检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2018年第4期34卷 139-143页

作者：崔红晶周涛邱堃佩宋浩昌刘新光广东医科大学衰老研究所广东省医学分子诊断重点实验室东莞市衰老与抗衰老重点实验室东莞523808

研究蛋白质O-甘露糖转移酶(Protein O-mannosyltransferase,PMT)家族中PMT3基因缺失,以及PMT1与PMT3双基因缺失对酵母细胞复制性寿命的影响。采用一步基因置换法构建PMT3基因缺失酵母菌株(pmt3Δ),基于基因同源重组的原理,构建PMT1和PMT... 详细信息

研究蛋白质O-甘露糖转移酶(Protein O-mannosyltransferase,PMT)家族中PMT3基因缺失,以及PMT1与PMT3双基因缺失对酵母细胞复制性寿命的影响。采用一步基因置换法构建PMT3基因缺失酵母菌株(pmt3Δ),基于基因同源重组的原理,构建PMT1和PMT3双基因缺失酵母菌株(pmt1Δpmt3Δ);显微镜下分离和计数酵母子细胞的数目,统计酵母细胞复制性寿命。与野生型酵母细胞的平均复制性寿命(26代)比较,pmt3Δ菌株(24代,P>0.05)和pmt1Δpmt3Δ菌株(25代,P>0.05)的平均寿命均无明显变化,差异无统计学意义。酵母PMT3单基因缺失,以及PMT1和PMT3双基因缺失均不影响细胞的复制性寿命。

关键词：酿酒酵母细胞寿命出芽糖基化

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酿酒酵母PMT6基因缺失对细胞寿命的影响

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生物技术 2017年第6期27卷 576-579,544页

作者：崔红晶周涛赵炜宋浩昌袁源郑慧玲刘新光广东医科大学衰老研究所广东省医学分子诊断重点实验室东莞市衰老与抗衰老重点实验室广东东莞523808

[目的]构建蛋白质O-甘露糖转移酶(Protein O-mannosyltransferase)-6基因缺失酵母菌株,研究其对细胞寿命的影响。[方法]以pRS306质粒为模板,采用一步基因置换方法构建PMT6基因缺失菌株(pmt6Δ);光学显微镜下分离和计数酵母母细胞产生子... 详细信息

[目的]构建蛋白质O-甘露糖转移酶(Protein O-mannosyltransferase)-6基因缺失酵母菌株,研究其对细胞寿命的影响。[方法]以pRS306质粒为模板,采用一步基因置换方法构建PMT6基因缺失菌株(pmt6Δ);光学显微镜下分离和计数酵母母细胞产生子细胞的数目,检测酵母细胞的复制性寿命;在热量限制条件下(含0.5%葡萄糖培养基),检测酵母细胞分裂增殖速度。[结果]成功构建pmt6Δ菌株;与对照组酵母细胞的复制性寿命(25.2代)比较,pmt6Δ菌株的寿命(25.4代)无明显变化(P>0.05);在热量限制条件下,pmt6Δ菌株的生长曲线低平,细胞分裂增殖减慢。[结论]PMT6基因不参与酵母细胞复制性寿命的调控,而热量限制影响PMT6基因缺失细胞的分裂增殖能力。

关键词：酿酒酵母热量限制复制性寿命细胞增殖

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PAMM不影响人脂肪干细胞的成脂分化能力

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生物化学与生物物理进展 2022年第7期49卷 1305-1317页

作者：张明萌王颖梁杰吴洪福史玉仓吴志远饶敏腊彭健愉蒋智文刘新光孙雪荣广东医科大学广东省医学分子诊断重点实验室衰老研究所东莞523808 青岛市市立医院集团输血医学科青岛266011 广东医科大学第二临床医学院东莞523808 广东医科大学附属医院整形外科湛江524001 广东医科大学干细胞与再生组织工程重点实验室东莞523808 广东医科大学生物化学与分子生物学研究所湛江524023

目的PAMM(peroxiredoxin-like 2 activated in M-CSF stimulated monocytes)是近年来发现的一种在脂肪组织中高表达的分泌因子,但其生物学功能尚不完全清楚。为了给PAMM功能研究提供新线索,本文探讨了PAMM在白色脂肪生成中的可能作用及P... 详细信息

