检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2025年第1期57卷 66-73页

作者：王艳萍徐倩倩孟卫芹王金良魏凤董林刘吉山谢金文山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600

旨在建立双重实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,对叉头框蛋白P3(FoxP3)、白细胞介素10(IL-10)的RNA转录进行定量检测。设计并合成FoxP3、IL-10的扩增引物和荧光探针,优化引物浓度、退火温度,建立RT-qPCR方法,检测猪圆环病毒2型(PCV2)感染... 详细信息

旨在建立双重实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,对叉头框蛋白P3(FoxP3)、白细胞介素10(IL-10)的RNA转录进行定量检测。设计并合成FoxP3、IL-10的扩增引物和荧光探针,优化引物浓度、退火温度,建立RT-qPCR方法,检测猪圆环病毒2型(PCV2)感染外周血调节性T淋巴细胞(Treg)和免疫器官中FoxP3和IL-10的mRNA含量;根据Western blot检测蛋白表达验证方法的可靠性。结果:建立的RT-qPCR方法呈现“S”型扩增曲线,相关系数R^(2)≥0.99;转化生长因子-β(TGF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素17(IL-17)等基因的核酸模板和阴性对照均无扩增曲线,最低检测浓度10 copies/μL,批内、批间变异系数分别为0.87%、1.84%;PCV2攻毒组外周血Treg细胞中FoxP3和IL-10的mRNA含量均出现明显升高,FoxP3的mRNA含量在攻毒第14天到达峰值,IL-10的mRNA含量在攻毒第10天到达峰值,PCV2感染后导致胸腺、淋巴结和脾脏中FoxP3和IL-10转录水平升高;Western blot检测表明,FoxP3蛋白表达量在攻毒第14天、第28天,IL-10在攻毒第10天和第14天显著高于对照组,与RT-qPCR结果一致。综上,本研究建立的猪FoxP3、IL-10双重RT-qPCR方法具有特异、敏感、检测稳定可靠的特点,对于评价猪体的免疫应答水平和机体免疫稳态具有重要意义。

关键词： FoxP3 IL-10 实时荧光定量PCR Treg活化免疫负调控

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猪流行性腹泻病毒BZ01株的分离鉴定及培养特性研究

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动物医学进展 2025年第3期46卷 6-11页

作者：魏凤张文通孟庆伟吕素芳王艳张志亭李峰山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 邹平市农业农村局山东邹平256200

用已建立的RT-PCR方法对采集的疑似猪流行性腹泻病猪的粪便样品进行检测,选用Vero细胞分离培养检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性的样品,连续传3代后用RT-PCR方法鉴定,对其S1基因进行序列测定和遗传进化分析,并用Vero细胞对分离毒体外培... 详细信息

用已建立的RT-PCR方法对采集的疑似猪流行性腹泻病猪的粪便样品进行检测,选用Vero细胞分离培养检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性的样品,连续传3代后用RT-PCR方法鉴定,对其S1基因进行序列测定和遗传进化分析,并用Vero细胞对分离毒体外培养所需的接毒时间、收毒时间、接毒剂量及胰蛋白酶浓度进行试验,筛选出该株PEDV体外培养最佳条件。结果表明,该分离株为G2b型,在Vero细胞增殖最佳接毒时间为培养24 h细胞长成单层时,最佳收毒时间为接毒后48 h,最佳接毒剂量为10%,最佳胰蛋白酶浓度为15μg/mL,研究结果可为PEDV的分离培养及提高病毒效价提供参考。

关键词：猪流行性腹泻病毒分离鉴定培养特性

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鸡新城疫、禽流感（H9）二联灭活疫苗不同佐剂免疫效果评价

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中国动物传染病学报 2025年

作者：郭广君吕素芳王艳唐娜张春玲苗立中肖跃强黄兵山东省滨州畜牧兽医研究院山东绿都生物科技有限公司山东省农业科学院家禽研究所

旨在筛选评价新城疫、禽流感（H9）二联灭活苗生产用免疫效果最佳的佐剂。使用3种白油佐剂和2种复合佐剂按一定比例同新城疫和禽流感制备灭活疫苗，分别免疫30日龄SPF鸡，分为免疫组A、B、C、D、E各10只，对照组F组10只，然后对各组疫... 详细信息

旨在筛选评价新城疫、禽流感（H9）二联灭活苗生产用免疫效果最佳的佐剂。使用3种白油佐剂和2种复合佐剂按一定比例同新城疫和禽流感制备灭活疫苗，分别免疫30日龄SPF鸡，分为免疫组A、B、C、D、E各10只，对照组F组10只，然后对各组疫苗进行无菌、物理性状、安全性及免疫效力检验。研究表明，5种佐剂制备的疫苗在无菌、物理性状、安全性均符合国家标准，但各组免疫效果存在差异。B组和E组免疫效果优于其他免疫组，其中E组（ADJ701佐剂）效果最佳，21 d新城疫免疫抗体效价达到1:256，禽流感免疫抗体效价达到1:512，显著高于其他组（P<0.01）。

