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PCR介导嗜肺军团菌疫苗候选基因lvgA和Hsp60的融合及其在大肠杆菌中表达的初步研究

南方医科大学学报 2006年第7期26卷 904-909页

作者：刘明杰陈建平王涛廖涛陈宪芦殿香田玉四川大学华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室四川成都610041 川北医学院附属医院检验科四川泸州637000 四川大学生物材料工程研究中心四川成都610064

目的采用PCR法进行嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的拼接融合,克隆并检测该融合基因在原核系统中表达情况,为进一步研究其免疫性能作必要的准备。方法采用重组聚合酶链反应,设计引物首先分别从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得待融合端互补的军... 详细信息

目的采用PCR法进行嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的拼接融合,克隆并检测该融合基因在原核系统中表达情况,为进一步研究其免疫性能作必要的准备。方法采用重组聚合酶链反应,设计引物首先分别从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得待融合端互补的军团菌毒力基因(lvgA)和热休克蛋白60基因(Hsp60),经琼脂糖电泳纯化回收,再以适量lvgA和Hsp60为模板变性、退火、重叠延伸,实现二基因的PCR水平融合,随后采用外引物进行新一轮扩增,扩得足量lvgA/Hsp60融合基因的PCR产物,继而将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒,转化宿主菌BL21,经PCR、酶切及测序鉴定后,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析等鉴定。结果扩增出了约2292bp的lvgA/Hsp60融合基因,构建了原核表达重组质粒pGlvgA/Hsp60,并检测到Mr约117000的GST-lvgA-Hsp60融合蛋白表达条带。结论采用PCR法实现了嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的融合,构建了其原核表达重组质粒,并使该融合蛋白在原核系统中得到了有效的表达,为进一步研究该融合基因的免疫学特性奠定了基础.

关键词：嗜肺军团菌 lvgA基因 Hsp60基因重组聚合酶链反应基因表达

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川北地区妊娠妇女弓形虫感染调查

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医学信息 2011年第5期24卷 2989-2990页

作者：杨尚君寇俊明夏智勇川北医学院基础医学院人体寄生虫学教研室南充市第四人民医院妇产科川北医学院附属医院妇产科

了解川北地区妊娠妇女弓形虫感染率及弓形虫的感染因素。方法取孕产妇静脉血,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)行弓形虫病IgM检测,并对各种感染因素进行询问调查,行χ2检验分析。结果 2065名妊娠妇女弓形虫的感染率为4.87%,感染率随年龄的... 详细信息

了解川北地区妊娠妇女弓形虫感染率及弓形虫的感染因素。方法取孕产妇静脉血,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)行弓形虫病IgM检测,并对各种感染因素进行询问调查,行χ2检验分析。结果 2065名妊娠妇女弓形虫的感染率为4.87%,感染率随年龄的增加有上升趋势(P>0.05),与动物接触密切职业和宠物饲养具有显著性关系(P<0.05)。结论本地区弓形虫感染并非罕见,弓形虫感染主要与动物接触、宠物饲养相关。

关键词：弓形虫妊娠妇女感染因素 IgM

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四川南充口腔毛滴虫的调查

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1990年第1期8卷 79-79页

作者：张仁刚王官德熊万林章德农川北医学院寄生虫学教研室附属医院口腔科

1984年4月在南充市对口腔科门诊病人,用探针取齿龈基部、牙周袋、牙洞等部位的牙垢,进行生理盐水直接涂片、镜检,同时进行口腔疾病检查。共检查556人,其中包括工人、机关人员、医务工作者、大学及小学学生、学龄前儿童。男328例,女228... 详细信息

1984年4月在南充市对口腔科门诊病人,用探针取齿龈基部、牙周袋、牙洞等部位的牙垢,进行生理盐水直接涂片、镜检,同时进行口腔疾病检查。共检查556人,其中包括工人、机关人员、医务工作者、大学及小学学生、学龄前儿童。男328例,女228例。年龄5～67岁。查出口腔毛滴虫感染者45人,感染率为8％,其中与齿龈内阿米巴混合感染者,占总感染人数的80％(36/45),单纯感染者仅占20％(9/45)。在各年龄组中,年龄按0～10、11～20、21～30、31～40、41～50、51～60和60岁以上分组、各组的感染率依次为2.4％(2/85)、

关键词：感染率口腔疾病患者感染者

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台湾次睾吸虫的自然宿主新纪录

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四川动物 1990年第1期 37-37页

作者：王天顺王官德川北医学院寄生虫学教研室

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嗜肺军团菌htpA基因的克隆及其原核表达

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中国人兽共患病学报 2006年第2期22卷 114-117页

