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中国组织工程研究 2025年第4期29卷 661-669页

作者：孙现娟王秋花张锦艺杨杨杨王文双张晓晴滨州医学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室生物材料与组织再生国际合作联合实验室山东省烟台市264003 烟台毓璜顶医院妇科山东省烟台市264000

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间... 详细信息

背景:临床上迫切需要小口径人工血管来治疗冠状动脉和外周动脉疾病,目前,血管组织工程已成为制备小口径人工血管的主要方法,选择合适的生物材料和细胞来源是小口径组织工程血管构建成功的关键因素。目的:观察4种静电纺丝膜材料对骨髓间充质干细胞增殖、黏附及分化为血管平滑肌细胞的影响。方法:分离提取SD大鼠骨髓间充质干细胞。将骨髓间充质干细胞分别接种于聚己内酯(PCL)、聚己内酯-透明质酸(PCL-HA)、聚己内酯-丝素蛋白(PCL-SF)、聚己内酯-明胶(PCL-GEL)静电纺丝膜材料上,培养1,3,7 d后,扫描电镜下观察材料上的细胞排布,鬼笔环肽染色观察材料上的细胞增殖与黏附,qRT-PCR检测材料上细胞分泌的CD90、Meflin、转化生长因子βmRNA表达;向血管平滑肌细胞诱导分化7 d后,qRT-PCR检测材料上细胞ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达。结果与结论:①扫描电镜下可见骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上均沿着静电纺丝膜的纤维走向排列;②鬼笔环肽染色显示,骨髓间充质干细胞在4种静电纺丝膜上分布规律,均沿着纤维走向呈现平行分布,并且PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL静电纺丝膜较PCL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附,PCL-SF静电纺丝膜相较于PCL-HA、PCL-GEL静电纺丝膜更有利于骨髓间充质干细胞的增殖、黏附;③qRT-PCR检测显示,4种静电纺丝膜材料均可维持骨髓间充质干细胞CD90和Meflin的mRNA表达,组间比较差异无显著性意义(P>0.05);PCL-HA、PCL-SF、PCL-GEL组培养1,7 d的转化生长因子βmRNA表达高于PCL组(P<0.05),PCL-SF组培养3,7 d的转化生长因子βmRNA表达高于其他3组(P<0.05),PCL-HA组培养7 d的转化生长因子βmRNA表达高于PCL-GEL组(P<0.05);④qRT-PCR检测显示,PCL-SF组ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达高于其他3组(P<0.05),PCL-HA组ɑ-平滑肌肌动蛋白mRNA表达高于PCL组(P<0.05);⑤结果表明:相较于PCL、PCL-HA、PCL-GEL静电纺丝膜,PCL-SF静电纺丝膜与骨髓间充质干细胞结合更适合制备小口径组织工程血管。

关键词：骨髓间充质干细胞小口径组织工程血管静电纺丝聚己内酯聚己内酯-透明质酸聚己内酯-丝素蛋白聚己内酯-明胶

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聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜联合间充质干细胞修复子宫内膜损伤

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中国组织工程研究 2025年第16期29卷 3369-3379页

作者：安江茹张锦艺王秋花杨杨杨王文双张晓晴滨州医学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室生物材料与组织再生国际合作联合实验室山东省烟台市264003 烟台毓璜顶医院妇科山东省烟台市264000

背景:人子宫内膜间充质干细胞能够直接修复受损的子宫内膜,促进血管生成、恢复子宫形态结构,然而将干细胞直接注入受损子宫内膜后的细胞存活率低、滞留时间短,修复效果有限。目的:观察聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜复合人子宫内膜间充质... 详细信息

