检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2009年第12期49卷 1650-1654页

作者：于可响马秀丽李玉峰吴静林树乾姜亦飞黄兵山东省农业科学院家禽研究所山东省禽病诊断与免疫重点实验室济南250023

【目的】构建1型鸭肝炎病毒(DHV)的感染性克隆,用于研究其基因组的结构与功能。【方法】用RT-PCR方法扩增出覆盖整个1型鸭肝炎病毒CL株基因组3个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆(BR-CL)。将BR-CL在体外转录出的... 详细信息

【目的】构建1型鸭肝炎病毒(DHV)的感染性克隆,用于研究其基因组的结构与功能。【方法】用RT-PCR方法扩增出覆盖整个1型鸭肝炎病毒CL株基因组3个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆(BR-CL)。将BR-CL在体外转录出的RNA转染鸭胚肾细胞,并传至第6代,利用RT-PCR方法和间接免疫荧光试验进行鉴定。将获得的子代病毒(CL-R)在SPF鸡胚上传代,观察鸡胚死亡及胚体病变情况。通过胶体金免疫电镜观察子代病毒粒子的形态。【结果】RT-PCR、间接免疫荧光和胶体金免疫电镜均检测到了子代病毒。通过感染SPF鸡胚试验发现,子代病毒能致死鸡胚。【结论】本研究成功构建出具有感染性的DHV全长cDNA克隆,这在国内外还是首次报道,为进一步揭示DHV基因组的结构和功能提供了良好的技术平台。

关键词： 1型鸭肝炎病毒全长cDNA克隆拯救病毒

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2022—2023年鸡主要种源传播性疫病流行动态分析

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中国动物传染病学报 2024年

作者：马秀丽徐怀英高月花于可响刘丽萍胡峰秦卓明山东省农业科学院家禽研究所山东省禽病诊断与免疫重点实验室

自2021年以来，实验室检测的种源传播性疫病的疑似病例如鸡传染性贫血（CIA）、滑液囊支原体（MS）等已连续两年超过呼吸道病例如新城疫（ND）、禽流感（AI）等。对2022—2023年送检的4821份疑似病例的检测表明，鸡传染性贫血病毒（CIA... 详细信息

自2021年以来，实验室检测的种源传播性疫病的疑似病例如鸡传染性贫血（CIA）、滑液囊支原体（MS）等已连续两年超过呼吸道病例如新城疫（ND）、禽流感（AI）等。对2022—2023年送检的4821份疑似病例的检测表明，鸡传染性贫血病毒（CIAV）、MS等种源传播性疫病病原累计检出阳性率为40.92%，远高于呼吸道病的阳性检出率30.51%。其中，在种源传播性疫病病原中，CIAV阳性率最高，为25.18%；其次是禽呼肠孤病毒（ARV），为5.33%；其余依次为MS，占4.36%、禽腺病毒（FAdV）为3.15%等。种源传播性疫病已成为影响家禽雏鸡质量的重要因素。

关键词：鸡种源传播性疫病流行病学动态分析

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中国动物传染病学报 2022年第2期30卷 93-99页

作者：田雪于可响胡峰马秀丽刘存霞黄兵吴家强宋敏训李玉峰山东省农业科学院家禽研究所禽病诊断与免疫重点实验室济南250023

本研究针对病毒基因组5'端非编码区的保守区域设计引物,建立了用于检测鸡传染性腺胃炎相关的圆圈病毒3型(Gyv3)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法。该方法具有较好的特异性,敏感性和重复性,对于鸡Gyv3以外的其他常见鸡病毒性病原的DNA... 详细信息

本研究针对病毒基因组5'端非编码区的保守区域设计引物,建立了用于检测鸡传染性腺胃炎相关的圆圈病毒3型(Gyv3)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法。该方法具有较好的特异性,敏感性和重复性,对于鸡Gyv3以外的其他常见鸡病毒性病原的DNA或cDNA均无特异性扩增,灵敏度能达到30.76 copies/μL,组内和组间变异系数均不超过2%。对临床样品的检测结果显示,本研究建立的荧光定量PCR方法对鸡Gyv3检出率为12.28%。

关键词：鸡传染性腺胃炎 Gyrovirus 3 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR

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雏鸭感染坦布苏病毒后对其生长性能和血液生化指标的影响

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中国兽医学报 2014年第4期34卷 541-545,559页

作者：王友令袁小远于可响张玉霞艾武杨金兴徐怀英李玉峰王莉莉山东省农业科学院家禽研究所/山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室山东济南250023

将200只1d龄雏鸭随机分为2组,攻毒试验组150只,对照组50只,自由采食,预饲7d。8d龄时按100ELD50感染剂量进行雏鸭攻毒,攻毒7d内每日称取体质量并采血分离血清进行生化指标检测。攻毒3d后攻毒组体质量与对照组存在显著差异(P<0.01),攻... 详细信息