关键词：佐剂新城疫禽流感灭活疫苗抗体水平

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玉米油中玉米赤霉烯酮的ELISA测定

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现代食品科技 2013年第6期29卷 1431-1433页

作者：孟卫芹武玉香唐世云沈志强山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 山东滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

用间接竞争酶联免疫分析法(ELISA法)对3种玉米油中的玉米赤霉烯酮残留进行了测定,以评价试剂盒的性能。结果表明,标准曲线线性方程y=-2.2x+0.66,相关系数r为0.9974,IC50为0.29μg/kg,线性范围为0.05-4.05μg/kg,灵敏度为0.05μg/kg,添... 详细信息

用间接竞争酶联免疫分析法(ELISA法)对3种玉米油中的玉米赤霉烯酮残留进行了测定,以评价试剂盒的性能。结果表明,标准曲线线性方程y=-2.2x+0.66,相关系数r为0.9974,IC50为0.29μg/kg,线性范围为0.05-4.05μg/kg,灵敏度为0.05μg/kg,添加回收率均大于85%。该法测定玉米赤霉烯酮灵敏度高,重复性好,特异性高,适合用于检测各种玉米油中的玉米赤霉烯酮残留。

关键词：玉米油玉米赤霉烯酮酶联免疫检测法

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的免疫学和免疫逃避研究进展

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病毒学报 2012年第6期28卷 689-698页

作者：张松林韩静李峰高三阳刘磊马永彪沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院滨州256600 滨州市优抚医院滨州256600 山东省绿都生物科技有限公司滨州256600

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。由于该病毒介导的复杂的免疫逃避机制以及抗原性基因的异质性等特征,目前疫苗产... 详细信息

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。由于该病毒介导的复杂的免疫逃避机制以及抗原性基因的异质性等特征,目前疫苗产品不能提供十分有效的保护。对于基因变异较大的流行毒株,疫苗提供的免疫保护更为有限。本文就PRRSV免疫学和免疫逃避的最新研究进展进行归纳总结,以期为PRSSV防控,新型疫苗设计等提供参考。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒免疫学免疫逃避

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昆明小鼠与BALB/c小鼠MHC-Ⅱ分子恒定链的序列差异分析及多克隆抗体的制备

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中国兽医学报 2012年第5期32卷 715-720页

作者：肖跃强董林郭广君魏凤甄洪花唐娜沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600

分离昆明小鼠与BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞,经Con-A活化,提取细胞总RNA,RT-PCR获得小鼠Ii分子(P31、P41)基因,DNAStar软件分析序列。将BALB/c小鼠P31/P41分子插入到pGEX-KG多克隆位点构建原核表达载体,IPTG诱导并经GST标签蛋白纯化柱纯化... 详细信息

分离昆明小鼠与BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞,经Con-A活化,提取细胞总RNA,RT-PCR获得小鼠Ii分子(P31、P41)基因,DNAStar软件分析序列。将BALB/c小鼠P31/P41分子插入到pGEX-KG多克隆位点构建原核表达载体,IPTG诱导并经GST标签蛋白纯化柱纯化表达蛋白,将GST-P31/P41蛋白分别与弗氏佐剂混合乳化后免疫家兔,采集血清。测序分析显示,两品系小鼠P31、P41均分别为648、840bp,编码215个、279个氨基酸;序列比对结果表明,昆明小鼠、BALB/c小鼠P31、P41分子与GenBank已登录核苷酸序列与/或氨基酸序列均存在多个位点差异,且所克隆的两品系小鼠P31分子之间核苷酸序列同源性为98.8%,氨基酸序列同源性为98.6%;两种小鼠P41分子之间核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为99.3%;通过与人、鸡对应Ii分子进行比较,发现与人同源性较高,核苷酸序列同源性在79.0%以上,氨基酸序列同源性在73.0%以上,而与鸡同源性相对较低,核苷酸序列同源性在55.0%以上,氨基酸序列同源性在41%以上。IPTG诱导并纯化后获得GST-P31/P41蛋白,免疫家兔后所采集的血清经ELISA、Western-blotting证实获得了兔抗P31/P41多克隆抗体。结果表示,昆明小鼠与BALB/c小鼠Ii分子间存在差异位点,并成功制备了兔抗Ii分子多克隆抗体,为开展靶向性表位疫苗研究奠定基础。

