检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2003年第4期23卷 296-299页

作者：杨海宁于修平卞继峰赵蔚明贾继辉周亚滨栾怡齐眉于谨山东大学医学院微生物学教研室分子生物学实验室济南250012

目的　研究HPV5 8E6蛋白与p5 3蛋白的作用关系 ,以初步探讨其致癌机理。方法　先通过GST沉降试验和体外降解试验 ,体外研究HPV5 8E6结合降解p5 3蛋白的作用 ,进而将表达质粒导入SAOS 2细胞 ,在细胞内研究HPV5 8E6对p5 3诱导细胞凋亡活... 详细信息

目的　研究HPV5 8E6蛋白与p5 3蛋白的作用关系 ,以初步探讨其致癌机理。方法　先通过GST沉降试验和体外降解试验 ,体外研究HPV5 8E6结合降解p5 3蛋白的作用 ,进而将表达质粒导入SAOS 2细胞 ,在细胞内研究HPV5 8E6对p5 3诱导细胞凋亡活性的影响。结果　HPV5 8E6能够有效结合p5 3蛋白并进一步诱导其降解 ,而且在细胞内 ,HPV5 8E6具有抑制p5 3蛋白的诱导凋亡的功能。结论　p5 3蛋白的降解影响其细胞周期调控和诱导凋亡的功能 ,导致细胞发生恶性转化引发子宫颈癌等肿瘤。

关键词：人乳头瘤病毒 E6蛋白 p53 作用癌基因蛋白抑癌基因宫颈肿瘤

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人乳头瘤病毒16型野毒株L1-E7融合基因重组腺病毒载体构建及在293细胞中表达嵌合病毒样颗粒的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第4期21卷 368-372页

作者：卞继峰于修平赵蔚明杨海宁王芸胡海燕周亚滨贾继辉栾怡齐眉耿昭山东大学医学院分子生物学实验室济南250012

目的　制备人乳头瘤病毒HPV16L1 E7重组腺病毒 ,以期获得防治宫颈癌的重组腺病毒减毒活疫苗。方法　以HPV16型的野毒株HPV16 114/K为模板 ,利用PCR克隆技术制备HPV16L1 E7融合基因pUC19L1 E7,含L1的 1～ 30 1氨基酸 (AA)和E7的 1～ 6 ... 详细信息

目的　制备人乳头瘤病毒HPV16L1 E7重组腺病毒 ,以期获得防治宫颈癌的重组腺病毒减毒活疫苗。方法　以HPV16型的野毒株HPV16 114/K为模板 ,利用PCR克隆技术制备HPV16L1 E7融合基因pUC19L1 E7,含L1的 1～ 30 1氨基酸 (AA)和E7的 1～ 6 0AA的编码DNA序列 ;并转入腺病毒穿梭质粒pCA14L1 E7,与腺病毒质粒pBHG10共转染 2 93细胞 ,筛选重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7。以PCR、ELISA和Westernblot方法鉴定重组病毒及其表达的L1 E7蛋白 ,密度梯度超速离心纯化HPV16嵌合L1 E7VLP ,电镜观察VLP的形态结构。结果　PCR DNA序列分析表明成功构建了HPV16L1 E7重组质粒pUC19L1 E7;并获得HPV16重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7,在 2 93细胞中可高效表达L1 E7蛋白 ,并形成嵌合病毒样颗粒 (cVLP)。结论　构建的重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7可有效表达HPV16L1 E7cVLP ,可进一步用于动物实验。

关键词：乳头状瘤病毒病毒样颗粒腺病毒载体疫苗宫颈肿瘤宫颈癌

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转染PHGPx基因对Aβ及H_2O_2诱导PC_(12)细胞凋亡的保护作用

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中国老年学杂志 2004年第10期24卷 942-945页

作者：付振涛杨玲玲郝建荣曾季平孔峰钟华崔行山东大学医学院生化与分子生物学教研室山东济南250012

目的　观察转染磷脂过氧化氢谷胱甘肽过氧化物酶 (PHGPx)基因对神经毒物质Aβ及H2 O2 诱导细胞凋亡的保护作用。方法　通过基因转染和筛选得到稳定高表达PHGPx基因的PC1 2 细胞 ,加入神经毒物质Aβ及H2 O2 ,采用电镜、DNA片段化测定、MT... 详细信息

