检索结果-内蒙古大学图书馆

中华肿瘤防治杂志 2012年第11期19卷 822-826页

作者：齐亚妮钱冬萌芦进荣丁朝霞胡明王斌陈爱平青岛大学医学院附属医院妇科山东青岛266003 青岛大学医学院微生物学教研室山东青岛266071

目的:探讨显性负抑制人转录激活因子5(ATF5)对卵巢癌细胞SKOV-3顺铂敏感性的影响。方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测不同卵巢癌细胞系ATF5的表达。采用脂质体介导法将真核表达质粒pLeGFP-C1-NT-Azip-ATF5和pLeGFP-C1分别转染SKOV-3细... 详细信息

目的:探讨显性负抑制人转录激活因子5(ATF5)对卵巢癌细胞SKOV-3顺铂敏感性的影响。方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测不同卵巢癌细胞系ATF5的表达。采用脂质体介导法将真核表达质粒pLeGFP-C1-NT-Azip-ATF5和pLeGFP-C1分别转染SKOV-3细胞,同时设空白对照组;于转染后24h给予不同浓度的顺铂作用48h,通过MTT法测定细胞增殖抑制率;转染后24h给予4μmol/L顺铂作用0、12、24和48h,通过流式细胞术和蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡和Bcl-2蛋白的表达。结果:ATF5在3种卵巢癌细胞系中均有不同程度的表达,其中SKOV-3细胞系表达最高;显性负抑制SKOV-3细胞内源性ATF5的功能联合顺铂作用后,与非特异性转染组和空白对照组相比,特异性转染组细胞增殖明显受抑制,顺铂的IC50由5.4μmol/L下降为3.6μmol/L;顺铂作用24h,特异性转染组细胞凋亡率显著升高,约为非特异性转染组3倍,抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达明显下降,P<0.05。结论:显性负抑制ATF5的表达可明显增强卵巢癌细胞系SKOV-3对顺铂的化疗敏感性,其协同顺铂诱导细胞凋亡的机制可能与Bcl-2的下调相关。

关键词：卵巢肿瘤 ATF5 细胞凋亡化疗敏感性

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58型人乳头瘤病毒早期蛋白E7对细胞周期蛋白的调控作用研究

58型人乳头瘤病毒早期蛋白E7对细胞周期蛋白的调控作用研究

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：张魏芳赵蔚明于修平山东大学医学院微生物学教研室

目的宫颈癌是仅次于乳腺癌的女性第二大常见恶性肿瘤,而高危型人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）感染与宫颈癌的发生高度相关。继HPV16、18之后,HPV58是亚洲地区引发宫颈癌的第三大高危型HPV型别,但与HPV16、18不同的是,目前尚... 详细信息

目的宫颈癌是仅次于乳腺癌的女性第二大常见恶性肿瘤,而高危型人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）感染与宫颈癌的发生高度相关。继HPV16、18之后,HPV58是亚洲地区引发宫颈癌的第三大高危型HPV型别,但与HPV16、18不同的是,目前尚没有针对HPV58的疫苗,其致癌的具体机制也不甚清楚。方法以在亚洲地区流行的58型HPV E7蛋白为研究目标,利用分子克隆技术构建质粒pBabe-HPV58 E7,以原代角化上皮细胞为靶细胞,利用逆转录病毒包装系统获得表达58 E7的细胞系。研究发现HPV58 E7的表达能显著促进原代角化上皮细胞增殖,并延长原代细胞的生命周期。G1期细胞周期依赖蛋白激酶（Cyclin-dependent kinase,Cdks）是促进细胞增殖的关键,因此检测了激酶Cdk2及其催化亚基cyclin A和cyclin E的蛋白水平,结果显示58 E7表达细胞中Cdk2及cyclin A和cyclin E的表达显著上调,同时激酶活性分析证实Cdk2的活性显著升高。p53作为抑癌蛋白,其功能主要是通过激活p21实现的,p21作为细胞周期蛋白激酶抑制因子（Cyclin-dependent kinase inhibitors,CKIs）,可以抑制激酶Cdk2的活性从而阻断细胞周期的进程。检测p53和p21的蛋白表达水平,结果表明58 E7表达细胞中,p53和p21的蛋白水平显著升高,说明58 E7能逃避或者干扰p21的抑制功能,激活Cdk2,从而使细胞增殖。结果细胞周期分为1、S、G和M 4期,在各期分别存在对应的细胞周期检测点,当细胞受到紫外线照射等DNA损伤时,检测点激活,细胞周期暂时停滞,直至修复完成才进入下一时期。为了验证58 E7是否能逃避G检测点,用DNA破坏药物处理细胞,用流式细胞术进行检测,结果发现更多的对照细胞停滞在G期,进入S期的细胞减少,说明DNA损伤激活了G检测点;而58 E7表达细胞则能逃避G检测点,使更多的细胞进入S期。结论本课题的工作是国际上首次对高危型HPV58 E7致癌的分子机制进行研究,可为发现治疗性靶位或者研制治疗性疫苗提供理论基础。

