检索结果-内蒙古大学图书馆

中国血吸虫病防治杂志 2016年第4期28卷 381-387页

作者：谢郁廖海燕陈淑洁石玲玉欧丽妍滕萍英夏丹陈启伟郑斯楠周晓红南方医科大学公共卫生学院病原生物学系暨广东普通高校新发传染病防治重点实验室广州510515

目的克隆、鉴定日本血吸虫热休克因子(Sj-hsf),并分析其基因结构特征和可变剪切亚型。方法以日本血吸虫尾蚴感染新西兰白兔,42 d后剖杀,以灌注法收集雌虫、雄虫及感染兔肝脏,以Trizol法提取总RNA。以RT-PCR扩增日本血吸虫雌虫、雄虫、... 详细信息

目的克隆、鉴定日本血吸虫热休克因子(Sj-hsf),并分析其基因结构特征和可变剪切亚型。方法以日本血吸虫尾蚴感染新西兰白兔,42 d后剖杀,以灌注法收集雌虫、雄虫及感染兔肝脏,以Trizol法提取总RNA。以RT-PCR扩增日本血吸虫雌虫、雄虫、虫卵总RNA,获得Sj-hsf开放阅读框(ORF)全长片段和Sj-hsf可变剪切区域片段,并进行克隆、酶切及测序鉴定。用DNAMAN 8.0、Inter Pro、Mega 6结合日本血吸虫和曼氏血吸虫基因组数据库以及Gen Bank等网络分析平台,分析Sj-hsf的基因结构特征、功能结构域、可变剪切模式以及不同物种间HSF序列的同源性和进化树。结果自雌虫、雄虫、虫卵扩增获得靶片段,并克隆获得阳性重组质粒,其中含Sj-hsf ORF的p BSj HSFf-F、p BSj HSFf-M、p BSj HSFf-E以及含可变剪切片段的p BSj HSFs-F、p BSj HSFs-M、p BSj HSFs-E,酶切及测序鉴定正确。序列分析显示Sj-hsf具有3种剪切亚型:Sj-hsf-isoform1(2 050 bp)、Sj-hsf-isoform2(2 086 bp)、Sj-hsf-isoform3(2 111 bp),Gen Bank登录号分别为KU954546、KX119143、KX119144,均位于日本血吸虫基因组SJC-S000780,有8个外显子,在雌虫、雄虫和虫卵阶段3种亚型均存在,以Sj-hsf-isoform1表达量高。Sj-HSF-isoform1(671 aa)、Sj-HSF-isoform2(683 aa)具有HSF特征性DBD(DNA Binding Domain)、HR-A/B和HR-C结构域,Sj-HSF-isoform3(282 aa)提前终止,无HR-C结构域。进化树分析表明Sj-HSF三种剪切亚型隶属HSF1,与曼氏血吸虫HSF近源。结论日本血吸虫雌虫、雄虫、虫卵阶段均存在3种剪切亚型的HSF,以Sj-HSF-isoform1表达量高。本研究为进一步阐明Sj-HSF调控Sj-HSPs等应激防御体系的分子机制奠定了基础。

关键词：日本血吸虫热休克反应热休克因子可变剪切热休克蛋白

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埃及伊蚊性别决定基因 Transformer 2 的鉴定与表达分析

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南方医科大学学报 2013年第11期33卷 1583-1589页

作者：刘培文陈宇婷顾金保陈晓光南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广东普通高校新发传染病防治重点实验室广东广州510515

目的分离、鉴定和分析埃及伊蚊性别决定基因Transformer 2(Aaetra2)。方法通过生物信息学方法与分子生物学方法获得了Aaetra2基因的全长。通过与已知物种tra2的比较,分析Aaetra2的基因结构特点与分子进化特征,通过RT-PCR方法验证Aaetra... 详细信息

目的分离、鉴定和分析埃及伊蚊性别决定基因Transformer 2(Aaetra2)。方法通过生物信息学方法与分子生物学方法获得了Aaetra2基因的全长。通过与已知物种tra2的比较,分析Aaetra2的基因结构特点与分子进化特征,通过RT-PCR方法验证Aaetra2的时间与组织表达特点。结果分离并鉴定Aaetra2-α与Aaetra2-β两个基因,它们位于染色体不同部位,通过选择性启动子的剪切策略进行自我调控,转录多种mRNA。埃及伊蚊TRA2蛋白具有保守的RRM、RS1、RS2和linker功能结构域区。Aaetra2表达方式无时间特异性的,从卵持续性表达至成虫阶段,且无性别特异性表达与组织特异性表达。结论 Aaetra2具有保守的昆虫性别决定基因tra2的功能结构域与表达特征,对其深入研究将为其最终应结合释放携带显性致死基因的昆虫技术应用于蚊虫的防制提供理论依据。

