检索结果-内蒙古大学图书馆

南方水产科学 2018年第1期14卷 35-42页

作者：陈建林苏泽杰鲁义善徐亮张红莲夏立群广东海洋大学深圳研究院广东深圳518108 广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡氏菌病的主要病原。鰤鱼诺卡氏菌水解酶(hydrolase,HYD)可能是鰤鱼诺卡氏菌的毒力因子。研究结果表明鰤鱼诺卡氏菌HYD的肽段不是分泌蛋白。亚细胞定位研究发现HYD-GFP融合蛋白均匀地分布在胖... 详细信息

鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡氏菌病的主要病原。鰤鱼诺卡氏菌水解酶(hydrolase,HYD)可能是鰤鱼诺卡氏菌的毒力因子。研究结果表明鰤鱼诺卡氏菌HYD的肽段不是分泌蛋白。亚细胞定位研究发现HYD-GFP融合蛋白均匀地分布在胖头鲤(FHM)细胞的细胞质中。亚细胞定位和过表达研究都显示HYD蛋白在FHM细胞中表达后,细胞核出现固缩浓染、凋亡小体等细胞凋亡特征,但Caspase-3活性检测表明HYD并未显著增加细胞凋亡水平。研究为进一步了解鰤鱼诺卡氏菌的致病机理奠定了基础。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌水解酶亚细胞定位 Caspase-3活性检测

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尼罗罗非鱼CD247基因克隆及其组织表达分析

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广东海洋大学学报 2018年第6期38卷 6-12页

作者：樊博琳黎源汪志文鲁义善王蓓简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088

【目的】克隆尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)CD247基因(Gen Bank登录号:MF975639;On-CD247),分析On-CD247的生物信息学特征及其在正常和经灭活无乳链球菌注射刺激的尼罗罗非鱼组织中的表达。【方法】设计CD247基因引物并对CD247基... 详细信息

【目的】克隆尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)CD247基因(Gen Bank登录号:MF975639;On-CD247),分析On-CD247的生物信息学特征及其在正常和经灭活无乳链球菌注射刺激的尼罗罗非鱼组织中的表达。【方法】设计CD247基因引物并对CD247基因片段进行扩增,运用荧光定量PCR技术分析尼罗罗非鱼CD247组织分布。【结果与结论】CD247基因编码区为453 bp,编码150个氨基酸,理论分子质量为16.9 ku,等电点为6.33,在跨膜区域有保守的ASP27、Asp35残基,胞内具有三段保守的免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)。On-CD247序列与红笛鲷(Lutjanus sanguineus)相似性最高,为74.0%,与其他鱼类的相似性介于35.8%～73.0%之间。On-CD247在健康尼罗罗非鱼各组织中均有表达,其中在胸腺中表达量最高,其次是皮肤、肌肉、鳃,在头肾中表达量最低。经灭活无乳链球菌刺激后,On-CD247的表达量在胸腺、头肾和肠道中均显著上调,而在脾脏中却显著下调,且有明显的时序性。胸腺、头肾和肠道均在3 h表达量最高,脾脏在12 h表达量最低,头肾中的表达量也在12 h回落,表明On-CD247表达可被无乳链球菌所诱导。

关键词：尼罗罗非鱼 CD247 基因克隆组织表达无乳链球菌

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尼罗罗非鱼补体3基因片段的原核表达及条件优化

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广东海洋大学学报 2018年第2期38卷 80-84页

作者：牛金中黄瑜汤菊芬鲁义善汪志文郑琦蔡佳简纪常广东海洋大学水产学院//广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

【目的】补体3(Complement3,C3)在罗非鱼的抗病感染中有重要作用,研究C3基因判断原核表达及表达条件。【方法】根据NCBI中已公布罗非鱼补体C3的基因序列,选取C3基因片段,设计一对带有酶切位点的特异性引物,经连接、转化等后,使用限制性... 详细信息

【目的】补体3(Complement3,C3)在罗非鱼的抗病感染中有重要作用,研究C3基因判断原核表达及表达条件。【方法】根据NCBI中已公布罗非鱼补体C3的基因序列,选取C3基因片段,设计一对带有酶切位点的特异性引物,经连接、转化等后,使用限制性核酸内切酶EcoRI和XhoI对克隆成功的C3基因片段以及原核表达载体pGEX-4T进行双酶切,构建重组质粒pGEX-4T-C3,导入大肠杆菌进行原核表达,并优化表达条件,并对纯化目的蛋白进行Western Blot鉴定。【结果】C3基因片段的重组质粒pGEX-4T-C3构建成功。罗非鱼C3基因片段编码区长度为1 341 bp。获得的目的蛋白分子质量为75 ku,与预期结果相符。最佳诱导时间、浓度以及温度分别为4 h、0.2 mmol/L以及37℃;目的蛋白主要以包涵体的形似存在。重组蛋白可以与GST-Tag单克隆抗体特异性结合,说明成功获得罗非鱼C3片段的重组蛋白。