关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白 Cdk2

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活化NKT细胞在小鼠衣原体生殖道感染中作用的研究

活化NKT细胞在小鼠衣原体生殖道感染中作用的研究

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：王红赵蕾彭莹刘娟齐眉陈强杨熙赵蔚明山东大学医学院医学微生物学教研室加拿大曼尼托巴大学医学微生物系

目的分析自然杀伤T(NKT)细胞在小鼠衣原体生殖道感染中的作用并初步探讨其作用机制。方法雌性BALB/c小鼠腹腔注射NKT细胞特异性刺激物α-galactosylceramide(α-半乳糖神经酰胺)或vehicle(溶媒对照)后阴道接种衣原体(***)。不同时间点... 详细信息

目的分析自然杀伤T(NKT)细胞在小鼠衣原体生殖道感染中的作用并初步探讨其作用机制。方法雌性BALB/c小鼠腹腔注射NKT细胞特异性刺激物α-galactosylceramide(α-半乳糖神经酰胺)或vehicle(溶媒对照)后阴道接种衣原体(***)。不同时间点取小鼠阴道拭子检测衣原体存活数(IFU),同时对小鼠生殖道标本进行病理组织学分析。小鼠生殖道局部引流淋巴结NKT细胞用四聚体染色后,流式细胞术分析细胞的活化情况。利用RT-PCR方法对感染小鼠生殖道组织细胞因子的表达。ELISA检测生殖道引流淋巴结和生殖道冲洗液的细胞因子模式。结果与对照组小鼠相比,α-半乳糖神经酰胺处理组小鼠对衣原体感染体抗力较强,阴道衣原体IFU明显低于对照组存活数较低(P<0.05)。生殖道组织的肉眼及镜下观察发现α-半乳糖神经酰胺处理组小鼠较少发生子宫角扩张和输卵管积水;生殖道局部组织炎症病变较轻。流式检测结果表明,α-半乳糖神经酰胺处理组小鼠的NKT(CD1d tetramer+TCRβ+)细胞以及CD69+NKT细胞的比例较对照组明显增加。荧光定量PCR结果显示,实验组小鼠生殖道组织中IFN-γ和IL-12 mRNA表达水平升高,而IL-10水平下降,与小鼠生殖道引流淋巴结培养上清和生殖道冲洗液的ELISA结果一致。结论经α-半乳糖神经酰胺活化的NKT细胞对生殖道***感染有保护性作用,其保护性作用的发挥与促进宿主抗衣原体生殖道感染的Th1免疫反应有关。

关键词： NKT细胞 α-半乳糖神经酰胺衣原体生殖道感染

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衣原体糖脂抗原对自然杀伤性T细胞生物学活性的影响

衣原体糖脂抗原对自然杀伤性T细胞生物学活性的影响

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：彭莹赵蕾刘露王红陈强高晓玲杨熙赵蔚明山东大学医学院医学微生物学教研室加拿大曼尼托巴大学医学微生物系

目的自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类具有重要免疫调节作用的特殊T细胞亚群,可识别由非经典的MHCI类分子CD1d递呈的糖脂类抗原,而不是肽类抗原。以往研究表明,衣原体在感染过程中可活化NKT细胞,并对其生物学活性产生影响。衣原体在生长繁... 详细信息

