检索结果-内蒙古大学图书馆

水产学报 2012年第10期36卷 1482-1492页

作者：张新中鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东海洋大学广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室仲恺农业工程学院

为研究红笛鲷免疫防御相关基因的作用机理和调控机制,实验应用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)成功克隆了红笛鲷组织相容性复合物Ⅰα(MHCⅠα)抗原基因的全长cDNA序列,MHCⅠα的全长序列为1 369 bp,编码... 详细信息

为研究红笛鲷免疫防御相关基因的作用机理和调控机制,实验应用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)成功克隆了红笛鲷组织相容性复合物Ⅰα(MHCⅠα)抗原基因的全长cDNA序列,MHCⅠα的全长序列为1 369 bp,编码354个氨基酸残基。BLAST分析显示,红笛鲷MHCⅠα与其他已知物种MHCⅠα基因的最高同源性为84%。构建的系统进化树显示,红笛鲷MHCⅠα与石斑鱼等MHCⅠα亲缘关系较近。Real-time PCR分析表明,MHCⅠα在头肾中的最大表达量出现在哈氏弧菌ZJ0706诱导后6～15 h内;构建的重组表达质粒pET32a-MHCⅠα经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了正确表达。将纯化后的重组蛋白与佐剂混合后免疫新西兰纯种大白兔制备多克隆抗体。ELISA检测显示,所获得的兔抗血清效价约为1∶40 000。Western blot检测发现,本实验制备的抗血清能特异性地与重组蛋白发生抗原抗体反应。

关键词：红笛鲷主要组织相容性复合物Ⅰα(MHCⅠα) 原核表达克隆 cDNA末端快速扩增技术(RACE)

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溶藻弧菌诱导凡纳滨对虾消减文库的构建及其表达序列标签分析

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水生生物学报 2010年第1期34卷 157-163页

作者：蔡小辉鲁义善吴灶和简纪常王蓓蔡双虎广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025

利用抑制消减杂交技术构建了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)诱导的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)血淋巴细胞cDNA文库。用DNAMAN5.2.2软件对560条高质量的ESTs进行聚类,共获得239个Unigenes。与GenBank进行BLASTx和BLASTn同源比较,其中66.9%为已知功能基因,33.1%为未知功能基因,GO分类将其分为7类,包括能量和基础代谢类相关的基因为第一大类占36%,免疫相关基因占15%,其他基因占8%,信号转导类占3%,抗氧化酶和凋亡相关蛋白均为2%,核蛋白类占1%。实验结果表明凡纳滨对虾在溶藻弧菌诱导下可产生一系列特异基因的表达,通过对文库的分析显示,基于PCR方法建立的SSH文库为取得大量免疫相关基因的ESTs序列提供了可能。

关键词：凡纳滨对虾溶藻弧菌抑制消减杂交(SSH) 表达序列标签(EST)

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用免疫蛋白质组学方法筛选哈氏弧菌免疫反应蛋白

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水产学报 2010年第4期34卷 635-642页

作者：李岩庞欢瑛鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东海洋大学水产学院广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东海洋大学水产学院中国科学院南海海洋研究所中国科学院研究生院

用免疫蛋白质组学的研究方法鉴定了哈氏弧菌的免疫反应蛋白。将哈氏弧菌接种于TSB培养基28℃培养18h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,一向电泳采用7cmpH4～7的胶条进行等电聚焦,二向用12.5%的SDS-PAGE胶分离蛋白质,考马斯亮蓝染... 详细信息

