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中国组织化学与细胞化学杂志 2015年第2A期23卷 113-119页

作者：李宵王春芳李鹏飞王晶闫肖卿田峰山西医科大学实验动物中心实验动物与人类疾病动物模型山西省重点实验室山西医科大学科研实验中心太原030001

目的构建EGFP转基因小鼠及建系,并观察转基因小鼠的细胞及组织荧光发出状况。方法使用Gateway clone技术构建eEGFP载体,通过DNA显微注射法将构建好的EGFP载体注入受精卵内,转移至假孕母鼠内生出转基因小鼠。将转基因小鼠后代中的阳性小... 详细信息

目的构建EGFP转基因小鼠及建系,并观察转基因小鼠的细胞及组织荧光发出状况。方法使用Gateway clone技术构建eEGFP载体,通过DNA显微注射法将构建好的EGFP载体注入受精卵内,转移至假孕母鼠内生出转基因小鼠。将转基因小鼠后代中的阳性小鼠互交,逐步淘汰杂合子小鼠。饲养过程测量小鼠的基本数据。培养转基因小鼠的脊髓源神经干细胞,并取部分常用组织石蜡切边,在荧光显微镜下观察。结果成功构建了EGFP转基因小鼠,并在屏障环境下饲养繁殖至7代。与野生型小鼠相比,EGFP转基因小鼠基本数据无明显差异。各常用组织切片在荧光显微镜下均可观察到绿色荧光,从脊髓中培养获得的神经干细胞也可观察到绿色荧光。结论 EGFP小鼠组织在常规处理后可观察到发出绿色荧光的细胞;小鼠脊髓源神经干细胞在体外培养3代仍可观察到绿色荧光,可利用这种自然标记的细胞研究神经干细胞在脊髓损伤修复中所产生的作用。

关键词：转基因小鼠 EGFP 细胞标记工具鼠脊髓损伤神经干细胞移植

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糖代谢异常对大鼠肝脏组织中巨噬细胞移动抑制因子及C-Jun氨基端激酶表达水平的影响

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中国实验动物学报 2015年第2期23卷 165-170页

作者：樊林花刘建新李丹卫兵艳刘茂林王春芳刘田福山西医科大学实验动物中心实验动物和人类疾病动物模型山西省重点实验室太原030001 山西省一0九医院太原030006 山西医科大学第二医院肿瘤生物治疗科太原030001

目的观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和C-Jun氨基端激酶(JNK)在糖代谢异常大鼠肝脏组织中表达水平的变化,探讨糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)的病理机制。方法将60只大鼠随机分为糖耐量受损(IGT)模型组(n=20)、2型糖尿病(T2DM)模型... 详细信息

目的观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和C-Jun氨基端激酶(JNK)在糖代谢异常大鼠肝脏组织中表达水平的变化,探讨糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)的病理机制。方法将60只大鼠随机分为糖耐量受损(IGT)模型组(n=20)、2型糖尿病(T2DM)模型组(n=20)、IGT对照组(n=10)及T2DM对照组(n=10),高脂饲料喂养复制IGT大鼠模型,高脂饲料喂养加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)制备T2DM大鼠模型,采用TUNEL法检测各组大鼠肝脏细胞凋亡;实时荧光PCR技术检测肝脏组织中MIF mRNA的表达;Western blot方法检测肝脏组织中MIF、caspase-3、JNK蛋白表达及磷酸化JNK(p-JNK)的表达。结果 IGT大鼠及T2DM大鼠肝组织凋亡细胞明显增多;IGT组和T2DM组肝组织MIF基因表达较各自对照组明升高(P<0.01),MIF、caspase-3、JNK蛋白表达及JNK磷酸化水平也明显升高(P<0.05或P<0.01);与IGT组相比,T2DM组caspase-3、MIF、JNK蛋白表达水平明显降低(P<0.01),而JNK磷酸化水平是明显升高(P<0.01)。结论糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝的发生可能与MIF、caspase-3、JNK表达水平的升高及JNK磷酸化水平的增强有关。

关键词：巨噬细胞移动抑制因子 C-Jun氨基端激酶 Caspase-3 糖耐量受损 2型糖尿病

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miR-31的表达在神经干细胞分化中的作用

miR-31的表达在神经干细胞分化中的作用

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2015中国转化医学大会暨中国转化医学联盟成立大会

作者：李宵田峰王春芳山西医科大学实验动物中心实验动物与人类疾病动物模型山西省重点实验室太原030001

神经干细胞的分化一直是脊髓损伤后治疗的关键问题，而microRNA则在机体内的细胞分化调节方面起到重要问题.在前期实验中，我们通过对比神经干细胞和运动神经元的microRNA差异表达谱，发现miR-31的差异表达较为明显;其在神经干细胞而在... 详细信息