目的自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类具有重要免疫调节作用的特殊T细胞亚群,可识别由非经典的MHCI类分子CD1d递呈的糖脂类抗原,而不是肽类抗原。以往研究表明,衣原体在感染过程中可活化NKT细胞,并对其生物学活性产生影响。衣原体在生长繁殖过程中可分泌一种水溶性糖脂抗原(GLXA),与衣原体的感染相关,但GLXA与NKT细胞活性的关系尚不清楚。本研究拟探讨在衣原体感染过程中GLXA是否能够活化NKT细胞及其对NKT细胞生物学活性的影响。方法体外实验,采用GLXA-CD1d-NKT杂交瘤共培养系统,检测在体外细胞水平上GLXA对NKT细胞的活化作用。体内试验,采用NKT缺陷小鼠和野生型小鼠,尾静脉给予GLXA,分别于注射后2 h和12 h检测小鼠血清中IL-4和IFN-γ的分泌水平。小鼠腹腔给予GLXA,用流式细胞术检测NKT细胞的活化、细胞内细胞因子染色检测IL-4和IFN-γ的分泌。结果 GLXA可在体外共培养系统中活化NKT杂交瘤细胞,促使NKT杂交瘤细胞分泌IL-2。体内实验表明:GLXA可促使野生型小鼠的血清中产生较高水平的IL-4和IFN-γ,但在NKT缺陷小鼠体内没有发现这种现象。在流式细胞术检测中,GLXA可在体内促进NKT表面活化标志CD69的表达,并诱导NKT细胞分泌较高水平的IL-4和IFN-γ。结论以上实验初步证明,GLXA可在体内和体外活化NKT细胞,并促进其分泌IL-4和IFN-γ,从而影响NKT细胞的生物学活性和对衣原体感染的免疫调节作用。该研究进一步完善了衣原体感染过程中对宿主免疫的作用机制,并为以GLXA为靶点的疫苗研究奠定了新的理论基础。

关键词：糖脂抗原衣原体 NKT细胞

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上皮性钙黏素及其基因启动子区甲基化与葡萄胎恶变关系

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青岛大学医学院学报 2012年第2期48卷 105-107,110页

作者：李雪戴淑真车艳辞王宁罗兵青岛大学医学院附属医院妇科山东青岛266003 青岛大学医学院微生物学教研室山东青岛266003

目的研究上皮性钙黏素(E-cadherin)及其基因启动子区CpG岛甲基化在葡萄胎恶变中的作用,探讨去甲基化制剂5′-氮杂-2′脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导绒癌细胞株中E-cadherin基因恢复表达的可能性。方法采用免疫组化SP法,检测10例正常早孕绒毛... 详细信息

目的研究上皮性钙黏素(E-cadherin)及其基因启动子区CpG岛甲基化在葡萄胎恶变中的作用,探讨去甲基化制剂5′-氮杂-2′脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导绒癌细胞株中E-cadherin基因恢复表达的可能性。方法采用免疫组化SP法,检测10例正常早孕绒毛和37例葡萄胎组织中E-cadherin的表达。采用甲基化特异性PCR(MSP)检测正常早孕绒毛、非恶变葡萄胎、恶变葡萄胎及绒癌细胞株JAR中E-cadherin基因CpG岛的甲基化状态,并用RT-PCR检测绒癌细胞株JAR经5-Aza-CdR处理后E-cadherin mRNA表达。结果正常早孕绒毛、非恶变葡萄胎、恶变葡萄胎组织E-cadherin蛋白表达阳性率及甲基化率分别为100%、90.00%、41.18%和0、15.00%、41.18%,差异均有显著性(χ2=12.903、4.573,P<0.05)。E-cadherin蛋白表达在甲基化组低于非甲基化组(Ken-dall tau-b=0.769,P<0.05),且恶变葡萄胎组织中E-cadherin基因甲基化率与解剖学分期、预后评分有关(Kendalltau-b=-0.757、-0.663,P<0.05)。在JAR细胞株中E-cadherin基因启动子区呈甲基化状态,且其mRNA弱表达,经5-Aza-CdR处理后的JAR细胞株E-cadherin mRNA表达明显增强。结论 E-cadherin基因启动子区过度甲基化可能是E-cadherin失活的机制之一,与葡萄胎的恶性进展有关。5-Aza-CdR能逆转JAR细胞株中E-cadherin基因甲基化状态,从而恢复E-cadherin基因的转录活性。

关键词：葡萄胎上皮性钙黏素甲基化溴脱氧胞苷

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α-galactosylceramide活化NKT细胞在宿主抵抗衣原体生殖道感染中的作用

α-galactosylceramide活化NKT细胞在宿主抵抗衣原体生殖道感染中...

