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洋葱根尖细胞有丝分裂石蜡制片的探讨

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技术与市场 2009年第4期16卷 57-57页

作者：王婉申跃武梁素华刘云川北医学院生物学教研室四川南充637007

我们通过反复实验,对洋葱根尖细胞有丝分裂石蜡切片制作过程,进行了一些经验总结,以供同仁参考。

关键词：洋葱有丝分裂石蜡切片

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HLA-G基因14bp插入/缺失多态性与我国汉族类风湿关节炎相关性研究

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川北医学院学报 2009年第4期24卷 319-323页

作者：夏艳辉吴凤霞武丽君罗雄燕杨明辉刘宁涛陈全袁国华重庆医科大学免疫学教研室重庆400016 川北医学院附属医院风湿免疫研究所四川南充637000 新疆维吾尔自治区人民医院风湿科新疆乌鲁木齐830000 遂宁市人民医院风湿科四川遂宁629000

目的探讨HLA-G基因14bp插入/缺失多态性与类风湿关节炎(RA)易感性的相关性,并分析其不同基因型间RA患者临床特点的差异。方法多聚酶链式反应(PCR)检测154例RA患者及367名健康体检者的HLA-G基因14bp插入/缺失多态性,比较不同基因型RA患... 详细信息

目的探讨HLA-G基因14bp插入/缺失多态性与类风湿关节炎(RA)易感性的相关性,并分析其不同基因型间RA患者临床特点的差异。方法多聚酶链式反应(PCR)检测154例RA患者及367名健康体检者的HLA-G基因14bp插入/缺失多态性,比较不同基因型RA患者间关节肿胀数、关节压痛数、关节晨僵时间、病情活动指数DAS28积分及实验室指标如C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)、类风湿因子(RF)、抗CCP抗体滴度的差异。结果HLA-G 14bp插入/缺失多态性基因型频率分布在正常人和RA患者均显示Hardy-Weinberg平衡(正常人组:χ2=0.095,p=0.953;RA组:χ2=0.533,p=0.766);HLA-G 14bp插入/缺失多态性基因和基因型频率与RA易感性均无显著性的相关性联系;与+14bp/+14bp和+14bp/-14bp基因型RA患者比较,-14bp/-14bp纯合子基因型RA患者的压痛关节数(p=0.049)、肿胀关节数(p=0.004)明显增多,病情活动指数DAS28明显更重(p=0.028),RF滴度更高(p=0.001)。结论HLA-G基因14bp插入/缺失多态性与RA疾病易感性无关,但可影响RA患者的临床表现,HLA-G—14/-14bp纯合子型可能作为预后不良因素参与到RA疾病机制之中。

关键词：类风湿关节炎 HLA—G 基因多态性

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重庆市15岁以上居民吸烟行为及相关因素研究

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现代预防医学 2008年第13期35卷 2415-2417页

作者：高晓凤李健巫幸福曾庆钟晓妮周燕荣川北医学院预防医学教研室重庆医科大学公共卫生学院卫生统计学教研室

[目的]了解重庆巿15岁及以上居民吸烟现状及相关因素。[方法]多阶段分层整群随机抽样,使用调查表入户调查每位家庭成员,对所获居民吸烟信息分析。[结果]重庆市15岁及以上的居民吸烟率为29.7%,其中男性吸烟率58.3%,女性吸烟率2.0%;吸烟... 详细信息

[目的]了解重庆巿15岁及以上居民吸烟现状及相关因素。[方法]多阶段分层整群随机抽样,使用调查表入户调查每位家庭成员,对所获居民吸烟信息分析。[结果]重庆市15岁及以上的居民吸烟率为29.7%,其中男性吸烟率58.3%,女性吸烟率2.0%;吸烟者平均每天吸烟量16.5支,其中男性吸烟量为16.6支,女性吸烟量为12.4支。多因素分析表明性别、民族、年龄、婚姻状况、文化程度、职业、以及家里对抽烟的规定对居民的吸烟行为具有统计学意义。[结论]重庆巿居民的吸烟情况较全国平均水平严重,控制吸烟、减少吸烟相关疾病已经刻不容缓。

关键词：吸烟行为相关因素

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益母草注射液预防剖宫产产后出血的多中心临床研究

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中华妇产科杂志 2009年第3期44卷 175-178页

作者：林建华林其德刘兴会严建英贺晶李力古航孙丽洲张建平于松马玉燕牛建民夏泳赵三存李望王惠兰王柄顺上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科 200127 基础医学院统计学教研室四川大学华西第二医院产科福建省妇幼保健院产科浙江大学医学院附属妇产科医院产科第三军医大学大坪医院妇产科第二军医大学长海医院妇产科南京医科大学附属第一医院妇产科中山大学附属第二医院妇产科首都医科大学附属北京妇产医院产科山东大学齐鲁医院妇产科广东省妇幼保健院产科福州市第二医院妇产科陕西省妇幼保健院产科石家庄市妇产医院产科河北医科大学第二附属医院妇产科

