检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2001年第4期21卷 340-342页

作者：马春红孙汶生丁培芳曹英林张利宁山东大学医学院微生物与免疫学教研室济南250012

为开发新型抗HBV药物 ,设计合成针对HBVENⅡ (1713 172 7)的反义寡核苷酸 (as ENⅡ ) ,以不同浓度、不同作用方式作用于HepG2 2 15细胞 ,ELISA检测结果表明 10 μmol/L的as ENⅡ可显著抑制HBsAg、HBeAg表达 ,抑制率可达 5 2 1%和 40 ... 详细信息

为开发新型抗HBV药物 ,设计合成针对HBVENⅡ (1713 172 7)的反义寡核苷酸 (as ENⅡ ) ,以不同浓度、不同作用方式作用于HepG2 2 15细胞 ,ELISA检测结果表明 10 μmol/L的as ENⅡ可显著抑制HBsAg、HBeAg表达 ,抑制率可达 5 2 1%和 40 1%。 10 μmol/Las ENⅡ一次性用于HepG2 2 15细胞后 ,其对HBsAg、HBeAg的抑制作用呈现双峰现象 :分别在 1d、5d和 1d、3d ,抑制作用分别为 30 4% ,5 2 1%和 34 0 % ,40 1%。同样浓度as ENⅡ每天反复加入HepG2 2 15细胞 ,其抑制作用缓慢上升 ,分别在第 7、6d达高峰 ,抑制作用分别为 73 6 9%和 73 6 4%。结果提示HBVENⅡ是设计抗HBV反义寡核苷酸片段的良好靶位。

关键词： HBV ENⅡ 反义寡核苷酸抑制作用 HCC

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反义寡核苷酸体外抗乙型肝炎病毒研究

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中华预防医学杂志 2001年第5期35卷 338-340页

作者：刘素侠孙汶生曹英林张利宁马春红丁培芳山东大学医学院微生物学及免疫学教研室济南市250012

目的　探讨反义寡核苷酸的体外抗病毒作用 ,为基因水平上防治乙型肝炎病毒 (HBV)感染及HBV相关肝细胞癌的基因治疗提供实验依据。方法　用PCR方法分别合成了互补于HBVX基因的翻译起始区、DR2区、ENⅡ区的反义寡核苷酸 (AsON)及无关序列 ... 详细信息

目的　探讨反义寡核苷酸的体外抗病毒作用 ,为基因水平上防治乙型肝炎病毒 (HBV)感染及HBV相关肝细胞癌的基因治疗提供实验依据。方法　用PCR方法分别合成了互补于HBVX基因的翻译起始区、DR2区、ENⅡ区的反义寡核苷酸 (AsON)及无关序列 ,其中针对ENⅡ设计的AsON ,目前尚未见互补于该区段反义寡核苷酸的报道。以HBVDNA转染的HepG2 2 15细胞为靶细胞 ,ELISA法检测AsON作用前后细胞上清中的HBsAg和HBeAg分泌情况。结果　当AsON的最佳作用浓度为 10 μmol L时 ,3种反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg抑制率分别为 :5 7%、6 0 %、5 2 %和 5 6 %、45 %、5 6 % ,AsON对HBV抗原的抑制作用具双峰现象。无关序列无明显抑制作用 (<12 % )。利用锥虫蓝染色、四甲基偶氮唑盐比色试验观察到当AsON作用浓度为 40 μmol L时 ,对细胞代谢无明显毒副作用。结论　反义寡核苷酸封闭HBVX基因区的关键区段 ,可有效抑制HBV抗原的分泌。

关键词：乙型肝炎病毒反义寡核苷酸类基因转染肿瘤细胞细胞培养肝细胞癌基因治疗

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幽门螺杆菌细胞微生物学模型的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第4期23卷 283-287页

作者：贾继辉张茂修于修平郭辉玉陈春燕付艺冰赵蔚明周亚滨栾怡齐眉宋静肖颖山东大学医学院微生物学教研室济南250012 中山大学医学院微生物学教研室山东大学第二医院

目的　建立幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)细胞微生物学研究模型。方法　选择 6至 8月龄胎儿胃粘膜组织进行原代细胞培养 ,运用扫描和透射电镜研究了螺杆状和圆球形Hp与人胃粘膜上皮细胞相互作用关系。结果　螺杆状Hp很快与人胃粘... 详细信息

