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真菌Polyporus sp. M05多糖诱导白血病细胞株HL-60凋亡作用机制的实验研究

中华肿瘤防治杂志 2010年第6期17卷 431-433,445页

作者：张恒兰杨炜华温培娥任霞姜国胜孙晓柏苏恩裕姜国胜山东省医学科学院基础医学研究所山东省现代医用药物与技术重点实验室山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室济南250062

目的:研究真菌Polyporus sp.M05多糖对白血病细胞株HL-60增殖抑制及诱导凋亡作用,并探讨其分子机制。方法:活细胞计数法检测多糖的增殖抑制作用;倒置显微镜下直接观察细胞形态;PI染色流式细胞术检测多糖诱导周期阻滞及凋亡作用;RT-PCR... 详细信息

目的:研究真菌Polyporus sp.M05多糖对白血病细胞株HL-60增殖抑制及诱导凋亡作用,并探讨其分子机制。方法:活细胞计数法检测多糖的增殖抑制作用;倒置显微镜下直接观察细胞形态;PI染色流式细胞术检测多糖诱导周期阻滞及凋亡作用;RT-PCR检测凋亡相关基因。结果:多糖对HL-60细胞有增殖抑制作用,并随着浓度增大,作用增强;显微镜下观察细胞有明显的凋亡小体。流式细胞术检测细胞有明显G0/G1期阻滞及凋亡峰的出现,并随着时间越长和浓度的增大凋亡阳性率比例越高,与阴性对照相比差异有统计学意义(P<0.01);RT-PCR检测到Bcl-2基因下调,Bax、Fas及Caspase-9基因上调。结论:Polyporus sp.M05中提取的多糖对白血病细胞株HL-60有增殖抑制和诱导凋亡作用,分子机制与Bcl-2基因下调,Bax、Fas及Caspase-9基因上调有关,线粒体途径及死亡受体途径均参与了此凋亡过程。

关键词：真菌 Polyporus 多糖 HL-60 凋亡

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慢性HCV感染患者外周血CD81、CD4表达的观测

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山东大学学报（医学版） 2010年第9期48卷 89-92,96页

作者：程广霞张玲刘靓雯冯照雷李翠玲山东省医学科学院基础医学研究所山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室济南250062 济南市传染病医院检验中心济南250021

目的研究慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染患者外周血CD81、CD4的表达,探讨CD81对患者机体免疫系统的调节作用。方法选择HCV感染患者55例(感染组),健康对照25例(健康对照组),采用流式细胞术检测其外周血CD81、CD4的表达水平,ELISA法检测血清... 详细信息

目的研究慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染患者外周血CD81、CD4的表达,探讨CD81对患者机体免疫系统的调节作用。方法选择HCV感染患者55例(感染组),健康对照25例(健康对照组),采用流式细胞术检测其外周血CD81、CD4的表达水平,ELISA法检测血清中白介素2(IL-2)的含量,RT-PCR法检测血清中HCVRNA的含量。结果感染组CD81分子的表达水平与血清中HCVRNA的含量呈正相关(r=0.474,P<0.01)。感染组外周血淋巴细胞中CD81+细胞和CD3+CD4+T细胞中CD3+CD4+CD81+T细胞的数量均高于健康对照组(P<0.01),且二者呈正相关(r=0.581,P<0.01);感染组CD3+CD4+T细胞的数量和血清中IL-2的含量均显著低于健康对照组(P<0.05),且两者呈正相关(r=0.378,P<0.05)。结论 HCV感染后,HCVRNA的持续存在可能促进细胞表面CD81分子的表达;CD81分子高表达的同时,伴随CD3+CD4+T细胞数量降低,且分泌的细胞因子IL-2减少,参与患者机体的免疫调节。

关键词：丙型肝炎病毒白细胞分化抗原81 CD3+CD4+T细胞白细胞介素2 丙型肝炎病毒RNA

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APL患者诱导分化治疗前后粘附分子ICAM1和VCAM1变化与临床意义

