检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2011年第1期27卷 19-22页

作者：梁岩高美华张蓓青岛大学医学院免疫学教研室山东青岛266071

目的:构建针对Sp1基因siRNA真核表达载体,转染前列腺癌细胞PC-3,研究反式作用因子Sp1对CD59表达的影响。方法:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建含特异性Sp1基因的重组载体pSUPER-siSp1,脂质体法转染前列腺癌细胞,G418筛选建立稳定... 详细信息

目的:构建针对Sp1基因siRNA真核表达载体,转染前列腺癌细胞PC-3,研究反式作用因子Sp1对CD59表达的影响。方法:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,构建含特异性Sp1基因的重组载体pSUPER-siSp1,脂质体法转染前列腺癌细胞,G418筛选建立稳定表达转染基因的细胞株,RT-PCR和Western blot检测转染细胞中Sp1和CD59基因的表达,染料释放试验判断CD59基因抑制后对补体溶破的抵抗作用。结果:成功构建了Sp1基因siRNA真核表达载体,转染PC-3细胞可表达荧光蛋白,稳定转染的PC-3细胞CD59基因的mRNA和蛋白水平降低,染料释放实验表明CD59基因受抑制后对补体溶破的抵抗作用降低。结论:siRNA-Sp1重组载体有效地抑制了CD59的表达,降低CD59的抗补体活性,结果证明反式作用因子Sp1是CD59表达调控中重要的转录因子,为探讨CD59在肿瘤细胞中高表达的研究奠定了基础。

关键词： CD59 启动子 Sp1转录因子 RNA干扰

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被动吸烟下调大鼠卵泡刺激素、黄体生成素、促性腺激素释放激素及其受体的表达

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解剖学报 2010年第5期41卷 714-718页

作者：尹崇高李若葆李洪利潍坊医学院护理学院潍坊医学院人体解剖学教研室潍坊医学院医学研究实验中心山东潍坊261053

目的研究被动吸烟对Wistar大鼠卵巢结构、激素受体及血清中激素的影响。方法 Wistar大鼠32只,分为实验组和对照组(各16只)。实验组大鼠吸烟3个月,对照组不予吸烟,3个月后处死大鼠。光镜及电镜下观察各组大鼠卵巢结构的改变,免疫组织化... 详细信息

目的研究被动吸烟对Wistar大鼠卵巢结构、激素受体及血清中激素的影响。方法 Wistar大鼠32只,分为实验组和对照组(各16只)。实验组大鼠吸烟3个月,对照组不予吸烟,3个月后处死大鼠。光镜及电镜下观察各组大鼠卵巢结构的改变,免疫组织化学染色检测激素受体的改变,酶联免疫吸附试验检测血清中激素的改变情况。结果实验组大鼠卵巢髓质血管收缩、减少,间质疏松。卵巢颗粒细胞内线粒体水样变、空泡样变,线粒体嵴断裂、模糊;粗面内质网脱颗粒样变。血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、促性腺激素释放激素(GnRH)水平比对照组显著降低,其浓度值比较差异有显著性(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。实验组大鼠卵巢组织中卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)的表达显著低于对照组(P<0.01,P<0.05)。结论被动吸烟可使大鼠血清中FSH、LH及GnRH水平明显降低,大鼠卵巢中FSHR及LHR的表达减少,提示被动吸烟可破坏卵巢的结构及功能,引起生殖内分泌失调。

关键词：被动吸烟卵巢卵泡刺激素黄体生成素促性腺激素释放激素免疫组织化学大鼠

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音速波状蛋白与成纤维细胞生长因子-8联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元

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解剖学报 2011年第1期42卷 22-26页

作者：付文玉吕翠庄文欣陈丹丹吕娥王晓萃杨丽潍坊医学院组织胚胎学教研室潍坊医学院附属医院干细胞实验室山东潍坊261053

目的探讨音速波状蛋白(SHH)与成纤维细胞生长因子-8(FGF-8)促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外定向分化为多巴胺(DA)能神经元的作用。方法体外分离、扩增和鉴定大鼠BMSCs。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后,SHH与FGF-8联合诱... 详细信息