目的　建立幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)细胞微生物学研究模型。方法　选择 6至 8月龄胎儿胃粘膜组织进行原代细胞培养 ,运用扫描和透射电镜研究了螺杆状和圆球形Hp与人胃粘膜上皮细胞相互作用关系。结果　螺杆状Hp很快与人胃粘膜上皮细胞微绒毛粘附 ,Hp粘附细胞处形成一个致密纤维样肌动蛋白垫 ,上皮细胞膜杯状内陷包绕Hp ,紧密粘附于宿主细胞 ,Hp粘附下方细胞内微丝、微管和肌动蛋白呈局灶性聚集。圆球形Hp可出现类似生物学效应 ,提示两种形态的Hp皆可作用于人胃粘膜上皮细胞。此外 ,螺杆状Hp还可与宿主细胞膜融合 ,被细胞内在化 ,细胞内出现空泡效应。上述病理性改变与Hp感染的胃粘膜活性组织标本的检查结果基本一致。结论　原代胃粘膜上皮细胞与Hp相互作用近似于Hp体内致病的微环境 ,是Hp细胞微生物学研究的良好模型。

关键词：幽门螺杆菌细胞微生物学模型胃粘膜上皮细胞细胞培养病原微生物学

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特异siRNA抑制宫颈癌细胞中人乳头状瘤病毒16型E6表达的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第7期26卷 598-602页

作者：栾怡于修平赵蔚明周亚滨白晓卉山东大学医学院微生物学教研室济南250012

目的优化HPV-16 E6癌基因特异的U6质粒表达的siRNA,抑制HPV癌基因表达及其对子宫颈癌细胞生长繁殖的影响。方法选择4个分别针对HPV-16 E6 mRNA外显子和内含子序列为靶序列,合成DNA链,构建表达HPV-16 E6短发卡样dsRNA的重组pSilencer1.0... 详细信息

目的优化HPV-16 E6癌基因特异的U6质粒表达的siRNA,抑制HPV癌基因表达及其对子宫颈癌细胞生长繁殖的影响。方法选择4个分别针对HPV-16 E6 mRNA外显子和内含子序列为靶序列,合成DNA链,构建表达HPV-16 E6短发卡样dsRNA的重组pSilencer1.0-U6载体,导入HPV-16 DNA阳性的宫颈癌细胞株CaSki中,观察该细胞中HPV-16 E6、E7基因表达水平及其蛋白含量的变化,并观察细胞生长被抑制的情况。结果4种HPV-16 E6 siRNA均能降低宫颈癌细胞CaSki的生长速率。通过细胞生长曲线观察到HPV-16 E6 shRNA表达质粒导入细胞0-96 h内,可降低细胞生长速度。荧光定量RT-PCR检测HPV-16 E6 siRNA可使宫颈癌细胞株CaSki中HPV-16 E6、E7基因转录的mRNA水平降低,其中针对E6 mRNA内含子的重组shRNA只抑制E6基因的表达水平。West- ern blot分析表明,4个HPV-16 E6 siRNA作用72 h后,未能检测到宫颈癌细胞中HPV-16 E6蛋白。结论HPV-16 E6 siRNA能使宫颈癌细胞CaSki生长缓慢;选择针对E6内含子的siRNA作用位点,特异性抑制E6表达;而针对E6外显子的siRNA作用位点,可抑制E6和E7基因的表达,是用于治疗HPV阳性宫颈癌细胞的理想靶位。

关键词：人乳头状瘤病毒 siRNA 子宫颈肿瘤细胞生长

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表达HPV6b L1-E7嵌合蛋白的减毒沙门菌诱导小鼠免疫应答

