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m^(6)A去甲基化酶FTO调控BCL2 mRNA稳定性与翻译效率促进血小板前体形成

陆军军医大学学报 2025年第6期47卷 519-530页

作者：夏文军卢尧吴煌文爱清陈卫川北医学院基础医学与法医学院病理生理学教研室四川南充陆军特色医学中心(第三军医大学大坪医院)输血医学科创伤与化学中毒全国重点实验室重庆

目的探究下调m^(6)A去甲基化酶脂肪质量和肥胖相关基因(fat mass and obesityassociated protein,FTO)对MEG-01巨核细胞系血小板前体形成的影响及其机制。方法①分别用1 nmol/L佛波迷酯(phorbol myristate acetate,PMA)组(诱导组)和DMSO组(对照组)处理MEG-01细胞72 h,通过Western blot和RT-qPCR检测FTO蛋白和mRNA表达变化情况。②用靶向FTO的病毒液(sh-FTO)和阴性对照病毒液(sh-NC)感染MEG-01细胞,用1 nmol/L PMA诱导sh-NC组和sh-FTO组MEG-01细胞72 h后,Western blot和RT-qPCR检测FTO蛋白和mRNA表达变化情况。碘化丙啶(propidium lodrde,PI)DNA染色检测细胞周期、CCK-8检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测cleaved Caspase-3蛋白表达量,CD41/CD61染色检测巨核细胞成熟情况,明场观察和CD61免疫荧光检测血小板前体形成情况,RT-qPCR检测细胞凋亡相关分子(Caspase-3、BAD、BAK1、BCL2、MCL1)表达量,Western blot检测进一步验证BCL2蛋白变化情况,基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)中筛选出数据集;使用加州大学圣克鲁兹分校基因组浏览器(University of California,Santa Cruz genome browser,UCSC)分析比对BCL2 mRNA上的甲基化测序峰;m^(6)A甲基化RNA免疫共沉淀(m^(6)A RNA immunoprecipitation,m^(6)A-RIP)验证MEG-01巨核细胞BCL2 mRNA m^(6)A甲基化富集水平,检测sh-NC组和sh-FTO组BCL2 mRNA m^(6)A甲基化富集水平变化,以mRNA半衰期实验和多聚核糖体分离实验检测BCL2 mRNA翻译效率。结果①与DMSO组相比,PMA组FTO蛋白(P<0.05)和mRNA(P<0.01)表达水平升高;②与sh-NC组相比,sh-FTO组FTO mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),细胞周期发生G1/S期阻滞[(60.80±1.29)%vs(72.13±1.18)%,P<0.01],细胞活力明显降低[(1.17±0.03)%vs(0.69±0.05)%,P<0.05],Annexin V-FITC/PI阳性细胞占比升高[(12.87±0.83)%vs(17.45±1.58)%,P<0.01],TUNEL阳性细胞占比显著升高[(1.03±0.27)%vs(17.49±9.91)%,P<0.01],cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),CD41+CD61+阳性率明显降低[(51.63±1.13)%vs(34.08±0.53)%,P<0.01],具有伪足的巨核细胞比率明显降低[(26.49±6.73)%vs(13.31±5.97)%,P<0.01]。③与sh-NC相比,sh-FTO组细胞抗凋亡分子BCL2蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.01),UCSC GEO测序显示BCL2 mRNA上有m^(6)A甲基化修饰位点,并经m^(6)ARIP实验在MEG-01巨核细胞验证:与GAPDH mRNA相比,BCL2 mRNA有明显的m^(6)A富集信号(P<0.01);与sh-NC相比,BCL2 mRNA上的m^(6)A甲基化修饰明显升高(P<0.01);BCL2 mRNA的稳定性显著降低,翻译效率显著降低(P<0.01)。结论m^(6)A去甲基化酶FTO调控BCL2 mRNA稳定性与翻译效率,促进血小板前体形成。