作者：刘明杰陈建平廖涛王涛陈宪田玉张雷张莉四川大学华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室暨形态学实验室四川大学时间生物学卫生部重点实验室成都610041 川北医学院附属医院检验科南充637000

目的克隆并检测嗜肺军团菌htpA基因在原核系统中表达情况,为进一步研究HtpA蛋白的免疫性能作必要的准备。方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得军团菌热休克蛋白A基因htpA,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构... 详细信息

目的克隆并检测嗜肺军团菌htpA基因在原核系统中表达情况,为进一步研究HtpA蛋白的免疫性能作必要的准备。方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得军团菌热休克蛋白A基因htpA,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGhtpA,重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后,转化宿主菌大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果扩增出了291bp完整的htpA基因,构建了原核表达重组质粒pGhtpA,并检测到约36kDa的GST-htpA融合蛋白质表达条带。结论成功克隆了嗜肺军团菌htpA基因并使HtpA蛋白在原核表达系统中得到了有效的表达,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。

关键词：嗜肺军团菌 htpA基因基因克隆基因表达

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斑蝥酸钠对肝癌细胞HepG_2增殖抑制作用的研究

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西部医学 2011年第6期23卷 1007-1009页

作者：杨尚君罗治彬张波陈瑾歆邵阳川北医学院基础医学院人体寄生虫学教研室四川南充637000 川北医学院医学影像四川省重点实验室四川南充637000 川北医学院基础医学院化学教研室四川南充637000

目的研究斑蝥酸钠(cantharidin,CTD)对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用和机制。方法采用免疫组化染色法(I mmunohistochemistry,I H)和33528染色法观察斑蝥酸钠对HepG2细胞增殖的抑制作用,并观察肝癌细胞凋亡的形态学变化及不同剂量斑蝥... 详细信息

目的研究斑蝥酸钠(cantharidin,CTD)对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用和机制。方法采用免疫组化染色法(I mmunohistochemistry,I H)和33528染色法观察斑蝥酸钠对HepG2细胞增殖的抑制作用,并观察肝癌细胞凋亡的形态学变化及不同剂量斑蝥酸钠对HepG2细胞凋亡率的影响。结果 1.0 mg/L以上斑蝥酸钠对人肝癌细胞HepG2的增殖有显著抑制作用(P<0.01),最高凋亡率(47.24%)出现于高剂量组(5.0 mg/L)。结论斑蝥酸钠对人肝癌细胞HepG2的增殖有显著抑制作用,是治疗肝癌较理想的药物之一。

关键词：斑蝥酸钠抑制作用人肝癌细胞HepG2

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Ⅰ我国内脏利什曼病不同疫区病原体SSUrDNA多变区序列差异与RAPD结果分析比较 Ⅱ我国山丘疫区利什曼原虫(***10)LACK抗原基因克隆和表达

Ⅰ我国内脏利什曼病不同疫区病原体SSUrDNA多变区序列差异与RAPD...

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中国动物学会第八次全国寄生虫学学术讨论会

作者：胡孝素卜玲毅芦殿梅敬保迁华西医科大学寄生虫学教研室华西医科大学寄生虫学教研室华西医科大学寄生虫学教研室川北医学院微生物学教研室

目的分析我国内脏利什曼病(VL)山丘、平原与荒漠疫区利什曼原虫(L.d.)分离株小亚基核糖体DNA(SSUrDNA)多变区的序列差异。与 3个疫区分离株RAPD结果分析比较。方法本实验用L.d.7种/株nDNA进行PCR扩增,将扩增出的SSU rDNA基因的特异片段... 详细信息

目的分析我国内脏利什曼病(VL)山丘、平原与荒漠疫区利什曼原虫(L.d.)分离株小亚基核糖体DNA(SSUrDNA)多变区的序列差异。与 3个疫区分离株RAPD结果分析比较。方法本实验用L.d.7种/株nDNA进行PCR扩增,将扩增出的SSU rDNA基因的特异片段克隆于PGMER-T EasyVector上,采用通用引物M13进行PCR扩增,全自动测序仪测序。RAPD采用7种随机引物。结果序列分析显示,扩增的7种/株利什曼原虫SSU rDNA序列大小均为392bp;序列分析比较发现我国3