关键词：埃及伊蚊 transformer2 性别决定基因显性致死基因

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日本血吸虫主要虫卵抗原Sjp40在感染新西兰白兔肝脏中的表达与免疫定位

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南方医科大学学报 2015年第6期35卷 826-831页

作者：夏丹邓淦明滕萍英谢郁李耀民王春梅陈淑洁陈敏芳麦荣嘉廖海燕石玲玉欧丽妍陈启伟陈晓光周晓红南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系//广东普通高校新发传染病防治重点实验室广东广州510515

目的观察Sjp40在感染新西兰白兔肝脏沉积虫卵及其肉芽肿病变形成中的表达情况,并进行免疫定位。方法日本血吸虫尾蚴感染新西兰白兔,收集未感染组、29 dpi组和45 dpi组肝脏,Trizol法提取各组肝脏总RNA,以日本血吸虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(G... 详细信息

目的观察Sjp40在感染新西兰白兔肝脏沉积虫卵及其肉芽肿病变形成中的表达情况,并进行免疫定位。方法日本血吸虫尾蚴感染新西兰白兔,收集未感染组、29 dpi组和45 dpi组肝脏,Trizol法提取各组肝脏总RNA,以日本血吸虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,Taqman探针q RT-PCR检测Sjp40 m RNA的表达;提取各组肝脏总蛋白,以硫酸铵盐析法和Protein G免疫亲和柱层析法纯化的抗Sjp40-Mc Ab 9G7和抗弓形虫t SAG1-Mc Ab Y3A8(对照抗体),western blot检测Sjp40蛋白的表达;制备肝脏石蜡切片,HE染色观察肝脏虫卵肉芽肿的形成与发展,进一步以免疫荧光技术进行Sjp40在肝脏沉积虫卵及其肉芽肿组织中的定位。结果日本血吸虫感染兔呈急性肝肉芽肿病变期的45 dpi肝脏沉积虫卵中Sjp40 m RNA水平显著高于29 dpi尚未形成虫卵肉芽肿结节的肝脏沉积的未成熟虫卵(P<0.05),westernb blot证实了Sjp40蛋白在29 dpi和45 dpi兔肝脏中的表达。免疫荧光显示:Sjp40在29 dpi兔肝脏中定位于未成熟虫卵内,而45 dpi可见感染兔肝脏中沉积大量成簇内含毛蚴的成熟虫卵及其周围肉芽肿组织均有明显荧光。结论 Sjp40在日本血吸虫感染兔肝脏沉积虫卵中的转录水平随虫卵发育成熟而显著增加,在感染兔急性肉芽肿病变期(45dpi)呈现由虫卵向其周围肉芽肿组织扩散现象,提示该分子在血吸虫肉芽肿形成与发展过程中具有重要作用。

关键词：日本血吸虫血吸虫病 SjP40 虫卵肉芽肿免疫荧光定位

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白纹伊蚊滞育及其分子机制

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第3期34卷 282-289页

作者：夏丹滕萍英陈晓光周晓红南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系暨广东普通高校新发传染病防治重点实验室广州510515

白纹伊蚊是登革热、基孔肯雅热等虫媒疾病的重要传病媒介,亦是最具生物入侵能力的蚊媒,其在全球的快速播散和定殖,为登革病毒等的迅速扩延提供了必要条件,而白纹伊蚊的滞育为其适应不同气候地理条件提供了重要生物学基础,本文综述了白... 详细信息

白纹伊蚊是登革热、基孔肯雅热等虫媒疾病的重要传病媒介,亦是最具生物入侵能力的蚊媒,其在全球的快速播散和定殖,为登革病毒等的迅速扩延提供了必要条件,而白纹伊蚊的滞育为其适应不同气候地理条件提供了重要生物学基础,本文综述了白纹伊蚊滞育及其分子机制研究进展。

关键词：白纹伊蚊滞育滞育相关基因滞育分子机制光周期

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蚊虫的组学研究:媒介生物学和传播疾病的大数据分析平台

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南方医科大学学报 2015年第5期35卷 625-630页

