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西南大学学报（自然科学版） 2020年第1期42卷 1-8页

作者：李青晏唐运林蒋睿轩张永红朱峰白兴荣顾偌铖吴燕燕吴玉娇陈洁李田李春峰韦俊宏潘国庆周泽扬西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学微孢子虫感染与防控重庆市重点实验室重庆400715 西南大学农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715 西南大学生物技术学院重庆400715 云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所云南蒙自661101 重庆师范大学生命科学学院重庆401331

草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)自2019年1月入侵中国以来,现已蔓延至全国25个省份.为了解草地贪夜蛾的肠道微生物的组成,近期该课题组在云南蒙自地区的玉米地采集了草地贪夜蛾幼虫及成虫,通过分离培养结合16S rDNA测序鉴定其肠道细... 详细信息

草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)自2019年1月入侵中国以来,现已蔓延至全国25个省份.为了解草地贪夜蛾的肠道微生物的组成,近期该课题组在云南蒙自地区的玉米地采集了草地贪夜蛾幼虫及成虫,通过分离培养结合16S rDNA测序鉴定其肠道细菌分离株的种属.在幼虫肠道中分离到32个细菌分离株,通过16S rDNA序列同源聚类可归为4个属,分别为克雷伯氏菌属(Klebsiella)、肠球菌属(Enterococcus)、沙雷氏菌属(Serratia)和摩根菌属(Morganella),其中克雷伯氏菌属(Klebsiella)丰度最高,为53.1%;在成虫肠道中分离到16个细菌分离株归为5个属,分别为不动杆菌属(Acinetobacter)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、微球菌属(Micrococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)和肠杆菌属(Enterobacter),其中不动杆菌丰度最高,为56.0%.该研究首次对入侵中国的草地贪夜蛾成虫肠道细菌进行分离鉴定,为后续研究草地贪夜蛾生物学适应性等重要问题奠定了基础.

关键词：草地贪夜蛾肠道细菌成虫云南地区生物适应性

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家蚕基因组靶向编辑技术研究进展

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昆虫学报 2018年第3期61卷 371-384页

作者：龙定沛郝占章向仲怀赵爱春西南大学蚕学与系统生物学研究所家蚕基因组生物学国家重点实验室农业部蚕桑功能基因组与生物技术重点实验室重庆400716

人工核酸内切酶(engineered endonuclease,EEN)系统介导的基因组编辑技术是进行基因组功能研究与生物遗传改良操作的重要工具。家蚕Bombyx mori是最早实现人工驯化和饲养的经济昆虫,同时也是后基因组时代用作功能基因分析的重要鳞翅目... 详细信息

人工核酸内切酶(engineered endonuclease,EEN)系统介导的基因组编辑技术是进行基因组功能研究与生物遗传改良操作的重要工具。家蚕Bombyx mori是最早实现人工驯化和饲养的经济昆虫,同时也是后基因组时代用作功能基因分析的重要鳞翅目模式昆虫。近年来随着锌指核酸酶(zinc finger nuclease,ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)以及CRISPR/Cas9系统介导的新型基因组靶向编辑技术的快速发展,家蚕基因组靶向编辑技术的研究和应用也取得了重要进展。本文概述了目前最为常用的3种EEN介导的基因组靶向编辑系统的组成和作用原理,全面系统地介绍了家蚕基因组靶向编辑技术的建立过程以及该技术介导实现家蚕内源或外源基因定点突变、基因组结构变异和外源基因在家蚕基因组定点整合操作的应用研究进展,探讨了家蚕基因组靶向编辑技术存在的内源靶基因定点敲除与外源基因定点整合效率较低、外源基因整合的"脱靶效应"等主要问题及相应解决策略,并对利用该技术实现家蚕多基因同时修饰的潜力和多种基因组靶向编辑系统的联合应用与多元化开发的发展趋势进行了展望,以期为推动基因组靶向编辑技术在昆虫基因功能分析、突变模型建立等研究领域的发展提供借鉴与参考。

关键词：家蚕基因组编辑人工核酸内切酶基因操作 ZFN TALEN CRISPR/Cas9

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重庆地区草地贪夜蛾幼虫肠道真菌的分离鉴定

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西南大学学报（自然科学版） 2019年第9期41卷 1-8页

作者：吴燕燕耿敬可徐思唐运林顾偌铖韦俊宏潘国庆周泽扬西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715 西南大学微孢子虫感染与防控重庆市重点实验室重庆400715 西南大学生物技术学院重庆400715 重庆师范大学生命科学学院重庆401331

草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)是一种洲际迁飞性农业害虫,食谱广泛.2019年5月已迁飞至重庆地区,对农作物造成严重危害.为了解入侵重庆地区草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)肠道真菌菌群的组成,本研究以采集自重庆巫山玉米田及重... 详细信息

