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Neurexin、Neuroligin基因在人类及鼠类动物肠神经系统的表达及意义

中华小儿外科杂志 2010年第2期31卷 132-136页

作者：王健张文同孙大庆刘春喜李爱武山东大学齐鲁医院小儿外科山东大学第二医院山东大学教育部、卫生部心血管重构与功能研究重点实验室

目的探讨Neurexin和Neuroligin基因在人类及鼠类动物肠神经系统（ENS）是否有表达，以及对ENS突触结构与功能的作用，探查其在先天性巨结肠各段的表达特征及意义。方法首先制备小鼠、大鼠、豚鼠、正常人体肠管肌间神经丛铺片，通过双重... 详细信息

目的探讨Neurexin和Neuroligin基因在人类及鼠类动物肠神经系统（ENS）是否有表达，以及对ENS突触结构与功能的作用，探查其在先天性巨结肠各段的表达特征及意义。方法首先制备小鼠、大鼠、豚鼠、正常人体肠管肌间神经丛铺片，通过双重免疫荧光细胞染色，证明Neurexin、Neuroligin基因是否在肠神经系统表达，再采用免疫组织化学技术对20例先天性巨结肠狭窄段，移行段和扩张段肌间神经丛铺片标本染色，判断Neurexin、Neuroligin基因的表达情况。结果①Neurexin、Neuroligin蛋白在小鼠、大鼠、豚鼠、人体的肠肌间神经丛与神经细胞标记Hu在同一细胞表达；而Neurexin蛋白与突触前标记物synaptophysin，Neuroligin蛋白与突触后标记物PSED5也在同一神经组织出现；②Neurexin、Neuroligin蛋白在先天性巨结肠扩张段表达最多，移行段明显减少（P〈0．05），病变段无表达；同一组织Neurexin和Neuroligin的表达无明显差异（P〉0．05）。结论Neurexin、Neuroligin基因在鼠齿类动物及人体肠神经系统都有表达，不仅在胞体，而且在轴突、树突都有表达，Neurexin在突触前表达，Neuroligin在突触后表达。它们对肠神经系统突触的结构功能起重要作用，与一些胃、肠道动力性疾病有密切关系，是导致先天性巨结肠蠕动功能丧失的重要原因。

关键词：肠神经系统突触 Hirschsprung病

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siRNA沉默膀胱癌肝素酶基因对T24细胞增殖及MMP-2表达的影响

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山东大学学报（医学版） 2008年第6期46卷 561-565,570页

作者：张开舒徐忠华姜虹阎磊周尊林王荣刘海南范医东刘照旭郑宝钟亓天伟山东大学齐鲁医院泌尿外科济南250012 教育部和卫生部心血管重构与功能研究重点实验室济南250012

目的研究siRNA干扰沉默膀胱癌肝素酶基因对T24细胞增殖及MMP-2表达的影响方法体外化学合成肝素酶特异性小干扰RNA(siRNA),用脂质体2000转染至T24膀胱移行细胞癌细胞内,常规分为正常对照组、空白对照组、阴性对照组和转染实验组进行实验... 详细信息

目的研究siRNA干扰沉默膀胱癌肝素酶基因对T24细胞增殖及MMP-2表达的影响方法体外化学合成肝素酶特异性小干扰RNA(siRNA),用脂质体2000转染至T24膀胱移行细胞癌细胞内,常规分为正常对照组、空白对照组、阴性对照组和转染实验组进行实验,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,反转录聚合酶链法(RT-PCR)检测肝素酶基因的表达,免疫细胞化学方法检测MMP-2的表达。结果RNA干扰沉默T24膀胱移行细胞癌细胞肝素酶基因后,T24细胞增殖活力下降,三个不同干扰组细胞活力分别下降了(28.55±3.66)%(、27.20±3.25)%和(37.29±4.82)%。肝素酶mRNA表达下降,膀胱移行细胞癌细胞中MMP-2(明胶酶A)的表达亦明显下降(P均<0.05)。结论RNA干扰肝素酶基因后,细胞活力及肝素酶mRNA表达水平下降并且明显抑制膀胱癌细胞中MMP-2的表达。

关键词： RNA干扰肝素裂合酶明胶酶A 膀胱肿瘤 T24细胞

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卡托普利对心动过速心肌病心肌缝隙连接蛋白重构的影响

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山东大学学报（医学版） 2008年第2期46卷 140-144页

作者：陶文钟敬泉张薇李艳侯雪梅张运教育部和卫生部心血管重构和功能研究重点实验室山东大学齐鲁医院心内科济南250012

目的研究卡托普利对心动过速心肌病（tachycardia-induced cardiomyopathy，TIC）实验犬心室肌中缝隙连接蛋白重构的影响。方法24只犬随机分为3组。起搏组：实验犬植入永久起搏器，经颈外静脉途径将起搏电极导线置入右心耳（起搏频率350... 详细信息