目的　观察转染磷脂过氧化氢谷胱甘肽过氧化物酶 (PHGPx)基因对神经毒物质Aβ及H2 O2 诱导细胞凋亡的保护作用。方法　通过基因转染和筛选得到稳定高表达PHGPx基因的PC1 2 细胞 ,加入神经毒物质Aβ及H2 O2 ,采用电镜、DNA片段化测定、MTT比色微量分析及流式细胞凋亡率分析等方法观察转基因后抗逆变致凋亡的能力。结果　加入神经毒物质Aβ或H2 O2 后 ,未转染PHGPx基因的PC1 2 细胞出现凋亡的特征性形态学改变 ,电泳可见断裂的DNA片段 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率较转染组明显增加。MTT比色微量分析显示细胞活力下降 (均P <0 0 1 )。结论　Aβ及H2 O2 能够诱导神经细胞凋亡。转染PHGPx基因能对抗Aβ、H2 O2 的神经毒性 ,保护Aβ、H2 O2 所致的神经细胞损伤凋亡。

关键词： Aβ x基因转染凋亡 PC12细胞诱导保护作用 H2O2 DNA片段电泳

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PSA启动子介导的TAT-p21^(WAF1/CIP1)融合蛋白在前列腺癌细胞中的特异表达及活性初探

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中国病理生理杂志 2008年第3期24卷 498-503页

作者：蔡捷苑辉卿孔峰任凯王小玲吉恺胡晓燕张建业山东大学医学院生物化学与分子生物学教研室山东济南250012

目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前... 详细信息

目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前列腺癌的抑制作用。方法:利用PCR技术构建含有PSA启动子、TAT蛋白转导序列和p21读码框架的真核表达载体pPSA-TAT-p21,并进行酶切、测序鉴定。脂质体法在前列腺癌LNCaP细胞和大肠癌HT-29细胞中转染上述表达载体及对照质粒后进行反转录PCR(RT-PCR),检测p21的mRNA以及蛋白在不同细胞中的表达情况。MTT法检测转染pPSA-TAT-p21后LNCaP细胞的增殖情况。结果:成功构建pPSA-TAT-p21真核表达载体。RT-PCR和Western blotting结果显示PSA-TAT-p21在前列腺癌细胞中有明显表达,在大肠癌细胞中基本不表达,呈现特异性的表达,而由CMV启动子介导的p21(pCMV-21)对照组在两个细胞株中均有表达。细胞增殖实验结果显示,含有TAT蛋白转导结构域的PSA-TAT-p21的融合蛋白对前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显高于不含TAT的PSA-p21蛋白。结论:pPSA-TAT-p21能够在前列腺癌细胞中特异性地高效表达,为前列腺癌基因的靶向治疗提供了实验依据。

关键词：前列腺特异抗原 TAT—p21^WAF1/CIP1融合蛋白前列腺肿瘤 LNCaP细胞 HT-29细胞

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神经营养肽NP14基因的合成及其在大肠杆菌中的高表达

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中国病理生理杂志 2007年第12期23卷 2304-2308页

作者：张之勇苑辉卿姜安丽蔡捷任凯胡晓燕孔峰张建业山东大学医学院生物化学与分子生物学教研室山东济南250012

目的:根据鞘脂激活蛋白原神经营养序列设计并构建短肽(neurotrophic peptide,NP)多拷贝串连表达载体,利用基因工程的方法制备短肽NP。方法:根据大肠杆菌的偏爱密码子设计并合成NP的碱基片段,通过PCR方法合成串联双拷贝2NP片段,经平端连... 详细信息

目的:根据鞘脂激活蛋白原神经营养序列设计并构建短肽(neurotrophic peptide,NP)多拷贝串连表达载体,利用基因工程的方法制备短肽NP。方法:根据大肠杆菌的偏爱密码子设计并合成NP的碱基片段,通过PCR方法合成串联双拷贝2NP片段,经平端连接克隆到载体pUC18中。利用EcoT14I酶切pUC18-2NP后可产生非镜相对称黏性末端,与表达载体pETEcoT一次连接反应,得到一系列含有不同片段拷贝数的表达载体pETE-coT-multiNP,经PCR-array方法进行阳性克隆筛选、测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达。结果:经IPTG诱导后,在BL21(DE3)菌中高效表达了2、4、8拷贝融合蛋白,并在每个单拷贝之间加入了溴化氢的切割位点,使融合蛋白切割后能够得到单拷贝的短肽。结论:短肽NP在大肠杆菌中获得高效表达,为进一步研究其生物活性奠定了基础。