草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)是一种洲际迁飞性农业害虫,食谱广泛.2019年5月已迁飞至重庆地区,对农作物造成严重危害.为了解入侵重庆地区草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)肠道真菌菌群的组成,本研究以采集自重庆巫山玉米田及重庆江津高粱田中的草地贪夜蛾幼虫为材料,运用传统培养方法分离其粪便中的肠道优势真菌,并对其进行形态学观察和分子生物学鉴定.实验通过分离培养不同地区、不同食物的草地贪夜蛾肠道真菌,结合形态学观察及rDNA ITS测序完成了属水平的鉴定,共分离得到了5个属10个真菌分离株,其中分离自重庆巫山玉米田的草地贪夜蛾肠道真菌归为3个属,分别为念珠菌属(Candida)、掷孢酵母属(Sporobolomyces)和帚枝霉属(Sarocladium);分离自重庆江津高粱田的草地贪夜蛾肠道真菌归为3个属,分别为念珠菌属(Candida)、莫氏黑粉菌属(Moesziomyces)和毛霉属(Mucor).初步分离获得入侵重庆地区的草地贪夜蛾肠道真菌,丰富了对入侵草地贪夜蛾肠道微生物的认识.

关键词：重庆地区草地贪夜蛾肠道真菌鉴定

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重庆地区3株球孢白僵菌的分离鉴定

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西南大学学报（自然科学版） 2019年第8期41卷 14-19页

作者：吴燕燕唐运林顾偌铖李恬恬包佳玲李田李春峰韦俊宏潘国庆周泽扬西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715 西南大学微孢子虫感染与防控重庆市重点实验室重庆400715 西南大学生物技术学院重庆400715 重庆师范大学生命科学学院重庆401331

我国是农业和林业大国,农林害虫的危害造成了严重的经济损失,同时化学防治也导致了环境污染等诸多问题.因此,开发基于虫生真菌的生物农药意义重大.为了丰富虫生真菌菌种资源,以野外感染白僵菌的蝽蟓及室内感染的家蚕僵虫样品为实验材料... 详细信息

我国是农业和林业大国,农林害虫的危害造成了严重的经济损失,同时化学防治也导致了环境污染等诸多问题.因此,开发基于虫生真菌的生物农药意义重大.为了丰富虫生真菌菌种资源,以野外感染白僵菌的蝽蟓及室内感染的家蚕僵虫样品为实验材料,采用多种培养基,分离获得了3株虫生真菌菌株,分别为来自蝽蟓的NB-1,PW-1菌株和来自家蚕的JCY菌株,形态学观察结果表明,各菌株的培养特征与白僵菌属菌株较为一致;分子生物学鉴定表明,各菌株rDNA ITS序列与GenBank中白僵菌属球孢白僵菌多个菌株同源性高达99%,因此将菌株NB-1,PW-1和JCY均鉴定为球孢白僵菌( Beauveria bassiana );生物学特性观察发现不同菌株间分生孢子产生量存在显著差异,分离自蝽蟓僵虫的球孢白僵菌PW-1,NB-1分生孢子产量分别为(7.55±0.15)×10^7个/mL,(6.30±0.40)×10^7个/mL,均高于家蚕分离株JCY,其产孢量仅为(3.02±0.22)×10^7个/mL.结论为后续研发针对包括草地贪夜蛾在内的农林害虫生物杀虫剂奠定了菌种基础.

关键词：球孢白僵菌虫生真菌鉴定蝽蟓家蚕

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CRISPR/Cas9系统在昆虫中的应用

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遗传 2018年第4期40卷 266-278页

作者：童晓玲方春燕盖停停石津鲁成代方银西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学生物技术学院农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715

CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated nuclease 9)技术是一种RNA引导的基因组靶向编辑技术,能对基因组序列进行精确编辑,在探究基因功能、修复受损基因、沉默有害基因、改良品质性状等方面具有广阔的应用前景。近年来,随着对CRISPR/Cas9系统研究的不断深入和改造,该系统以其操作简易、省时、高效等优点在生物学研究的众多领域中得以推广和应用,特别是在果蝇(Bombyx mori)、家蚕(silkworm)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)和蝴蝶(butterfly)等多种昆虫中。本文概述了CRISPR/Cas9的结构、作用原理及发展优化,总结了CRISPR/Cas9导入昆虫的策略和在昆虫中的应用,以及对CRISPR/Cas9系统产生脱靶问题的应对策略,以期对经济昆虫和有益昆虫的分子育种、害虫的生物技术防控等研究提供参考。

关键词： CRISPR/Cas9 基因组编辑昆虫应用

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昆虫启动子的研究及应用

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昆虫学报 2018年第3期61卷 360-370页

作者：童晓玲石津盖停停方春燕代方银西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学生物技术学院农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715

