检索结果-内蒙古大学图书馆

广东海洋大学学报 2016年第4期36卷 30-36页

作者：李静庞欢瑛简纪常鲁义善汤菊芬吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

根据NCBI上登录的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列,设计一对克隆溶藻弧菌HY9901株Ⅲ型分泌系统"分子尺"蛋白VscP全长基因的特异性引物,PCR扩增获得基因的全长片段。结果显示,vsc P(Gen Bank登录号FR780678)开放... 详细信息

根据NCBI上登录的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列,设计一对克隆溶藻弧菌HY9901株Ⅲ型分泌系统"分子尺"蛋白VscP全长基因的特异性引物,PCR扩增获得基因的全长片段。结果显示,vsc P(Gen Bank登录号FR780678)开放阅读框ORF为1 206 bp,共编码401个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测其分子质量约为44.4 ku,等电点为5.72。Signal 4.1 Server和TMHMM Server 2.0预测结果表明,VscP无信号肽与跨膜结构域。Soft Berry-Psite预测结果显示,VscP含有3个N端糖基化位点,2个cAMP及c GMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,5个蛋白激酶C磷酸化位点,9个酪蛋白激酶II磷酸化位点,2个N端豆蔻酰基化位点,1个酰胺化位点和3个微体C末端靶信号位点。运用MEGA6.0构建的VscP系统进化树显示,溶藻弧菌VscP与副溶血弧菌(***)聚为一簇。应用SWISS-MODEL软件构建VscP亚基三维结构模型发现,其与鞭毛Fil K蛋白有相似构型。

关键词：溶藻弧菌 III 型分泌系统基因克隆生物信息学分析 vscP

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葡聚糖刺激下的斜带石斑鱼转录组分析

葡聚糖刺激下的斜带石斑鱼转录组分析

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2016年中国水产学会学术年会

作者：张海艳王蓓鲁义善汪志文黄瑜简纪常广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室

斜带石斑鱼是一种重要的海水经济养殖鱼类,病害是制约水产养殖业的一个重要的因素。近年来,葡聚糖作为一种新型的天然免疫增强剂在水产养殖中得到广泛的应用。本文,我们使用腹腔注射法免疫斜带石斑鱼,在免疫后的6h和72h分别取头肾,淋巴... 详细信息

斜带石斑鱼是一种重要的海水经济养殖鱼类,病害是制约水产养殖业的一个重要的因素。近年来,葡聚糖作为一种新型的天然免疫增强剂在水产养殖中得到广泛的应用。本文,我们使用腹腔注射法免疫斜带石斑鱼,在免疫后的6h和72h分别取头肾,淋巴细胞,胸腺和脾脏组织进行转录测序。转录组测序结果一共组装了175568条Unigene,平均长度是1507bp。通过Blast比对数据库进行功能注释,一共注释了121629条Unigene。基因差异表达分析获得葡聚糖刺激后的各组织的显著差异表达的免疫相关基因。对差异基因进行GO和KEGG富集分析,免疫相关的显著富集通路主要为toll-like receptor,RIG-1-like receptor和T-cell receptor信号通路等。本研究结果为阐明葡聚糖调节鱼类免疫系统的作用机制提供数据参考。

关键词：斜带石斑鱼葡聚糖转录组 qPCR

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斜带石斑鱼BCL2家族蛋白BOK基因鉴定与功能分析

斜带石斑鱼BCL2家族蛋白BOK基因鉴定与功能分析

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2016年中国水产学会学术年会

作者：蔡佳喻大鹏魏世娜汤菊芬鲁义善吴灶和秦启伟简纪常广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室中国科学院南海海洋研究所中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室

细胞凋亡在许多生理过程和免疫应答中发挥着重要的作用,BOK基因是细胞凋亡中一个关键的调控因子。本研究对斜带石斑鱼BOK(Ec-BOK)基因进行了克隆及功能分析。结果表明,Ec-BOK基因可以编码210个氨基酸,其含有4个保守的功能结构域(BH1-4)... 详细信息

细胞凋亡在许多生理过程和免疫应答中发挥着重要的作用,BOK基因是细胞凋亡中一个关键的调控因子。本研究对斜带石斑鱼BOK(Ec-BOK)基因进行了克隆及功能分析。结果表明,Ec-BOK基因可以编码210个氨基酸,其含有4个保守的功能结构域(BH1-4)和1个跨膜区(TM),蛋白序列与深裂眶锯雀鲷该蛋白相似度最高,为97%。荧光定量分析表明Ec-BOK基因在多种组织中均有表达,其中肝脏和肾脏中表达量最高。经SGIV感染后,Ec-BOK基因表达上调,体外实验过表达Ec-BOK基因可以抑制病毒基因的转录。本研究结果表明,Ec-BOK基因在鱼类抗病毒免疫应答中可能发挥着重要作用