关键词：脂肪质量和肥胖相关基因血小板前体 m^(6)A甲基化修饰 B淋巴细胞瘤-2基因

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孤束核参与高血压中枢调控的研究进展

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生理学报 2025年第1期77卷 85-94页

作者：田雨李娜张翼王红杰河北大学基础医学院保定071000 河北医科大学生理学教研室石家庄050017 河北大学临床医学院保定071000 河北省慢性肾脏病骨骼代谢生理学重点实验室保定071000

孤束核是接收并整合心血管调节信号传入的第一级中枢,其通过参与心血管反射,在维持正常自主神经活动及血压调节中发挥重要作用。孤束核内的神经元之间形成复杂的突触连接,并与其他脑区相互作用。孤束核通过压力感受器反射、交感神经活... 详细信息

孤束核是接收并整合心血管调节信号传入的第一级中枢,其通过参与心血管反射,在维持正常自主神经活动及血压调节中发挥重要作用。孤束核内的神经元之间形成复杂的突触连接,并与其他脑区相互作用。孤束核通过压力感受器反射、交感神经活动、肾素-血管紧张素-醛固酮系统和氧化应激等多种途径调节自主神经活动及血压。孤束核功能异常可能导致高血压。研究孤束核在血压中枢调控的作用,以及干预孤束核相关的神经递质和信号通路,可为高血压的防治提供新思路。本文总结了迄今为止有关孤束核调节自主神经活动及血压的研究结果和亟待解决的问题,旨在为今后研究提供参考和借鉴。

关键词：孤束核自主神经高血压压力反射交感神经传出氧化应激

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赖型钩体pCX7探针Southern杂交分析不同血清群型钩体DNA

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华西医科大学学报 1994年第3期25卷 248-252页

作者：沈成义戴保民川北医学院病理生理学教研室

用赖型０１７株钩体ＤＮＡ基因库中筛选出的重组克隆ｐＣＸ７制备重组质粒，再以￣（３２）Ｐ标记为探针，对１１个血清群的１８株问号钩体、双曲钩体ＰａｔｏｃＩ株和细螺旋体ｉｌｌｉｎｉ３０５５株ＤＮＡＳｏｕｔｈ－ｅｒｎ杂交。放... 详细信息

用赖型０１７株钩体ＤＮＡ基因库中筛选出的重组克隆ｐＣＸ７制备重组质粒，再以￣（３２）Ｐ标记为探针，对１１个血清群的１８株问号钩体、双曲钩体ＰａｔｏｃＩ株和细螺旋体ｉｌｌｉｎｉ３０５５株ＤＮＡＳｏｕｔｈ－ｅｒｎ杂交。放射自显影结果显示：双曲钩体ＰａｔｏｃＩ株和细螺旋体ｉｌｌｉｎｉ３０５５株ＤＮＡ未获杂交阳性区带；ｊａｖａｎｉｃａ（爪哇）、ｍａｎｈａｏ２（曼耗２）和ｒａｎａｒｕｍ（蛙）三个低毒力血清型的问号状钩体ＤＮＡ亦为阴性；１５株问号状钩体ＤＮＡ均出现了杂交信号，而且不同群型钩体ＤＮＡ杂交带型明显不同，赖型钩体０１７株（强毒株）与６０１株（弱毒株）杂交带型也有细微差别。作者认为，以ｐＣＸ７探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交可望作为钩体分类和鉴定的工具或参考。

关键词：钩端螺旋体杂交酶谱重组质粒

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EGCG对2型糖尿病大鼠肾脏功能的影响

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中国老年学杂志 2019年第15期39卷 3762-3764页

作者：刘行海买文丽刘红郑倩刘华徐策川北医学院生理学教研室

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾脏功能的影响。方法复制T2DM大鼠模型。实验动物分成4组:对照组、模型组、EGCG1组和EGCG2组〔分别为50、150mg/(kg·d)灌胃〕。给药12w后,测定大鼠空腹血糖(FBG)、... 详细信息