关键词：尼罗罗非鱼补体3 原核表达条件优化

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尼罗罗非鱼NCC活性调控蛋白的筛选鉴定与功能分析

尼罗罗非鱼NCC活性调控蛋白的筛选鉴定与功能分析

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2018年中国水产学会学术年会

作者：黄瑜汤菊芬蔡佳王蓓鲁义善简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室

非特异性细胞毒性细胞Ⅰ型受体(NCCRP-1)是非特异性细胞毒性细胞(NCC)发挥功能的重要受体蛋白。本研究以罗非鱼为研究对象,构建On-NCCRP-1酵母双杂交诱饵质粒,并构建罗非鱼头肾与肝脏酵母双杂交c DNA文库。利用诱饵载体分别从肝脏和头肾... 详细信息

非特异性细胞毒性细胞Ⅰ型受体(NCCRP-1)是非特异性细胞毒性细胞(NCC)发挥功能的重要受体蛋白。本研究以罗非鱼为研究对象,构建On-NCCRP-1酵母双杂交诱饵质粒,并构建罗非鱼头肾与肝脏酵母双杂交c DNA文库。利用诱饵载体分别从肝脏和头肾c DNA文库中筛选潜在互作蛋白。最终获取C-typelectin(On-C-typelectin)蛋白与On-NCCRP-1有潜在相互作用,并且克隆获得On-C-typelectin基因的ORF序列。点对点验证发现On-NCCRP-1与On-C-typelectin可相互作用。利用On-C-typelectin重组蛋白对体外分离的NCC进行刺激后,发现3 h和6 h均可诱导部分NCC毒性效应分子高表达,该结果表明NCC被激活。同时用诱导3 h的NCC对FHM细胞进行毒性实验,发现On-C-type lectin重组蛋白可有效诱导FHM细胞凋亡信号开启,而使用抗On-NCCRP-1抗体封闭On-NCCRP-1,可抑制NCC对FHM的杀伤活性。结果表明,On-C-type lectin可通过受体On-NCCRP-1介导NCC的杀伤活性。该研究为揭示鱼类NCC活性调控的作用网络及分子机理奠定了基础。

关键词：尼罗罗非鱼非特异性细胞毒性细胞非特异性细胞毒性细胞Ⅰ型受体 C-type lectin 活性调控

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一种鰑鱼诺卡氏菌酪氨酸蛋白磷酸酶基因的克隆及功能初步研究

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水产学报 2017年第7期41卷 1017-1027页

作者：夏立群童邦卓徐亮苏泽杰陈锐敏廖保山鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东海洋大学深圳研究院

這鱼诺卡氏菌是鱼类诺卡氏菌病的主要病原,可导致鱼类慢性系统性肉芽肿疾病。這鱼诺卡氏菌全基因组序列分析发现了一个酪氨酸蛋白磷酸酶(protein tyrosine phosphtase,PTP)基因,生物信息学分析显示该基因很可能编码一个靶向定位于宿主... 详细信息

這鱼诺卡氏菌是鱼类诺卡氏菌病的主要病原,可导致鱼类慢性系统性肉芽肿疾病。這鱼诺卡氏菌全基因组序列分析发现了一个酪氨酸蛋白磷酸酶(protein tyrosine phosphtase,PTP)基因,生物信息学分析显示该基因很可能编码一个靶向定位于宿主细胞线粒体的分泌蛋白。本实验对這鱼诺卡氏菌PTP进行了基因克隆、分泌蛋白鉴定、亚细胞定位、过表达和线粒体膜电位检测,结果显示,在這鱼诺卡氏菌胞外产物中质谱鉴定到了PTP肽段,证实其为分泌蛋白。亚细胞定位研究观察到PTP-GFP融合蛋白均匀地分布在FHM细胞中,与线粒体分布不重合,说明這鱼诺卡氏菌PTP蛋白并未靶向定位于线粒体。亚细胞定位和过表达研究都显示PTP蛋白在FHM细胞中表达后,细胞核出现固缩浓染、凋亡小体等明显的细胞凋亡特征。通过线粒体膜电位检测表明,在pcDNA-PTP转染后48 h,线粒体跨膜电位被明显破坏,说明這鱼诺卡氏菌PTP很可能是一种可诱导细胞凋亡的细菌蛋白。通过对這鱼诺卡氏菌PTP开展基因克隆和功能初步研究,为进一步揭示该基因的功能和深入了解這鱼诺卡氏菌的分子致病机理奠定了基础。

关键词：這鱼诺卡氏菌酪氨酸蛋白磷酸酶分泌蛋白亚细胞定位细胞凋亡

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溶藻弧菌sodB基因敲除突变株的构建及其表型特征

溶藻弧菌sodB基因敲除突变株的构建及其表型特征

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2018年中国水产学会学术年会

作者：陈妍妍蔡双虎简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一种条件性嗜盐革兰氏阴性致病菌,它不仅限制了水产养殖业的健康发展,还影响了人类的健康。超氧化物歧化酶(SOD)在机体抗氧化防御中起着重要的作用。本实验利用OverlapPCR和同源重组技术,构建sodB基因... 详细信息

