检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2023年第3期31卷 113-119页

作者：徐晴晴王峰王文秀莫玲沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研工作站滨州256600 扬州大学博士后科研流动站扬州225009 太仓广东温氏家禽有限公司太仓215488 山东省院士工作站滨州256600

为了快速、准确和简便地检测K亚群禽白血病病毒(ALV-K),本研究参照GenBank中ALV-K的gp85基因设计了特异的RPA引物和用于LwCas13a反应系统的crRNA,通过优化反应条件建立了检测ALV-K的CRISPR/Cas13a方法,并验证了该方法的特异性、敏感性... 详细信息

为了快速、准确和简便地检测K亚群禽白血病病毒(ALV-K),本研究参照GenBank中ALV-K的gp85基因设计了特异的RPA引物和用于LwCas13a反应系统的crRNA,通过优化反应条件建立了检测ALV-K的CRISPR/Cas13a方法,并验证了该方法的特异性、敏感性和符合性。结果显示,该法对感染鸡的其他常见病毒的检测均为阴性,特异性良好无交叉反应;灵敏度为50 copies/μL;与PCR的检测结果有很好的符合性。本研究建立的CRISPR/Cas13a检测方法配合试纸条显色在1.5 h左右可对ALV-K进行快速的鉴别诊断,为该病的诊断及防控净化提供了强有力的技术支撑。

关键词： K亚群禽白血病病毒 RPA crRNA CRISPR/Cas13a

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鸡传染性贫血病毒CRISPR/Cas13a检测方法的建立及初步应用

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中国兽医学报 2023年第4期43卷 681-686页

作者：徐晴晴王峰王文秀莫玲沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研工作站山东滨州256600 扬州大学博士后科研流动站江苏扬州225009 太仓广东温氏家禽有限公司江苏太仓215488 山东省院士工作站山东滨州256600

为了快速、准确和简便地检测鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus,CIAV),本研究参照GenBank中CIAV的VP2基因设计了特异的RPA引物和用于LwCas13a反应系统的crRNA,通过优化反应条件建立了检测CIAV的CRISPR/Cas13a方法,并验... 详细信息

为了快速、准确和简便地检测鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus,CIAV),本研究参照GenBank中CIAV的VP2基因设计了特异的RPA引物和用于LwCas13a反应系统的crRNA,通过优化反应条件建立了检测CIAV的CRISPR/Cas13a方法,并验证了该方法的特异性、敏感性和复合性。结果显示,该法对感染鸡的其他常见病毒的检测均为阴性,特异性良好无交叉反应;灵敏度为50copies/μL;与PCR的检测结果有很好的符合率。本研究建立的CRISPR/Cas13a检测方法配合试纸条显色在1.5h内可对CIAV进行快速的鉴别诊断,为该病的诊断及防控净化提供了强有力的技术支撑。

关键词：鸡传染性贫血病毒 RPA crRNA Cas13a

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AtHKT1启动子转化本生烟草的初步研究

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华北农学报 2018年第A01期33卷 10-16页

作者：陆玉建李震张弘扬姜翠凤郝舒蕾林建辉张永磊吴涛滨州学院生物与环境工程学院山东省黄河三角洲野生植物资源开发利用工程技术研究中心山东滨州256603 山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研工作站山东滨州256600 吉林大学博士后科研流动站吉林长春130062 暨南大学生命科学技术学院广东广州510632

HKT蛋白家族主要参与控制K+的吸收和K+/Na+的选择性运输,对提高植物抗胁迫能力具有重要的作用。为了研究At HKT1组织表达水平与植物耐盐性的关系,利用生物信息学技术对HKT类蛋白的同源性、At HKT1基因表达情况及其启动子顺式作用元件进... 详细信息

HKT蛋白家族主要参与控制K+的吸收和K+/Na+的选择性运输,对提高植物抗胁迫能力具有重要的作用。为了研究At HKT1组织表达水平与植物耐盐性的关系,利用生物信息学技术对HKT类蛋白的同源性、At HKT1基因表达情况及其启动子顺式作用元件进行分析和预测,在此基础上将At HKT1启动子导入到本生烟草细胞中,根据GUS染色结果,分析At HKT1基因在本生烟草中的组织表达水平。生物信息学分析结果显示,拟南芥和小麦处于不同的进化分支,亲缘关系较远,提示At HKT1的功能可能与小麦中相应蛋白存在一定的差异。At HKT1基因在拟南芥许多器官和组织中都有丰富的表达,其中在叶、根和花中的表达量较高,证实At HKT1基因可能具有重要的生理功能。At HKT1启动子可能是一个逆境响应启动子,包含多种能够响应环境胁迫的重要元件。因此,At HKT1基因表达很可能受到环境胁迫的调控。GUS染色结果显示,转pHKT1-gus本生烟草幼苗叶、维管系统、根以及花的染色较深,进一步证实At HKT1在这些区域表达量较高。以上结果表明,At HKT1基因表达调控有利于实现Na+的转运,进而调节植物耐盐性。除此之外,还可能有其他一些未知的功能,这进一步增加了At HKT1功能的复杂性。目前,有关HKT类蛋白K+和Na+转运方式的机制并不明确,通过分析At HKT1基因在本生烟草中的表达水平,为进一步了解At HKT1基因的作用机制提供参考。