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾脏功能的影响。方法复制T2DM大鼠模型。实验动物分成4组:对照组、模型组、EGCG1组和EGCG2组〔分别为50、150mg/(kg·d)灌胃〕。给药12w后,测定大鼠空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)水平并计算胰岛素敏感指数(ISI)、三酰甘油(TG)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、肾组织的超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量、肾脏肥大指数(KW/BW)、肾皮质钠泵活性。结果与对照组比较,模型组FBG、FINS水平、KW/BW、MDA含量、Scr、BUN显著升高,ISI、SOD活性显著下降,肾皮质钠泵活性显著降低(P<0.05)。与模型组比较,EGCG1组和EGCG2组各指标均显著改善(P<0.05),具有一定剂量依赖性。结论EGCG对T2DM大鼠肾脏功能具有保护作用,其机制可能与EGCG可降低T2DM大鼠血糖血脂,降低肾脏氧化应激水平,稳定T2DM大鼠肾皮质钠泵活性有关。

关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯 2型糖尿病肾脏功能

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虫草菌丝对2型糖尿病大鼠认知功能障碍的影响

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中国老年学杂志 2019年第12期39卷 3026-3028页

作者：刘行海刘红郑倩刘华买文丽川北医学院生理学教研室

目的探讨虫草菌丝(CS)对2型糖尿病(T2DM)大鼠认知功能的影响。方法采用链脲佐菌素联合高脂饮食复制T2DM大鼠模型,将成功造模大鼠随机分成模型组,CS低、中、高剂量组〔CS1组1.5ml/(kg·d)、CS2组3.0ml/(kg·d)、CS3组6.0ml/(kg&#... 详细信息

目的探讨虫草菌丝(CS)对2型糖尿病(T2DM)大鼠认知功能的影响。方法采用链脲佐菌素联合高脂饮食复制T2DM大鼠模型,将成功造模大鼠随机分成模型组,CS低、中、高剂量组〔CS1组1.5ml/(kg·d)、CS2组3.0ml/(kg·d)、CS3组6.0ml/(kg·d),灌胃〕。给药4w后,采用Morris水迷宫法进行行为学检测;测定大鼠空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)水平并计算胰岛素敏感指数(ISI);测定海马组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量。结果与对照组比较,模型组逃避潜伏期明显延长,在原平台象限停留的时间明显缩短,FBG、FINS、MDA和TNF-α含量明显升高,ISI、SOD水平明显降低(均P<0.05)。与模型组比较,CS3组避潜伏期明显缩短(P<0.05);CS2、CS3组在原平台象限停留的时间明显增加(P<0.05);CS2、CS3组其他各指标均显著改善(P<0.05),作用呈剂量依赖性。结论CS可改善T2DM大鼠认知障碍,可能与其降低T2DM大鼠体内血糖,减轻脑部炎症反应和提高抗氧化能力有关。

关键词：虫草菌丝 2型糖尿病认知障碍

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维甲酸诱发C57小鼠骨质疏松模型的形态学和骨密度变化

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中国老年学杂志 2019年第17期39卷 4312-4314页

作者：周圆媛川北医学院生理学教研室

目的探讨维甲酸诱发C57小鼠骨质疏松模型的形态学和骨密度变化。方法 3月龄SPF级野生型C57小鼠为随机分为两组各50只,骨质疏松组每天给予0.9%维甲酸(90 ml/kg)灌胃,对照组每天给予0.9%氯化钠注射液( 90 ml/kg )灌胃,共21 d。电子天平... 详细信息