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第1期23卷 49-52页

作者：孙新六赵蔚明卞继峰于修平贾继辉周亚滨栾怡齐眉王红山东大学医学院微生物学教研室济南250012

目的　探讨表达人乳头状瘤病毒 6b型 (HPV6b)L1 E7嵌合蛋白的减毒沙门菌诱导小鼠粘膜及系统免疫反应的可行性。方法　对重组减毒沙门菌S .BRD5 0 9 pTETnir15 6bL1E7体外厌氧诱导其表达 ,Westernblot方法鉴定表达的L1 E7蛋白。此重组... 详细信息

目的　探讨表达人乳头状瘤病毒 6b型 (HPV6b)L1 E7嵌合蛋白的减毒沙门菌诱导小鼠粘膜及系统免疫反应的可行性。方法　对重组减毒沙门菌S .BRD5 0 9 pTETnir15 6bL1E7体外厌氧诱导其表达 ,Westernblot方法鉴定表达的L1 E7蛋白。此重组沙门菌经滴鼻和口服联合粘膜免疫BALB c小鼠 ,采用ELISA方法及足垫肿胀试验分别检测免疫小鼠血清及阴道冲洗液中特异性抗体和DTH反应。结果　Westernblot分析显示 ,重组沙门菌在预计相对分子质量 (Mr) 5 6× 10 3 处有特异染色带 ,提示此重组沙门菌能表达特异的HPV6bL1 E7蛋白。ELISA检测结果表明实验组小鼠阴道冲洗液中HPV6bL1特异性sIgA显著升高 ,和对照组比较两者差异有显著性 (P <0 .0 1) ,但小鼠血清中HPV6bL1IgG抗体无明显变化 ,实验组和对照组两者差异无显著性。DTH结果显示 :与对照组比较 ,实验组小鼠接受HPV6bL1 E7抗原刺激后产生明显阳性反应 ,提示重组沙门菌免疫小鼠产生了针对HPV6bL1 E7抗原的特异性细胞免疫反应。结论　构建的重组减毒沙门菌S .BRD5 0 9 pTETnir15 6bL1E7可激发有效的粘膜免疫及细胞免疫反应 ,为进一步研制新型HPV粘膜疫苗奠定了实验基础。

关键词： HPV6b L1-E7 嵌合蛋白减毒沙门菌小鼠免疫应答尖锐湿疣

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优化密码促进HPV 6b E7蛋白表达及DNA疫苗诱导的细胞免疫反应

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中华实验和临床病毒学杂志 2002年第4期16卷 309-311页

作者：赵蔚明于修平周亚滨卞继峰贾继辉栾怡齐眉孙新六王红山东大学医学院微生物学教研室济南250012

目的　探讨优化密码对人乳头瘤病毒 6b型 (HPV 6b)基因表达及免疫原性的影响 ,为治疗性DNA疫苗的研究奠定基础。方法　设计合成含优化密码及pRB结合位点突变的HPV 6bE7(hu mE7)全长基因。测序验证无误后 ,定向克隆于pcDNA3的KpnⅠ和Eco... 详细信息

目的　探讨优化密码对人乳头瘤病毒 6b型 (HPV 6b)基因表达及免疫原性的影响 ,为治疗性DNA疫苗的研究奠定基础。方法　设计合成含优化密码及pRB结合位点突变的HPV 6bE7(hu mE7)全长基因。测序验证无误后 ,定向克隆于pcDNA3的KpnⅠ和EcoRⅠ位点 ,成功构建真核表达质粒pcDNA3 hu mE7。体外转染COS 1细胞 ,免疫荧光检测其E7蛋白表达。C57BL 6小鼠胫前肌内接种裸DNA ,观察其诱导的细胞免疫反应。结果　pcDNA3 hu mE7在COS 1细胞获得明显表达 ,表达产物主要位于细胞核中。DNA免疫结果显示 ,与含有野生型E7基因的表达质粒pcDNA3 wtE7比较 ,pcDNA3 hu mE7免疫小鼠脾细胞培养上清中IFN γ产生明显升高 ,CD8+ 和CD4 + 淋巴细胞活性增强。结论　优化密码能促进HPV 6bE7蛋白表达及DNA疫苗诱导的细胞免疫反应。