关键词： AtHKT1基因本生烟草启动子表达水平 GUS染色

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猪链球菌Ide通用截短蛋白原核表达及纯化研究

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中国兽药杂志 2018年第6期52卷 7-12页

作者：曲光刚王长江李书光李茂峰武曰星金婷婷韩文瑜沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研工作站山东滨州256600 吉林大学博士后科研流动站长春130062 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 阳信县综合检验检测中心山东滨州251800

为利用大肠埃希菌表达猪链球菌Ide通用截短蛋白,通过对Gen Bank公布的Ide S蛋白家族基因同源性分析,使用Primer 5.0软件设计一对特异性引物,以猪链球菌2型强毒株JZLQ全基因组为模板,采用PCR方法扩增Ide基因截短片段,经Bam HⅠ和HindⅢ... 详细信息

为利用大肠埃希菌表达猪链球菌Ide通用截短蛋白,通过对Gen Bank公布的Ide S蛋白家族基因同源性分析,使用Primer 5.0软件设计一对特异性引物,以猪链球菌2型强毒株JZLQ全基因组为模板,采用PCR方法扩增Ide基因截短片段,经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后将目的片段分别克隆到p ET28a、p ET32a和p ET-sumo表达载体上,分别转化宿主菌*** BL21(DE3)。通过优化诱导温度及诱导剂IPTG浓度进行表达并对表达产物进行SDS-PAGE分析。结果显示,PCR扩增片段大小约为1200 bp,经双酶切和测序验证构建正确;三种重组表达载体转化大肠埃希菌后均有目的蛋白表达,但不同表达条件下目的蛋白表达量存在差异,其中p ET28a-Tr Ide重组表达载体用25℃诱导、IPTG终浓度为1 mmol/L时可实现重组蛋白的高效可溶性表达,为IdeSsuis蛋白在猪链球菌通用疫苗研发方面的研究奠定了基础。

关键词：猪链球菌2型 IgM裂解酶原核表达 SDS-PAGE分析

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蜂胶黄酮对PPV感染PK-15细胞后产生抗感染因子的研究

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黑龙江畜牧兽医（下半月） 2017年第3期 157-159页

作者：马霞郭振环郑宝亮王晓琳刘永录雷连成沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研工作站山东滨州256600 吉林大学博士后科研流动站长春130062 河南牧业经济学院郑州450046 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

为了研究蜂胶黄酮对猪肾脏细胞(PK-15细胞)感染猪细小病毒(PPV)后产生抗感染因子的影响,试验将蜂胶黄酮从最大安全浓度250μg/m L倍比稀释5个浓度,分别为250.0,125.0,62.5,31.2,15.6μg/m L,与PPV一起加至长成单层PK-15细胞培养体系中,... 详细信息

为了研究蜂胶黄酮对猪肾脏细胞(PK-15细胞)感染猪细小病毒(PPV)后产生抗感染因子的影响,试验将蜂胶黄酮从最大安全浓度250μg/m L倍比稀释5个浓度,分别为250.0,125.0,62.5,31.2,15.6μg/m L,与PPV一起加至长成单层PK-15细胞培养体系中,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定蜂胶黄酮对PPV感染PK-15细胞后产生β干扰素(IFN-β)、γ干扰素(IFN-γ)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)抗感染因子含量的变化。结果表明:与病毒对照组比较,在感染PPV后2,12 h,只有较高浓度的蜂胶黄酮具有显著提高PK-15细胞产生IFN-β、IFN-γ和i NOS抗感染因子含量的能力(P<0.05);PK-15细胞在感染病毒后24,48,72 h,蜂胶黄酮对提高PPV感染PK-15细胞后产生抗感染因子能力比较弱。说明蜂胶黄酮提高PPV感染PK-15细胞产生抗感染因子主要集中在感染的早期。

关键词：蜂胶黄酮猪细小病毒猪肾脏细胞 β干扰素(IFN-β) 抗感染因子 γ干扰素(IFN-γ) 诱导型一氧化氮合酶(iN OS)

