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EFHD2调节NOX4/ROS通路启动糖代谢重编程促进乳腺癌进展的机制研究

中国比较医学杂志 2024年第9期34卷 66-75页

作者：徐明飞张怡康如意刘超越川北医学院基础医学与法医学院人体解剖学教研室四川南充637000 川北医学院基础医学与法医学院免疫学教研室四川南充637000 川北医学院临床医学院四川南充637000

目的基于NOX4/ROS信号通路探讨EFHD2影响乳腺癌发生进展的作用机制。方法将细胞分为NC-shRNA组和EFHD2-shRNA组,构建沉默EFHD2表达的慢病毒载体及其对照载体后转染乳腺癌细胞MDA-MB-23、MCF-7,qRT-PCR验证转染效率;CCK8检测细胞增殖活性... 详细信息

目的基于NOX4/ROS信号通路探讨EFHD2影响乳腺癌发生进展的作用机制。方法将细胞分为NC-shRNA组和EFHD2-shRNA组,构建沉默EFHD2表达的慢病毒载体及其对照载体后转染乳腺癌细胞MDA-MB-23、MCF-7,qRT-PCR验证转染效率;CCK8检测细胞增殖活性;平板克隆实验检测细胞集落形成能力;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡及ROS水平;qRT-PCR检测GLUT1、PDK1、PFK1、PKM2、PDH、LDH mRNA的表达;Western blot检测Cleaved caspase-3、MMP-2、NOX4蛋白的表达。结果与NC-shRNA组相比,EFHD2-shRNA组细胞中EFHD2的表达明显降低,细胞存活及其集落形成能力减弱;细胞凋亡率及促凋亡蛋白Cleaved caspase-3的表达升高;细胞迁移距离缩短,细胞侵袭数及促迁移、侵袭蛋白MMP-2的表达降低;乳酸及GLUT1、PDK1、PFK1、PKM2、LDH的水平降低,ATP及PDH的水平升高;流式结果表明沉默EFHD2后ROS水平降低,NOX4蛋白下调。结论EFHD2可通过调节NOX4/ROS信号通路,抑制ROS生成,引起乳酸及葡萄糖堆积从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移及侵袭。

关键词：乳腺癌代谢重编程 NOX4/ROS信号通路 EFHD2 免疫逃逸

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m^(6)A去甲基化酶FTO调控BCL2 mRNA稳定性与翻译效率促进血小板前体形成

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陆军军医大学学报 2025年第6期47卷 519-530页

作者：夏文军卢尧吴煌文爱清陈卫川北医学院基础医学与法医学院病理生理学教研室四川南充陆军特色医学中心(第三军医大学大坪医院)输血医学科创伤与化学中毒全国重点实验室重庆