目的探讨音速波状蛋白(SHH)与成纤维细胞生长因子-8(FGF-8)促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外定向分化为多巴胺(DA)能神经元的作用。方法体外分离、扩增和鉴定大鼠BMSCs。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后,SHH与FGF-8联合诱导大鼠BMSCs向DA能神经元分化12d,免疫细胞化学和免疫荧光法检测神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酪氨酸羟化酶(TH)、囊泡单胺转运体(VMAT2)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、细胞周期蛋白(Cyclin)B1的表达。结果诱导后大鼠BMSCs能分化为具有典型神经元形态的细胞,PCNA、CDK2、CyclinB1表达降低,高表达Nestin、NSE、TH和VMAT2,低表达GFAP。诱导后大鼠BMSCs与对照组BMSCs的TH阳性率分别为(46.7±3.3)%和(3.6±2.2)%(P<0.01)。结论 SHH与FGF-8可以在体外诱导大鼠BMSCs定向分化为DA能神经元样细胞。

关键词：间充质干细胞多巴胺能神经元音速波状蛋白成纤维细胞生长因子-8 细胞培养大鼠

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无蹼壁虎抗肿瘤活性成分对HepG2细胞增殖、迁移及凋亡的影响

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中国药理学通报 2012年第1期28卷 101-105页

作者：谢斌高志芹石剑飞于文静连波张仕状刘顺梅潍坊医学院细胞生物学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院生物技术专业实验室山东潍坊261053 潍坊医学院附属医院影像中心山东潍坊261053

目的观察无蹼壁虎抗肿瘤活性成分(Gekko Swinhonisanti-neoplasm active component,GSAAC)对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法 GSAAC与体外培养的人肝癌HepG2细胞共培养,分别以MTT法和Transwell小室检测其对细胞增殖及迁移... 详细信息

目的观察无蹼壁虎抗肿瘤活性成分(Gekko Swinhonisanti-neoplasm active component,GSAAC)对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法 GSAAC与体外培养的人肝癌HepG2细胞共培养,分别以MTT法和Transwell小室检测其对细胞增殖及迁移、侵袭的影响;免疫组化法检测PCNA的表达;Hochest33342荧光染色法、TUNEL法观察GSAAC对HepG2细胞的作用;流式细胞术检测细胞周期及早期凋亡率。结果 GSAAC(25～400 mg.L-1)可明显抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,呈浓度依赖性;Ho-chest33342、TUNEL染色及流式细胞术结果显示,GSAAC可诱导细胞发生早期凋亡,阻滞HepG2细胞从S期进入G2期。结论 GSAAC可能通过影响细胞周期进而抑制HepG2细胞增殖和迁移并诱导细胞发生凋亡,进而实现抑制肿瘤的作用。

关键词： HepG2 无蹼壁虎抗肿瘤活性成分增殖凋亡迁移流式细胞术

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T细胞活化连接蛋白脂筏定位功能缺失影响T细胞内CD59信号转导的功能

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第11期29卷 1121-1124,1128页

作者：秦云高美华王冰张蓓李园园李营梁洁青岛大学医学院免疫学教研室山东青岛266071

目的用前期构建好的T细胞活化连接蛋白(LAT)-EGFP质粒,基因点突变技术使LAT-EGFP的棕榈酰化位点突变,使LAT-EGFP-M(棕榈酰化位点突变的LAT-EGFP)的细胞膜定位功能缺失,抗体交联CD59后观察T细胞信号活化状态的改变。方法采用电转染的方... 详细信息