用免疫蛋白质组学的研究方法鉴定了哈氏弧菌的免疫反应蛋白。将哈氏弧菌接种于TSB培养基28℃培养18h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,一向电泳采用7cmpH4～7的胶条进行等电聚焦,二向用12.5%的SDS-PAGE胶分离蛋白质,考马斯亮蓝染色,获得双向电泳图谱,再结合免疫转印技术检测免疫反应的蛋白质,利用ImageMaster 2D Platinum进行配对分析得到15个非特异性的免疫反应性蛋白点,30个特异性的免疫反应性蛋白点。经过鉴定得到13种非特异性的免疫反应性蛋白质,这其中有2对蛋白在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白;同时得到28种特异性的免疫反应性蛋白质,有一个蛋白点没有在数据库中查找到相对应的蛋白质,还有1对蛋白在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白。将特异性免疫反应蛋白鉴定结果与非特异性比较发现有1对蛋白鉴定为同一种蛋白;另外,No.17和No.19是F0F1 ATP synthase的两个亚基。特异性免疫反应蛋白鉴定结果中有6个蛋白质是已知的其他细菌的具有免疫反应的蛋白,分别为OmpN,OmpW,OmpU,alanine dehydrogenase,Elongation factor Ts(EF-Ts),cysteine synthase成功建立了哈氏弧菌的免疫蛋白质组学研究方法,筛选出28种具有特异性免疫反应的蛋白质,为哈氏弧菌的免疫蛋白研究提供理论依据和操作框架。

关键词：哈氏弧菌免疫蛋白质组学全菌可溶性蛋白双向电泳

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溶藻弧菌全菌可溶性蛋白二维图谱的建立及部分蛋白分子的鉴定

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中国水产科学 2010年第3期17卷 404-413页

作者：庞欢瑛李岩鲁义善简纪常吴灶和中国科学院南海海洋研究所广东广州510301 中国科学院研究生院北京100049 广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

本研究采用蛋白质组学技术,建立了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03培养至稳定期的蛋白质组双向电泳图谱,并对部分蛋白分子进行了肽质量指纹图谱分析鉴定。首先将溶藻弧菌接种于TSB培养基28℃培养24 h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌... 详细信息

本研究采用蛋白质组学技术,建立了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03培养至稳定期的蛋白质组双向电泳图谱,并对部分蛋白分子进行了肽质量指纹图谱分析鉴定。首先将溶藻弧菌接种于TSB培养基28℃培养24 h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,荧光染料标记,24 cm pH4 ～ 7的胶条进行等电聚焦,再用12.5%的胶进行SDS-PAGE。2-D胶经过分析,得到902±8个蛋白斑点,重复胶的匹配点数为866±28,匹配率为96%。从双向电泳图谱中选取68个高丰度蛋白质点进行肽质量指纹图谱鉴定,其中60个在NMPDR数据库中得到鉴定,另外8个在NCBI数据库中得到鉴定。鉴定的蛋白中发现Serine protein kinase、purine nucleoside phosphorylase 和Alkyl hydroperoxide reductase subunit C-like protein存在修饰现象,它们在胶上均有2种表现形式。对68个蛋白进行了细胞功能的分类,发现能量代谢蛋白最多,占43%;其次是转运和结合蛋白,占9%;第三是外膜蛋白,占8%。经CMR操纵子预测软件分析预测到2个操纵子,它们均参与了能量代谢过程。研究结果为溶藻弧菌在不同生长条件下的比较蛋白质组学以及该菌强毒株和无毒株的比较研究提供了基础资料。

关键词：蛋白质组学溶藻弧菌全菌可溶性蛋白肽质量指纹图谱双向电泳

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地高辛标记的DNA探针制备及其应用于溶藻弧菌的检测

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华中农业大学学报 2009年第4期28卷 459-462页

作者：周凤丽简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院/广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025

从基因库中获取溶藻弧菌的胶原蛋白酶基因序列和外膜蛋白基因序列,根据基因的保守性用DNAStar分别设计2对引物,分别对溶藻弧菌基因组进行PCR扩增,用地高辛标记扩增的特异DNA片段以制备探针。分别用胶原蛋白酶DNA探针和外膜蛋白DNA探针... 详细信息