神经干细胞的分化一直是脊髓损伤后治疗的关键问题，而microRNA则在机体内的细胞分化调节方面起到重要问题.在前期实验中，我们通过对比神经干细胞和运动神经元的microRNA差异表达谱，发现miR-31的差异表达较为明显;其在神经干细胞而在运动神经元表达较低，提示我们其在神经干细胞的分化中起到重要作用.本实验中，我们提取了脊髓源神经干细胞体外分离培养，并转染miR-31的过表达和干扰试剂.通过观察细胞的形态变化及分化情况，并使用RT-PCR检测相关基因的表达实验结果发现，在miR-31的过表达组中形态变化较小，抑制组中突起伸出较多，呈神经元的形态特征.ChAT免疫细胞化学显示抑制组的表达要高于过表达组RT-PCR结果显示过表达组中神经干细胞的标记物Nestin表达要高于抑制组，神经元的标记物Stmnl在抑制组中的表达要高于过表达组.综合以上结果说明在miR-31过表达的情况下，神经干细胞会更多的保持在未分化的状态;当抑制miR-31的表达后，神经干细胞会更多的向运动神经元分化我们希望继续探讨miR-31在神经干细胞分化中的具体机制，以此来改造细胞向合适的方向分化，更好的服务于临床，为脊髓损伤的治疗提供新的参考.

关键词： miRNA-31 脊髓损伤分化转染神经干细胞

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miR-31在小鼠脊髓损伤恢复中发挥的作用

miR-31在小鼠脊髓损伤恢复中发挥的作用

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2015中国转化医学大会暨中国转化医学联盟成立大会

作者：田峰李宵王春芳山西医科大学实验动物中心实验动物与人类疾病动物模型山西省重点实验室太原030001

本课题通过高特异的TaqMan低密度阵列(TaqMan low-density array,TLDA)技术筛选了特定的关键miRNA,发现miR-31能够在神经干细胞中显著高表达,在物种间可以高度保守,并在转录后水平通过促进靶mRNA的降解和/或抑制翻泽过程而发挥负调控基... 详细信息

本课题通过高特异的TaqMan低密度阵列(TaqMan low-density array,TLDA)技术筛选了特定的关键miRNA,发现miR-31能够在神经干细胞中显著高表达,在物种间可以高度保守,并在转录后水平通过促进靶mRNA的降解和/或抑制翻泽过程而发挥负调控基因表达的过程。实验中,分别制备miR-31转基因小鼠和普通FVB小鼠制作脊髓损伤模型,并观测两种小鼠体内脊髓组织形态上的差异和Nestin、 NSE、GFAP三种基因含量变化。实验结果表明：miR-31转基因小鼠脊髓损伤后体内Nestin、NSE和GFAP的表达量比普通FVB小鼠明显增高,表明miR-31转基因小鼠中神经干细胞数量、神经干细胞向神经元定向分化量都高于普通FVB小鼠。综上结果说明miR-31在脊髓损伤中能够促进神经干细胞的再生和增殖,并且能够促进神经干细胞最终向神经元的分化增多、改善脊髓损伤的微环境。若将miR-31细胞移植入脊髓损伤部位,可以在脊髓损伤局部起到好的治疗效果,为临床上治疗脊髓损伤提供理论和实验依据。

关键词：脊髓损伤 miRNA-31 小鼠

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山西医科大学学报 2015年第4期46卷 297-300,385页

作者：樊林花李丹刘茂林卫兵艳王春芳刘田福刘建新山西医科大学实验动物中心实验动物和人类疾病动物模型山西省重点实验室太原030001 山西医科大学第二临床医学院肿瘤生物治疗科山西省一O九医院

目的观察高脂饮食诱导的糖代谢异常大鼠肝脏糖原沉积与内质网应激(ERS)相关分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)在肝脏中的表达变化。方法 SD雄性大鼠60只,随机分为糖耐量受损组(IGT,n=20),... 详细信息