目的探究下调m^(6)A去甲基化酶脂肪质量和肥胖相关基因(fat mass and obesityassociated protein,FTO)对MEG-01巨核细胞系血小板前体形成的影响及其机制。方法①分别用1 nmol/L佛波迷酯(phorbol myristate acetate,PMA)组(诱导组)和DMSO组(对照组)处理MEG-01细胞72 h,通过Western blot和RT-qPCR检测FTO蛋白和mRNA表达变化情况。②用靶向FTO的病毒液(sh-FTO)和阴性对照病毒液(sh-NC)感染MEG-01细胞,用1 nmol/L PMA诱导sh-NC组和sh-FTO组MEG-01细胞72 h后,Western blot和RT-qPCR检测FTO蛋白和mRNA表达变化情况。碘化丙啶(propidium lodrde,PI)DNA染色检测细胞周期、CCK-8检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测cleaved Caspase-3蛋白表达量,CD41/CD61染色检测巨核细胞成熟情况,明场观察和CD61免疫荧光检测血小板前体形成情况,RT-qPCR检测细胞凋亡相关分子(Caspase-3、BAD、BAK1、BCL2、MCL1)表达量,Western blot检测进一步验证BCL2蛋白变化情况,基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)中筛选出数据集;使用加州大学圣克鲁兹分校基因组浏览器(University of California,Santa Cruz genome browser,UCSC)分析比对BCL2 mRNA上的甲基化测序峰;m^(6)A甲基化RNA免疫共沉淀(m^(6)A RNA immunoprecipitation,m^(6)A-RIP)验证MEG-01巨核细胞BCL2 mRNA m^(6)A甲基化富集水平,检测sh-NC组和sh-FTO组BCL2 mRNA m^(6)A甲基化富集水平变化,以mRNA半衰期实验和多聚核糖体分离实验检测BCL2 mRNA翻译效率。结果①与DMSO组相比,PMA组FTO蛋白(P<0.05)和mRNA(P<0.01)表达水平升高;②与sh-NC组相比,sh-FTO组FTO mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),细胞周期发生G1/S期阻滞[(60.80±1.29)%vs(72.13±1.18)%,P<0.01],细胞活力明显降低[(1.17±0.03)%vs(0.69±0.05)%,P<0.05],Annexin V-FITC/PI阳性细胞占比升高[(12.87±0.83)%vs(17.45±1.58)%,P<0.01],TUNEL阳性细胞占比显著升高[(1.03±0.27)%vs(17.49±9.91)%,P<0.01],cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),CD41+CD61+阳性率明显降低[(51.63±1.13)%vs(34.08±0.53)%,P<0.01],具有伪足的巨核细胞比率明显降低[(26.49±6.73)%vs(13.31±5.97)%,P<0.01]。③与sh-NC相比,sh-FTO组细胞抗凋亡分子BCL2蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.01),UCSC GEO测序显示BCL2 mRNA上有m^(6)A甲基化修饰位点,并经m^(6)ARIP实验在MEG-01巨核细胞验证:与GAPDH mRNA相比,BCL2 mRNA有明显的m^(6)A富集信号(P<0.01);与sh-NC相比,BCL2 mRNA上的m^(6)A甲基化修饰明显升高(P<0.01);BCL2 mRNA的稳定性显著降低,翻译效率显著降低(P<0.01)。结论m^(6)A去甲基化酶FTO调控BCL2 mRNA稳定性与翻译效率,促进血小板前体形成。

关键词：脂肪质量和肥胖相关基因血小板前体 m^(6)A甲基化修饰 B淋巴细胞瘤-2基因

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化学遗传学调控高血压大鼠室旁核促肾上腺皮质激素释放因子神经元对前交感神经元兴奋性的影响

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中国药理学通报 2023年第12期39卷 2338-2345页

作者：马宏宇郭鑫淇张荧高璐杜梓硕王浩然马会杰河北医科大学基础医学院生理学教研室河北石家庄050017

目的观察下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin-releasing factor,CRF)神经元对正常血压Wistar Kyoto(WKY)大鼠或自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)前交感神经元兴奋性的影响,阐明交感中枢过度兴奋的可能神经环路机制。方法本研究使用成年雄性WKY和SHR。通过蛋白印迹实验明确WKY与SHR PVN CRF蛋白表达水平。同时,借助免疫荧光实验观察WKY与SHR PVN CRF神经元与前交感神经元。通过将CRF启动子特异性Cre依赖的腺相关病毒(adeno-associated viruses,AAV)与化学遗传学AAV共同注入PVN,使得CRF神经元特异性表达仅由设计性药物激活的设计性受体(designer receptors exclusively activated by designer drugs,DREADDs),即WKY室旁核CRF神经元特异性表达与Gq亚基偶联的人M3毒蕈碱型DREADD(hM3Dq),SHR室旁核CRF神经元特异性表达与Gi亚基偶联的人M4毒蕈碱型DREADD(hM4Di),而叠氮平-N-氧化物(clozapine-N-oxide,CNO)作为配体可结合兴奋性hM3Dq或抑制性hM4Di,进而调控PVN CRF神经元的兴奋性。而后向脊髓中间外侧柱(intermediolateral column,IML)微量注入荧光示踪剂逆行标记室旁核前交感神经元。最后,我们应用全细胞膜片钳记录CNO(10μmol·L^(-1))对室旁核前交感神经元自发兴奋性突触后电流(spontaneous excitatory postsynaptic currents,sEPSCs)和诱发动作电位的影响。结果SHR室旁核CRF蛋白表达水平明显高于WKY大鼠,SHR室旁核CRF神经元活动增强、数量增多。化学遗传学DREADDs可成功表达在PVN CRF神经元,同时,逆行荧光示踪剂可成功标记在向脊髓投射的PVN前交感神经元。用含CNO的人工脑脊液灌流预先在PVN CRF神经元表达hM4Di-mCherry的SHR脑片,可以引起PVN前交感神经元sEPSCs频率明显降低,但不影响其幅度。此外,用含CNO的人工脑脊液灌流预先在PVN CRF神经元表达hM3Dq-eGFP的WKY大鼠脑片,PVN前交感神经元sEPSCs的频率和幅度均无明显差异。PVN CRF神经元表达有hM3Dq-eGFP的WKY大鼠脑片或表达有hM4Di-mCherry的SHR脑片用CNO灌流给药,PVN前交感神经元电流诱发动作电位均无明显变化。结论自发性高血压大鼠PVN CRF神经元活动增强、数量增多,增强前交感神经元sEPSCs,室旁核CRF神经元与前交感神经元之间存在神经调控微环路。