启动子(promotor)作为基因时空表达调控的重要元件,与RNA聚合酶结合形成转录起始复合体,控制着基因表达的起始时间和表达水平。对启动子的研究可以更好地阐明基因表达调控的机制,为解析基因调控网络奠定基础。本文对昆虫启动子研究方法... 详细信息

启动子(promotor)作为基因时空表达调控的重要元件,与RNA聚合酶结合形成转录起始复合体,控制着基因表达的起始时间和表达水平。对启动子的研究可以更好地阐明基因表达调控的机制,为解析基因调控网络奠定基础。本文对昆虫启动子研究方法进行综述,主要阐述昆虫启动子及其特定元件的鉴定方法,以及昆虫启动子的应用。

关键词：昆虫启动子特异序列鉴定应用害虫防治

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重庆地区取食高粱的草地贪夜蛾肠道细菌新分离株的鉴定

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西南大学学报（自然科学版） 2019年第9期41卷 9-16页

作者：郭志斌蒋睿轩唐运林顾偌铖李青晏行甜向丽吴燕燕胡源刘秀雷云飞韦俊宏潘国庆周泽扬西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学生物技术学院重庆400715 西南大学农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715 西南大学微孢子虫感染与防控重庆市重点实验室重庆400715 重庆江津农业科技有限公司重庆江津402289 重庆市江津区农业技术推广中心重庆江津402260 重庆师范大学生命科学学院重庆401331

为充分认识入侵重庆地区草地贪夜蛾(Spodopterafrugiperda)的肠道微生物,2019年7月该课题组再次在重庆江津地区高粱地采集了草地贪夜蛾幼虫,通过分离培养结合16SrDNA测序鉴定,从江津草地贪夜蛾幼虫肠道中共分离得到38个细菌分离株,归为... 详细信息

为充分认识入侵重庆地区草地贪夜蛾(Spodopterafrugiperda)的肠道微生物,2019年7月该课题组再次在重庆江津地区高粱地采集了草地贪夜蛾幼虫,通过分离培养结合16SrDNA测序鉴定,从江津草地贪夜蛾幼虫肠道中共分离得到38个细菌分离株,归为9个属,分别为克雷伯氏菌属(Klebsiella)、肠球菌属(Enterococcus)、微球菌属(Micrococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、不动杆菌属(Acinetobacter)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、假单胞菌属(Pseudomonas)和鞘脂杆菌属(Sphingobacterium).在课题组前期研究的基础上,新分离到了6个属,分别为克雷伯氏菌属(Klebsiella)、微球菌属(Micrococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)和鞘脂杆菌属(Sphingobacterium).同时还对入侵重庆地区采食高粱和玉米的草地贪夜蛾幼虫肠道细菌分离株进行了比较分析,只在采食高粱的草地贪夜蛾幼虫肠道中发现了欧文氏菌属(Erwinia)、微球菌属(Micrococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)的菌株,而气单胞菌属(Aeromonas)、短波单胞菌属(Brevundimonas)、金黄杆菌属(Chryseobacterium)和类香味菌属(Myroides)则只在采食玉米的草地贪夜蛾幼虫肠道中分离得到.通过对同一片江津高粱地的草地贪夜蛾和玉米黏虫(Mythimnaseparata)的肠道细菌分离株进行比较分析,只在草地贪夜蛾肠道中发现了微球菌属(Micrococcus)、欧文氏菌属(Erwinia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、葡萄球菌属(Staphylococcus)和鞘脂杆菌属(Sphingobacterium),而金黄杆菌属(Chryseobacterium)只发现于玉米黏虫肠道中.

关键词：重庆地区草地贪夜蛾肠道细菌高粱玉米

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重庆地区取食高粱的草地贪夜蛾与玉米粘虫肠道细菌比较

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西南大学学报（自然科学版） 2019年第8期41卷 6-13页

作者：顾偌铖唐运林吴燕燕牛小慧李青晏郭志斌向丽蒋睿轩雷云飞刘秀胡源包佳玲李田韦俊宏潘国庆周泽扬西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715 西南大学微孢子虫感染与防控重庆市重点实验室重庆400715 西南大学生物技术学院重庆400715 重庆市种子管理站重庆401121 江津区农业技术推广中心重庆江津402260 重庆江记农业科技有限公司重庆江津402289 重庆师范大学生命科学学院重庆401331

草地贪夜蛾( Spodoptera frugiperda )于2019年5月被发现已经入侵至重庆地区, 6月底在江津地区的高粱地中也发现了少量的草地贪夜蛾,同时还发现了大量玉米粘虫( Mythimna seperata ).通过分离培养同一生境内的草地贪夜蛾和玉米粘虫的肠... 详细信息