目的探讨剖宫产术中应用益母草注射液预防产后出血的有效性和安全性。方法采用多中心、随机、单盲、阳性药物对照的前瞻性研究方法，于2007年4至8月，选择全国15所三级医院440例因产科医学指征行剖宫产分娩的产妇为研究对象。其中益母草... 详细信息

目的探讨剖宫产术中应用益母草注射液预防产后出血的有效性和安全性。方法采用多中心、随机、单盲、阳性药物对照的前瞻性研究方法，于2007年4至8月，选择全国15所三级医院440例因产科医学指征行剖宫产分娩的产妇为研究对象。其中益母草组147例，于胎儿娩出后子宫肌壁注射益母草注射液40mg，术后2h开始，益母草注射液臀部肌内注射，20mg／12h，共3次；益母草＋缩宫素组144例，于胎儿娩出后子宫肌壁注射益母草注射液40mg及缩宫素10u，术后2h开始，益母草注射液臀部肌内注射，20mg／12h，共3次；缩宫素组149例，胎儿娩出后子宫肌壁注射缩宫素10u，同时静脉滴注缩宫素10U（加入5％葡萄糖液500ml中），术后2h开始，缩宫素臀部肌内注射，10U／12h，共3次。观察：（1）产时出血量、产后2、6、12、24、48h的阴道出血量；（2）产后24h总出血量和产后出血发生率；（3）产前及产后血红蛋白、红细胞计数的差值；（4）不良反应。结果（1）出血量：平均产时出血量益母草组为（368±258）ml，缩宫素组为（269±141）ml，益母草＋缩宫素组为（255±114）ml，3组的产时出血量分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；产后2、6、12、24、48h各组阴道出血量比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。（2）产后24h总出血量：产后24h总出血量益母草组平均为（480±276）ml、益母草＋缩宫素组为（361±179）ml、缩宫素组为（381±179）ml，3组术后24h总出血量分别比较，差异也有统计学意义（P〈0．01）。（3）产后出血发生率：产后出血发生率益母草组为32．0％（47／147）、益母草＋缩宫素组为11．1％（16／144）、缩宫素组为18．8％（28／149），益母草＋缩宫素组产后出血发生率最低，而益母草组产后出血发生率最高，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。（4）产前及产后血红蛋白、红细胞计数：各组产后与产前比较，红细胞计数和血红蛋白水平均有不同程度的下降，其中益母草组红细胞计数差值为（0．3±0．5）×10^12／L，血红蛋白差值为（9±13）g／L；益母草＋缩宫素组红细胞计数差值为（0．2±0．4）×10^12／L，血红蛋白差值为（6±10）g／L；缩宫素组红细胞计数差值为（0．2±0．4）×10^12／L，血红蛋白差值为（7±30）g／L，缩宫素组、益母草＋缩宫素组分别与益母草组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；益母草＋缩宫素组血红蛋白下降程度最低。（5）不良反应：3组中共有2例发生轻度过敏反应。结论剖宫产术中应用益母草注射液联合缩宫素，可明显预防产后出血的发生，且药物安全性好。

关键词：益母草产后出血多中心研究

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S1P1受体ERY保守基序突变对FTY720诱导其内化的影响

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现代免疫学 2008年第3期28卷 214-218页

作者：胡为民杨健唐恩洁敬保迁任碧轩川北医学院微生物学与免疫学教研室南充637007 川北医学院免疫学与分子生物学研究所南充637007

1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)是淋巴细胞表面的重要受体。为研究S1P1中ERY保守基序与FTY720诱导其内化的关系,以HA-S1P1-Myc-EGFP-N1为模板,应用重叠PCR的方法,将S1P1第142位的Arg(R)突变为Asn(N),连同N端HA标签一起,克隆入pcDNA3.1(+)真... 详细信息

1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)是淋巴细胞表面的重要受体。为研究S1P1中ERY保守基序与FTY720诱导其内化的关系,以HA-S1P1-Myc-EGFP-N1为模板,应用重叠PCR的方法,将S1P1第142位的Arg(R)突变为Asn(N),连同N端HA标签一起,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体。同时PCR扩增野生型S1P1,克隆入pcDNA3.1(+)中。限制性酶切消化、PCR和测序鉴定后,经Polyfect转染入HEK293细胞。G418筛选出稳定细胞株。100 nmol/L FTY720处理12 h后,抗HA-PE抗体染色,用流式细胞仪检测S1P1在HEK293细胞上的表达情况。结果显示HA-S1P1(WT)-pcDNA3.1(+)和HA-S1P1(R142N)-pcDNA3.1(+)载体被成功构建,HA-S1P1(WT)和HA-S1P1(R142N)蛋白表达在HEK293稳定细胞株的表面。FTY720能诱导HA-S1P1(WT)内化,但不能诱导HA-S1P1(R142N)内化。提示FTY720诱导S1P1内化与ERY保守基序有关。