目的用前期构建好的T细胞活化连接蛋白(LAT)-EGFP质粒,基因点突变技术使LAT-EGFP的棕榈酰化位点突变,使LAT-EGFP-M(棕榈酰化位点突变的LAT-EGFP)的细胞膜定位功能缺失,抗体交联CD59后观察T细胞信号活化状态的改变。方法采用电转染的方法转染Jurkat细胞,抗体交联CD59后,共聚焦荧光显微镜下观察LAT分布情况的变化;用噻唑蓝(MTT)比色法检测抗体交联前后各组Jurkat细胞增殖情况差别;应用ELISA检测各组细胞上清中IL-2的变化水平;用Western blot技术检测抗体交联后LAT-EGFP和LAT-EGFP-M的磷酸化程度。结果抗体交联CD59之后,LAT-EGFP-M较LAT-EGFP相比不能定位聚集于CD59所在的脂筏区域,并且转染了突变LAT-EGFP-M质粒的Jurkat细胞增殖速度和IL-2分泌能力低于转染LAT-EGFP质粒、转染空载体EGFP-N3及未转染的细胞。LAT-EGFP-M的磷酸化程度远低于LAT-EGFP。结论棕榈酰化位点缺失的LAT会减弱CD59在T细胞中的信号转导功能。

关键词： CD59 T细胞活化连接蛋白棕榈酰化 T淋巴细胞

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T细胞活化接头蛋白棕榈酰化位点突变抑制CD59 GPI介导的T淋巴细胞活化信号转导

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第8期31卷 1013-1016,1021页

作者：高美华王丽娜王冰丛蓓蓓张树超青岛大学医学院免疫学教研室山东青岛266071

目的构建T细胞活化接头蛋白(LAT)棕榈酰化位点突变的慢病毒,感染Jurkat细胞,建立稳定转染的细胞株,观察LAT棕榈酰化位点突变对CD59介导的T淋巴细胞活化信号转导的影响。方法构建阴性对照(neg-EGFP)、LAT-M-EGFP融合蛋白基因载体,包装成... 详细信息

目的构建T细胞活化接头蛋白(LAT)棕榈酰化位点突变的慢病毒,感染Jurkat细胞,建立稳定转染的细胞株,观察LAT棕榈酰化位点突变对CD59介导的T淋巴细胞活化信号转导的影响。方法构建阴性对照(neg-EGFP)、LAT-M-EGFP融合蛋白基因载体,包装成慢病毒,分别感染Jurkat细胞,建立稳定感染的细胞株。激光共聚焦显微镜观察病毒感染效率及融合蛋白在细胞上的定位;CCK-8法检测CD59单克隆抗体交联前后各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测磷脂酶Cγ1(PLC-γ1)、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)蛋白的表达。结果共聚焦显微镜观察发现LAT-M组细胞的LAT分子在细胞膜上散在分布,CD59抗体交联刺激后,未出现明显的点簇状聚集区。与阴性对照细胞相比,LAT-M细胞增殖活性明显降低,中晚期凋亡细胞明显增加;Western blot结果显示,LAT-M组的PLC-γ1、LCK蛋白表达水平和阴性对照组大致相同,经抗体活化后无明显变化,而阴性对照细胞的PLC-γ1、LCK蛋白表达量下降。结论 LAT棕榈酰化位点突变的Jurkat细胞脂筏定位功能缺失,细胞处于抑制状态,对CD59糖基磷脂酰肌醇(GPI)介导的T淋巴细胞活化信号转导有抑制作用。

关键词： CD59 棕榈酰化信号转导

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突变人CD59分子抗MAC沉积在糖尿病血管病中的作用

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第9期25卷 774-776,779页

作者：张丽高美华青岛大学医学院免疫学教研室山东青岛266000

目的:研究糖化人突变(HM)CD59作为补体攻膜复合体(MAC)抑制物在糖尿病血管病病理机制中的重要作用。方法:构建2种HMCD59重组质粒,转染CHO细胞;FCM、Western blot筛选高表达细胞。糖化,BCECF释放试验测定糖化HMCD59和糖化HNCD59抗补体活... 详细信息