关键词：高血压化学遗传学室旁核 CRF神经元前交感神经元神经微环路

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功能化聚乳酸-羟基乙酸共聚物基骨组织再生诱导膜的制备及其在大鼠颌骨缺损重建中的应用

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华西口腔医学杂志 2022年第5期40卷 522-531页

作者：刘一鸣赵云韩梅章雨秋米方林王冰川北医学院口腔医学系南充637000 川北医学院附属医院口腔科南充637000 川北医学院基础医学与法医学院化学教研室南充637000

目的制备具有抑制纤维化及抑菌作用的功能化复合静电纺丝纤维膜,初步探究其对大鼠颌骨缺损的修复作用。方法通过静电纺丝技术制备负载环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列、奥硝唑及纳米羟磷灰石(n-HA)的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纤维膜作为诱... 详细信息

目的制备具有抑制纤维化及抑菌作用的功能化复合静电纺丝纤维膜,初步探究其对大鼠颌骨缺损的修复作用。方法通过静电纺丝技术制备负载环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列、奥硝唑及纳米羟磷灰石(n-HA)的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纤维膜作为诱导骨组织再生作用的功能层(GBRL);通过流延法制备具有支撑作用及隔离不同功能层作用的致密膜层(BL);通过静电纺丝技术制备具有抑制纤维化作用的聚(对氧环己酮-L-苯丙氨酸)纤维膜作为抑制纤维化功能层(AFL)。应用扫描电子显微镜对复合膜形态进行表征观察,应用细胞计数盒(CCK)-8法研究不同功能层对MC3T3-E1及L929细胞增殖的影响;应用抑菌圈测试法研究复合膜对牙龈卟啉单胞菌增殖的抑制作用。构建大鼠下颌骨骨缺损模型,研究复合膜对骨缺损组织的修复作用,并与临床常用的胶原口腔修复膜的修复作用进行比较。结果成功制备具有多孔结构的纤维功能层,GBRL层可支持MC3T3-E1细胞增殖,AFL层可抑制L929细胞的增殖;负载奥硝唑的复合膜可抑制牙龈卟啉单胞菌的增殖;多种复合膜均可诱导大鼠缺损颌骨进行重建,其中同时负载奥硝唑及n-HA的复合膜具有最优异的修复效果,且效果优于胶原口腔修复膜。结论以同时负载奥硝唑及n-HA的静电纺丝膜作为GBRL层的复合膜,具有优异的抑菌及诱导骨组织再生的作用,且效果优于临床常用胶原口腔修复膜,是一种极有潜力应用于诱导牙周疾病所致缺损骨再生的材料。

关键词：静电纺丝抑制纤维化抑菌骨组织再生诱导膜

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以"榜样的力量"营造新时代大学优良校风的研究

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新教育时代电子杂志（教师版） 2024年第14期 22-24页

作者：何琦川北医学院基础医学与法医学院解剖教研室 637000

文章将从多方面深入探讨"榜样的力量"在营造优良校风中的应用和实践,其中包括强化师德师风建设、优化课程设置与教学方法以及构建正向激励机制等.我们将从理论和实际的结合出发,通过具体的实例和深入的分析,探寻营造新时代大... 详细信息

文章将从多方面深入探讨"榜样的力量"在营造优良校风中的应用和实践,其中包括强化师德师风建设、优化课程设置与教学方法以及构建正向激励机制等.我们将从理论和实际的结合出发,通过具体的实例和深入的分析,探寻营造新时代大学优良校风的有效策略和路径.本文旨在为大学的教育者提供有益的参考和启示,推动我国高等教育事业的发展和进步.