关键词：细胞免疫反应人乳头状瘤病毒 E7基因密码子 DNA疫苗免疫原性基因表达人乳头瘤病毒感染

来源：评论

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TRAIL受体在肿瘤细胞系上的表达及意义

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第2期18卷 128-130页

作者：韩丽辉孙汶生马春红张利宁曹英林宋静山东大学医学院微生物与免疫学教研室山东济南250012 RT-PCR TRAIL 受体

目的　　检测ＴＮＦ相关凋亡诱导配体（ＴＲＡＩＬ）的受体，在来源于血液系统、肝脏、肺脏和大肠的８个肿瘤细胞系中的表达，并探讨其意义。方法采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ，对ＴＲＡＩＬ受体的表达进行半定量检测。结果　ＴＲＡＩＬ凋亡... 详细信息

目的　　检测ＴＮＦ相关凋亡诱导配体（ＴＲＡＩＬ）的受体，在来源于血液系统、肝脏、肺脏和大肠的８个肿瘤细胞系中的表达，并探讨其意义。方法采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ，对ＴＲＡＩＬ受体的表达进行半定量检测。结果　ＴＲＡＩＬ凋亡通路中，能够诱导凋亡反应的死亡受体ＤＲ４和ＤＲ５，在所检测的肿瘤细胞系中都有表达，其中ＤＲ５在所有肿瘤细胞系中的表达水平均显著高于ＤＲ４（Ｐ＜０．０５）。而能够竞争性阻断ＴＲＡＩＬ诱导的凋亡反应的诱骗受体ＤｃＲ１和ＤｃＲ２，在所有的肿瘤细胞中都呈低水平表达或不表达。结论　ＤＲ５可能在ＴＲＡＩＬ诱导凋亡的通路中发挥最重要的作用。ＴＲＡＩＬ死亡受体和诱骗受体在肿瘤细胞系中的表达具有差异性，这种差异性可在一定程度上解释不同细胞对ＴＲＡＩＬ诱导凋亡的敏感度。

关键词：肿瘤 RT-PCR TRAIL TRAIL受体

来源：评论

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促进乳头状瘤病毒L1蛋白表达和DNA疫苗免疫效应的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第6期26卷 516-520页

作者：王红赵蔚明齐眉周亚滨栾怡程轶喆于修平山东大学医学院医学微生物学教研室济南250012

目的探讨促进乳头状瘤病毒(PV)晚期基因L1的蛋白表达和DNA疫苗免疫效应的途径及可能的机制。方法分别将含人源化优化密码BPVL1-GFP融合基因(HL1-GFP)和野生型BPVL1-GFP融合基因(WL1-GFP)的真核表达质粒体外单独转染或与tRNAser真核表达... 详细信息

目的探讨促进乳头状瘤病毒(PV)晚期基因L1的蛋白表达和DNA疫苗免疫效应的途径及可能的机制。方法分别将含人源化优化密码BPVL1-GFP融合基因(HL1-GFP)和野生型BPVL1-GFP融合基因(WL1-GFP)的真核表达质粒体外单独转染或与tRNAser真核表达质粒共转染人角质形成细胞HaCAT,荧光显微镜及Western blot方法观察L1-GFP融合蛋白的瞬时表达情况。半定量RT-PCR分析不同PV L1基因mRNA的表达。BALB／c小鼠股四头肌内分别接种野生型、优化密码L1 DNA疫苗,同时将L1 DNA疫苗与tRNAser真核表达质粒混合后接种小鼠,观察诱导产生的体液免疫反应。结果野生型WL1-GFP融合基因在HaCAT细胞中未能有效表达,优化密码HL1-GFP基因在HaCAT细胞中的蛋白表达水平明显增强;但两者在mRNA水平差异无统计学意义。WL1-GFP与tRNAser真核表达质粒共转染细胞中L1蛋白的表达较单独转染WL1-GFP基因时增强。动物DNA免疫结果表明,优化密码HL1 DNA疫苗接种可使小鼠特异性L1中和抗体水平明显升高;而野生型WL1 DNA疫苗接种组小鼠仅产生低滴度的L1抗体,WL1 DNA疫苗与tRNAser真核表达质粒混合接种使小鼠的L1抗体水平增加。结论优化密码能显著促进乳头状瘤病毒晚期基因L1在哺乳动物细胞中的表达和DNA疫苗的免疫反应;补充外源tRNAser基因能够提高野生型L1基因的蛋白表达和DNA疫苗诱导的体液免疫应答。

