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人脑髓鞘碱性蛋白对H_2O_2诱导人肺癌细胞YTLMC-90凋亡的抑制作用

癌症 2006年第2期25卷 170-174页

作者：陈建业王晓明刘戟陈璟歆王若菡彭文珍程汉华陈俊杰四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学研究所四川成都610041 川北医学院神经电生理研究所四川南充637007 川北医学院生物化学教研室四川南充637007

背景与目的:人脑髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)广泛分布于神经系统及多种非神经组织之中,而且在肺癌、乳腺癌、神经胶质瘤等多种肿瘤细胞中均检查到MBP的表达。但MBP与癌细胞侵犯神经组织的活性是否相关、与肺癌细胞的生物学行... 详细信息

背景与目的:人脑髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)广泛分布于神经系统及多种非神经组织之中,而且在肺癌、乳腺癌、神经胶质瘤等多种肿瘤细胞中均检查到MBP的表达。但MBP与癌细胞侵犯神经组织的活性是否相关、与肺癌细胞的生物学行为是否相关尚未见报道。本研究主要探讨MBP对过氧化氢(H2O2)诱导人肺癌细胞YTLMC-90凋亡的影响。方法:实验分为MBPcDNA微基因pSVCEPMBPCAT转染组(试验组)、空质粒pSVCEPCAT转染组和未转染组(对照组)。将含人Ⅰ型胶原a1链(COLⅠA1)基因启动子和增强子元件、并在其3′端接MBPcDNA的微基因,转染YTLMC-90细胞,并驱动MBP异位表达;采用MTT法检测细胞增殖,吖啶橙荧光染色显微镜和电镜观察细胞形态及其超微结构的改变;琼脂糖凝胶电泳检测染色质DNA断裂。结果:200μmol/LH2O2作用24h后,转染组、未转染组和空载体pSVCEPCAT转染组YTLMC-90细胞的生长抑制率分别为36.67%、84.00%和78.67%(P<0.001);对照组YTLMC-90细胞普遍可见凋亡细胞特有的形态学及生物化学改变,如胞核固缩、染色质断裂,DNA电泳呈梯状条带;而MBPcDNA微基因转染的YTLMC-90细胞未发现上述凋亡特征。结论:MBP促进YTLMC-90细胞增殖和拮抗H2O2诱导的凋亡,明显减少H2O2对YTLMC-90的细胞毒作用。

关键词：髓鞘碱性蛋白微基因过氧化氢肺肿瘤 YTLMC-90细胞系凋亡

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PCR介导嗜肺军团菌疫苗候选基因lvgA和Hsp60的融合及其在大肠杆菌中表达的初步研究

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南方医科大学学报 2006年第7期26卷 904-909页

作者：刘明杰陈建平王涛廖涛陈宪芦殿香田玉四川大学华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室四川成都610041 川北医学院附属医院检验科四川泸州637000 四川大学生物材料工程研究中心四川成都610064

目的采用PCR法进行嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的拼接融合,克隆并检测该融合基因在原核系统中表达情况,为进一步研究其免疫性能作必要的准备。方法采用重组聚合酶链反应,设计引物首先分别从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得待融合端互补的军... 详细信息

目的采用PCR法进行嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的拼接融合,克隆并检测该融合基因在原核系统中表达情况,为进一步研究其免疫性能作必要的准备。方法采用重组聚合酶链反应,设计引物首先分别从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得待融合端互补的军团菌毒力基因(lvgA)和热休克蛋白60基因(Hsp60),经琼脂糖电泳纯化回收,再以适量lvgA和Hsp60为模板变性、退火、重叠延伸,实现二基因的PCR水平融合,随后采用外引物进行新一轮扩增,扩得足量lvgA/Hsp60融合基因的PCR产物,继而将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒,转化宿主菌BL21,经PCR、酶切及测序鉴定后,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析等鉴定。结果扩增出了约2292bp的lvgA/Hsp60融合基因,构建了原核表达重组质粒pGlvgA/Hsp60,并检测到Mr约117000的GST-lvgA-Hsp60融合蛋白表达条带。结论采用PCR法实现了嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的融合,构建了其原核表达重组质粒,并使该融合蛋白在原核系统中得到了有效的表达,为进一步研究该融合基因的免疫学特性奠定了基础.