关键词：大学生自信来源教师全面认可自我榜样的力量优良校风

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利用细胞代谢组学探讨Nrf3在胃癌细胞增殖、迁移中的作用及机制

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现代肿瘤医学 2024年第7期32卷 1186-1193页

作者：陈梦未陈雅慧候维胡清勇周倩如汤建才川北医学院基础医学与法医学院四川南充637000 川北医学院病理教研室四川南充637000

目的:探究核因子红系2-样3(NF-E2-related factor 3 or NFE2L3,Nrf3)对胃癌细胞代谢、增殖及迁移能力的影响及作用机制。方法:通过生物信息学分析Nrf3在胃癌组织中的表达;慢病毒构建基因沉默Nrf3的胃癌细胞株;基于人细胞UHPLC-OE-MS非... 详细信息

目的:探究核因子红系2-样3(NF-E2-related factor 3 or NFE2L3,Nrf3)对胃癌细胞代谢、增殖及迁移能力的影响及作用机制。方法:通过生物信息学分析Nrf3在胃癌组织中的表达;慢病毒构建基因沉默Nrf3的胃癌细胞株;基于人细胞UHPLC-OE-MS非靶标代谢组学技术,对胃癌细胞(AGS)及Nrf3敲降细胞进行代谢组学分析;利用RT-qPCR及Western blot实验检测敲降Nrf3对胆碱代谢关键酶的影响;采用CCK-8及划痕实验检测敲降Nrf3对胃癌细胞增殖、迁移的影响;通过外源性给予胆碱类似物氯化胆碱后观察胃癌细胞增殖、迁移能力的改变。结果:生物信息学分析发现胃癌组织中Nrf3表达高于癌旁组织;敲降Nrf3显著改变了胃癌细胞的代谢特征,鉴定到57个对分类有显著贡献的差异代谢物,其中32个代谢物在敲降Nrf3的胃癌细胞中减少,25个代谢物增加;Nrf3敲降导致胃癌细胞8条通路改变(P<0.05),其中胆碱、精氨酸和脯氨酸代谢改变最为明显(P<0.01);RT-qPCR及Western blot实验结果显示,敲降Nrf3后影响了胆碱代谢关键酶PLA2、LYPLA1、GPCPD1、CHK的表达,其中GPCPD1改变最为显著;CCK-8、划痕实验结果揭示了敲降Nrf3抑制胃癌细胞的增殖及迁移;外源性给予胆碱类似物氯化胆碱能部分逆转敲降Nrf3导致的胃癌细胞增殖、迁移能力的减弱。结论:敲降Nrf3抑制胃癌细胞增殖和迁移,其机制可能与胆碱代谢重编程有关。

关键词：胃癌 Nrf3 胆碱代谢增殖迁移

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教育数字化背景下病理学教师数字素养及创新能力提升研究

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基础医学教育 2024年第9期26卷 783-787页

作者：何琳莉杨佳于李丽川北医学院基础医学与法医学院病理学教研室南充637000

随着数字化信息时代的到来,数字化转型已成为全球教育界共识。与形态学联系紧密的病理学科教育中,更具动态性、针对性、多元性和交互性的数字病理运用广泛,为创新教育注入源动力。病理学教师素质素养的提升,是构建数字病理教育新生态,... 详细信息

随着数字化信息时代的到来,数字化转型已成为全球教育界共识。与形态学联系紧密的病理学科教育中,更具动态性、针对性、多元性和交互性的数字病理运用广泛,为创新教育注入源动力。病理学教师素质素养的提升,是构建数字病理教育新生态,推进“数字中国”建设的重要抓手。当前各高校病理数字素养体系处在初步建设阶段,存在着数字资源不协调、数字意识不强、数字能力匮乏、数字教学抵制等问题。文章基于数字化转型背景下,总结病理学教师数字素养认识现状,创新提出教育“三促”模式,帮助打造数字形态下创新型课堂建设体系,并着力于解决数字素养提升难题,以期突破教学瓶颈,建立新时代高质量教育强军。

关键词：病理学教育数字化教学改革教师数字素养创新能力

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人体解剖学绘制简图结合思维导图教学模式的设计与应用

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解剖学杂志 2024年第1期47卷 78-80页

作者：周方方谢兴国朱晓华川北医学院基础医学与法医学研究所南充637100 川北医学院基础医学与法医学院解剖学教研室南充637100

2010年,国家发改委启动“农村订单定向医学生免费培养项目”,即在我国医学高等院校开展免费医学生定向培养工作[1],本校承担有该任务。人体解剖学是研究正常人体形态和结构的科学,是每名医学生的必修课。人体解剖学由于知识点多,内容繁... 详细信息