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医学检验与临床 2010年第2期21卷 62-64页

作者：吴国英姜国胜山东省医学科学院基础医学研究所山东省现代医用药物与技术重点实验室山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东济南250062

目的探讨粘附分子sICAM-1和sVCAM-1与白血病之间的关系及其在白血病诊断、治疗及预后监测中的临床意义。方法采用ELISA法检测As2O3对原代APL细胞分泌sICAM-1和sVCAM-1的影响：通过RT—PCR检测As203治疗前后APL患者sICAM-1和sVCAM—1 mRN... 详细信息

目的探讨粘附分子sICAM-1和sVCAM-1与白血病之间的关系及其在白血病诊断、治疗及预后监测中的临床意义。方法采用ELISA法检测As2O3对原代APL细胞分泌sICAM-1和sVCAM-1的影响：通过RT—PCR检测As203治疗前后APL患者sICAM-1和sVCAM—1 mRNA表达变化；采用MTT法检测0．5umol／L的As2O3对APL细胞体外增殖的影响。结果As2O3治疗前APL患者血清中粘附分子水平显著高于对照组，治疗后5～12天血清sICAM-1水平升高，此后逐渐下降，30天时接近正常水平。As2q在体外也可升高原代APL细胞分泌粘附分子水平。As2O3治疗后sVCAM—1和sICAM-1的基因表达均增强，并且随着治疗时间的延长，表达量上调。As2O3在体外能显著抑制APL原代细胞的增殖。结论三氧化二砷可诱导APL细胞由早幼粒细胞向成熟细胞分化，诱导APL患者血清中sVCAM-1和sICAM—1分泌。

关键词：急性旱幼粒细胞白血病(APL) 三氧化二砷诱导分化细胞间粘附分子-1(ICAM-1) 血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)

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Polyporus sp．M05多糖的抗肿瘤作用

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国际肿瘤学杂志 2010年第7期37卷 547-550页

作者：张恒兰杨炜华温培娥任霞孙晓柏姜国胜山东省医学科学院基础医学研究所山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室济南250062

目的研究真菌Polyporus sp．M05多糖PSM—a体内对荷瘤小鼠S180的抑瘤作用及其机制。方法MTT法检测PSM-a体外对S180细胞株的增殖抑制作用。建立S180小鼠模型，灌胃治疗，每日检测肿瘤体积并计算瘤体比和抑瘤率。实验结束后处死小鼠，MTr... 详细信息

目的研究真菌Polyporus sp．M05多糖PSM—a体内对荷瘤小鼠S180的抑瘤作用及其机制。方法MTT法检测PSM-a体外对S180细胞株的增殖抑制作用。建立S180小鼠模型，灌胃治疗，每日检测肿瘤体积并计算瘤体比和抑瘤率。实验结束后处死小鼠，MTr比色法测定小鼠自然杀伤（NK）细胞及淋巴因子活化杀伤细胞（LAK）的杀伤活性。HE染色检测肿瘤组织细胞坏死情况。结果PSM-a在体外能抑制S180细胞生长；在体内能显著降低荷瘤小鼠的瘤重和瘤体比，250μg／ml的PSM-a对肿瘤抑制率高达80％以上；PSM-a能促进NK细胞及LAK细胞的杀伤活性；病理切片显示PSM-a作用后引起肿瘤组织坏死。结论PSM-a对S180荷瘤小鼠肿瘤的生长有明显的抑制作用，其机制可能与提高机体免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤活性有关。

关键词：多孔菌类多糖类肿瘤

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顺铂增加人脑胶质瘤细胞U251对TRAIL敏感性的实验研究

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国际肿瘤学杂志 2010年第5期37卷 386-389,396页