关键词：乳头状瘤病毒 L1基因 tRNA 蛋白表达 DNA免疫

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SV40转化的人胃黏膜上皮细胞与胃癌细胞间的比较蛋白质组学研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第3期24卷 226-229页

作者：贾继辉陈春燕于修平郭辉玉张茂修周亚滨栾怡齐眉赵蔚明山东大学医学院微生物学教研室山东大学第二医院中山大学中山医学院微生物学教研室

目的　研究猴病毒 4 0 (SV4 0 )转化的人胃黏膜上皮细胞GES 1与人胃癌细胞MGC 80 3的差异蛋白质组。方法　运用固相pH梯度双向凝胶电泳技术比较两者差异蛋白 ,差异蛋白用胰酶进行胶内酶切 ,肽混合物使用基质辅助激光解吸 /电离飞行时间... 详细信息

目的　研究猴病毒 4 0 (SV4 0 )转化的人胃黏膜上皮细胞GES 1与人胃癌细胞MGC 80 3的差异蛋白质组。方法　运用固相pH梯度双向凝胶电泳技术比较两者差异蛋白 ,差异蛋白用胰酶进行胶内酶切 ,肽混合物使用基质辅助激光解吸 /电离飞行时间质谱仪 (MALDI TOF MS)进行质谱分析 ,将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果　获得 17个GES 1和MGC 80 3细胞间表达差异蛋白质的明确信息 ,涉及细胞骨架、细胞调控、细胞凋亡和生物氧化等种类蛋白质。结论　SV4 0转化的人胃黏膜上皮细胞GES 1与人胃癌细胞MGC 80 3间的表达蛋白具有差异 ,这些差异蛋白分析有助于深入研究胃癌发生发展机制。

关键词：胃黏膜上皮细胞癌比较蛋白质组学猴病毒40 早期诊断病原微生物

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嗜酸乳杆菌对生殖道上皮细胞的黏附和黏附拮抗作用的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第10期24卷 802-806页

作者：王红艳贾继辉邢咏梅陈春燕周亚滨唐伟程轶喆于修平山东大学医学院微生物学教研室济南250012 山东大学第二医院

目的　比较热灭活状态和活菌状态乳酸杆菌对生殖道上皮细胞的黏附性及其对生殖道常见致病菌白色念珠菌和加德纳菌的黏附拮抗作用。方法　运用光镜和电镜分析嗜酸乳杆菌活菌和热灭活两种生物状态对刮取的阴道上皮细胞和传代培养的宫颈上... 详细信息

目的　比较热灭活状态和活菌状态乳酸杆菌对生殖道上皮细胞的黏附性及其对生殖道常见致病菌白色念珠菌和加德纳菌的黏附拮抗作用。方法　运用光镜和电镜分析嗜酸乳杆菌活菌和热灭活两种生物状态对刮取的阴道上皮细胞和传代培养的宫颈上皮细胞系HeLa细胞的黏附指数以及经两种生物状态嗜酸乳杆菌拮抗作用后致病菌的黏附指数的变化 ,并用台盼蓝染色法比较二者黏附HeLa细胞后对细胞存活率的影响。结果　两种生物状态的嗜酸乳杆菌对刮取的阴道上皮细胞的黏附不存在显著性差异 ,而热灭活状态对HeLa细胞的黏附指数显著高于活菌状态 ,两种生物状态的嗜酸乳杆菌对白色念珠菌和加德纳菌均有黏附抑制作用 ,热灭活状态嗜酸乳杆菌黏附HeLa细胞在一定时间内不降低细胞存活率。结论　经热灭活的嗜酸乳杆菌对生殖道上皮细胞有较强的黏附性并可对女性生殖道常见致病菌发挥黏附拮抗作用。

关键词：黏附 HeLa细胞上皮细胞活菌生殖道热灭活常见致病菌嗜酸乳杆菌台盼蓝染色法生物

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