从基因库中获取溶藻弧菌的胶原蛋白酶基因序列和外膜蛋白基因序列,根据基因的保守性用DNAStar分别设计2对引物,分别对溶藻弧菌基因组进行PCR扩增,用地高辛标记扩增的特异DNA片段以制备探针。分别用胶原蛋白酶DNA探针和外膜蛋白DNA探针对实验室保种的溶藻弧菌以及鱼排分离的溶藻弧菌进行斑点杂交检测,检测结果表明,胶原蛋白酶基因探针与保种的溶藻弧菌以及鱼排分离的溶藻弧菌DNA产生较强的阳性反应,而与霍乱弧菌、哈氏弧菌和副溶血弧菌DNA等均无反应,表明该胶原蛋白酶DNA探针的特异性较强;而外膜蛋白基因探针与保种的溶藻弧菌以及鱼排分离的溶藻弧菌DNA产生较强的阳性反应,但与哈氏弧菌和副溶血弧菌DNA也出现了较强的阳性反应,与霍乱弧菌DNA则无反应,表明该外膜蛋白DNA探针的特异性较低。说明所构建的溶藻弧菌胶原蛋白酶DNA探针斑点杂交检测方法具有特异性强,简便易行,可应用于溶藻弧菌的快速检测。

关键词：溶藻弧菌胶原蛋白酶DNA探针外膜蛋白DNA探针斑点杂交

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应用免疫蛋白质组学筛选哈氏弧菌免疫反应蛋白质

应用免疫蛋白质组学筛选哈氏弧菌免疫反应蛋白质

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中国水产学会鱼病专业委员会第七次会员代表大会暨学术讨论会

作者：李岩庞欢瑛鲁义善吴灶和简纪常广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025 广东海洋大学水产学院湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025 广东海洋大学水产学院湛江524025 中科院南海海洋研究所广

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副溶血弧菌和河流弧菌全菌蛋白的双向电泳图谱比较

副溶血弧菌和河流弧菌全菌蛋白的双向电泳图谱比较

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第十届全国水产青年学术年会

作者：李岩庞欢瑛鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 中科院南海海洋研究

为获得副溶血弧菌(Vibrio Parahemolyticus)和河流弧菌(Vibrio furnissii)的全菌蛋白双向电泳图谱，并对电泳图谱进行分析、比较，实验利用裂解液分别裂解副溶血弧菌和河流弧菌，提取全菌蛋白;一向电泳分别采用7cm pH4 ～7的胶条进行等... 详细信息

为获得副溶血弧菌(Vibrio Parahemolyticus)和河流弧菌(Vibrio furnissii)的全菌蛋白双向电泳图谱，并对电泳图谱进行分析、比较，实验利用裂解液分别裂解副溶血弧菌和河流弧菌，提取全菌蛋白;一向电泳分别采用7cm pH4 ～7的胶条进行等电聚焦，二向用12.5％的SDS-PAGE胶分离蛋白质，考马斯亮蓝染色，获得双向电泳图谱，并利用ImageMaster 2D Platinum进行分析，副溶血弧菌的双向电泳图谱得到314±6个蛋白斑点，河流弧菌的双向电泳图谱得到297±10个蛋白斑点，蛋白主要集中在pI值4.24 ～6.50、分子量为95～34ku的区域间.结论：得到副溶血弧菌和河流弧菌的全菌蛋白双向电泳图谱，对这两种弧菌的图谱比较得出有108个蛋白点可以相匹配，副溶血弧菌有个206±6差异蛋白，河流弧菌有个189±10差异蛋白.这为进一步研究副溶血弧菌和河流弧菌全菌蛋白的免疫蛋白质组学以及弧菌的鉴定奠定了基础，也为以后亚单位疫苗的制备提供了参考.