目的PAMM(peroxiredoxin-like 2 activated in M-CSF stimulated monocytes)是近年来发现的一种在脂肪组织中高表达的分泌因子,但其生物学功能尚不完全清楚。为了给PAMM功能研究提供新线索,本文探讨了PAMM在白色脂肪生成中的可能作用及PAMM调节的下游基因。方法利用成脂分化液或“成脂分化液+IL-1α”建立人脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的成脂分化和成脂抑制模型。用si RNA干扰和过表达质粒转染的方法抑制或上调PAMM表达水平。采用基因芯片、m RNA测序及定量RT-PCR检测基因的m RNA表达水平,采用蛋白质印迹法评价蛋白质表达水平,用油红O染色检测脂滴沉积。结果随着ADSCs向白色脂肪分化,PAMM表达水平明显上升,而随着成脂抑制,PAMM表达明显下降。在ADSCs中沉默或过表达PAMM后,再进行成脂分化。结果发现,上调或下调PAMM对脂滴形成及成脂相关基因的表达均无明显影响。类似地,在高度分化的脂肪细胞中敲低PAMM表达,对细胞形态及脂滴含量亦无明显影响。本文进一步利用si RNA干扰、m RNA测序及q RT-PCR,筛选和验证了一批受PAMM调节的下游基因及功能性基因集,包括SULF1、A2M基因及调节P53稳定性的基因集等。结论PAMM可作为白色成脂分化的标志基因,但其自身对白色脂肪细胞生成无明显影响,本研究筛选出来的PAMM下游基因及基因集,可为进一步研究PAMM的功能提供新线索。

关键词： PAMM 脂肪细胞成脂分化干细胞脂肪因子

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酵母ATG8与PMT1双基因缺失菌株的构建及鉴定

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牡丹江医学院学报 2018年第4期39卷 1-3页

作者：崔红晶袁源陈亚芹邱堃佩赵炜广东医科大学衰老研究所广东省医学分子诊断重点实验室东莞市衰老与抗衰老重点实验室广东东莞523808

目的构建自噬相关ATG8与蛋白质O-甘露糖转移酶1(PMT1)双基因缺失酵母菌株。方法一步基因置换法构建ATG8基因缺失菌株(BY4741 atag8::LEU2);通过将不同配型的酵母细胞杂交、显微镜下四分体拆分,平板印记、缺陷型培养基筛选等方法,构建ATG... 详细信息

目的构建自噬相关ATG8与蛋白质O-甘露糖转移酶1(PMT1)双基因缺失酵母菌株。方法一步基因置换法构建ATG8基因缺失菌株(BY4741 atag8::LEU2);通过将不同配型的酵母细胞杂交、显微镜下四分体拆分,平板印记、缺陷型培养基筛选等方法,构建ATG8和PMT1双基因缺失菌株(BY4742 agt8::LEU2 PMT1::URA3);PCR鉴定阳性克隆基因组DNA。结果 ATG8基因缺失菌株电泳条带为2759 bp和980 bp,ATG8和PMT1双基因缺失菌株电泳条带分别为2759 bp,980bp,1630 bp和731 bp。四分体拆分实验发现ATG8基因缺失酵母细胞形成较小的单克隆。结论成功构建ATG8基因缺失菌株和ATG8与PMT1双基因缺失菌株;缺失ATG8基因酵母细胞形成较小的单克隆。

关键词：酿酒酵母自噬甘露糖基化复制性寿命

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酶连接介导PCR法构建酵母PMT3基因缺失菌株

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牡丹江医学院学报 2018年第1期39卷 1-3,23页

作者：崔红晶周涛宋浩昌赵炜刘新光广东医科大学衰老研究所广东省医学分子诊断重点实验室东莞市衰老与抗衰老重点实验室广东东莞523808

目的本文运用酶连接介导的PCR法构建酿酒酵母PMT3基因缺失菌株。方法以酿酒酵母基因组DNA为模板,PCR扩增PMT3基因开放阅读框两侧片段,双酶切后,定向克隆于pRS305载体;限制性内切酶MluⅠ线性化基因缺失重组载体(pRS305-pmt3-ko),采用醋... 详细信息

目的本文运用酶连接介导的PCR法构建酿酒酵母PMT3基因缺失菌株。方法以酿酒酵母基因组DNA为模板,PCR扩增PMT3基因开放阅读框两侧片段,双酶切后,定向克隆于pRS305载体;限制性内切酶MluⅠ线性化基因缺失重组载体(pRS305-pmt3-ko),采用醋酸锂的方法将重组载体转化酵母细胞;经营养缺陷型培养基筛选,PCR法验证阳性克隆酵母菌株。结果基因缺失重组载体测序正确,PMT3基因缺失酵母菌株构建成功。结论利用基因缺失重组载体pRS305-pmt3-ko,成功构建PMT3基因缺失酵母菌株。