目的:研究糖化人突变(HM)CD59作为补体攻膜复合体(MAC)抑制物在糖尿病血管病病理机制中的重要作用。方法:构建2种HMCD59重组质粒,转染CHO细胞;FCM、Western blot筛选高表达细胞。糖化,BCECF释放试验测定糖化HMCD59和糖化HNCD59抗补体活性。ELISA测定30例糖尿病无血管病变组和30例Ⅱ型糖尿病血管病组血清PDGF-BB、VEGF含量。结果:筛选细胞株表达率分别为59.8%、53.7%、54.5%;BCECF释放试验显示糖化前转染突变CD59细胞比较糖化后细胞染料释放率低(P<0.01);而正常CD59细胞比较糖化后细胞染料释放率无统计学意义。Ⅱ型糖尿病有血管病变组与糖尿病无血管病变组相比,血清PDGF-BB、VEGF明显增高(P<0.01)。结论:证实HMCD59易糖化抗补体活性下降加速糖尿病血管病的发生发展。

关键词： CD59 真核表达糖化补体免疫分子

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雷公藤在大鼠1型糖尿病模型中对调节性T细胞Foxp3表达的影响及意义

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第3期24卷 270-273页

作者：梁春联王静青岛大学医学院免疫学教研室山东青岛266021

目的:研究雷公藤在大鼠1型糖尿病模型中对CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)Foxp3基因表达的影响及意义。方法:将48只大鼠随机分为3组,每组各16只,Ⅱ、Ⅲ组采用小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法制备大鼠1型糖尿病模型,Ⅰ组为正常对照。... 详细信息

目的:研究雷公藤在大鼠1型糖尿病模型中对CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)Foxp3基因表达的影响及意义。方法:将48只大鼠随机分为3组,每组各16只,Ⅱ、Ⅲ组采用小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法制备大鼠1型糖尿病模型,Ⅰ组为正常对照。Ⅲ组在成模后给与雷公藤多甙(GTT)灌胃,1次/d,连续3个月。淋巴细胞转化试验(MTT法)检测脾淋巴细胞增殖活性;荧光定量PCR检测外周血及脾淋巴细胞Foxp3 mRNA的表达;免疫组化检测淋巴结和脾组织FOXP3蛋白的表达。结果:Ⅱ、Ⅲ组血糖水平高于Ⅰ组(P<0.01);胰岛中Ⅲ组淋巴细胞浸润程度较Ⅱ组减轻;Ⅱ、Ⅲ组淋巴细胞增殖活性均较Ⅰ组升高(P<0.01),用药后Ⅲ组较Ⅱ组降低;Foxp3 mRNA、FOXP3蛋白表达水平Ⅱ、Ⅲ组均高于Ⅰ组(P<0.05),Ⅲ组表达水平较Ⅱ组有所升高,但差别无统计学意义(P>0.05)。结论:Foxp3+Tr细胞参与了STZ诱导的大鼠1型糖尿病的发生发展;上调Tr细胞Foxp3基因的表达可能为雷公藤治疗1型糖尿病的机制之一。

关键词： CD4^+CD25^+调节性T细胞 Foxp3 雷公藤 1型糖尿病

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基于随机森林算法的胰腺癌术后预测模型构建

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吉林大学学报（医学版） 2022年第2期48卷 426-435页

作者：李承圣包绮晗郝晓燕潘庆忠王素珍石福艳潍坊医学院公共卫生学院卫生统计学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院护理学院内外科教研室山东潍坊261053 潍坊医学院公共卫生学院数学教研室山东潍坊261053

目的:通过随机森林算法构建胰腺癌患者术后5年生存情况预测模型,为胰腺癌患者术后预后评估提供指导。方法:利用美国国立癌症研究所监测、流行病学和结果数据库(SEER)收集符合本研究要求的42618条胰腺癌患者及其预后数据,经过数据筛选最... 详细信息