将200只1d龄雏鸭随机分为2组,攻毒试验组150只,对照组50只,自由采食,预饲7d。8d龄时按100ELD50感染剂量进行雏鸭攻毒,攻毒7d内每日称取体质量并采血分离血清进行生化指标检测。攻毒3d后攻毒组体质量与对照组存在显著差异(P<0.01),攻毒组谷丙转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰胺转移酶(GGT)、胆碱酯酶(CHE)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐(Cre)、尿酸(UA))等指标各自在不同时间阶段与对照组存在显著差异(P<0.01)。所以雏鸭感染坦布苏病毒后不仅对其生长产生抑制,而且对机体器官尤其是肝脏和肾脏的性能造成影响。以上研究雏鸭感染坦布苏病毒后对其生长性能和血液生化指标的影响,为鸭感染坦布苏病毒的致病机理提供了理论依据。

关键词：鸭坦布苏病毒生长性能血液生化指标

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新城疫病毒抗原性和核心基因的动态演化及防控思考

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中国家禽 2011年第14期33卷 1-6页

作者：秦卓明徐怀英刘玉山黄兵李玉峰山东省农业科学院家禽研究所山东省禽病诊断与免疫重点实验室山东济南250023

新城疫是危害我国家禽业的重要疫病之一,强制免疫是我国的基本国策。免疫压力下,新城疫病毒抗原性和核心基因的变异问题成为众多禽病工作者研究的焦点。本文汇总了近年来国内外对新城疫病毒抗原性和分子变异研究的新进展,结合作者多年... 详细信息

新城疫是危害我国家禽业的重要疫病之一,强制免疫是我国的基本国策。免疫压力下,新城疫病毒抗原性和核心基因的变异问题成为众多禽病工作者研究的焦点。本文汇总了近年来国内外对新城疫病毒抗原性和分子变异研究的新进展,结合作者多年来的科研积累,对影响该病毒抗原性和核心基因分子变异的因素进行了分析,并对生产中新城疫的防控提出了基本建议。

关键词：新城疫病毒抗原性核心基因分子变异防控

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1株鸭坦布苏病毒人工感染雏鸭的病理学研究

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畜牧兽医学报 2013年第1期44卷 66-70页

作者：王友令袁小远杨金兴于可响徐怀英张玉霞艾武秦卓明李玉峰山东省农业科学院家禽研究所/山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室济南250023

7日龄雏鸭经肌肉接种坦布苏病毒BZ株1周后,发病率100%,死亡率为80%。接种鸭全身多数器官出现充血、出血、坏死等症状,病理学变化主要表现在肝实质严重变性、坏死;脾淋巴细胞局部减少;肾小管上皮细胞肿胀;肺淤血,内有大量细胞渗出;胰腺... 详细信息

7日龄雏鸭经肌肉接种坦布苏病毒BZ株1周后,发病率100%,死亡率为80%。接种鸭全身多数器官出现充血、出血、坏死等症状,病理学变化主要表现在肝实质严重变性、坏死;脾淋巴细胞局部减少;肾小管上皮细胞肿胀;肺淤血,内有大量细胞渗出;胰腺中可见凝固性坏死灶;大脑软脑膜充血、水肿,小脑脑膜上炎性细胞浸润。鸭接种该病毒后,攻毒组的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、谷氨酰胺转移酶、乳酸脱氢酶水平和血清尿酸的浓度较对照组明显升高。结果表明:坦布苏病毒BZ株可造成全身多器官的病理性损伤以及主要血液生化指标的显著变化,这可能是该病毒致病性的重要机制之一。

关键词：鸭坦布苏病毒病理学研究血清酶

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鸭甲型肝炎病毒的遗传和抗原稳定性分析

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中国动物传染病学报 2018年第6期26卷 48-52页

作者：马秀丽黄兵李玉峰于可响刘存霞胡峰亓丽红宋敏训艾武山东省农业科学院家禽研究所山东省禽病诊断与免疫重点实验室济南250023

本研究测定了实验室保存的25株(2000年～2017年)鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)和32株(2008年～2017年)鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV-3)的VP1基因序列,利用生物信息学软件对其以及Genbank中下载的DHAV的VP1基因进行遗传进化关系分析,并选取代表... 详细信息

本研究测定了实验室保存的25株(2000年～2017年)鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)和32株(2008年～2017年)鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV-3)的VP1基因序列,利用生物信息学软件对其以及Genbank中下载的DHAV的VP1基因进行遗传进化关系分析,并选取代表毒株进行血清中和试验,分析DHAV-1或DHAV-3的遗传和抗原稳定性。结果表明,DHAV-1进化为2个遗传分支,2016年～2017年的分离毒株分布在同一分支上;DHAV-3进化为2个不同的分支,2008年～2017年分离毒株集中在相同分支上,又进一步进化为不同的亚分支;DHAV-1或DHAV-3毒株之间无明显的地理分布差异。血清交叉中和试验结果表明,DHAV-1或DHAV-3同一血清型之间具有较好的交叉保护,表明同一血清型的DHAV未发生抗原变异。本研究揭示了DHAV-1或DHAV-3的遗传进化特点和相同血清型之间的抗原稳定性。