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纳米蜂胶黄酮对猪细小病毒的体内外抗病毒作用

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中国兽医学报 2017年第1期37卷 18-22,46页

作者：马霞郭振环刘永录雷连成沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研工作站山东滨州256600 吉林大学博士后科研流动站吉林长春130062 河南牧业经济学院河南郑州450046 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

采用体内外试验研究纳米蜂胶黄酮抗猪细小病毒(PPV)作用。体外试验是以普通蜂胶黄酮为对照,分3种加药方式(先加蜂胶、后加蜂胶、蜂胶和病毒同时加入)加至PK-15细胞中,用MTT法检测细胞活性,实时荧光PCR检测PK-15中PPV含量,观察蜂胶黄酮对... 详细信息

采用体内外试验研究纳米蜂胶黄酮抗猪细小病毒(PPV)作用。体外试验是以普通蜂胶黄酮为对照,分3种加药方式(先加蜂胶、后加蜂胶、蜂胶和病毒同时加入)加至PK-15细胞中,用MTT法检测细胞活性,实时荧光PCR检测PK-15中PPV含量,观察蜂胶黄酮对PK-15抗PPV及清除PPV能力的影响。体内试验是给豚鼠注射PPV后灌胃纳米蜂胶黄酮和普通蜂胶黄酮,检测肺脏、肾脏、肝脏、性腺及血液中PPV含量、血清中HI含量。结果显示:(1)与普通蜂胶黄酮相比,纳米蜂胶黄酮可显著抑制PPV在PK-15上生长,高浓度效果优于低浓度,3种加药方式中先加药物的效果最好;(2)高中剂量的纳米蜂胶黄酮可以显著抑制PPV在血液中复制、减轻PPV对豚鼠体重的影响、提高血清HI效价。结果表明:蜂胶黄酮经纳米化处理后,可以显著提高其抗PPV活性。

关键词：纳米蜂胶黄酮猪细小病毒体内体外抗病毒活性

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蜂胶黄酮对PK-15细胞感染PPV与TGEV产生抗感染因子的比较

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中国兽医学报 2017年第6期37卷 989-993页

为了研究蜂胶黄酮对宿主细胞感染不同结构病毒后产生抗感染因子的影响,将蜂胶黄酮从最大安全质量浓度250mg/L倍比稀释5个浓度,与猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis of pigs virus,TGEV)、细小病毒(porcine parvovirus,P... 详细信息

为了研究蜂胶黄酮对宿主细胞感染不同结构病毒后产生抗感染因子的影响,将蜂胶黄酮从最大安全质量浓度250mg/L倍比稀释5个浓度,与猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis of pigs virus,TGEV)、细小病毒(porcine parvovirus,PPV)分别一起加至长成单层PK-15细胞培养体系中,ELISA法测定蜂胶黄酮对TGEV或PPV感染PK-15细胞后产生IFN-β、IFN-γ和iNOS抗感染因子的含量。结果显示,与病毒对照组比较,在感染TGEV后2,12h的前期,蜂胶黄酮可以显著提高PK-15细胞产生IFN-β、IFN-γ和iNOS含量的能力;在感染PPV后2,12h的前期,只有较高质量浓度的蜂胶黄酮可以提高PK-15细胞产生IFN-β、IFN-γ和iNOS含量的能力。PK-15细胞在感染病毒后24,48和72h,蜂胶黄酮对提高TGEV感染PK-15细胞后产生抗感染因子能力高于PPV。蜂胶黄酮提高有囊膜的TGEV感染宿主PK-15细胞产生抗感染因子能力高于无囊膜的PPV。

关键词：蜂胶黄酮猪传染性胃肠炎病毒猪细小病毒抗感染因子

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SPF鸡胚St3galⅠ基因的克隆及其在MDCK细胞中的表达

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华北农学报 2016年第2期31卷 45-51页

作者：陆玉建吴信明管宇张松林李树芳韩文瑜沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研工作站山东滨州256600 吉林大学博士后科研流动站吉林长春130062 滨州学院生命科学系山东滨州256603 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 郑州大学生命科学院河南郑州450001

为了提高MDCK细胞表面禽流感病毒(AIV)受体的水平,以12日龄的SPF鸡胚为试材,通过反转录PCR扩增唾液酸转移酶Ⅰ基因(St3galⅠ),并将回收的片段插入到pMD18-T载体中。酶切pMD18-T-St3galⅠ和pCI-neo质粒,将目的片段进行连接,构建含有St3ga... 详细信息