关键词：嗜肺军团菌 lvgA基因 Hsp60基因重组聚合酶链反应基因表达

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嗜肺军团菌htpA基因的克隆及其原核表达

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中国人兽共患病学报 2006年第2期22卷 114-117页

作者：刘明杰陈建平廖涛王涛陈宪田玉张雷张莉四川大学华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室暨形态学实验室四川大学时间生物学卫生部重点实验室成都610041 川北医学院附属医院检验科南充637000

目的克隆并检测嗜肺军团菌htpA基因在原核系统中表达情况,为进一步研究HtpA蛋白的免疫性能作必要的准备。方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得军团菌热休克蛋白A基因htpA,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构... 详细信息

目的克隆并检测嗜肺军团菌htpA基因在原核系统中表达情况,为进一步研究HtpA蛋白的免疫性能作必要的准备。方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得军团菌热休克蛋白A基因htpA,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGhtpA,重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后,转化宿主菌大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果扩增出了291bp完整的htpA基因,构建了原核表达重组质粒pGhtpA,并检测到约36kDa的GST-htpA融合蛋白质表达条带。结论成功克隆了嗜肺军团菌htpA基因并使HtpA蛋白在原核表达系统中得到了有效的表达,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。

关键词：嗜肺军团菌 htpA基因基因克隆基因表达

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骨间后神经的解剖学研究及其临床意义

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川北医学院学报 2006年第2期21卷 110-112页

作者：丁家明佘永华冉茂成叶秋萍刘剑张良君李春蓉川北医学院基础医学院解剖学教研室四川南充637000 川北医学院医学系 2004级本科学生四川南充637000

目的研究骨间后神经的起源、行程、受卡压原因,并为外科手术治疗提供解剖学基础。方法解剖40侧成人尸体上肢,将骨间后神经分为3段(见附图):桡管段为从起点到旋后肌入口的距离,旋后肌管段为入口到出口的距离,旋后肌管后段为出旋后肌管以... 详细信息

目的研究骨间后神经的起源、行程、受卡压原因,并为外科手术治疗提供解剖学基础。方法解剖40侧成人尸体上肢,将骨间后神经分为3段(见附图):桡管段为从起点到旋后肌入口的距离,旋后肌管段为入口到出口的距离,旋后肌管后段为出旋后肌管以后的分支。观察骨间后神经的起源、行程、分支,旋后肌管入口、出口的形态和结构特点。用游标卡尺测量桡管段和旋后肌管段长度,旋后肌管入、出口的宽度。结果骨间后神经桡管段和旋后肌管段长度分别为(36.1±10.7)mm(均数±标准差,下同)和(39.7±0.89)mm。旋后肌管入口宽度为(12.4±0.29)mm,腱性结构占65%(26例),膜性结构占20%(8例),肌性结构为15%(6例)。出口位于拇长展肌上缘上方(15.3±0.68)mm,宽度(12.9±0.55)mm,肌性结构占52.5%(21例),腱性结构占40%(16例),膜性结构占7.5%(3例)。结论桡管和旋后肌管的解剖结构有时可导致骨间后神经受卡压,本文资料对外科手术治疗具有重要参考价值。

关键词：骨间后神经桡管旋后肌管

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糖尿病大鼠视网膜基因表达谱差异的初步分析

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中华医学遗传学杂志 2005年第5期22卷 563-565页

作者：梅妍周鸿鹰项涛卢友光李爱冬唐恩洁羊惠君四川大学基础医学与法医学院人体解剖学教研室成都610041 成都医学院科研实验中心川北医学院免疫与分子生物研究所

目的建立大鼠正常视网膜和糖尿病8周视网膜基因表达谱,比较两者差异,初步分析糖尿病视网膜病变的相关基因。方法通过限制片段差异显示PCR(restriction fragments differential display-PCR,RFDD-PCR)获得正常大鼠视网膜及8周糖尿病大鼠... 详细信息

目的建立大鼠正常视网膜和糖尿病8周视网膜基因表达谱,比较两者差异,初步分析糖尿病视网膜病变的相关基因。方法通过限制片段差异显示PCR(restriction fragments differential display-PCR,RFDD-PCR)获得正常大鼠视网膜及8周糖尿病大鼠视网膜组织转录组片段。应用Fragment Analysis等软件,对差异片段进行生物信息学分析,初步确定糖尿病视网膜病变相关基因/表达序列标签(expression se-quence tag,EST)。结果获得有意义的片段共3639个,有差异的片段840个,占表达数的23.08%。其中包括5个视觉传导相关基因,13个兴奋性神经递质受体基因和3个抑制性神经递质受体基因。糖尿病8周大鼠视网膜Rhodopsin kinase、β-arrestin、Phosducin、rod photoreceptor cGMP-gated channel和Rpe65的表达下调,离子型谷氨酸受体iGluR1-4下调,代谢性谷氨酸受体及γ-氨基丁酸受体各亚型则普遍上调,而甘氨酸受体表达无变化。结论糖尿病8周大鼠神经视网膜已受到累及,其基因表达模式的改变,可能与糖尿病早期视功能损害有关。