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中国微生物学会2012感染与免疫学术研讨会

作者：王红赵蕾彭莹刘娟齐眉陈强杨熙赵蔚明山东大学医学院医学微生物学教研室山东省济南市文化西路44号250012 加拿大曼尼托巴大学医学院微生物学和免疫系

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ATF-5在结直肠癌组织中的表达及其意义

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齐鲁医学杂志 2012年第4期27卷 311-313页

作者：程广钱冬萌王斌青岛大学医学院附属医院急诊普外科山东青岛266003 青岛大学医学院微生物学教研室山东青岛266003

目的研究转录激活因子5(ATF-5)在人结直肠癌组织中的表达及其意义。方法选取我院结直肠癌组织标本38例,正常结直肠组织标本12例,采用RT-PCR法检测两种组织标本中ATF-5的表达水平。结果38例结直肠癌组织标本中有32例ATF-5阳性表达,12例... 详细信息

目的研究转录激活因子5(ATF-5)在人结直肠癌组织中的表达及其意义。方法选取我院结直肠癌组织标本38例,正常结直肠组织标本12例,采用RT-PCR法检测两种组织标本中ATF-5的表达水平。结果38例结直肠癌组织标本中有32例ATF-5阳性表达,12例正常结直肠组织标本中无ATF-5阳性表达,两者比较差异有显著性(χ2=24.53,P<0.01)。结论结直肠癌组织中ATF-5高表达,ATF-5可能在结直肠癌的发生、发展中起关键作用。

关键词：转录激活因子类结直肠肿瘤逆转录聚合酶链反应

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衣原体感染中NKT细胞影响NK细胞IFN-γ的产生和杀伤功能

衣原体感染中NKT细胞影响NK细胞IFN-γ的产生和杀伤功能

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2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会

作者：赵蕾高晓玲 Antony George Joyee 白虹赵蔚明杨熙山东大学医学院医学微生物学教研室 Laboratory for Infection and Immunity Departments of Medical Microbiology and ImmunologyFaculty of MedicineUniversity of Manitoba

目的自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类独特的T淋巴细胞亚群。NKT细胞作为一种调节细胞能够影响多种免疫细胞的功能。以往有研究利用α-GalCer对NKT细胞的特异性激活作用揭示了NKT细胞对NK细胞的调节作用,但是这种调节是否在天然微生物感染... 详细信息

目的自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类独特的T淋巴细胞亚群。NKT细胞作为一种调节细胞能够影响多种免疫细胞的功能。以往有研究利用α-GalCer对NKT细胞的特异性激活作用揭示了NKT细胞对NK细胞的调节作用,但是这种调节是否在天然微生物感染中同样发挥作用目前尚不清楚。方法本研究在Chlamydia muridarum(Cm)小鼠呼吸道感染模型中,利用NKT细胞缺陷小鼠和抗体封闭(antiCD1dmAb)策略,对衣原体感染过程中NKT细胞是否能够影响NK细胞的免疫应答进行了研究。结果首先,在体外实验中我们发现Cm体外感染迅速增加了CD69在NK及NKT细胞上的表达,诱导了NK和NKT细胞IFN-γ的迅速产生。而相对与野生型小鼠,NKT KO小鼠的NK细胞CD69表达显著降低,同样,用抗体封闭CD1d与TCR的相互作用从而阻断NKT细胞的活化也显著抑制了NK细胞CD69的表达和IFN-γ的产生。其次,在体内感染实验中,2种细胞在肺部淋巴细胞中百分比和绝对数均显著增加,同时肺NKT细胞和NK细胞均增加了CD69的表达。NKT KO鼠在Cm感染后,脾和肺NK(CD3-NK1.1+)的百分比和绝对数均显著低于野生型小鼠。有趣的是,感染后3 d,NKT缺陷小鼠的肺和脾脏中产IFN-γ的NK细胞的百分比明显低于野生型小鼠。相反,NKT缺陷小鼠的肺和脾脏NK细胞在YAC-1的刺激下脱颗粒的水平(即CD107a的表达)反而明显高于野生型小鼠。以上结果表明:在Cm感染过程中NKT细胞促进了NK细胞的扩增和活化,增强了NK细胞IFN-γ的产生但却抑制了其杀伤功能,揭示了NKT细胞对NK细胞产生IFN-γ以及对靶细胞杀伤的不同调节效应。结论上述研究结果展示了感染中固有免疫细胞间相互作用的复杂性,有利于加深我们对衣原体感染中免疫调节的理解。