关键词：神经营养肽融合蛋白质类原核表达

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2,3-吲哚醌诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及周期阻滞

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癌症 2008年第3期27卷 283-288页

作者：宋金莲岳旺侯琳葛银林青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室山东青岛266021

背景与目的:2,3-吲哚醌(isatin,ISA)是存在于哺乳动物体液及组织中的一种天然物质,已发现其对肿瘤细胞的生长有抑制作用,但具体作用机制尚不明。本研究以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为靶细胞,观察ISA对SH-SY5Y细胞的作用及其机制。方法:... 详细信息

背景与目的:2,3-吲哚醌(isatin,ISA)是存在于哺乳动物体液及组织中的一种天然物质,已发现其对肿瘤细胞的生长有抑制作用,但具体作用机制尚不明。本研究以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为靶细胞,观察ISA对SH-SY5Y细胞的作用及其机制。方法:采用荧光染色、流式细胞术(flow cytometry,FCM)及Western blot等方法检测不同浓度ISA(0、100、200、400μmol/L)诱导SH-SY5Y细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用机制。结果:400μmol/L ISA作用48h后,在荧光显微镜下观察到SH-SY5Y细胞出现核固缩、DNA断裂等典型的凋亡形态学改变。Western blot结果显示,随ISA浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达无明显改变,Bcl-2/Bax下降。100、200、400μmol/L ISA处理SH-SY5Y细胞48h,活化Caspase-3的表达率分别为19.28%、25.88%、33.43%,明显高于对照组(P<0.05)。Western blot进一步检测到其下游底物Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂(inhibitor of caspase-activated DNase,ICAD)被降解。细胞周期分析表明,经100、200、400μmol/L ISA处理48h后,G1期SH-SY5Y细胞数明显增加,呈明显的G1期阻滞;磷酸化的ERK蛋白及Cyclin D1(CDK1)蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论:ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡和细胞周期G1期阻滞,该作用可能与Bcl-2/Bax降低、Caspase-3激活,以及下调磷酸化ERK和细胞周期因子CDK1表达有关。

关键词： 2,3-吲哚醌神经母细胞瘤 SH-SY5Y细胞 Bcl-2/Bax Caspase-3 凋亡细胞周期阻滞

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转染过氧化氢酶-过氧化物酶基因对Aβ诱发PC_(12)细胞凋亡的保护作用

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毒理学杂志 2006年第3期20卷 150-152页

作者：付振涛崔行杨玲玲郝建荣曾季平胡晓燕孔峰山东大学医学院生化与分子生物学教研室山东济南250012

目的观察转染过氧化氢酶-过氧化物酶(CPX)基因对神经毒物质β淀粉样肽(Aβ)诱发细胞凋亡的保护作用。方法转染并筛选稳定高表达CPX基因的PC12细胞系,用神经毒物质Aβ处理细胞,观察其抗逆变致凋亡的能力。通过电镜、DNA片段化的测定、MT... 详细信息

目的观察转染过氧化氢酶-过氧化物酶(CPX)基因对神经毒物质β淀粉样肽(Aβ)诱发细胞凋亡的保护作用。方法转染并筛选稳定高表达CPX基因的PC12细胞系,用神经毒物质Aβ处理细胞,观察其抗逆变致凋亡的能力。通过电镜、DNA片段化的测定、MTT比色微量分析及流式细胞凋亡率分析观察转基因后对Aβ诱发细胞凋亡的保护作用。结果加入神经毒物质Aβ后,未转染CPX基因的PC12细胞出现凋亡的特征性形态学改变,电泳可见断裂的DNA片段,流式细胞仪检测细胞凋亡率较CPX基因转染组明显增加。MTT比色微量分析显示细胞活力下降(P<0.001)。结论Aβ诱导的神经细胞凋亡与活性氧的产生有关,转染CPX基因能对抗Aβ的神经毒性,保护Aβ所致的神经细胞凋亡。

关键词：过氧化氢酶-过氧化物酶(CPX) 细胞转染 β淀粉样肽(Aβ) 细胞凋亡阿尔茨海默病(AD)

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HPV58 E6体外降解p53蛋白作用的研究

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基础医学与临床 2002年第4期22卷 346-350页