关键词：糖尿病大鼠视网膜基因表达谱兴奋性神经递质受体遗传因素

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大鼠松果体的神经支配——免疫组织化学及光镜体视学研究

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解剖学报 2005年第3期36卷 288-291页

作者：吴亮生王蕾马玉琼陈文玉欧可群杨正伟四川大学华西基础医学与法医学院组织学与胚胎学教研室成都610041 川北医学院形态定量研究室南充637007

目的探讨大鼠松果体的神经支配及双侧颈上交感神经节摘除后对松果体细胞分泌活动的影响。方法免疫组织化学、光学体视框及图像分析方法。结果松果体内神经末梢、松果体细胞及其突起终末呈突触体素(P38)免疫组织化学阳性反应。摘除了双... 详细信息

目的探讨大鼠松果体的神经支配及双侧颈上交感神经节摘除后对松果体细胞分泌活动的影响。方法免疫组织化学、光学体视框及图像分析方法。结果松果体内神经末梢、松果体细胞及其突起终末呈突触体素(P38)免疫组织化学阳性反应。摘除了双侧颈上交感神经节后,大鼠松果体所含神经末梢的平均数密度减少了43%(P<0.01),平均每个大鼠松果体内所含神经末梢总数减少了37%(P<0.05),松果体细胞及其突起终末内突触体素免疫阳性产物的平均A值明显降低(P<0.01)。结论支配松果体的神经纤维有很大部分来自双侧颈上交感神经节,这些神经纤维对松果体细胞的分泌功能产生明显影响。

关键词：松果体颈上交感神经节神经支配突触体素(P38) 免疫组织化学光学体视框及图像分析大鼠

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限制片段差异显示聚合酶链反应建立人类疾病表达谱的研究(英文)

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中华医学遗传学杂志 2005年第3期22卷 294-297页

作者：周鸿鹰梅妍卢友光李爱冬唐恩洁羊惠君四川大学基础与法医学院人体解剖与组织胚胎学教研室成都610041 四川大学成都医学院科研实验中心四川省南充市川北医学院免疫与分子生物研究所

目的用限制片段差异显示聚合酶链反应(restrictionfragmentdifferentialdisplaypolymerasechainreaction,RFDDPCR)技术建立基因表达谱,分析比较人类疾病表达谱差异的可行性。方法采集乳腺癌根治术患者的乳腺癌组织、乳腺癌转移淋巴结及... 详细信息

目的用限制片段差异显示聚合酶链反应(restrictionfragmentdifferentialdisplaypolymerasechainreaction,RFDDPCR)技术建立基因表达谱,分析比较人类疾病表达谱差异的可行性。方法采集乳腺癌根治术患者的乳腺癌组织、乳腺癌转移淋巴结及正常乳腺组织,用RFDDPCR技术平行操作,获得3种组织全部转录物组片段。然后以7%尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行表达差异基因片段的分离、显示,结合http://***/display/数据库资料,进行生物信息学分析,初步筛选各组织间有表达差异的基因。结果建立了乳腺癌组织、乳腺癌转移淋巴结及正常乳腺组织的基因表达谱,获得基因片段5407个,其中在癌组织和正常组织间有表达差异的片段为1491个,癌组织与转移淋巴结间的差异片段有1176个,而转移淋巴结与正常组织间的差异片段为1462个,分别占表达数的40.9%,33.9%,39.6%。这些差异片段涉及细胞增殖分化,信号转导,炎性反应,肿瘤转移等多方面功能。结论RFDDPCR技术可以检测出大量表达基因,并同时比较3种或3种以上样本的表达差异,适用于人类疾病差异表达谱分析,筛选出疾病的候选基因。同时,还有可能找到新基因或新表达序列标签。

关键词：限制片段差异显示聚合酶链反应人类疾病表达谱基因序列

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栀子提取物(环烯醚萜总甙)对大鼠尾状核脑出血病理指标的影响

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华西医学 2005年第2期20卷 293-294页

作者：邓世山付莉熊若虹卢友光周德明羊惠君四川大学华西基础与法医学院人体解剖学教研室四川成都610041 川北医学院附属医院儿科四川南充637000

目的:探讨栀子提取物(环烯醚萜总甙)对急性脑出血大鼠脑血肿等病理改变及神经学功能、血常规等的影响,为临床治疗脑出血新药的研究提供可靠的动物实验依据。方法:依据大鼠大脑立体定位图谱定位,将50μl自体血注入其尾状核,建立大鼠脑出... 详细信息