作者：吴恙谢李华刘培文李小聪闫桂云陈晓光南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系//暨广东省普通高校新发传染病防治重点实验室广东广州510515

近年来随着二代测序等生物技术的的快速发展,蚊虫基因组学、转录组学、小RNA组学等领域的研究也得到了迅速提升。迄今为止,已有多种重要蚊媒包括冈比亚按蚊、致倦库蚊、埃及伊蚊等的基因组获得解析;不同蚊种的基因组大小差异很大,且与... 详细信息

近年来随着二代测序等生物技术的的快速发展,蚊虫基因组学、转录组学、小RNA组学等领域的研究也得到了迅速提升。迄今为止,已有多种重要蚊媒包括冈比亚按蚊、致倦库蚊、埃及伊蚊等的基因组获得解析;不同蚊种的基因组大小差异很大,且与基因组中的重复序列的多少呈正相关;基因组序列为嗅觉相关基因、性别决定基因等蚊虫基因的克隆鉴定提供了便利。转录组研究则给蚊虫基因的功能分析带来了有效手段,吸血蚊虫的分子基础、唾液腺蛋白的分类构成以及滞育的发生机制等都借此取得了突破性发展。小RNA组研究则揭示mi RNA和pi RNA对蚊虫的卵巢发育和吸血消化具有调节作用,而且在蚊媒抗病毒免疫中起重要作用。总之,蚊虫的组学研究为其媒介生物学和传播疾病的防治,提供了广阔的、实用的大数据分析平台。

关键词：蚊媒介基因组学转录组学小RNA组学蚊媒传染病

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刚地弓形虫入侵宿主细胞过程中棒状体蛋白16的分泌与分布

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第3期34卷 189-195页

作者：姜诗晨魏海霞何成邓胜群夏菁彭鸿娟南方医科大学公共卫生与热带医学学院广东省热带病研究重点实验室、病原生物学系暨广东省普通高校新发传染病防治重点实验室广州510515

目的观察刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)不同毒力株的棒状体蛋白16(ROP16)在入侵宿主细胞过程中的分泌及分布。方法以刚地弓形虫RH株速殖子c DNA为模板,PCR扩增Tgrop16基因,克隆至p ET-32a(+)载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(D... 详细信息

目的观察刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)不同毒力株的棒状体蛋白16(ROP16)在入侵宿主细胞过程中的分泌及分布。方法以刚地弓形虫RH株速殖子c DNA为模板,PCR扩增Tgrop16基因,克隆至p ET-32a(+)载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组蛋白Tg ROP16经纯化后免疫新西兰大白兔,制备抗Tg ROP16多克隆抗体,用蛋白质印迹(Western blotting)和间接ELISA检测抗Tg ROP16多克隆抗体的特异性和敏感性。用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测刚地弓形虫RH株和Pru株速殖子Tgrop16基因的转录水平,Western blotting分析RH株和Pru株Tg ROP16蛋白的表达量。用间接免疫荧光(IFA)检测弓形虫RH株和Pru株速殖子在入侵人包皮成纤维细胞(HFFs细胞)过程中,Tg ROP16蛋白在宿主细胞中的分泌与分布。结果制备的抗Tg ROP16多克隆抗体,Western blotting分析结果显示,能与重组蛋白Tg ROP16结合,在相对分子质量(Mr)约100 000处有一特异性条带;间接ELISA检测结果显示,抗体效价为1∶25 600。实时荧光定量PCR检测结果显示,Pru株Tgrop16基因表达量(7.786±0.206)是RH株(1.000±0.110)的7倍(P<0.05)。Western blotting分析结果显示,RH株中Tg ROP16蛋白表达量(Tg ROP16与其内参Tg Tubulin的灰度比值为0.373)较高于Pru株(Tg ROP16与其内参Tg Tubulin的灰度比值为0.232)。IFA检测结果显示,RH株和Pru株速殖子在入侵HFFs细胞前,Tg ROP16蛋白定位于速殖子的顶端复合体,速殖子入侵HFFs细胞后,Tg ROP16蛋白显示在虫体外。结论制备的抗Tg ROP16多克隆抗体特异性和敏感性高;刚地弓形虫RH株速殖子的Tg ROP16蛋白表达量高于Pru株的;两株速殖子在入侵HFFs细胞前,Tg ROP16蛋白分布于速殖子顶端复合体,在入侵宿主细胞过程中被分泌出虫体。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白16 多克隆抗体制备实时荧光定量PCR 间接免疫荧光蛋白质印迹