作者：孙晓柏温培娥陈剑任霞张恒兰苏恩裕唐天华任海全姜国胜山东省医学科学院基础医学研究所山东省现代医用药物与技术重点实验室山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室济南250062 济宁市第一人民医院神经外二科

目的研究顺铂在增加人脑胶质瘤细胞U251对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）敏感性的作用，并探讨其分子机制。方法通过倒置荧光显微镜下观察重组腺病毒载体携带的绿色荧光蛋白的表达确定最适感染复数MOI；运用MTF法检测细胞增殖... 详细信息

目的研究顺铂在增加人脑胶质瘤细胞U251对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）敏感性的作用，并探讨其分子机制。方法通过倒置荧光显微镜下观察重组腺病毒载体携带的绿色荧光蛋白的表达确定最适感染复数MOI；运用MTF法检测细胞增殖活性；倒置荧光显微镜下观察Hoechst 33342染色细胞凋亡形态；PI染色后通过流式细胞术检测诱导凋亡作用，RT-PCR法检测凋亡相关基因。结果感染后TRAIL基因的表达明显上调。顺铂增敏TRAIL组与单独组相比，有显著抑制细胞增殖作用（P〈0．05），Hoechst 33342染色观察有明显的核固缩，核碎裂。流式细胞术检测细胞有凋亡峰的出现，增敏组与单独组有显著性差异（P〈0．05）。RT-PCR检测到TRAIL、DR5、caspase-3基因上调，survivin基因下调。DR4表达无明显变化。结论顺铂可以增加人脑胶质瘤细胞U251对TRAIL的敏感性，其分子机制可能与DR5、caspase-3基因上调，survivin基因下调有关。

关键词：神经胶质瘤 TNF相关凋亡诱导配体腺病毒科顺铂

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原发性高血压患者细胞间黏附分子K469E基因多态性与颈动脉内膜中层厚度的相关性研究

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中国老年学杂志 2009年第3期29卷 331-333页

作者：温培娥路方红刘振东商青王舒健赵颖馨孙尚文金世宽山东省医学科学院基础医学研究所山东省现代医用药物与技术重点实验室山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东济南250062

目的探讨ICAM-1基因K496E多态性与动脉粥样硬化(AS)的关系。方法对437名原发性高血压(EH)患者进行颈动脉超声检测,根据检测结果将所有患者分为AS组和动脉正常组(正常组),采用巢式聚合酶链反应和免疫酶联吸附测定技术检测所有患者的细胞... 详细信息

目的探讨ICAM-1基因K496E多态性与动脉粥样硬化(AS)的关系。方法对437名原发性高血压(EH)患者进行颈动脉超声检测,根据检测结果将所有患者分为AS组和动脉正常组(正常组),采用巢式聚合酶链反应和免疫酶联吸附测定技术检测所有患者的细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因K496E基因型和等位基因分布及ICAM-1血浆水平,进行对比分析。结果AS组KK型频率明显高于正常组(χ2=12.437,P=0.000),基因型相对风险度分析发现,KK基因型的个体发生AS的危险性是KE或EE型的2.087倍(OR=2.087,95%CI=1.382～3.151);携带K等位基因发生AS的风险是E等位基因的1.962倍。经二元多因素Logistic回归分析,调整年龄、性别、体重指数、收缩压、舒张压、总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白等指标后,ICAM-1血浆水平、K等位基因和吸烟均不同程度的影响AS的发病,而且K等位基因及吸烟对于AS发病具有一定的协同作用。结论ICAM-1基因K469E多态性与EH患者的AS有相关性,K等位基因可能是AS的遗传危险因素。

关键词：细胞间黏附分子1 基因多态性动脉粥样硬化

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曲古抑菌素A诱导HL-60细胞凋亡机制的研究

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中华肿瘤防治杂志 2009年第4期16卷 249-251,255页

作者：杨炜华温培娥范华赵海涛乔高娟任霞任海全唐天华姜国胜山东省医学科学院基础医学研究所山东省现代医用药物与技术重点实验室山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东济南250062