背景:人子宫内膜间充质干细胞能够直接修复受损的子宫内膜,促进血管生成、恢复子宫形态结构,然而将干细胞直接注入受损子宫内膜后的细胞存活率低、滞留时间短,修复效果有限。目的:观察聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜复合人子宫内膜间充质干细胞修复大鼠子宫内膜损伤的效果。方法:①细胞实验:采用胶原酶消化法提取人子宫内膜间充质干细胞,静电纺丝技术制备聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜。将人子宫内膜间充质干细胞分别接种于聚苯乙烯培养板与聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜上,通过DNA定量分析、WST-1细胞活性实验、鬼笔环肽染色、扫描电镜观察细胞的增殖与黏附能力,qRT-PCR检测静电纺丝膜上细胞CD90、Meflin的mRNA表达。②动物实验:取27只处于动情期的雌性SD大鼠,通过机械搔刮法建立宫腔粘连模型后随机分为3组,每组9只:空白对照组不进行任何治疗,对照组将聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜植入宫腔损伤部位,实验组将聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜/人子宫内膜间充质干细胞补片植入宫腔损伤部位。术后第3,7,14天取材,采用苏木精-伊红染色观察子宫形态结构及腺体数量,qRT-PCR和免疫荧光染色观察子宫组织CD31、血管内皮生长因子的表达。结果与结论:①细胞实验:与聚苯乙烯培养板相比,聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜可促进人子宫内膜间充质干细胞的增殖与黏附,并且聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜支持人子宫内膜间充质干细胞基因CD90和Meflin的表达;②动物实验:苏木精-伊红染色显示,聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜/人子宫内膜间充质干细胞补片可促进子宫内膜损伤后形态结构的恢复,术后第14天的内膜厚度与腺体数量均多于空白对照组、对照组(P<0.05);qRT-PCR和免疫荧光染色检测显示,实验组术后第7,14天的CD31、血管内皮生长因子mRNA与蛋白表达均高于空白对照组、对照组(P<0.05);③结果表明:聚己内酯-透明质酸静电纺丝膜可以提高干细胞的存活率、延长干细胞与受损组织的接触时间,二者复合移植可更好地修复受损子宫内膜组织。

关键词：子宫内膜宫腔粘连人子宫内膜间充质干细胞静电纺丝膜聚己内酯透明质酸

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露蜂房纯化蛋白对急性髓系白血病患者骨髓细胞的影响

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中国药理学通报 2007年第5期23卷 685-687页

作者：时彦张圣明张雪莉吴洪娟李峰杰潍坊医学院组织胚胎学教研室

目的研究中药露蜂房纯化蛋白(nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ)对急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的作用并探讨其机制。方法采用NVP-Ⅱ在体外作用于AML患者BMMNC,经光镜、电镜、Hochest33258染色法、TdT缺口末端标记(TUN... 详细信息

目的研究中药露蜂房纯化蛋白(nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ)对急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的作用并探讨其机制。方法采用NVP-Ⅱ在体外作用于AML患者BMMNC,经光镜、电镜、Hochest33258染色法、TdT缺口末端标记(TUNEL)技术等方法检测NVP-Ⅱ对AML患者BMMNC的影响。结果不同浓度NVP-Ⅱ对AML患者BMMNC有不同程度的生长抑制和诱导凋亡作用。①光镜下观察到,与生理盐水对照组比较,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC数量明显减少,胞质内颗粒增多,并有较多的细胞碎片。②透射电镜下发现,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC细胞核染色质浓缩、碎裂,靠核膜边集呈块状,并形成凋亡小体;线粒体基质深染,呈现空泡样变及髓样变。③Hochest33258染色法显示,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC核染色质高度凝聚,致密浓染,或裂解呈碎块状,边缘光滑清晰。④TUNEL检测见阳性细胞核深染,NVP-Ⅱ处理组与生理盐水处理组比较,凋亡细胞明显增多(P<0.05)。结论NVP-Ⅱ可抑制AML患者BMMNC生长并诱导其凋亡。

关键词：露蜂房蛋白白血病骨髓单个核细胞凋亡

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Wnt抑制因子-1在肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因小鼠中的表达变化