目的研究卡托普利对心动过速心肌病（tachycardia-induced cardiomyopathy，TIC）实验犬心室肌中缝隙连接蛋白重构的影响。方法24只犬随机分为3组。起搏组：实验犬植入永久起搏器，经颈外静脉途径将起搏电极导线置入右心耳（起搏频率350～450次／min）。起搏加药物组：起搏器植入同起搏组，起搏器植入前3d至起搏8周后，每日给予卡托普利50mg 2次／日口服；对照组：实验犬未植入起搏器也未服药。分别在起搏前及起搏后第1、4、8周记录12导联心电图并行超声心动图检查，起搏8周后行心导管检查，并用激光头聚焦显微镜测定3组左心室肌缝隙连接蛋白（Connexin43，Cx43）含量。结果左心室肌Cx43含量比较：起搏组VS对照组（P〈0．001）；起搏组vs起搏加药物组（P〈0．05），起搏组Cx43含量均明显减低。结论卡托普利有明显延缓慢性实验犬TIC左心室Cx43下降的趋势。

关键词：心动过速性心肌病卡托普利缝隙连接蛋白

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大鼠胱抑素C腺病毒高效表达载体的构建在大鼠心肌成纤维细胞中的表达

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中华老年心脑血管病杂志 2011年第3期13卷 252-255页

作者：张书敏王永梅杜贻萌魏峰涛蒋卫东王欣董兆强姜红鹿庆华山东大学第二医院心血管内科济南250033 教育部和卫生部心血管重构和功能研究重点实验室

目的采用Gateway^(TM)技术构建携带胱抑素C(CysC)基因的重组腺病毒载体,并观察在大鼠心肌成纤维细胞中的表达。方法采用RT-PCR方法从大鼠心肌组织中扩增出CysC基因,将CysC基因经BP重组反应定向克隆至pDONR221载体,获得重组质粒pDONR221-... 详细信息

目的采用Gateway^(TM)技术构建携带胱抑素C(CysC)基因的重组腺病毒载体,并观察在大鼠心肌成纤维细胞中的表达。方法采用RT-PCR方法从大鼠心肌组织中扩增出CysC基因,将CysC基因经BP重组反应定向克隆至pDONR221载体,获得重组质粒pDONR221-CysC,经PCR及测序验证正确的pDONR221-CysC与腺病毒载体pAd/CMV/V_5-DEST在体外进行LR重组反应,CysC取代pAd/CMV/V_5-DEST中的ccdB-Cm^R基因,获得重组腺病毒载体pAd/CMV/V_5-DEST-CysC。采用Western blot技术检测CysC蛋白在293A细胞及大鼠心肌成纤维细胞中的表达。将培养的心肌成纤维细胞随机分为实验组、空载体组和对照组。结果 CysC腺病毒高效表达载体构建成功,测得病毒滴度为5.36×10^(10)ifu/ml,用重组CysC腺病毒转染心肌成纤维细胞24 h后,实验组的转染效率最高(≥90%);与对照组和空载体组比较,实验组CysC蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论成功构建了大鼠CysC腺病毒高效表达载体,并成功包装了含有该基因的重组腺病毒,可有效转染心肌成纤维细胞。

关键词：腺病毒科基因表达转染肌细胞,心脏成纤维细胞半胱氨酸蛋白酶抑制剂逆转录聚合酶链反应

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血脂康对心肌梗死患者颈动脉结构和功能影响的长期研究

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山东大学学报（医学版） 2006年第12期44卷 1229-1232页

作者：孟晓黎莉谭红伟郄良毅钟明冯民张运教育部和卫生部心血管重构和功能研究重点实验室山东大学齐鲁医院心内科山东济南250012

目的:探讨长期服用血脂康对心肌梗死患者颈动脉粥样硬化的影响。方法:65例心肌梗死患者随机分为治疗组和对照组,在常规治疗的基础上,治疗组给予血脂康,对照组给予安慰剂,平均治疗(5.58±1.05)年,治疗前后进行颈动脉超声检查,同时测... 详细信息