关键词： 1型1-磷酸鞘氨醇受体 FTY720 流式细胞术内化 HEK293细胞

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小鼠分娩前后子宫IL-17A及24p3表达变化的研究

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四川大学学报（自然科学版） 2008年第3期45卷 681-686页

作者：宋桂芹何波王琛琛梁素华刘康刘全胜四川大学生命科学学院成都610064 川北医学院医学生物学教研室南充637007

选择雌性BALB/c小鼠作为动物模型,分别在未孕期、怀孕中期、分娩当天、分娩后一天和分娩五天5个不同时期剖取子宫和肝脏.RT-PCR检测不同时期IL-17A及24p3 mRNA在小鼠子宫及肝脏内的表达,HE组织染色检查淋巴细胞浸润程度.结果发现小鼠分... 详细信息

选择雌性BALB/c小鼠作为动物模型,分别在未孕期、怀孕中期、分娩当天、分娩后一天和分娩五天5个不同时期剖取子宫和肝脏.RT-PCR检测不同时期IL-17A及24p3 mRNA在小鼠子宫及肝脏内的表达,HE组织染色检查淋巴细胞浸润程度.结果发现小鼠分娩前后IL-17A和24p3 mRNA在子宫内的表达呈正相关,两者可能参与了分娩前后子宫局部免疫炎症反应的调节.

关键词： IL-17A 24p3 子宫

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RNA干扰体内抑制HBeAg表达

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免疫学杂志 2008年第4期24卷 420-423页

作者：汪光蓉张国元杨健唐中唐恩洁朱道银川北医学院附属医院检验科风湿免疫研究所四川南充637000 川北医学院川北医学院分子生物研究所四川南充637000 重庆医科大学免疫微生物学教研室重庆400016

目的在机体水平观察小干扰RNA(siRNA)对HBeAg表达的影响。方法通过尾静脉注射1.5倍的HBV真核表达质粒pHBV1.5建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染模型,再将其与针对乙型肝炎病毒核心区的siRNA表达载体(psiHBV4)共注射,于注射后第6天取血测HBeA... 详细信息

目的在机体水平观察小干扰RNA(siRNA)对HBeAg表达的影响。方法通过尾静脉注射1.5倍的HBV真核表达质粒pHBV1.5建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染模型,再将其与针对乙型肝炎病毒核心区的siRNA表达载体(psiHBV4)共注射,于注射后第6天取血测HBeAg的表达,并用RT-PCR检测肝组织HBV prec/c mRNA转录子的水平。结果注射后第6天血清中,HBsAg、HBeAg在造模组中高表达。psiHBV4干扰组中HBeAg的表达受到了明显的抑制,与对照组相比有显著差异(P<0.05),RT-PCR显示肝内HBV prec/c mRNA水平亦明显降低,而无关干扰对照组则无相应的干扰作用。结论RNAi能特异,高效的抑制小鼠体内HBeAg的表达,为乙型肝炎的治疗带来了新的希望。

关键词： HBeAg 动物模型基因疗法 RNA干扰

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抑制TPP1表达对端粒保护蛋白1在染色体端粒定位及其功能的影响

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第三军医大学学报 2008年第18期30卷 1739-1742页

作者：郭晓兰谢传美吴凤霞青玉凤杨明辉唐中周京国袁国华朱道银重庆医科大学基础医学院免疫学教研室重庆400016 川北医学院附属医院风湿免疫研究所四川南充637000

目的观察TPP1受到抑制后,对端粒保护蛋白1a(Pot1a)和端粒保护蛋白1b(Pot1b)在端粒上的定位及其对端粒保护功能产生的影响。方法利用逆转录病毒介导的RNA干扰技术抑制小鼠胚胎成纤维样细胞内源性TPP1的表达后,采用免疫荧光/端粒肽核酸荧... 详细信息