关键词：鸭甲型肝炎病毒遗传抗原稳定性血清中和试验血清型

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鸭甲肝病毒1型和3型间接ELISA方法的建立与应用

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微生物学报 2015年第4期55卷 501-509页

作者：张玉瑶马秀丽黄兵李玉峰于可响李建亮刘存霞韩宏宇崔言顺山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东省农业科学院家禽研究所山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室山东济南250023

【目的】研究鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)1型VP3和3型VP1串联基因在大肠杆菌中的表达,并以纯化的重组蛋白为抗原建立鸭病毒性肝炎抗体检测的间接ELISA方法。【方法】设计2对特异性引物,提取鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和3型(DHA... 详细信息

【目的】研究鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)1型VP3和3型VP1串联基因在大肠杆菌中的表达,并以纯化的重组蛋白为抗原建立鸭病毒性肝炎抗体检测的间接ELISA方法。【方法】设计2对特异性引物,提取鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和3型(DHAV-3)的RNA,分别RT-PCR扩增得到714bp的DHAV-1VP3和720bp的DHAV-3 VP1基因,并克隆至p MD18-T载体中,然后依次将DHAV-1 VP3和DHAV-3 VP1定向插入p ET-32a(+)表达载体,获得重组表达载体p ET-1VP3-3VP1,进行IPTG(Isopropyl-beta-D-1-thiogalactopyranoside)诱导表达分析,以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法并应用于临床。【结果】经IPTG诱导表达,在大肠杆菌中可稳定、高效地表达DHAV-1VP3-3VP1蛋白。Western blot检测结果表明,表达的重组蛋白与DHAV-1和DHAV-3阳性血清均能发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为1.0μg/孔,血清最佳稀释度为1∶200,临界值为OD6 50值≥0.38,建立的间接ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。该方法与中和试验分别检测DHAV-3阳性血清,两种方法的符合率各为96.3%和96.7%;初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。【结论】以大肠杆菌表达的DHAV-1VP3-3VP1重组蛋白建立的间接ELISA方法可用于DHAV-1和DHAV-3抗体的检测。

关键词：鸭甲肝病毒1型鸭甲肝病毒3型 VP1基因 VP3基因表达

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一株鸭新城疫强毒的分离鉴定和分子特性分析

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中国家禽 2011年第16期33卷 13-15页

作者：于可响马秀丽吴静黄兵李玉峰秦卓明山东省农业科学院家禽研究所山东省禽病诊断与免疫重点实验室山东济南250023

从山东地区发病鸭中分离到一株新城疫病毒(SDLP09),经测定,其鸡胚半数致死量(ELD50)、鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)、6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)分别为107.85/0.1mL、48.5h、1.80、2.36,表明该新城疫病... 详细信息

从山东地区发病鸭中分离到一株新城疫病毒(SDLP09),经测定,其鸡胚半数致死量(ELD50)、鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)、6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)分别为107.85/0.1mL、48.5h、1.80、2.36,表明该新城疫病毒为强毒。通过分析其融合蛋白(F)发现,F蛋白多肽裂解位点为112RRQKRF117,符合NDV强毒株裂解位点氨基酸序列。F基因分型及氨基酸同源性比较发现,SDLP09株属于基因Ⅶ型,与野鸭源强毒NDV同源性更高,提示着该毒株可能来源于野鸭。

关键词：鸭新城疫病毒 F蛋白分子特性

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鸡传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达及其免疫学原性分析

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浙江农业学报 2010年第5期22卷 585-589页

作者：亓丽红艾武黄兵刘涛秦卓明宋敏训山东省农业科学院家禽研究所山东省禽病诊断与免疫重点实验室山东济南250023

根据对山东IBV流行株的遗传变异分析,选取流行代表株LC2,扩增其S1基因,将其S1基因克隆到pPIC9K载体中,构建了真核表达质粒pPIC9K-S1,经SacⅠ线性化后,通过电转化到毕赤酵母GS115中,经MD/MM及G418筛选,PCR鉴定,获得多拷贝阳性重组菌pPIC9... 详细信息

根据对山东IBV流行株的遗传变异分析,选取流行代表株LC2,扩增其S1基因,将其S1基因克隆到pPIC9K载体中,构建了真核表达质粒pPIC9K-S1,经SacⅠ线性化后,通过电转化到毕赤酵母GS115中,经MD/MM及G418筛选,PCR鉴定,获得多拷贝阳性重组菌pPIC9K-S1-GS115。将重组菌在0.5%甲醇中进行诱导分泌表达,对表达产物进行SDS-PAGE,Western blot分析。结果显示,在酵母培养基上清中检测到分子量为90 ku为目的蛋白,与鸡IBV阳性血清发生特异性反应。将表达上清及其重组菌菌体饲喂SPF鸡,40 d后采血,可检测到IBV保护性抗体。结果表明:表达的IBV的S1蛋白具有很好的免疫原性,为ELISA诊断试剂盒的研制及IBV疫苗的研制奠定基础。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因毕赤酵母表达免疫原性

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