目的:探讨长期服用血脂康对心肌梗死患者颈动脉粥样硬化的影响。方法:65例心肌梗死患者随机分为治疗组和对照组,在常规治疗的基础上,治疗组给予血脂康,对照组给予安慰剂,平均治疗(5.58±1.05)年,治疗前后进行颈动脉超声检查,同时测量血脂的变化。结果:与治疗前和对照组比较,治疗后血脂康组颈动脉内-中膜厚度(IMT)、斑块指数及胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平明显降低(P<0.05);且治疗后血脂康组阻力指数、僵硬指数明显低于对照组(P<0.05);收缩期峰值流速、舒张末期流速、最大剪切率、扩张性系数明显高于对照组(P<0.05)。结论:长期服用血脂康可减缓或阻止动脉粥样硬化的进展,对已形成的动脉粥样硬化和斑块具有逆转和消退作用,对大动脉弹性的改变也有一定的保护作用。

关键词：颈动脉粥样硬化血脂康超声检查心肌梗死

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房颤患者右心耳组织SIRT1表达以及与氧化应激的相关性

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第9期28卷 972-974页

作者：孙雪林卜培莉刘军妮王希吴新宁赵立祥山东大学齐鲁医院心内科教育部和卫生部心血管重构和功能研究重点实验室山东济南250012 龙口市人民医院心内科山东龙口265701

目的:观察房颤患者右心耳组织SIRT1的表达及其与心房氧化应激的关系。方法:选择行心脏手术的风湿性心脏病患者共38例,按照是否合并房颤分为两组:持续性房颤组25例(AF组),其房颤持续时间超过6个月;窦性心律组13例(SR组)。在术中取其部分... 详细信息

目的:观察房颤患者右心耳组织SIRT1的表达及其与心房氧化应激的关系。方法:选择行心脏手术的风湿性心脏病患者共38例,按照是否合并房颤分为两组:持续性房颤组25例(AF组),其房颤持续时间超过6个月;窦性心律组13例(SR组)。在术中取其部分右心耳组织,采用免疫组化法检测右心耳组织SIRT1蛋白表达,同时测定右心耳组织匀浆中丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(SOD)活力和金属硫蛋白(MT)的含量。结果:免疫组化结果发现AF组患者SIRT1表达(45.8±4.03)%高于SR组(19.7±2.54)%,差异有统计学意义(P<0.05)。房颤组MDA为(7.24±1.05)nmol/mg,SOD为(1034.25±84.32)U/mg,MT为(7.21±1.46)μg/g,窦性心律组MDA为(3.01±0.47)nmol/mg,SOD为(723.63±65.23)U/mg,MT为(4.31±1.23)μg/g,两者相比有显著性差异(P<0.05)。房颤组SIRT1表达与MDA、SOD、MT呈负相关,相关系数分别为-0.447、-0.521、-0.394(P<0.05)。结论:房颤患者右心耳组织SIRT1表达增加,与氧化应激指标呈负相关,提示SIRT1可能通过抑制氧化应激在房颤中起作用。

关键词： SIRT1 房颤氧化应激

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Rho激酶在乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤细胞凋亡中的作用

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山东大学学报（医学版） 2008年第5期46卷 498-501,505页

作者：孙俊萍张娟宋兆峰李晓星季晓平山东大学齐鲁医院心内科教育部和卫生部心血管重构与功能研究重点实验室济南250012

目的观察Rho激酶在培养乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤细胞凋亡中的作用，及Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔（fasudil，F）对缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响。方法原代培养出生1～2d的sD乳鼠心肌细胞，并行肌钙蛋白抗体免疫荧光染色鉴定，建立... 详细信息

目的观察Rho激酶在培养乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤细胞凋亡中的作用，及Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔（fasudil，F）对缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响。方法原代培养出生1～2d的sD乳鼠心肌细胞，并行肌钙蛋白抗体免疫荧光染色鉴定，建立缺血再灌注损伤（I／R）模型。实验分3组：①正常对照组；②I／R组；③I／R4-F组：建立I／R模型前20min加入法舒地尔，使其终浓度分别为10μmol／L（F1组）、30μmol／L（F2组）、50μmol／L（F3组）。Westernblot分别检测缺血2h，再灌注3h肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1（myosin phosphatase target subunit 1，MYPT1）磷酸化水平，作为Rho激酶功能活化的标志。应用流式细胞仪Annexin—WPI双色法检测再灌注3、6h时点心肌细胞的凋亡率。结果再灌注3h后MYPT1的磷酸化水平明显增加，I/R组为正常对照组的5．7倍（P〈0．01），F1、F2、F3组法舒地尔干预后较I/R组分别减少24．6％、40．1％、60．1％（P〈0．05）；法舒地尔组再灌注3、6h心肌细胞的凋亡率较I／R组同时间点显著下降，随给药浓度的增加，细胞凋亡率呈下降趋势。结论Rho激酶在缺血再灌注心肌细胞中有促凋亡作用，法舒地尔可减少缺血再灌注心肌细胞凋亡的发生，从而发挥良好的心肌保护作用。