目的观察TPP1受到抑制后,对端粒保护蛋白1a(Pot1a)和端粒保护蛋白1b(Pot1b)在端粒上的定位及其对端粒保护功能产生的影响。方法利用逆转录病毒介导的RNA干扰技术抑制小鼠胚胎成纤维样细胞内源性TPP1的表达后,采用免疫荧光/端粒肽核酸荧光原位杂交法检测外源性Pot1a和Pot1b在端粒上的定位,通过端粒末端脱氧尿嘧啶转移酶法检测TPP1降低后对染色体末端保护功能的影响,SA-βgal染色检测细胞衰老,Western blot检测磷酸化的P53水平和P21含量。结果TPP1受到抑制后大约65%的MEF细胞中Pot1a和Pot1b不能定位在端粒上,显著高于空载体对照组的5%(t=10.96,P<0.01);TdT-FITC检测结果显示,大约50%的细胞在TPP1受到抑制后出现TdT-FITC阳性,其中90%的TdT-FITC阳性信号出现在端粒上,而在空载体对照组TdT-FITC阳性细胞为4.7%(t=14.37,P<0.01),位于端粒上的TdT-FITC阳性信号<3%(t=17.59,P<0.01);β-gal染色(细胞衰老的特征性标志)结果显示,在TPP1受到抑制后β-gal阳性细胞率分别达25.7%和22.0%,显著高于对照组细胞的1.7%(t=18.23,P<0.01;t=16.9,P<0.01);进一步研究表明,TPP1受到抑制的细胞导致P53ser18磷酸化,P21表达明显增强。结论TPP1是Pot1a和Pot1b定位在端粒上必需的,抑制TPP1导致染色体末端失去保护功能并诱导P53依赖的细胞衰老。

关键词：端粒 TPP1 Pot1 细胞衰老

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弓状线位置的应用解剖

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四川解剖学杂志 2008年第3期16卷 18-19页

作者：马振超何文武樊中川廖致富佘永华川北医学院临床医学系川北医学院法医系川北医学院基础医学院人体解剖学教研室四川南充637007

目的观察和测量弓状线的形态和位置,为临床提供解剖学资料。方法在77具(152例)成年国人尸体标本上观察和测量弓状线的形态和位置。结果弓状线为弧形者有占64.10%,直线形者占28.90%,逐渐变薄消失者占7.00%。弓状线位于脐以下2～4cm的有34... 详细信息

目的观察和测量弓状线的形态和位置,为临床提供解剖学资料。方法在77具(152例)成年国人尸体标本上观察和测量弓状线的形态和位置。结果弓状线为弧形者有占64.10%,直线形者占28.90%,逐渐变薄消失者占7.00%。弓状线位于脐以下2～4cm的有34例(24.11%),位于脐以下5～9cm的有64例(45.39%),而位于脐以下4～5cm之间的有43例(30.50%)。脐至耻骨联合上缘和弓状线的距离分别为15.05±1.49cm和4.90±1.31cm。脐至弓状线长度与脐至耻骨联合上缘长度的比值为0.33。结论弓状线的形态有多种,位置以脐至耻骨联合上缘连线的中、上1/3交界处来描述更加合理。

关键词：弓状线应用解剖

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利用RNA干扰技术干扰HBeAg表达的研究

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现代免疫学 2008年第2期28卷 126-131页

作者：汪光蓉张国元杨健唐中唐恩洁朱道银川北医学院附属医院检验科风湿免疫研究所南充637000 川北医学院分子生物学研究所南充637000 重庆医科大学免疫微生物学教研室重庆400016

构建针对乙肝病毒HBeAg前c/c区(HBV prec/c)的短发夹环RNA(shRNA)质粒(psiHBV),观察其在体内外对HBV复制的抑制作用。构建RNA干扰真核表达载体psiHBV,与1.5倍HBV真核表达质粒pHBV1.5共转染HeLa细胞,用微粒子化学发光分析仪(MEIA)分别检... 详细信息

构建针对乙肝病毒HBeAg前c/c区(HBV prec/c)的短发夹环RNA(shRNA)质粒(psiHBV),观察其在体内外对HBV复制的抑制作用。构建RNA干扰真核表达载体psiHBV,与1.5倍HBV真核表达质粒pHBV1.5共转染HeLa细胞,用微粒子化学发光分析仪(MEIA)分别检测细胞上清和细胞裂解液中HBeAg表达水平;用半定量PCR检测prec/cmRNA的转录情况。随后用水动力学方法,向小鼠尾静脉注射pHBV1.5建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染模型。采用此感染模型,将pHBV1.5与在体外实验筛选到有明显抑制作用的shRNA表达载体(psiHBV4)共注射,注射后第6天用同样方法检测其干扰效果。结果显示,成功构建了针对HBV前c/c区的shRNA表达载体psiHBV4、psiHBV5、psiHBV6及无关shRNA表达载体psiC,筛选到在体外对HBeAg有明显的抑制作用的psiHBV4载体;注射pHBV1.5的动物血清高表达HBsAg和HBeAg。而共注射干扰性psiHBV4明显抑制了HBeAg的表达,与单纯感染组相比有显著差异,RT-PCR显示肝内HBV C mRNA水平亦明显降低。上述结果表明,siRNA能特异抑制HBV的复制和表达,对乙型肝炎的治疗有潜在应用前景。

关键词：乙型肝炎 shRNA RNA干扰动物模型

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