关键词：副溶血弧菌河流弧菌双向电泳蛋白质组学

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温度对溶藻弧菌HY9901株致病性相关蛋白的调控

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水生生物学报 2008年第6期32卷 787-793页

作者：庞欢瑛吴灶和简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025

将溶藻弧菌HY9901株置于15℃、20℃、28℃、37℃四个温度下培养,18h时分别测定细菌含量,胞外蛋白酶(Extracelluar protease,ECPase)表达量以及胞外产物(Extracellular product,ECP)对动物的致死性。结果表明,随着温度升高,菌液浓度、ECP... 详细信息

将溶藻弧菌HY9901株置于15℃、20℃、28℃、37℃四个温度下培养,18h时分别测定细菌含量,胞外蛋白酶(Extracelluar protease,ECPase)表达量以及胞外产物(Extracellular product,ECP)对动物的致死性。结果表明,随着温度升高,菌液浓度、ECPase的活性以及ECP对小鼠和红笛鲷的致死率先升高后下降。28℃培养的细菌浓度、ECPase的活性以及ECP对小鼠和红笛鲷的致死率均为最大。用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析不同温度培养下细菌的ECP和外膜蛋白(Outer membrane protein,OMP),结果显示,不同温度培养的溶藻弧菌ECP和OMP电泳图谱不同。溶藻弧菌主要ECP的分子量为70kD和62kD。ECP 70kD在20℃时的表达量最大,而28℃时ECP62 kD的蛋白浓度最高。45kD OMP随着温度升高,其合成量增大,28℃时达最大值;而40kD和34kD OMP则随着温度的升高而减弱。通过研究电泳纯化的ECP 62kD和ECP 70kD的酶活性和致死试验,证明ECP 62kD具有很强的酶活性和毒性,而ECP 70kD仅具有弱的酶活性和毒性。

关键词：溶藻弧菌胞外产物外膜蛋白胞外蛋白酶温度

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一种复方中草药饲料添加剂在红笛鲷网箱养殖中的应用

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广东海洋大学学报 2008年第4期28卷 59-64页

作者：陆志款简纪常吴灶和鲁义善汤菊芬广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

将黄芪、当归、甘草和山楂等粉碎后按一定比例配伍制成复方中草药饲料添加剂后,按质量分数0.5%、1.0%、1.5%和2.0%添加到基础饲料中,连续投喂红笛鲷(体重234.95±19.26 g,体长24.76±1.42 cm)56 d,研究复合中草药制剂对红笛鲷... 详细信息

将黄芪、当归、甘草和山楂等粉碎后按一定比例配伍制成复方中草药饲料添加剂后,按质量分数0.5%、1.0%、1.5%和2.0%添加到基础饲料中,连续投喂红笛鲷(体重234.95±19.26 g,体长24.76±1.42 cm)56 d,研究复合中草药制剂对红笛鲷生长、成活、免疫和抗病力的影响。结果表明,基础饲料中添加本复方中草药饲料添加剂能够显著促进红笛鲷的生长,增强其血清中的抗菌活力和溶菌酶活力,提高红笛鲷成活率及其对溶藻弧菌的免疫保护率,其中以添加1.5%(质量分数)和连续饲喂28 d效果为最佳(P<0.01)。

关键词：红笛鲷中草药饲料添加剂抗菌活力溶菌酶活力成活率免疫保护率

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苯酚和十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼的急性毒性及安全评价

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广东海洋大学学报 2008年第3期28卷 100-102页

作者：余坦健简纪常黄郁葱简贺君广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室

用苯酚和十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼进行急性毒性实验,以评价其在水环境中对奥尼罗非鱼的影响。研究表明:苯酚对奥尼罗非鱼的24、48、96 h的LC50分别为40.33、34.23、28.07 mg/L,十二烷基苯磺酸钠分别为10.06、9.14、8.48 mg/L;苯酚... 详细信息

用苯酚和十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼进行急性毒性实验,以评价其在水环境中对奥尼罗非鱼的影响。研究表明:苯酚对奥尼罗非鱼的24、48、96 h的LC50分别为40.33、34.23、28.07 mg/L,十二烷基苯磺酸钠分别为10.06、9.14、8.48 mg/L;苯酚对奥尼罗非鱼SC及最大容许浓度MPC分别为2.807、0.281 mg/L,十二烷基苯磺酸钠对奥尼罗非鱼SC为0.848 mg/L,最大容许浓度MPC为0.085 mg/L。

关键词：奥尼罗非鱼急性毒性实验苯酚十二烷基苯磺酸钠

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