目的:探讨曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的机制。方法:采用MTT方法检测TSA对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达。结果:0.1μmo... 详细信息

目的:探讨曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的机制。方法:采用MTT方法检测TSA对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达。结果:0.1μmol/L的TSA可明显抑制细胞增殖,P<0.01;0.05μmol/L的TSA可使细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05),但0.1μmol/L的TSA才能引起细胞凋亡(P<0.01);经0.1μmol/L的TSA作用12 h后,Bax、Caspase-9和Caspase-3基因表达明显升高,P<0.01。结论:TSA诱导HL-60细胞凋亡的机制在于引起细胞周期阻滞,上调Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达。

关键词：白血病,早幼粒细胞,急性/病理学抗肿瘤药/药理学半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶细胞凋亡

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修饰的肿瘤抗原肽CEA_(610D)疫苗的体外抗肿瘤作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第2期16卷 120-124页

作者：刘晶李翠玲顾洪涛阴海鹏朱传福温培娥张玲山东省医学科学院基础医学研究所山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室山东济南250062 山东省血液中心HLA研究室山东济南250014

目的:评价修饰的CEA610D抗原肽疫苗体外抗肿瘤免疫的有效性,为其临床应用提供依据。方法:多肽固相合成法合成HLA-A2CEA修饰肽(CEA610D)、HLA-A2天然肽CEA605-613(天然肽)和HLA-A2无关肽MAGE-3(无关肽),采用同种异体混合淋巴细胞与肽共... 详细信息

目的:评价修饰的CEA610D抗原肽疫苗体外抗肿瘤免疫的有效性,为其临床应用提供依据。方法:多肽固相合成法合成HLA-A2CEA修饰肽(CEA610D)、HLA-A2天然肽CEA605-613(天然肽)和HLA-A2无关肽MAGE-3(无关肽),采用同种异体混合淋巴细胞与肽共孵育的方法,诱导肽特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),利用MTT法检测CTL的增殖和杀伤活性;流式细胞术观察细胞表型;RT-PCR检测细胞穿孔素的表达;ELISA法检测CTL上清中IFN-γ的水平。结果:CEA610D疫苗产生肽特异性CTL的能力最强(P<0.05),其CD8+T细胞数也高于天然肽组和无关肽组;在效靶比为40:1时,CEA610D和天然肽所诱导的CTL对CEA+HLA-A2限制性人结肠癌细胞T84的杀伤活性可达(56.7±3.73)%和(51.2±1.86)%,而3种肽特异性CTL细胞对CEA+HLA-A2人结肠癌lovo细胞杀伤活性维持在本底水平;CEA610D组的CTL所释放的杀伤相关介质穿孔素和上清中IFN-γ的水平也显著高于其余两组(P<0.01)。结论:与天然肽相比,CEA610D疫苗可打破自身表位的免疫耐受,在体外抗肿瘤免疫中更具优势。

关键词：肿瘤抗原肽癌胚抗原修饰肽细胞毒性T淋巴细胞抗瘤作用

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淫羊藿苷与黄芩苷联合多柔比星对肝癌细胞APRIL表达和血管内皮细胞生长抑制的研究

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中华肿瘤防治杂志 2009年第20期16卷 1534-1537页

作者：唐菁张玲李翠玲顾洪涛杨尚军阴海鹏温培娥姜国胜山东省医学科学院基础医学研究所山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室山东省医学科学院药物研究所山东济南250062 烟台经济技术开发区医院检验科山东烟台264006

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(ICA)、黄芩苷(BAI)联合化疗药多柔比星(ADM)抑制肝癌HepG2细胞APRIL、VEGF的表达,进而抑制血管内皮细胞生长的作用机制。方法:MTT法检测血管内皮细胞ECV304的增殖活性;RT-PCR法检测HepG2细胞APRIL表达水平和E... 详细信息