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冈比亚按蚊性别决定基因doublesex的克隆、序列分析及表达谱

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昆虫学报 2015年第2期58卷 122-131页

作者：刘培文李小聪顾金保刘艳陈晓光广东普通高校新发传染病防治重点实验室南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广州510515

【目的】doublesex是控制昆虫性别分化的关键基因,决定了昆虫体细胞与生殖细胞的性别。本研究旨在克隆、鉴定重要疟疾媒介冈比亚按蚊Anopheles gambiae性别决定基因doublesex(Angdsx),分析其在雌雄个体内的剪切体及在不同发育时期的表... 详细信息

【目的】doublesex是控制昆虫性别分化的关键基因,决定了昆虫体细胞与生殖细胞的性别。本研究旨在克隆、鉴定重要疟疾媒介冈比亚按蚊Anopheles gambiae性别决定基因doublesex(Angdsx),分析其在雌雄个体内的剪切体及在不同发育时期的表达模式。【方法】基于冈比亚按蚊转录组数据库,比对到Angdsx相关片段,分别以雌雄成蚊c DNA为模板,采用RT-PCR与RACE方法克隆分别获得雌雄个体内Angdsx全长基因,利用生物信息软件对所得序列进行结构域预测、氨基酸序列比对和进化树分析。根据Angdsx特异性表达引物,利用RT-PCR方法研究其在冈比亚按蚊雌雄个体及不同发育时期的表达谱。【结果】分别从冈比亚按蚊雌雄成虫中克隆获得Angdsx c DNA全长序列,分别命名为AngdsxF(Gen Bank登录号:KM978937)和AngdsxM(Gen Bank登录号:KM978938)。Angdsx位于2号常染色体右臂,基因横跨接近80 kb基因组长度。AngdsxF长度为4 874 nt,编码长度为265个氨基酸的雌性特异性蛋白DSXF;AngdsxM长度为3 183 nt,编码长度为633个氨基酸的雄性特异性蛋白DSXM。结构域分析发现Angdsx包括doublesex保守的TRA/TRA-2结合位点、dsx重复序列、富含精氨酸/丝氨酸双肽区、多聚嘌呤增强子序列和RNA结合蛋白结合序列,以及连续的双核苷酸GT为主的重复序列。与AngdsxF相比,AngdsxM具有一个雌性特异性的外显子。AngdsxM在0-2 h卵中高表达,随后逐渐减少,在12-24 h卵中降至最低,之后再次升高;AngdsxF则在6-8 h卵中开始表达。【结论】本研究获得了冈比亚按蚊性别决定基因Angdsx在雌雄个体内的全长序列,Angdsx具有保守的结构域与表达特征。本研究结果为蚊虫性别分化的分子机制及将其最终应用于显性致死昆虫施放技术进行蚊媒的防制提供了理论基础。

关键词：冈比亚按蚊性别决定基因 doublesex 显性致死昆虫施放技术序列分析表达谱

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虚拟现实生物安全实验室的构建及应用

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现代预防医学 2011年第22期38卷 4637-4638+4641页

作者：刘延龚翊君朱利戴敏冯强赵卫南方医科大学公共卫生与热带医学学院中心实验室新发传染病防治广东普通高校重点实验室

[目的]探讨虚拟生物安全实验室的构建技术及其应用。[方法]使用Flash MX 2004、3DS MAX软件制作动画和3D模型,将模型导入EON Studio虚拟现实开发平台生成.edz类型文件,通过Macromedia Authorware软件将.edz类型文件与相关文本、图片、... 详细信息

[目的]探讨虚拟生物安全实验室的构建技术及其应用。[方法]使用Flash MX 2004、3DS MAX软件制作动画和3D模型,将模型导入EON Studio虚拟现实开发平台生成.edz类型文件,通过Macromedia Authorware软件将.edz类型文件与相关文本、图片、视频文件按软件脚本架构整合,建立一个桌面虚拟现实系统。[结果]虚拟实验室软件有别于传统的课件,在教学演示方面具有高仿真度以及较强的可扩展性的优势。[结论]运用虚拟现实技术开发的生物安全虚拟实验室,在生物安全教学培训领域有着广阔的应用前景。

关键词：虚拟现实技术生物安全虚拟实验室

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白纹伊蚊同步产卵诱导体系的优化及其卵胚发育观察

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寄生虫与医学昆虫学报 2016年第2期23卷 98-104页