关键词：恒定链昆明小鼠 BALB/c小鼠序列分析融合表达多克隆抗体

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猪繁殖与呼吸综合征病毒结构和非结构蛋白生物学功能研究进展

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畜牧兽医学报 2012年第11期43卷 1683-1696页

作者：张松林沈志强刘磊马永彪刘吉山山东省滨州畜牧兽医研究院滨州256600 山东省绿都生物科技有限公司滨州256600

猪繁殖与呼吸综合征严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。由于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)介导的特殊的免疫逃避机制以及抗原性基因的异质性等特征,目前疫苗产品不能提供十分有效的保护。作者就PRRSV结构和非... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。由于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)介导的特殊的免疫逃避机制以及抗原性基因的异质性等特征,目前疫苗产品不能提供十分有效的保护。作者就PRRSV结构和非结构蛋白生物学功能的最新研究进展进行归纳总结,以期为PRSSV防控,新型疫苗设计等提供参考。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒生物学功能结构和非结构蛋白

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PRRSV重组N蛋白表达、纯化及间接ELISA检测试剂盒的研制

引用

中国兽医学报 2012年第3期32卷 355-360页

作者：董林王艳萍谢金文沈志强祖立闯山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600

采用RT-PCR扩增出大小409bp猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因(PRRSV N gene),将该基因克隆到表达载体pGEX-KG,构建重组表达载体pGEX-KG-N,转化表达菌株BL21(DM3)诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组N蛋白获得了高效表... 详细信息

采用RT-PCR扩增出大小409bp猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因(PRRSV N gene),将该基因克隆到表达载体pGEX-KG,构建重组表达载体pGEX-KG-N,转化表达菌株BL21(DM3)诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组N蛋白获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为41 000,并具有良好的免疫学活性。扩大诱导培养,收集菌体,提取包涵体,用GST-Protein Purtification Kit亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯度达到90%以上,可满足诊断抗原质量要求。用纯化PRRSV重组核衣壳蛋白GST-N为包被抗原,建立检测PRRSV血清的间接ELISA诊断方法,并组装ELISA试剂盒。优化后抗原最适包被质量浓度为2.5mg/L;血清最适稀释度为1∶100;对血清样本检测临界值为0.224;与美国IDEXX公司的HerdChek ELISA试剂盒符合率为92%,特异性为95%,敏感性为90%;与猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒等常见猪繁殖障碍病标准阳性血清无交叉反应。ELISA试剂盒批内和批间变异系数分别为3.44%～6.34%和5.04%～7.64%。置4℃条件保存12个月,试剂盒稳定性无明显改变。该试剂盒对350份临床疑似血清检出率为88.6%。研制的ELISA试剂盒为PRRSV临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。

关键词： PRRSV N蛋白 ELISA试剂盒

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流行性乙型脑炎病毒E蛋白的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

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中国预防兽医学报 2010年第3期32卷 200-204,231页

作者：祖立闯王金良管宇沈志强董林李娇山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

为建立一种快速检测流行性乙型脑炎病毒抗体的方法,本研究参照已发表的JEV基因组序列,应用RT-PCR扩增了长约1000bp的E基因片段,连接pET30a表达载体中,经诱导后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明其... 详细信息

为建立一种快速检测流行性乙型脑炎病毒抗体的方法,本研究参照已发表的JEV基因组序列,应用RT-PCR扩增了长约1000bp的E基因片段,连接pET30a表达载体中,经诱导后获得了以包涵体形式表达的重组E蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明其具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为诊断抗原,建立了检测流行性乙型脑炎病毒抗体的E-ELISA诊断方法。该诊断方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,为JEV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和JEV流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。

关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白截短表达间接ELISA

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绵羊肺腺瘤病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医学报 2013年第11期33卷 1657-1661,1678页

作者：王金良于新友沈志强孙翠平唐娜山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600

根据GenBank登录的绵羊肺腺瘤病毒gag基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出了276bp的片段。产物经回收与pMD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5a中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标... 详细信息

根据GenBank登录的绵羊肺腺瘤病毒gag基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出了276bp的片段。产物经回收与pMD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5a中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性试验、特异性试验、重复性试验和临床检测应用。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,产物Tm在82～82.5℃之间,灵敏度为2.22个拷贝/μL,特异性和重复性较好,较常规RT-PCR方法提前1h出检测结果。本试验建立了检测JSRV的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR方法,为该病的早期快速诊断,并定量分析JSRV感染程度奠定了基础。

关键词：绵羊肺腺瘤病毒 SYBR Green I 实时荧光定量PCR 标准曲线

来源：评论

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