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解剖学报 2011年第5期42卷 588-593页

作者：吴欣管英俊于丽陈燕春王珊珊潍坊医学院组织学与胚胎学教研室山东潍坊261053

目的检测Wnt抑制因子-1(Wif-1)在成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型小鼠脊髓内的表达变化,进一步探讨Wif-1在ALS发病中的作用。方法选取ALS转基因鼠和同窝野生型鼠各54只,分别于鼠龄95d、108d、122d取材,部分鼠经4%多聚甲醛心脏... 详细信息

目的检测Wnt抑制因子-1(Wif-1)在成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型小鼠脊髓内的表达变化,进一步探讨Wif-1在ALS发病中的作用。方法选取ALS转基因鼠和同窝野生型鼠各54只,分别于鼠龄95d、108d、122d取材,部分鼠经4%多聚甲醛心脏灌注固定、分离脊髓、制备冷冻切片,应用免疫荧光染色技术检测脊髓内Wif-1的分布及变化;部分鼠取出脊髓、匀浆,应用RT-PCR和Western blotting方法观察不同时间点Wif-1 mRNA及其蛋白表达水平变化。结果成年ALS转基因鼠和同窝野生型鼠脊髓的中央管、灰质、白质中均可检测到Wif-1阳性细胞,在灰质内,Wif-1阳性细胞主要分布于脊髓前角;在白质内,神经元的轴突呈阳性反应。与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠Wif-1阳性细胞显著增多,Wif-1 mRNA和蛋白表达在95d变化不明显,在108d、122d均有升高,差异具有统计学意义(P<0.05),其中108d升高最明显。结论在ALS转基因鼠发病过程中Wif-1阳性细胞明显增多,Wif-1 mRNA和蛋白表达升高,表明Wif-1与ALS的发生密切相关。

关键词：肌萎缩脊髓侧索硬化症 Wnt抑制因子-1 脊髓免疫荧光反转录-聚合酶链式反应免疫印迹法转基因小鼠

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右心室条束的比较解剖学研究

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动物学杂志 1995年第3期30卷 37-40页

作者：谭玉珍王海杰管英俊张艳玲潍坊医学院组织胚胎学教研室

本文用５种动物的３７０例心脏，对右心室条束作了比较解剖学观察。狗右心室条束的出现率为９７％，兔６４％，牛５２％，猪３８％，羊２５％。牛、猪、羊和兔的右心室条束多附着于室间隔和室前壁之间，狗的条束多附着于前乳头肌或室间... 详细信息

本文用５种动物的３７０例心脏，对右心室条束作了比较解剖学观察。狗右心室条束的出现率为９７％，兔６４％，牛５２％，猪３８％，羊２５％。牛、猪、羊和兔的右心室条束多附着于室间隔和室前壁之间，狗的条束多附着于前乳头肌或室间隔和前壁之间。动物的右心室条束可分暗红色条束和乳白色条束，暗红色条束主要由心肌纤维构成，条束周边的结缔组织中含有束细胞；乳白色条束主要由结缔组织和位于中央的束细胞构成，心肌纤维少或缺如。心脏注射标本的条束切片显示，注射剂位于束细胞束周围的结缔组织鞘间隙内。

关键词：心脏右心室条束动物比较解剖学

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帕金森病大鼠黑质小胶质细胞及星形胶质细胞的变化

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解剖学报 2010年第3期41卷 344-348页

作者：庄文欣付文玉吕娥杨丽吕翠张雪莉潍坊医学院组织学与胚胎学教研室山东潍坊261053

目的探讨帕金森病(PD)发病中黑质小胶质细胞和星形胶质细胞的变化。方法采用立体定向术将神经毒素6-羟基多巴胺(6-OHDA)注入大鼠右侧黑质和内侧前脑束内,制备大鼠PD模型。将制模成功的16只PD大鼠随机分为2周和8周模型组,另6只正常大鼠... 详细信息