关键词：法舒地尔缺血再灌注损伤 Rho激酶细胞凋亡

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乙醛脱氢酶2基因多态性与血管内皮功能及动脉粥样硬化关系的研究

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中华超声影像学杂志 2007年第5期16卷 389-392页

作者：李瑞建陈玉国张运孙祎徐峰吕瑞娟巩会平教育部和卫生部心血管重构与功能研究重点实验室山东大学齐鲁医院急诊科济南250012 教育部和卫生部心血管重构与功能研究重点实验室山东大学齐鲁医院心内科济南250012

目的应用高分辨力超声技术对肱动脉舒张功能及血流动力学进行评价，并结合定量冠状动脉（冠脉）造影结果，探讨乙醛脱氢酶2（ALDH2）基因多态性与血管内皮功能及动脉粥样硬化之间关系。方法 150例经冠脉造影证实的冠心病患者，根据基... 详细信息

目的应用高分辨力超声技术对肱动脉舒张功能及血流动力学进行评价，并结合定量冠状动脉（冠脉）造影结果，探讨乙醛脱氢酶2（ALDH2）基因多态性与血管内皮功能及动脉粥样硬化之间关系。方法 150例经冠脉造影证实的冠心病患者，根据基因测序结果分为A组（野生型）93例（62％）和B组（突变型）57例（38％），观察两组患者冠心病易患因素及冠状动脉病变程度，同时应用高分辨力超声技术评价肱动脉舒张功能及相应状态下血流最大剪切率。结果两组患者基本临床特征比较差异无统计学意义（P〉0．05）。B组患者多支病变率显著低于A组（57．9％对76．4％，P=0．017），Gensini评分亦低于A组（46．3±35．7对61．8±49．3，P=0．04）。高分辨力超声检查：肱动脉基础内径两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。内皮依赖性血管舒张功能检查：反应性充血后肱动脉内径变化两组间差异无统计学意义（P〉0．05）；非内皮依赖性血管舒张功能检查：含化硝酸甘油后B组血管内径的增幅较A组显著减少（P〈0．05），表明B组患者对硝酸酯类药物反应能力较低。脉冲多普勒检查血流动力学，基础状态及反应性充血后肱动脉最大剪切率A组显著低于B组（P〈0．01），提示野生型患者易发生动脉粥样硬化。结论ALDH2基因多态性与血管内皮功能及动脉粥样硬化之间关系密切。ALDH2基因突变虽可导致非内皮依赖性血管舒张功能障碍，但内皮依赖性血管舒张功能不受影响。ALDH2基因突变可能具有抗动脉粥样硬化的作用。

关键词：超声检查动脉硬化内皮,血管醛脱氢酶

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Apelin-Apelin受体信号系统在心血管系统中的作用研究进展

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中华老年心脑血管病杂志 2010年第7期12卷 661-662页

作者：于兴隆葛志明山东大学齐鲁医院心内科教育部和卫生部心血管重构和功能研究重点实验室济南250012

日本学者Tatemoto于2000年用反向药理学方法，首次从牛胃分泌物中分离提取到一种新的血管活性肽，命名为Apelin。G蛋白偶联受体（GPCRs）是通过G蛋白介导其生物学效应的一大类膜受体的总称。未明确内源性配基的GPCRs称为孤儿GPCRs（orph... 详细信息

日本学者Tatemoto于2000年用反向药理学方法，首次从牛胃分泌物中分离提取到一种新的血管活性肽，命名为Apelin。G蛋白偶联受体（GPCRs）是通过G蛋白介导其生物学效应的一大类膜受体的总称。未明确内源性配基的GPCRs称为孤儿GPCRs（orphan GPCRs，oGPCRs）。

关键词：受体 G蛋白偶联高血压心力衰竭糖尿病 2型心血管系统

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钠尿肽C型受体信号通路与心血管疾病

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中国病理生理杂志 2011年第12期27卷 2417-2422页

作者：徐娜娜黄山英柳子墨贺红胡琴国家教育部和卫生部心血管重塑和功能研究重点实验室山东大学齐鲁医院心内科山东济南250012

钠尿肽家族（natriuretic peptides,NPs）主要包括心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide,ANP）、脑钠尿肽（brain natriuretic peptide,BNP）和C型钠尿肽（Ctypenatriuretic peptide,CNP）3类,新发现的还有曼巴蛇钠尿肽、尿扩张素及在澳大利亚大班蛇毒液中的一类钠尿肽样肽类[1]。钠尿肽激素在心血管、肾脏、内分泌系统中的作用研究比较清楚,

关键词：受体,钠尿肽钠尿肽类磷脂酶C 心肌细胞成纤维细胞血管平滑肌细胞

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