关键词：利什曼原虫分离株 L.d.SC10)LACK 基因克隆和表达序列差异病原体 SSUrDNA

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重组杜氏利什曼原虫39kD抗原的诊断价值

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实用寄生虫病杂志 1996年第3期4卷 97-99页

作者：敬保迁胡孝素章涛马莹川北医学院微生物学教研室华西医科大学寄生虫学研究室

为了给内脏利什曼病（ＶＬ）患者提供较为准确的实验诊断方法。我们将表达杜氏利什曼原虫３９ｋＤ抗原的大肠杆菌制备物进行电泳并转移至硝酸纤维滤膜上，以１１例确诊ＶＬ病人的不同稀释度血清对其识别，当稀释度达１∶４００时，全部... 详细信息

为了给内脏利什曼病（ＶＬ）患者提供较为准确的实验诊断方法。我们将表达杜氏利什曼原虫３９ｋＤ抗原的大肠杆菌制备物进行电泳并转移至硝酸纤维滤膜上，以１１例确诊ＶＬ病人的不同稀释度血清对其识别，当稀释度达１∶４００时，全部病人血清均能明显识别３９ｋＤ抗原带．而正常人血清和其他病人血清不识别３９ｋＤ抗原带，说明重组杜氏利什曼原虫３９ｋＤ抗原具有一定的诊断价值，用其检测病人血清中相应抗体可以诊断内脏利什曼病。

关键词：杜氏利什曼原虫重组抗原诊断价值

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肝脏组织S-腺苷甲硫氨酸酶与卡氏肺孢子虫肺炎的相关性研究

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国际检验医学杂志 2011年第18期32卷 2082-2083页

作者：张金花杨霞霞万启惠遵义医学院寄生虫学教研室贵州563003 川北医学院附属医院检验科四川南充637000

目的探讨卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型肝脏组织S-腺苷甲硫氨酸酶的变化。方法给SD大鼠皮下注射地塞米松建立肺孢子虫肺炎动物模型,采用改良的六亚甲基四胺银染色法检测获得肺组织中的肺孢子虫包囊,利用组织S-腺苷甲硫氨酸酶检测试剂盒测定... 详细信息

目的探讨卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型肝脏组织S-腺苷甲硫氨酸酶的变化。方法给SD大鼠皮下注射地塞米松建立肺孢子虫肺炎动物模型,采用改良的六亚甲基四胺银染色法检测获得肺组织中的肺孢子虫包囊,利用组织S-腺苷甲硫氨酸酶检测试剂盒测定肝脏组织中S-腺苷甲硫氨酸酶的含量。结果感染组大鼠全部感染了卡氏肺孢子虫,感染率为100%;肝脏组织中S-腺苷甲硫氨酸酶的含量为(0.254 5±0.067 9)μmol/mg,正常对照组大鼠卡氏肺孢子虫包囊的检出率为0%,肝脏组织中S-腺苷甲硫氨酸酶的含量为(0.401 4±0.087 8)μmol/mg,感染组与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论卡氏肺孢子虫肺炎大鼠肝脏组织中S-腺苷甲硫氨酸酶的含量明显降低,提示测定肝脏组织S-腺苷甲硫氨酸酶的含量可以辅助诊断卡氏肺孢子虫肺炎。

关键词：肺炎,肺囊虫性甲硫氨酸腺苷转移酶肺组织

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卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清中IL-8的动态变化

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国际检验医学杂志 2011年第5期32卷 569-570页

作者：张金花杨霞霞万启惠遵义医学院寄生虫学教研室贵州遵义563003 川北医学院附属医院检验科四川南充637000

目的探讨卡氏肺孢子虫肺炎动物血清中IL-8的动态变化。方法给SD大鼠皮下注射地塞米松建立肺孢子虫肺炎动物模型,改良的六亚甲基四胺银染色法检获肺组织中的肺孢子虫包囊,采用IL-8检测试剂盒检测大鼠血清中IL-8的含量。结果对照组、第7、... 详细信息

目的探讨卡氏肺孢子虫肺炎动物血清中IL-8的动态变化。方法给SD大鼠皮下注射地塞米松建立肺孢子虫肺炎动物模型,改良的六亚甲基四胺银染色法检获肺组织中的肺孢子虫包囊,采用IL-8检测试剂盒检测大鼠血清中IL-8的含量。结果对照组、第7、8、9周感染组的IL-8含量分别为(16.554±1.211)、(17.267±3.172)、(18.173±2.133)及(19.847±5.346)pg/mL,感染率依次为0.00%、90.00%、90.91%及100.00%。结论随着感染时间的延长,血清中IL-8的水平逐渐升高,IL-8水平的动态变化可以作为卡氏肺孢子虫肺炎的辅助诊断。

关键词：卡氏肺孢子虫肺炎血清 IL-8

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