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m^(6)A去甲基化酶FTO调控BCL2 mRNA稳定性与翻译效率促进血小板前体形成

陆军军医大学学报 2025年第6期47卷 519-530页

作者：夏文军卢尧吴煌文爱清陈卫川北医学院基础医学与法医学院病理生理学教研室四川南充陆军特色医学中心(第三军医大学大坪医院)输血医学科创伤与化学中毒全国重点实验室重庆

目的探究下调m^(6)A去甲基化酶脂肪质量和肥胖相关基因(fat mass and obesityassociated protein,FTO)对MEG-01巨核细胞系血小板前体形成的影响及其机制。方法①分别用1 nmol/L佛波迷酯(phorbol myristate acetate,PMA)组(诱导组)和DMSO组(对照组)处理MEG-01细胞72 h,通过Western blot和RT-qPCR检测FTO蛋白和mRNA表达变化情况。②用靶向FTO的病毒液(sh-FTO)和阴性对照病毒液(sh-NC)感染MEG-01细胞,用1 nmol/L PMA诱导sh-NC组和sh-FTO组MEG-01细胞72 h后,Western blot和RT-qPCR检测FTO蛋白和mRNA表达变化情况。碘化丙啶(propidium lodrde,PI)DNA染色检测细胞周期、CCK-8检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测cleaved Caspase-3蛋白表达量,CD41/CD61染色检测巨核细胞成熟情况,明场观察和CD61免疫荧光检测血小板前体形成情况,RT-qPCR检测细胞凋亡相关分子(Caspase-3、BAD、BAK1、BCL2、MCL1)表达量,Western blot检测进一步验证BCL2蛋白变化情况,基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)中筛选出数据集;使用加州大学圣克鲁兹分校基因组浏览器(University of California,Santa Cruz genome browser,UCSC)分析比对BCL2 mRNA上的甲基化测序峰;m^(6)A甲基化RNA免疫共沉淀(m^(6)A RNA immunoprecipitation,m^(6)A-RIP)验证MEG-01巨核细胞BCL2 mRNA m^(6)A甲基化富集水平,检测sh-NC组和sh-FTO组BCL2 mRNA m^(6)A甲基化富集水平变化,以mRNA半衰期实验和多聚核糖体分离实验检测BCL2 mRNA翻译效率。结果①与DMSO组相比,PMA组FTO蛋白(P<0.05)和mRNA(P<0.01)表达水平升高;②与sh-NC组相比,sh-FTO组FTO mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),细胞周期发生G1/S期阻滞[(60.80±1.29)%vs(72.13±1.18)%,P<0.01],细胞活力明显降低[(1.17±0.03)%vs(0.69±0.05)%,P<0.05],Annexin V-FITC/PI阳性细胞占比升高[(12.87±0.83)%vs(17.45±1.58)%,P<0.01],TUNEL阳性细胞占比显著升高[(1.03±0.27)%vs(17.49±9.91)%,P<0.01],cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),CD41+CD61+阳性率明显降低[(51.63±1.13)%vs(34.08±0.53)%,P<0.01],具有伪足的巨核细胞比率明显降低[(26.49±6.73)%vs(13.31±5.97)%,P<0.01]。③与sh-NC相比,sh-FTO组细胞抗凋亡分子BCL2蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.01),UCSC GEO测序显示BCL2 mRNA上有m^(6)A甲基化修饰位点,并经m^(6)ARIP实验在MEG-01巨核细胞验证:与GAPDH mRNA相比,BCL2 mRNA有明显的m^(6)A富集信号(P<0.01);与sh-NC相比,BCL2 mRNA上的m^(6)A甲基化修饰明显升高(P<0.01);BCL2 mRNA的稳定性显著降低,翻译效率显著降低(P<0.01)。结论m^(6)A去甲基化酶FTO调控BCL2 mRNA稳定性与翻译效率,促进血小板前体形成。

关键词：脂肪质量和肥胖相关基因血小板前体 m^(6)A甲基化修饰 B淋巴细胞瘤-2基因

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赖型钩体pCX7探针Southern杂交分析不同血清群型钩体DNA

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华西医科大学学报 1994年第3期25卷 248-252页