目的探讨帕金森病(PD)发病中黑质小胶质细胞和星形胶质细胞的变化。方法采用立体定向术将神经毒素6-羟基多巴胺(6-OHDA)注入大鼠右侧黑质和内侧前脑束内,制备大鼠PD模型。将制模成功的16只PD大鼠随机分为2周和8周模型组,另6只正常大鼠作为对照组。观察各组大鼠黑质致密带内多巴胺(DA)能神经元、OX-42(小胶质细胞的特异性标志物)及神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP,星形胶质细胞的特异性标志物)阳性细胞的分布和形态变化。结果 2周和8周模型组损毁侧黑质致密部DA能神经元较健侧显著减少(P<0.01),损毁侧OX-42阳性细胞的数量较健侧明显增加(P<0.01),形态呈"阿米巴状"。损毁侧GFAP阳性细胞数量较健侧明显增加(P<0.01),突起变短,染色加深。2周模型组和8周模型组DA能神经元及两种胶质细胞的变化情况相似。结论 PD大鼠模型中存在着小胶质细胞和星形胶质细胞的激活,且两种胶质细胞的活化程度在PD发病过程中的不同时间无明显差别。

关键词：小胶质细胞星形胶质细胞帕金森病免疫组织化学大鼠

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生长抑素对人红白血病K562细胞超微结构的影响

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电子显微学报 2002年第2期21卷 180-183页

作者：张圣明陈红霞吴红娟李峰杰王尊哲潍坊医学院组织胚胎学教研室山东潍坊261042

目的 :观察生长抑素 (somatostatin ,SMS)对人红白血病K5 6 2细胞超微结构的影响。方法 :采用体外细胞培养 ,加入不同浓度的 8肽生长抑素 (奥曲肽 ,octreotide)作用于K5 6 2细胞 ,透射电镜下观察不同浓度SMS对K5 6 2细胞超微结构影响的... 详细信息

目的 :观察生长抑素 (somatostatin ,SMS)对人红白血病K5 6 2细胞超微结构的影响。方法 :采用体外细胞培养 ,加入不同浓度的 8肽生长抑素 (奥曲肽 ,octreotide)作用于K5 6 2细胞 ,透射电镜下观察不同浓度SMS对K5 6 2细胞超微结构影响的变化。结果 :空白对照组细胞质内有各种发达的细胞器 ;SMS处理组随SMS浓度的增加细胞器有不同程度的变化 ,以 10 - 7mol L～ 10 - 6 mol L变化最明显 ,细胞核染色质靠核膜边集呈块状或新月形 ,胞浆中见核碎裂团块与空泡 ,线粒体基质深染、空泡样变和髓样变。结论 :生长抑素可影响K5 6 2细胞的增殖。

关键词：人生长抑素 K562细胞红白血病超微结构

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中药露蜂房醇提取物对人红白血病K562细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

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解剖学杂志 2004年第1期27卷 18-22页

作者：芦志红张圣明李香群刘加强苗乃法山东潍坊医学院组织胚胎学教研室潍坊261042

目的 :研究中药露蜂房 (NidusVespae,NV)醇提取物对K5 62细胞的作用及其机制。方法 :利用3H TdR掺入、透射电镜、原位末端标记 (TUNEL)技术、免疫组织化学和图象分析等方法。结果 :不同浓度NV醇提取物对K5 62细胞生长具有明显抑制作用 (... 详细信息

目的 :研究中药露蜂房 (NidusVespae,NV)醇提取物对K5 62细胞的作用及其机制。方法 :利用3H TdR掺入、透射电镜、原位末端标记 (TUNEL)技术、免疫组织化学和图象分析等方法。结果 :不同浓度NV醇提取物对K5 62细胞生长具有明显抑制作用 ( 2 7%～ 5 6% )。NV醇提取物组K5 62细胞呈典型的凋亡形态学改变 ,其Bcl 2蛋白表达显著减弱、Bax蛋白表达显著增强。结论 :中药NV醇提取物可明显抑制K5 62细胞增殖 ,其作用机制可能是通过Bcl 2、Bax的表达 ,从而诱导白血病细胞凋亡。