关键词：斜带石斑鱼 BOK 新加坡虹彩病毒(SGIV) 病毒基因病毒复制

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斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)MHC Ⅱα基因的克隆及表达分析

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高技术通讯 2015年第1期25卷 102-110页

作者：蔡佳李楠蒋一男张念之鲁义善吴灶和夏春简纪常广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 中国农业大学动物医学院北京100094

利用RACE PCR克隆了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)主要组织相容性复合体Ⅱα(MHCⅡα)基因,并通过荧光定量PCR分析了该基因在健康鱼体中的组织分布以及在溶藻弧菌(Vibro alginolyticus)感染后在不同组织中的表达变化。斜带石斑鱼MH... 详细信息

利用RACE PCR克隆了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)主要组织相容性复合体Ⅱα(MHCⅡα)基因,并通过荧光定量PCR分析了该基因在健康鱼体中的组织分布以及在溶藻弧菌(Vibro alginolyticus)感染后在不同组织中的表达变化。斜带石斑鱼MHCⅡαcDNA全长为2127bp,其中5'非翻译区为834bp,开放阅读框为714bp,3'非翻译区为579bp,编码237个氨基酸,其推导的氨基酸序列包含信号肽、α1及α2功能区、跨膜区、连接肽和胞浆区。荧光定量PCR结果表明,斜带石斑鱼MHCⅡα基因在鳃、头肾、肝、体肾、脑、脾和肠中表达量较高,在心脏、皮肤和肌肉中的表达量较低,并且溶藻弧菌(Vibro alginolyticus)感染后在脾、肠、头肾、和体肾中的表达显著上调,分别为对照组的9.5倍、4.3倍、3.4倍及1.9倍。上述结果表明斜带石斑鱼MHCⅡα在抗溶藻弧菌感染的免疫反应中可能发挥重要作用,这对进一步了解石斑鱼抗菌免疫反应具有参考意义。

关键词：斜带石斑鱼溶藻弧菌 MHC Ⅱα 克隆表达分析

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溶藻弧菌转运蛋白TolB的免疫原性与免疫保护性

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生物技术通报 2015年第7期31卷 143-149页

作者：庞欢瑛周泽军张燕飞李静邱明生丁燏简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

旨在研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901转运蛋白Tol B作为疫苗候选抗原的可能性,根据已发表的全基因组序列,设计特异性引物PCR扩增tol B的基因全长序列。序列分析显示,该基因(Gen Bank登录号JQ846501)全长1 353 bp,共编码450个... 详细信息

旨在研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901转运蛋白Tol B作为疫苗候选抗原的可能性,根据已发表的全基因组序列,设计特异性引物PCR扩增tol B的基因全长序列。序列分析显示,该基因(Gen Bank登录号JQ846501)全长1 353 bp,共编码450个氨基酸残基。BLAST分析发现,溶藻弧菌tol B基因与其他已知弧菌的tol B具有较高的同源性,序列保守,可作为共同抗原候选蛋白。用原核表达的tol B蛋白免疫SPF级小鼠,制备多克隆抗体,ELISA效价达1∶40 000。免疫印迹表明鼠抗tol B血清能与诱导后的重组蛋白发生特异反应。为进一步研究tol B对石斑鱼(Epinephelus awoara)的免疫保护性,用Tol B蛋白两次免疫石斑鱼,ELISA检测发现,免疫石斑鱼血清的抗体效价在第4周达到峰值(1∶2 048)。攻毒实验结果表明Tol B对石斑鱼的免疫保护率为76%。结果表明,溶藻弧菌转运蛋白Tol B具有较好的免疫原性和免疫保护性,可作为弧菌亚单位疫苗的候选抗原。

关键词：溶藻弧菌 tol B基因免疫原性免疫保护

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斜带石斑鱼IL-10基因的克隆及其原核表达

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生物技术通报 2015年第9期31卷 131-137页

作者：肖周婷黄郁葱简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

白介素10(Interleukin-10,IL-10)是一个重要的多效细胞因子,主要作用是介导炎症反应和调控一些免疫细胞的分化和增殖。利用同源克隆和RACE-PCR技术获得全长为1 104 bp的斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)IL-10基因。该基因ORF为564 bp,... 详细信息

白介素10(Interleukin-10,IL-10)是一个重要的多效细胞因子,主要作用是介导炎症反应和调控一些免疫细胞的分化和增殖。利用同源克隆和RACE-PCR技术获得全长为1 104 bp的斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)IL-10基因。该基因ORF为564 bp,编码187个氨基酸,预测蛋白分子量为21.7 k D,等电点为5.74。氨基酸同源性比对及进化分析结果显示,斜带石斑鱼IL-10氨基酸序列和吉富罗非鱼(***)同源性最高,达72.25%。利用双酶切及质粒重组技术构建IL-10原核表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导原核表达。SDS-PAGE分析显示,融合蛋白分子量为37.5 k D,与预期相符;在IPTG为0.02mmol/L,37℃诱导3 h,蛋白包涵体的表达量最大。