作者：沈成义戴保民川北医学院病理生理学教研室

用赖型０１７株钩体ＤＮＡ基因库中筛选出的重组克隆ｐＣＸ７制备重组质粒，再以￣（３２）Ｐ标记为探针，对１１个血清群的１８株问号钩体、双曲钩体ＰａｔｏｃＩ株和细螺旋体ｉｌｌｉｎｉ３０５５株ＤＮＡＳｏｕｔｈ－ｅｒｎ杂交。放... 详细信息

用赖型０１７株钩体ＤＮＡ基因库中筛选出的重组克隆ｐＣＸ７制备重组质粒，再以￣（３２）Ｐ标记为探针，对１１个血清群的１８株问号钩体、双曲钩体ＰａｔｏｃＩ株和细螺旋体ｉｌｌｉｎｉ３０５５株ＤＮＡＳｏｕｔｈ－ｅｒｎ杂交。放射自显影结果显示：双曲钩体ＰａｔｏｃＩ株和细螺旋体ｉｌｌｉｎｉ３０５５株ＤＮＡ未获杂交阳性区带；ｊａｖａｎｉｃａ（爪哇）、ｍａｎｈａｏ２（曼耗２）和ｒａｎａｒｕｍ（蛙）三个低毒力血清型的问号状钩体ＤＮＡ亦为阴性；１５株问号状钩体ＤＮＡ均出现了杂交信号，而且不同群型钩体ＤＮＡ杂交带型明显不同，赖型钩体０１７株（强毒株）与６０１株（弱毒株）杂交带型也有细微差别。作者认为，以ｐＣＸ７探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交可望作为钩体分类和鉴定的工具或参考。

关键词：钩端螺旋体杂交酶谱重组质粒

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硫氮卓酮对失血性休克犬胰腺的保护作用及其机制的研究

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中国药理学通报 1994年第6期10卷 433-435页

作者：欧阳静萍李端祥涂淑珍杨海鹭常江邓冠斌湖北医学院病理生理教研室

杂种犬１１只，快速失血使平均动脉压达６．０ｋＰａ．维持９０ｍｉｎ，回输全部血液，２４０ｍｉｎ处死动物。硫氮卓酮（Ｄｉｌｔｉａｙｅｍ，Ｄｉｌ，ｎ＝６）组于休克３０ｍｉｎ时静脉输注Ｄｉｌ（６００１μｇ·ｋｇ－１．１５... 详细信息

杂种犬１１只，快速失血使平均动脉压达６．０ｋＰａ．维持９０ｍｉｎ，回输全部血液，２４０ｍｉｎ处死动物。硫氮卓酮（Ｄｉｌｔｉａｙｅｍ，Ｄｉｌ，ｎ＝６）组于休克３０ｍｉｎ时静脉输注Ｄｉｌ（６００１μｇ·ｋｇ－１．１５ｍｉｇ内输完）。休克组在相同时间输入等量生理盐水。结果显示，和休克组比较，Ｄｉｌ治疗能降低胰腺组织黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）活性，减少脂质过氧化产物丙二醛生成，增加谷胱甘肽过氧化物酶、Ｃｕ－Ｚｎ超氧化物酶（Ｃｕ－ＺｎＳＯＤ）和Ｍｎ－ＳＯＤ活性。并减轻胰腺损伤程度。提示Ｄｉｌ能保护休克时的胰腺，其机制与减少自由基生成，增加自由基清除酶活性有关。

关键词：休克失血性休克胰腺硫氮卓酮自由基犬

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HLA-DRA基因逆转录病毒载体重组质粒的构建和包装

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免疫学杂志 1999年第2期15卷 93-96页

作者：殷秀邓宇斌李树浓川北医学院病理生理教研室中山医科大学病理生理教研室

用逆转录病毒载体将ＨＬＡ－ＤＲＡ基因转染供体组织，使供受体之间的ＨＬＡ－ＤＲ抗原表型趋于一致形成嵌合体，可能诱导免疫耐受，从而减缓受者免疫活性细胞对移植物的识别和攻击，延长移植物存活时间。本文采用新一代逆转录病毒载体... 详细信息