目的探讨维甲酸诱发C57小鼠骨质疏松模型的形态学和骨密度变化。方法 3月龄SPF级野生型C57小鼠为随机分为两组各50只,骨质疏松组每天给予0.9%维甲酸(90 ml/kg)灌胃,对照组每天给予0.9%氯化钠注射液( 90 ml/kg )灌胃,共21 d。电子天平称量小鼠双侧股骨和胫骨(已剔除肌肉和软组织)湿重,应用Micro-CT对骨组织进行形态学观察;使用Inveon Research Work Place软件分析小鼠骨小梁相关参数。结果骨质疏松组小鼠体重较对照组明显降低( P <0.05),骨质疏松组小鼠股骨和胫骨湿重较对照组明显降低( P <0.05)。对照组小鼠的骨小梁走向大致相同,粗细均匀,形态规则,排列紧密有序,有一定厚度;骨质疏松组小鼠的骨小梁厚度变薄,数量变少,小梁间走向不一致,有断裂,分离度大,形态不规则,连接疏松,网状结构消失。与对照组比较,骨质疏松组小鼠的骨密度和骨矿含量明显降低( P <0.05)。结论维甲酸诱导法可建立3月龄的SPF级野生型C57小鼠骨质疏松模型,该模型小鼠的形态学及骨密度相关参数均有明显改变。

关键词：骨质疏松维甲酸成骨细胞破骨细胞 Micro-CT

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蟾蜍神经－肌接头小终板电位季节性变化的激素原因初探

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华西医科大学学报 1996年第4期27卷 367-371页

作者：敬华娥杨世若吕广能川北医学院生理学教研室

在春季和秋季分别滴加Ｌ－甲状腺素钠和雌酮于浴液，用细胞内记录方法研究了成年中华亚型大蟾蜍离体的缝匠肌纤维神经－肌接头小终板电位（ＭＥＰＰ）振幅季节性变化的激素原因。结果表明：①Ｌ－甲状腺素钠（５０μｍｏｌ／Ｌ）无论在... 详细信息

在春季和秋季分别滴加Ｌ－甲状腺素钠和雌酮于浴液，用细胞内记录方法研究了成年中华亚型大蟾蜍离体的缝匠肌纤维神经－肌接头小终板电位（ＭＥＰＰ）振幅季节性变化的激素原因。结果表明：①Ｌ－甲状腺素钠（５０μｍｏｌ／Ｌ）无论在春季或秋季都不能改变ＭＥＰＰ振幅；②雌酮（１００μｍｏｌ／Ｌ）在春、秋季均引起ＭＥＰＰ振幅明显增加。据此推测蟾蜍ＭＥＰＰ振幅的季节性变化与甲状腺激素作用的关系可能不密切，而与体内性激素的季节变化有关。

关键词：神经-肌接头甲状腺素蟾蜍 MEPP

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1,6-二磷酸果糖与细胞保护

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生理科学进展 2005年第2期36卷 189-190页

作者：郑倩方海立张能曹弟勇敬华娥康健川北医学院生理教研室南充637007 川北医学院解剖教研室南充637007 川北医学院药理教研室南充637007 重庆医科大学生理教研室重庆400016

1, 6- 二磷酸果糖是细胞内糖代谢的中间产物,是能在分子水平上调节细胞代谢中若干酶活性,作为恢复和改善细胞代谢的药物,可通过多方面因素减轻细胞损伤,从而对细胞起保护作用。

关键词： 1,6-二磷酸果糖细胞保护

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神经-肌接头自发性递质释放的研究进展

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生理科学进展 1997年第2期28卷 160-162页

作者：敬华娥杨世若华西医科大学生理学教研室川北医学院生理学教研室

神经－肌接头存在三种类型的自发性乙酰胆碱释放：（１）Ｃａ２＋敏感的量子式释放，是活性带突触小泡的释放，突触后电位表现为常见的微终板电位；（２）Ｃａ２＋不敏感的量子式释放，是活性带外突触小泡的释放，突触后电位表现为较大... 详细信息