关键词：衣原体杀伤功能 IFNγ 自然杀伤细胞自然杀伤T细胞

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表达谱芯片对EB病毒诱导甲基化沉默基因的筛选

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青岛大学医学院学报 2012年第4期48卷 291-294,297页

作者：王菁刘霞韩美艳吴国才王云罗兵青岛大学医学院微生物学教研室山东青岛266021 青岛市妇女儿童医疗保健中心遗传科

目的筛选EB病毒(EBV)相关胃癌中大量EBV诱导的甲基化沉默基因,为EBV相关肿瘤的研究提供理论依据。方法采用Agilent人类全基因组表达谱(4×44K)芯片,检测去甲基化药物Aza作用前后的EBV阳性和阴性胃癌细胞株,筛选出EBV相关胃癌特有的... 详细信息

目的筛选EB病毒(EBV)相关胃癌中大量EBV诱导的甲基化沉默基因,为EBV相关肿瘤的研究提供理论依据。方法采用Agilent人类全基因组表达谱(4×44K)芯片,检测去甲基化药物Aza作用前后的EBV阳性和阴性胃癌细胞株,筛选出EBV相关胃癌特有的甲基化沉默基因。应用实时荧光定量PCR和亚硫酸盐测序(BGS)方法对结果进行验证。结果去甲基化药物作用前后的EBV阳性细胞系差异基因与EBV阳性与阴性胃癌细胞系差异基因的共同基因共68条,此为EBV相关胃癌甲基化沉默特异性基因。在差异倍数为1.5和2.0时,分别检测到19和3条基因。实时荧光定量PCR和BGS验证结果显示,筛选基因在EBV阳性胃癌细胞系中处于低表达、高甲基化状态。结论筛选和鉴定EBV阳性细胞株甲基化沉默的抑癌基因,对明确EBV相关肿瘤的发病机制具有重要作用。

关键词：疱疹病毒4型人甲基化基因肿瘤抑制寡核苷酸序列分析

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产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌感染调查及耐药性分析

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现代生物医学进展 2012年第20期12卷 3870-3872,3909页

作者：陈佳红于春冬孙佰秀赵琳孙雪荣青岛大学医学院微生物学教研室山东青岛266021 青岛市妇女儿童医院检验科山东青岛266011

目的:探讨我院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌阳性率及耐药性的变化,以指导临床合理应用抗生素。方法:对我院自2009年1月至2011年8月住院患儿送检的各类标本中分离得到的肺炎克雷伯菌413株进行ESBLs筛选和确证。结果:共分离得... 详细信息

目的:探讨我院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌阳性率及耐药性的变化,以指导临床合理应用抗生素。方法:对我院自2009年1月至2011年8月住院患儿送检的各类标本中分离得到的肺炎克雷伯菌413株进行ESBLs筛选和确证。结果:共分离得到413株肺炎克雷伯菌,其中产ESBLs的菌株共204株,占49.39%,且有逐年上升趋势。ESBLs阳性菌株对头孢他啶、头孢噻吩、头孢噻肟、阿莫西林耐药程度最为严重,耐药率为100%;对美洛培南、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、环丙沙星高度敏感,敏感率为90.2%～100%。结论:产ESBLs的肺炎克雷伯菌已成为主要耐药菌,应加强耐药监测,重点监管并指导临床合理应用抗生素。

关键词：产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌阳性率

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