2010年,国家发改委启动“农村订单定向医学生免费培养项目”,即在我国医学高等院校开展免费医学生定向培养工作[1],本校承担有该任务。人体解剖学是研究正常人体形态和结构的科学,是每名医学生的必修课。人体解剖学由于知识点多,内容繁琐,容易使学生的学习感到枯燥、乏味。图形是一种形象生动的特殊语言,借助图形学习解剖学远比单纯的文字学习效果更优[2-3]。

关键词：人体解剖学医学高等院校免费医学生国家发改委定向培养思维导图教学正常人体特殊语言

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乳腺癌组织中USP20与Ezrin表达的相关性及临床意义

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现代肿瘤医学 2023年第15期31卷 2850-2854页

作者：方玲玉侯令密陈艳茹张振杨胡璟骅李金穗谢少利李静佳刘家有荣欣欣杨懿徐明飞邓世山周方方川北医学院基础医学与法医学院解剖教研室四川南充637100 川北医学院影像研究所四川南充637100 川北医学院附属医院乳腺癌生物靶向研究室院士工作站四川南充637100 川北医学院附属医院甲乳外科四川南充637100

目的:通过观察乳腺癌组织中泛素特异性蛋白酶20(USP20)、Ezrin表达变化及其与临床病理特征之间的关系,探讨乳腺癌组织中USP20与Ezrin表达的相关性及临床意义。方法:免疫组织化学及免疫荧光方法用于检测USP20与Ezrin阳性细胞的表达变化... 详细信息

目的:通过观察乳腺癌组织中泛素特异性蛋白酶20(USP20)、Ezrin表达变化及其与临床病理特征之间的关系,探讨乳腺癌组织中USP20与Ezrin表达的相关性及临床意义。方法:免疫组织化学及免疫荧光方法用于检测USP20与Ezrin阳性细胞的表达变化以及细胞定位,并分析它们与乳腺癌患者临床病理特征的关系;shRNA-USP20慢病毒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过荧光定量PCR与Western Blot检测USP20基因及蛋白的过表达水平,然后观察过表达USP20后Ezrin基因和蛋白的表达变化。结果:USP20与Ezrin在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为69.6%和78.5%,而在邻近相对正常组织中的表达均为阴性,与邻近相对正常组织相比,乳腺癌组织中USP20与Ezrin阳性表达均显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.01);USP20与Ezrin阳性表达均主要在乳腺癌组织细胞质中,少量在细胞核。两者在乳腺癌组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、WHO分级、分子分型和有无淋巴结转移均无关;shRNA-USP20慢病毒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后,USP20蛋白及mRNA的表达均明显增加(P<0.01),过表达USP20后Ezrin的mRNA表达不变,蛋白表达显著增加(P<0.01)。结论:乳腺癌组织中USP20和Ezrin表达呈正相关关系,且过表达USP20后Ezrin蛋白表达显著增加,USP20和Ezrin可能共同促进乳腺癌发生发展,其机制可能与USP20去泛素化作用有密切关系,这为临床治疗、预后及进一步研究提供重要的实验依据。

关键词：乳腺癌泛素特异性蛋白酶20 Ezrin 相关性

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生理学混合式评价体系的构建及思考

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中华医学教育探索杂志 2023年第2期22卷 208-211页

作者：买文丽徐策高瑛周圆媛刘行海张团笑敬华娥罗杰伟川北医学院生理教研室南充637000 川北医学院化学教研室南充637000

混合式评价体系以网络平台为载体,构建线上—线下、个人—团队之间跨时空的、动态的评价模式。生理学通过两年的混合式评价体系的运行,系统中过程性评价和终结性评价表现出很好的相关性,学生的学习能力和学习效果与评价结果表现出一致... 详细信息

混合式评价体系以网络平台为载体,构建线上—线下、个人—团队之间跨时空的、动态的评价模式。生理学通过两年的混合式评价体系的运行,系统中过程性评价和终结性评价表现出很好的相关性,学生的学习能力和学习效果与评价结果表现出一致性。实践证明,混合式评价体系不仅优化了传统的评价体系,而且充分拓展了形成性评价的五原则。但在体现网络平台优势的同时,也暴露出了网络平台监督不足的缺陷,应对其进行改进,进一步完善生理学混合式评价体系。

关键词：混合式评价体系线上线下过程性评价终结性评价

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