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(ICA)、黄芩苷(BAI)联合化疗药多柔比星(ADM)抑制肝癌HepG2细胞APRIL、VEGF的表达,进而抑制血管内皮细胞生长的作用机制。方法:MTT法检测血管内皮细胞ECV304的增殖活性;RT-PCR法检测HepG2细胞APRIL表达水平和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的表达情况;免疫细胞化学检测HepG2细胞VEGF表达水平。结果:HepG2细胞中VEGF蛋白、APRIL和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的mRNA均呈高表达状态,且APRIL与VEGF两者高表达呈显著正相关(P<0.001);HepG2细胞经25μg/mLICA、200μg/mLBAI、2μg/mLADM以及12.5μg/mLICA+1μg/mLADM、100μg/mLBAI+1μg/mLADM5组药物处理后,与未用药对照组相比,APRILmRNA表达水平明显下降;HepG2细胞经5组药物处理后的上清液与未用药对照组相比,对ECV304细胞具有明显的增殖抑制作用,抑制率分别为(2.79±5.57)%、(15.20±3.79)%、(12.10±4.50)%、(19.34±8.17)%和(20.27±4.77)%(P均<0.05);HepG2细胞经5组药物处理后,与未用药对照组相比,VEGF的表达水平明显下降。结论:A-PRIL具有促进静脉内皮细胞ECV304增殖的作用。ICA、BAI联合ADM能降低HepG2细胞中APRIL与VEGF的表达水平,从而发挥其抑制血管内皮细胞ECV304生长的作用。

关键词：淫羊藿苷黄芩苷多柔比星人肝癌细胞 APRIL 血管内皮细胞

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淋巴细胞过度活化及细胞因子与鼻息肉的免疫发病机制研究

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2009年第5期23卷 201-204页

作者：宋忠义张玲李建东李新功李翠玲山东省医学科学院基础医学研究所山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室济南250062 东营市人民医院耳鼻咽喉科山东东营257091

目的:探讨淋巴细胞CD4、CD69和细胞因子RANTES、IL-5、IL-8在鼻息肉组织中的表达及其在鼻息肉发生、发展中的作用。方法:苏木精-伊红染色、免疫组织化学和图像分析法检测34例鼻息肉组织(鼻息肉组)和30例鼻甲黏膜组织(对照组)中CD4、CD69... 详细信息

目的:探讨淋巴细胞CD4、CD69和细胞因子RANTES、IL-5、IL-8在鼻息肉组织中的表达及其在鼻息肉发生、发展中的作用。方法:苏木精-伊红染色、免疫组织化学和图像分析法检测34例鼻息肉组织(鼻息肉组)和30例鼻甲黏膜组织(对照组)中CD4、CD69、CD34、RANTES、IL-5、IL-8的表达。结果:鼻息肉组中淋巴细胞、嗜酸粒细胞弥漫浸润,腺体增生、杯状细胞增生、纤维增生、间质水肿的阳性率明显高于对照组(均P<0.01)。鼻息肉组中CD4、CD69、IL-5、IL-8、RANTES阳性淋巴细胞数密度(n/mm2)明显高于对照组(均P<0.05);CD4、CD69和RANTES、IL-5、IL-8的表达呈显著正相关(P<0.01、P<0.05和P<0.05)。IL-5、RANTES的高表达分别与嗜酸粒细胞浸润呈显著正相关(P<0.05、P<0.01)。IL-8的表达和鼻息肉组织中微血管形成呈显著正相关(P<0.01)。结论:CD4、CD69过度活化的T淋巴细胞及其产生的相关细胞因子IL-5、IL-8、RANTES可能促进和形成鼻息肉的免疫发病过程;IL-5、RANTES可促进嗜酸粒细胞的浸润、聚集、活化;IL-8可促进微血管形成。

关键词：鼻息肉过度活化淋巴细胞 CD4 CD69 RANTES IL-5 IL-8

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