为了提高MDCK细胞表面禽流感病毒(AIV)受体的水平,以12日龄的SPF鸡胚为试材,通过反转录PCR扩增唾液酸转移酶Ⅰ基因(St3galⅠ),并将回收的片段插入到pMD18-T载体中。酶切pMD18-T-St3galⅠ和pCI-neo质粒,将目的片段进行连接,构建含有St3galⅠ基因的真核表达载体。利用脂质体介导法转染MDCK细胞,在G418的筛选下,获得具有抗性的转基因细胞系。通过细胞克隆化培养和PCR检测,筛选可稳定表达St3galⅠ基因的细胞株。结果表明,从鸡胚中克隆的St3galⅠ基因成功的插入到pCI-neo质粒,从而实现真核表达载体pCI-neo-St3galⅠ的构建。在G418选择压力下,初步获得了稳转目的基因的MDCK细胞系。将抗性细胞混合克隆进行稀释,经选择后挑选出30个单克隆抗性细胞株。分别以转染细胞基因组DNA和总RNA为模板,经PCR检测显示,目的基因已整合入MDCK细胞的基因组中并可稳定的进行表达。

关键词：唾液酸 St3galⅠ基因 MDCK 转染 G418 PCR

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基于家兔模型的纳米蜂胶黄酮对PPV灭活疫苗免疫应答的研究

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黑龙江畜牧兽医 2016年第8期 198-200页

作者：马霞郭振环刘永录雷连成沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院博士后科研工作站山东滨州256600 吉林大学博士后科研流动站长春130062 河南牧业经济学院郑州450046

为了观察纳米蜂胶黄酮对猪细小病毒（PPV）灭活疫苗免疫应答的影响，试验以家兔为模型动物，并以油乳剂为对照，将30只家兔随机均分为3组，第1～2组分别背部皮下注射0．5mL纳米蜂胶黄酮和油乳剂猪细小病毒灭活疫苗，第3组为对照组注射0... 详细信息

为了观察纳米蜂胶黄酮对猪细小病毒（PPV）灭活疫苗免疫应答的影响，试验以家兔为模型动物，并以油乳剂为对照，将30只家兔随机均分为3组，第1～2组分别背部皮下注射0．5mL纳米蜂胶黄酮和油乳剂猪细小病毒灭活疫苗，第3组为对照组注射0．5mL生理盐水，检测血清抗体效价并观察对体液免疫的影响，测定淋巴细胞增殖及白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-6（IL-6）和1干扰素（IFN-γ）含量并评价对细胞免疫的影响。结果表明：纳米蜂胶黄酮、油乳剂均能提高家兔对PPV灭活疫苗的免疫应答能力，油乳剂提高抗体的效果好于纳米蜂胶黄酮，纳米蜂胶黄酮促进T淋巴细胞增殖和提高细胞因子含量的效果优于油乳剂。说明纳米蜂胶黄酮能增强猪细小病毒灭活疫苗的免疫效果，是一种效果良好的疫苗佐剂。

关键词：猪细小病毒(PPV) 纳米蜂胶黄酮佐剂活性家兔免疫应答体液免疫细胞免疫

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农杆菌介导rd29A启动子驱动otsB基因转化紫茉莉的研究

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植物研究 2016年第3期36卷 401-408页

作者：陆玉建张韩杰韩文瑜沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院/博士后科研工作站滨州256600 吉林大学博士后科研流动站长春130062 滨州学院生命科学系/山东省黄河三角洲野生植物资源开发利用工程技术研究中心滨州256603 山东省滨州畜牧兽医研究院滨州256600

紫茉莉为紫茉莉科紫茉莉属多年生草本植物,具有较高观赏和药用价值,对重金属和石油污染有较强修复能力。然而目前为止,紫茉莉再生和遗传转化体系尚未建立。本研究以紫茉莉为材料,初步建立起较为稳定的再生体系。通过克隆拟南芥rd29A启... 详细信息

紫茉莉为紫茉莉科紫茉莉属多年生草本植物,具有较高观赏和药用价值,对重金属和石油污染有较强修复能力。然而目前为止,紫茉莉再生和遗传转化体系尚未建立。本研究以紫茉莉为材料,初步建立起较为稳定的再生体系。通过克隆拟南芥rd29A启动子和大肠杆菌ots B基因,构建了p2300-rd29A pro-ots B植物表达载体。利用根癌农杆菌介导法对紫茉莉进行遗传转化。结果表明,当农杆菌的OD600=0.5,侵染成熟胚或带芽茎段60 min,共培养2 d,紫茉莉的转化效率较高。通过对筛选出的转基因植株进行PCR检测,显示大肠杆菌ots B基因已成功整合到紫茉莉的基因组中,并可有效的进行转录。

关键词：紫茉莉 rd29A启动子 otsB基因农杆菌遗传转化

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