作者：滕萍英郭祥潘怡承夏丹周晓红南方医科大学公共卫生学院病原生物学系广东普通高校新发传染病防治重点实验室广州510515

为构建白纹伊蚊同步产卵人工诱导体系，并对白纹伊蚊卵胚发育进行观察研究，本文通过对广州白纹伊蚊野生株和实验室传代的佛山株实施同步产卵人工诱导。结果发现使用黑色仿瓷杯作为诱卵容器、未漂白竹浆纸作为诱卵纸的同步产卵诱导效果... 详细信息

为构建白纹伊蚊同步产卵人工诱导体系，并对白纹伊蚊卵胚发育进行观察研究，本文通过对广州白纹伊蚊野生株和实验室传代的佛山株实施同步产卵人工诱导。结果发现使用黑色仿瓷杯作为诱卵容器、未漂白竹浆纸作为诱卵纸的同步产卵诱导效果良好，产卵动态观察结果显示：野生株产卵后第1d产卵量从3．4％提高到51％，前3d合计产卵量从30．2％升至97％，总产卵时长从18d缩短至7d；佛山株产卵后第1d产卵量从40％提高到94％，前3d合计产卵量从84％升至99．7％，总产卵时长从13d缩短至5d。对白纹伊蚊卵胚发育观察发现，白纹伊蚊卵胚经历了胚盘形成和原肠胚形成、胚带延伸、胚带收缩、背向闭合及卵胚发育结束5个发育阶段，各阶段的发育时间与埃及伊蚊不同。优化了白纹伊蚊同步产卵诱导体系，为白纹伊蚊卵相关研究提供参考。

关键词：白纹伊蚊同步产卵卵胚发育

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蚊寨卡病毒核酸检测体系的建立与初步应用

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中国病原生物学杂志 2017年第9期12卷 811-817,824页

作者：谢甜罗陆婷尹庆庆丁琳潘怡承滕萍英谢郁刘转转陈晓光周晓红南方医科大学公共卫生学院病原生物学系暨广东普通高校新发传染病防治重点实验室广东省热带病研究重点实验室广东广州510515

目的建立敏感、特异的主要适用于蚊媒携带寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的核酸检测体系,构建新型质粒标准分子,并初步应用于广州地区白纹伊蚊野生种群ZIKV感染检测。方法从GenBank获取ZIKV全长序列,以MAGE6.0分析比对锚定保守区域作为靶标... 详细信息

目的建立敏感、特异的主要适用于蚊媒携带寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的核酸检测体系,构建新型质粒标准分子,并初步应用于广州地区白纹伊蚊野生种群ZIKV感染检测。方法从GenBank获取ZIKV全长序列,以MAGE6.0分析比对锚定保守区域作为靶标片段,结合Beacon Designer 7.5、Primer premier 6等设计引物及探针,采用逆转录PCR(RT-PCR)扩增ZIKV RNA,获得检测靶标片段RZ-1,运用Overlapping PCR在RZ-1中间插入50bp内含子(mRZ-1),克隆获得ZIKV新型质粒标准分子pBmRZ-1。构建并优化ZIKV巢式逆转录PCR(Nested RT-PCR)和荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测体系,用pBmRZ-1及不同来源的ZIKV标本对检测体系进行敏感性和特异性测试,并用于广州白纹伊蚊野生种群ZIKV检测。结果成功构建ZIKV新型质粒标准分子pBmRZ-1及Nested RT-PCR和qRT-PCR检测体系。以pBmRZ-1测试最低检测极限(Limit of detection,LOD)Nested RT-PCR为5copies,qRT-PCR为1copy,qRT-PCR标准曲线拟合线性方程为Y=-3.387LOG(x)+41.43,相关系数R2=0.996,扩增效率为97.4%。该检测体系特异、敏感,能检出蚊虫和细胞感染的ZIKV,411份广州地区白纹伊蚊野生种群标本ZIKV检测阴性。结论成功构建了特异、敏感的ZIKV核酸检测体系,可用于蚊ZIKV检测,亦可用于细胞、血清标本的ZIKV检测。新型质粒标准分子pBmRZ-1能甄别标本中可能存在的来源于阳性参照的核酸污染。广州市白纹伊蚊野生种群未检出ZIKV。

关键词：寨卡病毒核酸检测新型质粒标准分子白纹伊蚊

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