用逆转录病毒载体将ＨＬＡ－ＤＲＡ基因转染供体组织，使供受体之间的ＨＬＡ－ＤＲ抗原表型趋于一致形成嵌合体，可能诱导免疫耐受，从而减缓受者免疫活性细胞对移植物的识别和攻击，延长移植物存活时间。本文采用新一代逆转录病毒载体连接ＨＬＡ－ＤＲＡ基因，构建ｐＤＯＲ／ＨＬＡ－ＤＲＡ逆转录重组质粒，经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ法包装双嗜性ＰＡ３１７细胞，获得高滴度感染性病毒上清，为进一步开展移植耐受研究提供了重要的实验基础。

关键词： HLA-DRA基因移植免疫逆转录病毒载体

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瓜蒌、心得安对血小板体外聚集和TXA2合成的影响

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武汉大学学报(医学版) 1988年第2期9卷 138-141页

作者：凌宏鲁翔董传仁欧阳静萍湖北医学院病理生理教研室湖北医学院病理生理教研室湖北医学院病理生理教研室湖北医学院病理生理教研室

本文报道瓜蒌注射液（终末浓度125～250mg/ml）和心得安（1～2μmol）在体外实验中,能明显抑制ADP或AA诱导的家兔血小板聚集性和TXA2合成释放反应。

关键词：心脏病/治疗普荼洛尔/药物作用血小板凝集血小板功能试验

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1,6-二磷酸果糖与细胞保护

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生理科学进展 2005年第2期36卷 189-190页

作者：郑倩方海立张能曹弟勇敬华娥康健川北医学院生理教研室南充637007 川北医学院解剖教研室南充637007 川北医学院药理教研室南充637007 重庆医科大学生理教研室重庆400016

1, 6- 二磷酸果糖是细胞内糖代谢的中间产物,是能在分子水平上调节细胞代谢中若干酶活性,作为恢复和改善细胞代谢的药物,可通过多方面因素减轻细胞损伤,从而对细胞起保护作用。

关键词： 1,6-二磷酸果糖细胞保护

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大鼠异丙肾上腺素性心肌梗塞检测心功能动态变化

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中国病理生理杂志 1992年第1期 58-21页

作者：卢显弟董传仁长治医学院病理生理教研室湖北医学院病理生理教研室

应用异丙肾上腺素(ISOP)复制心肌梗塞的动物疾病模型已有30余年的历史,业已证明大剂量(≥10mg/kg)ISOP能引起大鼠心肌线粒体肿胀、细胞水肿、肌原纤维挛缩,严重者可见肌质网变形、肌原纤维解离及大量线

关键词：异丙肾上腺素动物疾病模型喘息定大鼠心肌梗塞冠心病

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大蒜素抗肝癌的免疫机制研究

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中国病理生理杂志 2009年第2期25卷 392-395页

作者：张燕沈成义川北医学院基础医学院病理生理教研室四川南充637000

目的:利用鼠肝癌动物模型,评价大蒜素在体内抗肝癌的有效性及可能的免疫应答机制。方法:在BALB/c小鼠右侧腋部皮下接种***细胞建立实验动物模型,将40只BALB/c小鼠随机分成两组,模型组和大蒜素治疗组,每组动物各20只,予接种后第2d腹腔内... 详细信息

目的:利用鼠肝癌动物模型,评价大蒜素在体内抗肝癌的有效性及可能的免疫应答机制。方法:在BALB/c小鼠右侧腋部皮下接种***细胞建立实验动物模型,将40只BALB/c小鼠随机分成两组,模型组和大蒜素治疗组,每组动物各20只,予接种后第2d腹腔内注射给药,分别注射0.2mL0.9%NS和0.2ml(1.95kg/L)大蒜素液,每天1次,连续14d;每2d持续测量肿瘤体积变化,绘制肿瘤生长曲线;于末次给药第2d处死动物,称取肿瘤重量,计算肿瘤生长抑制率;用HE染色法、免疫组织化学法检测肿瘤组织中淋巴细胞浸润情况;用流式细胞仪检测小鼠外周血中T淋巴细胞亚群。结果:与模型组相比,大蒜素治疗组小鼠移植瘤生长明显受到抑制;肿瘤组织HE染色示大蒜素治疗组肿瘤组织中有较多淋巴细胞浸润,且能从形态学上观察到巨噬细胞及中性粒细胞在肿瘤组织中浸润,而模型组肿瘤组织中淋巴细胞浸润较少;免疫组织化学法检测到大蒜素治疗组肿瘤组织中有较多CD4+和CD8+T淋巴细胞浸润;流式细胞仪检测到大蒜素治疗组小鼠外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比分别为52.59%±4.93%和18.94%±1.87%,明显高于模型组的32.34%±6.40%和12.01%±1.06%(P<0.05)。结论:大蒜素可能通过活化CD4+和CD8+T淋巴细胞诱导抗肿瘤免疫作用抑制肿瘤细胞的生长。