目的:通过随机森林算法构建胰腺癌患者术后5年生存情况预测模型,为胰腺癌患者术后预后评估提供指导。方法:利用美国国立癌症研究所监测、流行病学和结果数据库(SEER)收集符合本研究要求的42618条胰腺癌患者及其预后数据,经过数据筛选最终纳入4020条患者信息。将研究对象随机分为训练集和测试集,采用χ2检验、多因素Logistic回归分析和随机森林变量重要性排名进行特征变量选择;利用合成少数样本过采样技术(SMOTE)将训练集调整为平衡数据集;基于平衡后数据集利用随机森林算法构建预测模型;利用测试集,基于G-mean指数、灵敏度、特异度和受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)4个评价指标,分别与Logistic回归分析、支持向量机、决策树和人工神经网络算法进行比较,对预测模型做出评价。结果:原始训练集中包含2814个样本,其中生存时间≥5年的患者有196例,占比约1/13,是不平衡数据集,经过SMOTE方法调整后获得平衡数据集,二分类样本数量基本达到平衡。最终纳入模型的变量有年龄、种族、肿瘤原发部位、肿瘤分化程度、是否放疗、T分期、N分期、婚姻状况、肿瘤大小和淋巴结阳性比率。基于随机森林算法构建的胰腺癌患者术后预测模型G-mean指数为0.830,AUC为0.833[P<0.05,95%置信区间(CI)(0.784,0.876)],优于Logistic回归分析、支持向量机、决策树和人工神经网络。结论:基于随机森林算法构建的胰腺癌术后预测模型对胰腺癌患者术后5年生存情况的预测性能优于其他常见机器学习方法,能够为临床医生改善胰腺癌患者的预后和生存状况提供依据。

关键词：胰腺肿瘤随机森林算法预测模型预后模型比较

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人CD59基因的突变和表达及其活性研究

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第2期21卷 151-154页

作者：张艳丽高美华青岛大学医学院免疫学教研室山东青岛266021

　目的: 构建人突变CD59(hmCD59)基因的真核表达系统, 深入研究hmCD59在糖尿病血管并发症中的作用。方法: 分别构建两种含有hmCD59全长cDNA序列的重组pALTER质粒, 运用脂质体介导法, 与pcDNA3质粒共转染CHO细胞, 以G418筛选阳性克隆(编... 详细信息

　目的: 构建人突变CD59(hmCD59)基因的真核表达系统, 深入研究hmCD59在糖尿病血管并发症中的作用。方法: 分别构建两种含有hmCD59全长cDNA序列的重组pALTER质粒, 运用脂质体介导法, 与pcDNA3质粒共转染CHO细胞, 以G418筛选阳性克隆(编号为hmCD59- 1- CHO及hmCD59 -2- CHO)。应用荧光抗体技术、免疫酶联技术及Westernblot, 进一步检测hmCD59蛋白在转染细胞膜表面的表达。通过双羧乙基碳氧荧光素四乙酰氧甲酯 (BCECF/AM)荧光染料释放试验, 对hmCD59蛋白糖基化前后的抗补体活性进行检测。结果: 筛选出的阳性克隆细胞用荧光抗体技术免疫酶联技术检测表明, 在细胞膜表面有hmCD59分子表达。将细胞的裂解物进行Westernblot证实, 在其相对分子质量(Mr)为 20 000处可见 1条与CD59的Mr相当的蛋白带。BCECF/AM荧光染料释放试验提示, 两种突变质粒的表达产物均具有抗补体活性, 糖基化后活性减弱。结论: 获得两株可稳定表达hmCD59的细胞。表达的hmCD59具有抗补体活性, 但糖基化后活性减弱。

关键词：人突变CD59 真核表达中国仓鼠卵巢细胞抗补体活性

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