目的:探讨栀子提取物(环烯醚萜总甙)对急性脑出血大鼠脑血肿等病理改变及神经学功能、血常规等的影响,为临床治疗脑出血新药的研究提供可靠的动物实验依据。方法:依据大鼠大脑立体定位图谱定位,将50μl自体血注入其尾状核,建立大鼠脑出血动物模型。通过管饲灌胃法给药并观察大鼠神经功能学变化、全血图检查、组织病理学检查、计算脑出血容积大小、小胶质细胞免疫组化计数。结果:栀子提取物组血肿容积大小明显减轻、神经细胞减少较轻,栀子提取物组血肿大小容积与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),阳性小胶质细胞数目较对照组明显减少(P<0.05)。结论:栀子提取物有效成份环烯醚萜总甙能显著减轻脑出血大鼠血肿大小、降低小胶质细胞的浸润及改善组织病理学变化等,对脑出血有一定改善作用。

关键词：栀子提取物脑出血动物模型病理变化小胶质细胞环烯醚萜总甙大鼠尾状核脑动脉

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两种方法致大鼠尾状核脑出血后病理指标的客观变化(英文)

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中国临床康复 2004年第25期8卷 5432-5433,i004页

作者：邓世山付莉卢友光王中亮羊惠君四川大学基础与法医学院人体解剖学教研室四川省成都市610041 川北医学院附属医院儿科四川省南充市637007

背景:人类对脑出血的研究常采用大鼠的脑出血模型,但脑出血模型中缺乏一些重要指标描述。目的:为脑出血的发病机制、治疗等研究提供有效可靠的疾病动物模型及相关指标。设计:随机对照实验研究。地点和对象:成年SD大鼠50只,均为雄性,实... 详细信息

背景:人类对脑出血的研究常采用大鼠的脑出血模型,但脑出血模型中缺乏一些重要指标描述。目的:为脑出血的发病机制、治疗等研究提供有效可靠的疾病动物模型及相关指标。设计:随机对照实验研究。地点和对象:成年SD大鼠50只,均为雄性,实验在四川大学基础与法医学院人体解剖学教研室完成。干预:SD大鼠50只随机分为自体血注入组(20只)和胶原酶注入组(20只),在大鼠尾状核分别注入自体血50μL和胶原酶5.001nkat,建立两种不同的脑出血模型,术后3d自体血注入组大鼠死亡5只,胶原酶注入组死亡共6只。主要观察指标:两组大鼠神经功能学评分,病理变化,血肿大小,免疫组织化学染色结果。结果:血肿大小犤自体血注入组为(10.65±3.12)μL、胶原酶注入组为(40.26±1.45)μL犦,两者比较差异有统计学意义(t=33.102,P<0.001)、阳性小胶质犤自体血注入组为(32.6±3.6)个、胶原酶注入组为(8.8±2.4)个犦,两者比较差异有统计学意义(t=20.885,P<0.001)。结论:由于两种方法建立的脑出血模型各种指标不同,因此可以根据不同的研究目的采用不同的动物模型。

关键词：大鼠尾状核脑出血病理指标发病机制胶原酶

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BDNF对H_2O_2诱导人成纤维细胞凋亡的实验研究

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川北医学院学报 2004年第2期19卷 2-5页

作者：陈建业王晓明唐中陈瑾歆刘戟王若菡刘智敏陈俊杰川北医学院生化教研室四川南充637000 川北医学院附属医院四川南充637000 四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学研究所四川成都610041

目的研究脑源性神经营养因子 (BDNF)对H2 0 2 诱导人成纤维细胞 (hFB)凋亡的作用。方法　将含人Ⅰ型胶原a1链(COLIAl)基因启动子和增强子元件并在其 3′端接BDNFcDNA的微基因pSVCEPBFCAT ,经脂质体介导转染hFB并驱动BDNF异位表达 ,采用... 详细信息

目的研究脑源性神经营养因子 (BDNF)对H2 0 2 诱导人成纤维细胞 (hFB)凋亡的作用。方法　将含人Ⅰ型胶原a1链(COLIAl)基因启动子和增强子元件并在其 3′端接BDNFcDNA的微基因pSVCEPBFCAT ,经脂质体介导转染hFB并驱动BDNF异位表达 ,采用四唑盐 (MTT)显色法检测细胞增殖 ,吖啶橙荧光染色显微镜观察细胞形态的改变 ,琼脂糖凝胶电泳检测染色质DNA断裂。结果　经 2 0 0 μmol/LH2 O2 作用 2 4h后 ,pSVCEPBFCAT转染组和对照组包括未转染hFB、空载体pSVCEPCAT转染hFB的细胞生长抑制率分别为 35 %和≥ 84 % ,p <0 .0 0 1;对照组hFB普遍可见凋亡细胞特有的形态学及生物化学改变 ,如胞浆和核固缩、染色质断裂、DNA电泳呈阶梯状条带 ,而pSVCEPBFCAT转染hFB未发现上述凋亡特征。结论　BDNF促进hFB增殖和拮抗H2 O2 诱导凋亡 ,明显抑制H2 O2 对hFB的细胞毒性。

关键词： BDNF H2O2 诱导成纤维细胞细胞凋亡实验研究

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