关键词： PCR 酵母细胞载体分段克隆

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酵母PMT1与PMT5双基因缺失对细胞复制性寿命的影响

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微生物学杂志 2018年第5期38卷 34-38页

作者：崔红晶周涛赵炜宋浩昌袁源郑慧玲刘新光广东医科大学衰老研究所广东东莞523808 广东省医学分子诊断重点实验室广东东莞523808 东莞市衰老与抗衰老重点实验室广东东莞523808

为研究蛋白质O-甘露糖转移酶-1(Protein O-mannosyltransferase-1,Pmt1p)与Pmt5p基因对酵母细胞寿命的影响,采用一步基因置换法构建PMT5基因缺失菌株(pmt5Δ),在此基础上,缺失PMT1基因,构建PMT1和PMT5双基因缺失菌株(pmt1Δpmt5Δ)。显... 详细信息

为研究蛋白质O-甘露糖转移酶-1(Protein O-mannosyltransferase-1,Pmt1p)与Pmt5p基因对酵母细胞寿命的影响,采用一步基因置换法构建PMT5基因缺失菌株(pmt5Δ),在此基础上,缺失PMT1基因,构建PMT1和PMT5双基因缺失菌株(pmt1Δpmt5Δ)。显微镜下分离和计数酵母子细胞的数目,统计菌株的复制性寿命;检测细胞吸光度值来评价细胞分裂增殖速度。结果发现,与对照组酵母细胞的平均复制性寿命(25代)比较,pmt5Δ菌株(26代)的寿命无明显变化(P> 0. 05),而pmt1Δpmt5Δ菌株(21代)的寿命明显缩短(P <0. 01);热量限制条件下,与对照组酵母细胞比较,pmt5Δ菌株的生长曲线无明显变化,而pmt1Δpmt5Δ菌株的生长曲线低平,细胞分裂增殖减慢。结果表明,PMT1与PMT5双基因缺失明显缩短酵母细胞的寿命,机制可能与细胞的增殖活力下降有关。

关键词：酿酒酵母复制性寿命热量限制细胞增殖

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酿酒酵母PMT1与PMT2双基因过表达菌株构建及其复制寿命研究

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牡丹江医学院学报 2017年第1期38卷 19-22页

作者：崔红晶何欣周涛王俊芳孙雪荣赵炜广东医科大学衰老研究所广东省医学分子诊断重点实验室东莞市衰老与抗衰老重点实验室广东医科大学生理学教研室广东东莞523808

目的构建酿酒酵母蛋白质O-甘露糖转移酶PMT1与PMT2双基因过表达菌株,研究其对酵母细胞复制性寿命的影响。方法以PCR技术为基础,通过分子克隆的方法构建PMT2基因表达载体;通过同源重组实现PMT1和PMT2双基因在酵母细胞中过表达;实时定量PC... 详细信息

目的构建酿酒酵母蛋白质O-甘露糖转移酶PMT1与PMT2双基因过表达菌株,研究其对酵母细胞复制性寿命的影响。方法以PCR技术为基础,通过分子克隆的方法构建PMT2基因表达载体;通过同源重组实现PMT1和PMT2双基因在酵母细胞中过表达;实时定量PCR验证过表达菌株中相关基因的转录水平;光学显微镜下分离和计数酵母目细胞产生子细胞的数目,检测酵母细胞的复制性寿命。结果通过克隆技术成功构建PMT2基因过表达载体(pRS305-PMT2-ox),并转化和筛选出PMT1与PMT2双基因过表达菌株(PMT1ox PMT2ox);转录水平分析证明PMT1和PMT2基因表达上调;复制性寿命检测结果显示:与野生型菌株比较,PMT1ox PMT2ox菌株的平均寿命无明显变化。结论过表达PMT1与PMT2基因不影响酵母菌株的平均复制性寿命,提示PMT1与PMT2双基因过表达不参与酵母复制性寿命的调节。

关键词：酿酒酵母甘露糖基化复制性寿命,内质网

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AHSA1基因缺失酿酒酵母株的构建及其对生长的影响

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广东医科大学学报 2020年第6期38卷 656-659页

作者：王悦钟国升袁源赵炜崔红晶蒋智文广东医科大学衰老研究所广东东莞523808 东莞市衰老与抗衰老重点实验室广东东莞523808 广东医科大学医学技术学院广东东莞523808 广东省医学分子诊断重点实验室广东东莞523808