神经－肌接头存在三种类型的自发性乙酰胆碱释放：（１）Ｃａ２＋敏感的量子式释放，是活性带突触小泡的释放，突触后电位表现为常见的微终板电位；（２）Ｃａ２＋不敏感的量子式释放，是活性带外突触小泡的释放，突触后电位表现为较大而上升缓慢的微终板电位，在正常肌肉较少见，而在多种削弱Ｃａ２＋敏感的量子式释放的情况下占优势；（３）胞浆乙酰胆碱的漏出。

关键词：神经-肌接头乙酰胆碱神经递质释放

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虫草菌丝对2型糖尿病大鼠胰岛内质网应激和胰岛细胞凋亡的影响

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中华糖尿病杂志 2014年第8期6卷 579-583页

作者：刘红刘行海买文丽刘华曹弟勇兰海涛霍雯郑倩川北医学院生理学教研室南充637100 川北医学院药理学教研室南充637100

目的观察虫草菌丝（cordyceps sinensis，CS）对2型糖尿病（T2DM）大鼠胰岛细胞的保护作用及机制。方法采用链脲佐菌素联合高脂饮食建立T2DM大鼠模型，成模后大鼠分为T2DM组、虫草菌丝低剂量组（2ml·kg＾-1·d＾-1，CS1组）... 详细信息

目的观察虫草菌丝（cordyceps sinensis，CS）对2型糖尿病（T2DM）大鼠胰岛细胞的保护作用及机制。方法采用链脲佐菌素联合高脂饮食建立T2DM大鼠模型，成模后大鼠分为T2DM组、虫草菌丝低剂量组（2ml·kg＾-1·d＾-1，CS1组）、虫草菌丝高剂量组（5ml·kg＾-1·d＾-1，CS2组），同时设置正常对照组。CS1组、CS2组用CS干预12周。观察CS对大鼠糖代谢的影响，进行各组大鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素水平（FINS）的比较，并计算胰岛素敏感指数（ISI）。胰岛细胞中凋亡的变化采用TUNEL方法测定，测定胰岛内质网应激蛋白（CHOP、JNK）的表达，其表达水平采用免疫组化进行检测。本实验多个样本均数间比较，采用F检验，组间两两比较采用SNK-q法检验，同一组干预前后比较用t检验。结果（1）FBG、FINS和ISI变化：CS干预12周后，CS1、CS2组FBG{（15．8±2．6）、（13．1±2．3）mmol/L]低于T2DM组[（20．5±3．7）mmol／L；q=8．56、10．20，均P〈0．0l]；CS1、CS2组FINS[（19．7±3．3）、（15．5±1．9）mU/L]低于T2DM组【（22．3±3．7）mU/L；q=5．28、7．44，均P〈0．01]；CS1、CS2组ISI[（-5．43±0．32）、（-4．35±O．24）】高于T2DM组[（-5．94±0．41）；q=6．38、8．52，均P〈O．01]。（2）大鼠胰岛凋亡指数：T2DM组显著高于正常对照组[（O．583±0．137）比（0．154±0．042）；q=12．02，P〈0．01]和CS1、CS2组[（0．369±0．032）、（0．241±0．024）；q=4．58、9．87，P〈0．05和P〈0．01]。（3）大鼠胰岛CHOP、JNK的表达：T2DM组[（0．362±0．064）、（1．35±0．15）]高于正常对照组[（0．063±O．021）、（0．12±0．03）；q=18．87、26．28，均P〈O．01]、CS1组[（0．268±0．038）、（0．56±0．07）；q=4．26、6．75，P〈0．05，P〈0．01]和CS2组[（0．152±0．035）、（0．33±0．06）；q=7．84、8．97，均P〈0．01]。结论CS能够保护T2DM大鼠胰岛细胞的功能，其机制可能与减轻胰岛细胞凋亡的发生，抑制胰岛内质网应激水平．降低CHOP、JUN的表达有关。

关键词：糖尿病,2型内质网胰岛细胞凋亡细胞虫草菌丝

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