目的观察高脂饮食诱导的糖代谢异常大鼠肝脏糖原沉积与内质网应激(ERS)相关分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)在肝脏中的表达变化。方法 SD雄性大鼠60只,随机分为糖耐量受损组(IGT,n=20),IGT对照组(n=10),2型糖尿病组(T2DM,n=20)及T2DM对照组(n=10)。采用高脂饮食饲养12周诱导IGT大鼠,高脂饮食饲养4周后腹腔注射链脲佐菌素诱导T2DM大鼠。过碘酸雪夫氏(PAS)染色观察各组大鼠肝脏糖原改变;real-time PCR技术检测肝脏组织中CHOP mRNA的表达;Western blot技术检测肝脏组织中Caspase-12蛋白的表达。结果 IGT组和T2DM组大鼠肝脏糖原含量丰富。IGT组和T2DM组肝组织CHOP mRNA的表达水平与各自对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),而Caspase-12蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与IGT组相比,T2DM组Caspase-12蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论糖代谢异常大鼠肝组织糖原含量明显增多,ERS相关分子Caspase-12表达水平增高,肝组织中存在内质网应激,肝糖原沉积可能是内质网应激的诱因之一。

关键词：内质网应激 CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 糖耐量受损 2型糖尿病

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实验动物树鼩和人类疾病的树鼩模型研究概述

实验动物树鼩和人类疾病的树鼩模型研究概述

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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：徐林张云梁斌吕龙宝陈策实陈勇彬周巨民姚永刚中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223 中国科学院昆明动物研究所中国科学院灵长类研究中心云南昆明650223 中国科学院树鼩繁殖基地云中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223 中国科学院昆明动物研究所中国科学院灵长类研究中心云南昆明650223 中国科学院昆明动物研究所实验动物中心云南昆明650223 中国科学院树鼩繁殖基地云南昆明650223

动物模型在生物医学领域(如回答人体各种重大生物学问题、解析人类疾病机理和新药研发等方面)已经做出了不可替代的巨大贡献。转化医学存在的问题使得树鼩(Tupaia belangeri chinensis)实验动物重新得到重视;人类疾病的树鼩模型也再次... 详细信息

动物模型在生物医学领域(如回答人体各种重大生物学问题、解析人类疾病机理和新药研发等方面)已经做出了不可替代的巨大贡献。转化医学存在的问题使得树鼩(Tupaia belangeri chinensis)实验动物重新得到重视;人类疾病的树鼩模型也再次受到越来越多的关注。该文综述了国内外特别是近年来我国树鼩研究进展，包括树鼩基础生物学及动物模型方面取得的成绩，并分析了该领域目前存在的困难和问题，探讨了未来的一些研究方向。

关键词：树鼩实验动物基础生物学人类疾病动物模型

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实验动物树鼩和人类疾病的树鼩模型研究概述

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Zoological Research 2013年第2期34卷 59-69页

作者：徐林张云梁斌吕龙宝陈策实陈勇彬周巨民姚永刚中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223 中国科学院昆明动物研究所中国科学院灵长类研究中心云南昆明650223 中国科学院树鼩繁殖基地云南昆明650223 中国科学院昆明动物研究所实验动物中心云南昆明650223

动物模型在生物医学领域(如回答人体各种重大生物学问题、解析人类疾病机理和新药研发等方面)已经做出了不可替代的巨大贡献。转化医学存在的问题使得树鼩(Tupaia belangeri chinensis)实验动物重新得到重视;人类疾病的树鼩模型也再次受到越来越多的关注。该文综述了国内外特别是近年来我国树鼩研究进展,包括树鼩基础生物学及动物模型方面取得的成绩,并分析了该领域目前存在的困难和问题,探讨了未来的一些研究方向。

关键词：树鼩实验动物基础生物学人类疾病动物模型

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中药Ⅰ号方对阿尔兹海默病的多靶位治疗作用

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中国比较医学杂志 2013年第5期23卷 26-29页

作者：梁良刘羽曹子青杨亚军朱华黄澜盛树力秦川邓巍北京协和医学院中国医学科学院医学实验动物研究所病理室卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021 山西省曲沃县西街本草中药研究所山西曲沃043400

目的应用高通量抗体芯片技术(KinexTM Antibody Microarray)来研究中药I号方(PN-1)对阿尔兹海默病的治疗作用。方法将阿尔兹海默病模型小鼠分为两组,其中对照组4只,每天给予双蒸水灌胃,给药组8只每天给予中药提取物灌胃,给药3个月后,利... 详细信息