关键词：斜带石斑鱼(Epinephelus coioides) Interleukin-10 基因克隆重组表达

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哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因克隆及原核表达

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生物技术通报 2015年第6期31卷 183-188页

作者：朱帆丁燏鲁义善简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

经克隆哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶(GR)基因,并构建其原核表达载体,以获得相应的表达蛋白。将GR和p ET-32a(+)通过Bam H I和Xho I双酶切后,体外用T4连接酶连接,构建重组质粒p ET-GR;然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,利用异丙基-β-D-硫代半... 详细信息

经克隆哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶(GR)基因,并构建其原核表达载体,以获得相应的表达蛋白。将GR和p ET-32a(+)通过Bam H I和Xho I双酶切后,体外用T4连接酶连接,构建重组质粒p ET-GR;然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,应用SDS-PAGE分析表达情况和表达条件。SDS-PAGE电泳获得分子量约为68.9 k D融合蛋白条带。在*** BL21(DE3)中重组质粒p ET-GR的表达条件为28℃,0.7 mmol/L的IPTG浓度诱导4 h表达量最高,且主要以包涵体形式表达。哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因在大肠杆菌中获得了高效表达。

关键词：哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因克隆原核表达

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红笛鲷MAPKK5基因的克隆及生物信息学分析

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水产科学 2015年第5期34卷 288-293页

作者：蔡佳黄郁葱吴灶和鲁义善简纪常冯东岳焦茂兴广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 农业部全国水产技术推广总站北京100125 宜春学院江西宜春336000

利用本实验室构建红笛鲷头肾cDNA文库中的MAPKK5基因EST序列,通过RACE PCR技术克隆红笛鲷MAPKK5基因cDNA全长(Ls-MAPKK5,登录号为KM657202)。序列分析结果显示,Ls-MAPKK5cDNA全长2632bp,其中开放阅读框1317bp,可编码438个氨基酸,预测其... 详细信息

利用本实验室构建红笛鲷头肾cDNA文库中的MAPKK5基因EST序列,通过RACE PCR技术克隆红笛鲷MAPKK5基因cDNA全长(Ls-MAPKK5,登录号为KM657202)。序列分析结果显示,Ls-MAPKK5cDNA全长2632bp,其中开放阅读框1317bp,可编码438个氨基酸,预测其编码蛋白的分子量为49.29ku,理论等电点为6.12。SignalP 4.0、TMHMM Server 2.0和SoftBerry-Psite预测结果显示,Ls-MAPKK5没有信号肽和跨膜结构,含有22个磷酸化位点。氨基酸序列分析显示LsMAPKK5具有保守的PB1与S_TKc结构域。利用MEGA5.0软件,根据邻位相连法构建MAPKK5系统进化树,结果显示Ls-MAPKK5与雀鲷、吉富罗非鱼该蛋白有较近的亲缘关系。

关键词：红笛鲷 MAPKK5 基因克隆生物信息学分析

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溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾白斑综合征病毒的抑制作用

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广东海洋大学学报 2015年第6期35卷 40-46页

作者：朱卫卫邱德全甘桢鲁义善简纪常广东海洋大学水产学院//广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室//广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

从患病凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)体内提取白斑综合征病毒(WSSV),PCR证实WSSV毒性,将病毒粗提液稀释10-2、10-3、10-4和10-5倍,攻毒实验表明,最佳攻毒剂量为10-4倍稀释液。对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别注射0.05、0.10、0.15 mg/m L的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)肽聚糖,免疫24 h后感染WSSV,测定其免疫保护率和肝胰腺的免疫学指标,探讨溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾抗WSSV的影响。结果表明:对虾的保护率随着肽聚糖的浓度增大而增大,与对照组相比,0.05、0.10、0.15 mg/m L组的保护率分别为36.67%、46.67%、56.67%;实验组凡纳滨对虾肝胰腺中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合成酶(NOS)活力与对照组相比的差异有统计学意义(P<0.01)。溶藻弧菌肽聚糖可有效增强凡纳滨对虾自身的非特殊性免疫能力,提高抗WSSV的能力。

关键词：肽聚糖抑制作用凡纳滨对虾白斑综合症病毒免疫指标

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溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统VscP基因缺失株的构建

溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统VscP基因缺失株的构建

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中国水产学会鱼病专业委员会2015年学术讨论会

作者：李静庞欢瑛简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

为探索溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统的毒力调控机制，对控制Ⅲ型分泌系统“针状样”毒力装置针长度的蛋白分子vscP 的功能进行初步研究。首先以溶藻弧菌强毒株HY9901 基因组DNA 为模板，采用Overlap PCR 技术构建vscP 基因缺失片段。

关键词：溶藻弧菌 vscP基因自杀质粒同源重组

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