目的构建酿酒酵母AHSA1基因缺失菌株,并观察其对生长的影响。方法运用基因同源重组技术构建单基因缺失的酿酒酵母株,采用生长曲线测定法和克隆形成实验检测AHSA1缺失对生长的影响。结果成功构建AHSA1基因缺失酵母菌株。与野生型酵母相比... 详细信息

目的构建酿酒酵母AHSA1基因缺失菌株,并观察其对生长的影响。方法运用基因同源重组技术构建单基因缺失的酿酒酵母株,采用生长曲线测定法和克隆形成实验检测AHSA1缺失对生长的影响。结果成功构建AHSA1基因缺失酵母菌株。与野生型酵母相比,AHSA1缺失菌株的克隆形成能力及短期增殖活性明显降低。结论AHSA1基因缺失可抑制酿酒酵母生长。

关键词：酿酒酵母 AHSA1 生长

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一种改进的蔗糖线性密度梯度溶液制备法

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生物技术 2023年第6期33卷 697-701页

作者：蒋智文黄婉玲林智鑫杨婉晴孙雪荣刘新光东莞市生物医药产业实验动物资源开发与应用研究重点实验室广东医科大学实验动物中心广东东莞523808 广东省医学分子诊断重点实验室衰老研究所广东东莞523808 广东医科大学药学院广东东莞523808

[目的]制备具有良好线性的蔗糖密度梯度溶液。[方法]利用溶液梯度混合仪和蠕动泵组装成新型的蔗糖密度梯度溶液制备器,用该制备器制备50%~0%和50%~10%等不同蔗糖密度梯度溶液,然后利用电脑核酸蛋白检测仪检测所制备的蔗糖密度梯度溶液... 详细信息

[目的]制备具有良好线性的蔗糖密度梯度溶液。[方法]利用溶液梯度混合仪和蠕动泵组装成新型的蔗糖密度梯度溶液制备器,用该制备器制备50%~0%和50%~10%等不同蔗糖密度梯度溶液,然后利用电脑核酸蛋白检测仪检测所制备的蔗糖密度梯度溶液的光密度,并对蔗糖密度溶液的线性进行评估;比较自制的蔗糖密度梯度溶液制备器与经典的Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的蔗糖密度梯度溶液的优劣。[结果]自制的蔗糖密度梯度溶液制备器制备的50%~0%和50%~10%蔗糖密度梯度溶液的光密度与蔗糖密度的决定系数(R^(2))都在0.98以上;Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的50%~0%蔗糖密度梯度溶液的光密度与蔗糖密度的决定系数(R^(2))为0.95~0.97。[结论]自制的蔗糖密度梯度溶液制备器制备的蔗糖密度梯度溶液优于Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的蔗糖密度梯度溶液。

关键词：离心法蔗糖密度梯度全自动密度梯度制备系统溶液吸光度线性拟合决定系数

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单细胞测序技术在结核病研究中的应用

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新发传染病电子杂志 2017年第3期2卷 151-154页

作者：尤信信余卫业谭卫国刘新光广东医科大学衰老研究所广东东莞523808 广东医科大学广东省医学分子诊断重点实验室广东东莞523808 广东医科大学生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023 深圳市慢性病防治中心广东深圳518020

单细胞测序(single cell sequencing,SCS)是指从单个细胞提取DNA或RNA样品进行DNA或RNA的测序。与传统测序相比,单细胞测序可以在细胞层面揭示遗传信息异质性及突变特征,因而具有广阔的应用前景。目前,随着对单细胞测序的关注和深入应用... 详细信息

单细胞测序(single cell sequencing,SCS)是指从单个细胞提取DNA或RNA样品进行DNA或RNA的测序。与传统测序相比,单细胞测序可以在细胞层面揭示遗传信息异质性及突变特征,因而具有广阔的应用前景。目前,随着对单细胞测序的关注和深入应用,包括单细胞分离技术、基因组或转录组扩增建库技术、信息完整性保存以及数据解读技术等一些技术的瓶颈也日趋凸显,而且实验成本也是一个需要解决的重要问题。因为单个细胞的DNA或RNA的量远低于现有测序仪的最低上样需求,因此必须先对单细胞内的微量核酸分子进行扩增,而且要保证扩增过程的可靠,以便开展后续的测序及进一步研究。

关键词：单细胞测序结核病细胞分离技术单个细胞遗传信息 RNA DNA

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