目的应用高通量抗体芯片技术(KinexTM Antibody Microarray)来研究中药I号方(PN-1)对阿尔兹海默病的治疗作用。方法将阿尔兹海默病模型小鼠分为两组,其中对照组4只,每天给予双蒸水灌胃,给药组8只每天给予中药提取物灌胃,给药3个月后,利用KinexTMAntibody Microarray筛选出两组的差异表达蛋白,然后用Ingenuity Pathway Analysis(IPA)及查阅文献找到其中与阿尔兹海默病相关的蛋白分子。结果给予中药I号方(PN-1)的阿尔兹海默病小鼠与空白对照小鼠比较,差异表达蛋白其中与阿尔兹海默病相关,且存在变化的为:p-tau(T522)、COX2,caspase6和caspase9下降;bcl-xl和CaMK4升高。结论中药Ⅰ号方(PN-1)能从抗tau蛋白高磷酸化、抗炎、抑制凋亡和提高记忆力等多靶位改善阿尔兹海默病模型小鼠的病理生理表现,可能成为治疗阿尔兹海默病的有效药物。

关键词：阿尔兹海默病模型小鼠中药Ⅰ号方多靶位

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Genetic diversity and matrilineal structure in Chinese tree shrews inhabiting Kunming,China

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Zoological Research 2011年第1期32卷 17-23页

作者：陈仕毅许凌吕龙宝姚永刚中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100049 中国科学院昆明动物研究所实验动物中心云南昆明650223

Due to their special phylogenetic position in the Euarchontoglires and close affinity to primates,tree shrews have been proposed as an alternative experimental animal to primates in biomedical ***,the population genetic structure of tree shrews has largely remained unknown and this has hindered the development of tree shrew breeding and *** we sampled 80 Chinese tree shrews（Tupaia belangeri chinensis） in Kunming,China,and analyzed partial mtDNA control region sequence *** on our samples and two published sequences from northern tree shrews（***）,we identified 29 substitutions in the mtDNA control region fragment（～ 604 bp） across 82 individuals and defined 13 *** samples were selected for sequencing of the cytochrome b（Cyt b;1134 bp） gene based on control region sequence variation and were analyzed in combination with 34 published sequences to solidify the phylogenetic pattern obtained from control region ***,tree shrews from Kunming have high genetic diversity and present a remarkable long genetic distance to the two reported northern tree shrews outside *** results provide some caution when using tree shrews to establish animal models because of this apparent genetic *** addition,the high genetic diversity of Chinese tree shrews inhabiting Kunming suggests that systematic genetic investigations should be conducted before establishing an inbred strain for medical and biological research.

关键词： Chinese tree shrews mtDNA Control region Cytochorme b Genetic diversity

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昆明城郊中国树鼩群体线粒体DNA遗传多样性(英文)

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动物学研究 2011年第1期32卷 17-23页

作者：陈仕毅许凌吕龙宝姚永刚中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室/中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223 中国科学院昆明动物研究所实验动物中心云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100049

由于树鼩是灵长类动物的近亲,且具有体型小、繁殖周期短、饲养管理成本低等优点,长期以来被认为有望替代灵长类动物用于人类疾病的动物模型研究。然而,目前对树鼩的群体遗传结构还知之甚少,这极大地限制了其在疾病动物模型研究的应用,... 详细信息

由于树鼩是灵长类动物的近亲,且具有体型小、繁殖周期短、饲养管理成本低等优点,长期以来被认为有望替代灵长类动物用于人类疾病的动物模型研究。然而,目前对树鼩的群体遗传结构还知之甚少,这极大地限制了其在疾病动物模型研究的应用,也是其品系资源创制的瓶颈。本研究通过分析80只采自于云南省昆明周边地区的野生树鼩(Tupaia belangeri chinensis)线粒体DNA(mtDNA)多态性,结合国外报道的2个树鼩(Tupaia belangeri)序列比较后发现,在604bp的mtDNA控制区片段中共检测到29个核苷酸替代变异,这些变异共界定了13种单倍型,表现较高的群体遗传多样度。另外,昆明地区的树鼩与国外报道的2个树鼩间存在较大的遗传分化,mtDNA控制区单倍型之间的核苷酸替换数大于18个,远高于昆明地区树鼩群体内部不同单倍型之间的差异。选择含有代表性的mtDNA控制区单倍型的17个昆明地区树鼩个体进一步测定了细胞色素b基因片段(1134bp),结合前人报道的数据分析,结果进一步支持mtDNA控制区数据反映的遗传格局及揭示的昆明地区树鼩与国外报道树鼩之间的明显差异。本研究结果提示,昆明地区树鼩与国外树鼩之间存在较大遗传差异,在将树鼩用于人类疾病动物模型研究中要注意这些遗传差别。昆明城郊的树鼩群体具有较高的遗传多样度,在开展近交系建立等工作时须考虑选取群体内部具有代表性的mtDNA世系。

关键词： DNA 线粒体单倍性多态现象遗传核苷酸类疾病模型动物树鼩科云南中国动物人类

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