关键词：露蜂房醇提取物白血病 K562细胞肿瘤抑制细胞凋亡细胞培养

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成年肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓细胞增殖的研究

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解剖学报 2008年第2期39卷 160-164页

作者：管英俊于丽岳炳德高海玲陈燕春张皓云潍坊医学院组织学与胚胎学教研室潍坊261042

目的观察成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内源性细胞的增殖和存活情况。方法对ALS转基因鼠进行BrdU注射,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光染色技术检测脊髓内细胞的增殖、分布和存活情况。结果成年ALS鼠脊髓... 详细信息

目的观察成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内源性细胞的增殖和存活情况。方法对ALS转基因鼠进行BrdU注射,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光染色技术检测脊髓内细胞的增殖、分布和存活情况。结果成年ALS鼠脊髓的中央管、灰质、白质均可检测到BrdU阳性细胞,经常可检测到形状相似、成对出现的细胞。在灰质内,BrdU阳性细胞主要分布于脊髓前角。在白质内,BrdU阳性细胞散在分布。前角ALS鼠脊髓内BrdU阳性细胞数量较野生型鼠多。BrdU末次注射后1d、14d均可检测到BrdU阳性细胞,但细胞数量逐渐减少,28d ALS鼠脊髓内仍可检测到少量BrdU阳性细胞,主要分布于中央管部位。增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞的分布和变化规律与BrdU阳性细胞一致。在95d龄ALS鼠(BrdU末次注射1d后),脊髓中Nestin阳性细胞较野生型鼠多,多数Nestin阳性细胞分布于脊髓前角,某些细胞呈BrdU/Nestin双标阳性。在BrdU注射后14d、28d脊髓中,未检测到BrdU/Nestin双标阳性细胞。结论神经退行性病变可激活ALS转基因鼠脊髓的细胞增殖,且细胞存活可达28d。

关键词：肌萎缩脊髓侧索硬化症脊髓细胞增殖 BrdU标记免疫荧光染色转基因鼠

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成年肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓增殖细胞的分化

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解剖学报 2009年第5期40卷 715-719页

作者：于丽管英俊高海玲陈燕春赵春艳杜红梅张皓云岳炳德潍坊医学院组织学与胚胎学教研室潍坊261053

目的探讨成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内增殖细胞的类型及分化情况。方法对ALS转基因鼠发病期进行BrdU标记,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光双标及三标染色技术检测ALS转基因鼠病变进展过程中脊髓内增殖... 详细信息

目的探讨成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内增殖细胞的类型及分化情况。方法对ALS转基因鼠发病期进行BrdU标记,分别于不同时间点取材,冷冻切片,应用免疫荧光双标及三标染色技术检测ALS转基因鼠病变进展过程中脊髓内增殖细胞的分化情况。结果成年ALS转基因鼠发病期脊髓的中央管、灰质、白质均未检测到BrdU/DCX双标记阳性细胞和BrdU/NeuN双标记阳性细胞。灰质、白质和中央管周围检测到大量NG2阳性细胞,阳性细胞数量随病变进展逐渐减少,NG2阳性细胞多呈BrdU阳性表达;可检测到少量BrdU/A2B5双标记阳性细胞;ALS转基因鼠发病期脊髓BrdU/GFAP双标记阳性细胞较多,部分双阳性细胞呈Nestin阳性,而野生型鼠脊髓内未检测到BrdU/GFAP双标记阳性细胞。结论神经退行性病变激活ALS转基因鼠脊髓内源性增殖细胞向神经胶质细胞方向分化,未检测到向神经元方向分化,内源性增殖细胞尚不能有效地促进退行性病变的修复。

关键词：肌萎缩脊髓侧索硬化症脊髓分化免疫荧光转基因鼠

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