关键词：大蒜素癌肝细胞

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1,6-二磷酸果糖对白细胞介素1β损伤的胰岛细胞功能的影响

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中国临床康复 2005年第7期9卷 48-49,60页

作者：郑倩曹弟勇刘华黄丹丹蓝海涛徐彬林丽李旭伟唐兰川北医学院生理教研室四川省南充市637007 川北医学院药理教研室四川省南充市637007 川北医学院病理生理教研室四川省南充市637007

目的:应用离体培养乳鼠胰岛细胞,探讨1,6-二磷酸果糖(fructose-1,6-diphosphate,FDP)对白细胞介素1β(IL-1β)损伤的胰岛细胞是否具有保护作用。方法:实验选用出生1～3d的Wistar大鼠20只。分离培养后的胰岛细胞,将其随机分为对照组、FD... 详细信息

目的:应用离体培养乳鼠胰岛细胞,探讨1,6-二磷酸果糖(fructose-1,6-diphosphate,FDP)对白细胞介素1β(IL-1β)损伤的胰岛细胞是否具有保护作用。方法:实验选用出生1～3d的Wistar大鼠20只。分离培养后的胰岛细胞,将其随机分为对照组、FDP组、IL-1β损伤组、IL-1β+FDP组,每组平行孔为6孔。应用MTT法检测对照组、IL-1β损伤组以及不同浓度(2.5,5.0,7.5,10.0,12.5,15.0mmol/L)FDP保护组胰岛细胞的细胞活性。结果:IL-1β损伤组细胞活性(A值:0.116±0.012)明显低于对照组(0.252±0.020)(F=8.92,P<0.01),加入5～10mmol/LFDP可使细胞活性增强(F=13.35,22.56,P<0.01),但2.5,12.5,15.0mmol/LFDP与受损细胞共同孵育后未能使细胞活性升高(P>0.05)。10,40h时未见FDP对受损细胞活性的保护,20h时IL-1β+FDP组细胞活性(A值:0.219±0.004)明显高于IL-1β损伤组(0.178±0.010)(F=19.10,P<0.01),30hIL-1β+FDP组细胞活性明显高于IL-1β损伤组(F=16.05,P<0.01)。结论:FDP对IL-1β损伤的胰岛细胞活性具有保护作用,且具有时间和剂量依从关系。

关键词：果糖二磷酸盐类/药理学胰岛/病理学细胞保护

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前列腺素E_2对家兔血液动力学的影响及对急性心肌梗塞后的心肌保护作用

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中国病理生理杂志 1990年第1期6卷 40-43页

作者：陶世英涂淑珍邓冠斌凌宏湖北医学院病理生理教研室

本实验结果表明,家兔静注PGE_2(Iμg/min/kg)后,动脉收缩压、静脉舒张压、平动脉压均显著下降,左室+dp/dt max,-dp/dt max、心肌耗氧量亦显著下降;心率、左室射血时间、左室收缩成分缩短速率,左室等容舒张期压力下降的时间常数均无明显... 详细信息

本实验结果表明,家兔静注PGE_2(Iμg/min/kg)后,动脉收缩压、静脉舒张压、平动脉压均显著下降,左室+dp/dt max,-dp/dt max、心肌耗氧量亦显著下降;心率、左室射血时间、左室收缩成分缩短速率,左室等容舒张期压力下降的时间常数均无明显改变。结果提示:家兔静注PGE_2,可降低动脉血压,减少心脏负荷,降低心肌耗氧量,但对心脏舒缩功能无明显影响。急性心肌梗塞的家兔,静注同剂量的PGE_2,可使+dP/dt max、-dp/dt max显著高于对照组;ST段抬高值亦显著低于对照组,LVSP高于对照组但无统计学意义。本结果亦进一步表明PGE_2可改善心肌血供,降低室壁张力,减少心肌耗氧量,以维持心脏功能。提示PGE_2对心肌梗塞具有保护作用。

关键词：心肌梗塞前列腺素E2 血液动力学

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