作者：杨海宁于修平卞继峰 JasonJChen 赵蔚明贾继辉周亚滨刘颖栾怡齐眉山东大学医学院微生物学教研室济南250012 山东大学医学院分子生物学实验室济南250012 DepartmentofMedicine UMassMedicalSchool

通过PCR方法从人乳头瘤病毒 5 8型 (HPV5 8)全基因克隆中扩增出HPV5 8E6基因片段 ,克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游 ,并在体外转录成mRNA后 ,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中成功表达了含有生物素标记的HPV5 8E6蛋白 ,并在体外... 详细信息

通过PCR方法从人乳头瘤病毒 5 8型 (HPV5 8)全基因克隆中扩增出HPV5 8E6基因片段 ,克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游 ,并在体外转录成mRNA后 ,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中成功表达了含有生物素标记的HPV5 8E6蛋白 ,并在体外成功发现HPV5 8E6能够降解p5 3蛋白 ,从而推断结合并降解p5 3蛋白是其致癌作用的关键环节。

关键词：体外降解 p53蛋白乳头状瘤病毒基因克隆基因表达抑癌蛋白宫颈癌

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2,3-吲哚醌对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响

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中国药理学通报 2007年第5期23卷 680-684页

作者：王娜侯琳祝兆怡张金玉鞠传霞葛银林岳旺青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室山东青岛266021

目的研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,ISA)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(0、100、200、400μmol·L-1)处理组,采用... 详细信息

目的研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,ISA)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和端粒酶表达的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(0、100、200、400μmol·L-1)处理组,采用Hochest33258荧光染色和琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡;采用Western blot检测凋亡抑制基因bcl-2、凋亡基因bax蛋白表达的变化;采用RT-PCR检测加药后SH-SY5Y bcl-2,bax及端粒酶逆转录酶(hTERT) mRNA表达水平的变化。结果100、200、400μmol·L-1ISA处理SH-SY5Y细胞48h后,荧光染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核碎裂形态;bcl-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax mR-NA及蛋白表达水平未见变化(P>0.05);hTERT mRNA表达水平降低(P<0.05),各组间差异比较有统计学意义;200、400μmol·L-1ISA处理SH-SY5Y细胞48h,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。结论2,3-吲哚醌可能通过下调bcl-2和hTERT表达诱导SH-SY5Y细胞凋亡,并在一定浓度范围内呈浓度依赖关系。

关键词： 2,3-吲哚醌 SH-SY5Y bcl-2 bax 端粒酶逆转录酶 Hochest

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KDR为靶的siRNA抑制乳腺癌细胞增殖的体内外研究

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第1期24卷 58-61页

作者：张晓静葛银林侯琳李泉青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室山东青岛266021

目的:采用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)在体内外抑制含激酶插入区受体(KDR)基因表达,探讨化学修饰的siRNA介导的RNA干扰(RNA i)技术在乳腺癌基因治疗的可行性和特异性。方法:采用阳离子脂质体L ipofectam ine2000TM作为转染试剂将针对人... 详细信息

目的:采用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)在体内外抑制含激酶插入区受体(KDR)基因表达,探讨化学修饰的siRNA介导的RNA干扰(RNA i)技术在乳腺癌基因治疗的可行性和特异性。方法:采用阳离子脂质体L ipofectam ine2000TM作为转染试剂将针对人KDR基因的siRNA转染人类乳腺细胞株MCF-7,诱导RNA i,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,RT-PCR,Western blot试验等检测KDR基因和蛋白表达及细胞增殖变化。采用阳离子聚合物纳米粒In vivojetPEITM为转染试剂将siRNA直接注射进裸鼠移植瘤,监测肿瘤生长变化,RT-PCR,免疫组化方法等监测KDR基因和蛋白表达变化。结果:靶向KDR基因siRNA转染MCF-7后,细胞增殖被抑制,KDRmRNA和蛋白的表达明显降低;裸鼠体内实验显示siRNA治疗组瘤组织的增长受到明显抑制;RT-PCR,免疫组化结果同时表明治疗组KDR表达下调。各对照组指标无明显变化。结论:化学修饰的siRNA介导的RNAi在体内外均能成功抑制靶基因的表达和MCF-7细胞增殖,是潜在的肿瘤治疗新方法,而KDR亦可作为肿瘤治疗的新靶点。

关键词： RNA干扰 siRNA MCF-7细胞血管内皮生长因子受体2 基因治疗

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