草地贪夜蛾( Spodoptera frugiperda )于2019年5月被发现已经入侵至重庆地区, 6月底在江津地区的高粱地中也发现了少量的草地贪夜蛾,同时还发现了大量玉米粘虫( Mythimna seperata ).通过分离培养同一生境内的草地贪夜蛾和玉米粘虫的肠道细菌,结合16S rDNA测序完成了这两种害虫肠道优势菌属水平的鉴定,共分离得到了19个细菌分离株,其中分离自草地贪夜蛾肠道细菌归为5个属,分别为欧文氏菌属(Erwinia),不动杆菌属(Acinetobacter),肠杆菌属(Enterobacter),肠球菌属(Enterococcus),假单胞菌属(Pseudomonas).分离自玉米粘虫肠道细菌归为6个属,分别为克雷伯氏菌属(Klebsiella),不动杆菌属(Acinetobacter),寡养单胞菌属(Stenotrophomonas),肠球菌属(Enterococcus),金黄杆菌属(Chryseobacterium),芽孢杆菌属(Bacillus).同时我们也对采自玉米地和高粱地的草地贪夜蛾肠道微生物优势菌进行了比较分析,在江津高粱地中的草地贪夜蛾中没有发现克雷伯氏菌,但该菌在巫山、巫溪玉米地的草地贪夜蛾中大量存在.结论为进一步研究草地贪夜蛾幼虫肠道核心微生物群奠定了基础.

关键词：重庆地区高粱草地贪夜蛾玉米粘虫肠道细菌

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家蚕核型多角体病毒多角体蛋白的多克隆抗体制备及应用试验

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蚕业科学 2018年第3期44卷 398-403页

作者：胡志刚董战旗蒋亚明董非凡潘敏慧家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400716 农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400716 西南大学生物技术学院重庆400716

杆状病毒（baculovirus）多角体蛋白（polyhedrin）是晚期高水平表达的蛋白质,对于维持病毒粒子在自然环境下的稳定性和在宿主之间的传播至关重要。PCR扩增家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV）多角体蛋白基... 详细信息

杆状病毒（baculovirus）多角体蛋白（polyhedrin）是晚期高水平表达的蛋白质,对于维持病毒粒子在自然环境下的稳定性和在宿主之间的传播至关重要。PCR扩增家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV）多角体蛋白基因polh,亚克隆到原核表达载体p ET32,获得重组质粒p ET32-polh,并转化至大肠埃希菌（Escherichia coli）BL21（DE3）表达菌株进行原核表达,诱导表达的融合蛋白带His标签,经镍柱纯化后用于免疫新西兰大白兔,制备抗多角体蛋白的多克隆抗体。Western blot检测该多克隆抗体能够特异识别Bm NPV的多角体蛋白。利用该多克隆抗体进行免疫荧光和Western blot分析多角体蛋白的亚细胞定位及表达时相,结果显示多角体蛋白定位于细胞质,且在病毒感染后48 h才可以被检测到。该多克隆抗体可用于Bm NPV多角体蛋白的功能研究。

关键词：家蚕核型多角体病毒多角体蛋白多克隆抗体亚细胞定位表达时相

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家蚕核型多角体病毒多角体蛋白的多克隆抗体制备及应用试验

家蚕核型多角体病毒多角体蛋白的多克隆抗体制备及应用试验

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中国蚕学会第十四届暨国家蚕桑产业技术体系家（柞）蚕遗传育种学术研讨会

作者：胡志刚董战旗蒋亚明董非凡潘敏慧家蚕基因组生物学国家重点实验室农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室西南大学生物技术学院

杆状病毒(baculovirus)多角体蛋白(polyhedrin)是晚期高水平表达的蛋白质,对于维持病毒粒子在自然环境下的稳定性和在宿主之间的传播至关重要。PCR扩增家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)多角体蛋白基因polh,... 详细信息

杆状病毒(baculovirus)多角体蛋白(polyhedrin)是晚期高水平表达的蛋白质,对于维持病毒粒子在自然环境下的稳定性和在宿主之间的传播至关重要。PCR扩增家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)多角体蛋白基因polh,亚克隆到原核表达载体p ET32,获得重组质粒pET32-polh,并转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)表达菌株进行原核表达,诱导表达的融合蛋白带His标签,经镍柱纯化后用于免疫新西兰大白兔,制备抗多角体蛋白的多克隆抗体。Western blot检测该多克隆抗体能够特异识别BmNPV的多角体蛋白。利用该多克隆抗体进行免疫荧光和Western blot分析多角体蛋白的亚细胞定位及表达时相,结果显示多角体蛋白定位于细胞质,且在病毒感染后48 h才可以被检测到。该多克隆抗体可以应用于Bm NPV多角体蛋白的功能研究。

关键词：家蚕核型多角体病毒多角体蛋白多克隆抗体亚细胞定位表达时相

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