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一种条件性嗜盐革兰氏阴性致病菌,它不仅限制了水产养殖业的健康发展,还影响了人类的健康。超氧化物歧化酶(SOD)在机体抗氧化防御中起着重要的作用。本实验利用OverlapPCR和同源重组技术,构建sodB基因基因框内敲除突变株,以研究sodB在溶藻弧菌致病性上发挥的生理作用。结果表明,与野生型溶藻弧菌HY9901相比,sodB的缺失对溶藻弧菌的生长曲线的影响不明显,sodB缺失株在生物膜形成和ECPase活性方面明显增强,而其泳动能力、CIK细胞粘附能力、SOD活性显著下降,同时石斑鱼致病性试验结果显示,突变株毒力下降了10.13倍。此外,sodB缺失株对抗生素的敏感程度有显著的改变。这些结果表明,sodB对于溶藻弧菌正常的生理功能、对氢氧化钠的抗氧化能力及毒力都很重要。

关键词：溶藻弧菌基因敲除 sodB 表型

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盐度对杂交石斑鱼受精卵孵化和卵黄囊仔鱼形态及活力的影响

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中国水产科学 2017年第3期24卷 507-515页

作者：黄建盛陈刚张健东王忠良汤保贵周晖广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省南海水产经济动物增养殖重点实验室广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025

为了研究盐度对褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)♀×清水石斑鱼(Epinephelus polyphekadion)♂杂交后代(简称杂交石斑鱼)受精卵孵化、卵黄囊仔鱼形态及活力的影响,将杂交石斑鱼受精卵置于不同盐度水体中,观察盐度胁迫下卵径... 详细信息

为了研究盐度对褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)♀×清水石斑鱼(Epinephelus polyphekadion)♂杂交后代(简称杂交石斑鱼)受精卵孵化、卵黄囊仔鱼形态及活力的影响,将杂交石斑鱼受精卵置于不同盐度水体中,观察盐度胁迫下卵径、油球径、孵化率及畸形率,以及孵化后卵黄囊仔鱼形态变化和活力状况。结果表明,在本研究条件下,受精卵卵径随盐度降低而增大,油球径不随盐度变化而变化。在盐度18~36范围内均能孵化仔鱼,但因盐度不同孵化率和初孵仔鱼畸形率有显著差异(P<0.05);随盐度升高,孵化率呈先升后降的变化,初孵仔鱼畸形率则相反。盐度24~36组孵化后3 d仔鱼卵黄囊几乎完全消耗,组间无显著差异(P>0.05)。在盐度24~36范围内,随着盐度的增加,仔鱼的不投饵存活系数(SAI值)呈先升后降的变化曲线;盐度30~33范围内,初孵仔鱼SAI值大于5;5日龄仔鱼全部死亡,半数死亡时间出现在孵化后3.5 d。综上分析表明,该杂交石斑鱼受精卵孵化及仔鱼培育的适宜盐度范围为24~36,最适盐度范围为30~33。

关键词：褐点石斑鱼清水石斑鱼杂交后代孵化率卵黄囊仔鱼盐度

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尼罗罗非鱼CD80基因的分子克隆与mRNA表达分析

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基因组学与应用生物学 2017年第1期36卷 190-200页

作者：汪志文张海艳黄瑜鲁义善简纪常汤菊芬广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088

CD80是T细胞活化和增殖过程中不可缺少的膜抗原,为T细胞的增殖分化提供必要的共刺激信号,在特异性细胞免疫过程中具有重要作用。本研究从罗非鱼脾脏组织中克隆获得CD80基因的编码区序列(Gen Bank登录号:KU884324;命名为On-CD80),该基因... 详细信息

CD80是T细胞活化和增殖过程中不可缺少的膜抗原,为T细胞的增殖分化提供必要的共刺激信号,在特异性细胞免疫过程中具有重要作用。本研究从罗非鱼脾脏组织中克隆获得CD80基因的编码区序列(Gen Bank登录号:KU884324;命名为On-CD80),该基因全长810 bp,可编码269个氨基酸,理论分子量为29.83 k D,等电点为5.97。氨基酸序列分析显示On-CD80具有2个保守的免疫球蛋白样结构域(Ig-like domain),5'端有一个典型的信号肽序列,3'端具有1个跨膜结构域。系统进化树中罗非鱼与伯氏朴丽鱼CD80蛋白聚为一支,显示了较高的同源性。荧光定量PCR分析显示,On-CD80在健康尼罗罗非鱼组织中均有表达,且在脾脏组织中表达量最高。经灭活的无乳链球菌免疫后,On-CD80在肾脏、脾脏、胸腺、肠道、鳃、脑组织中的表达量均显著上调,且表现出较为明显的时间依赖性表达模式,肠道、鳃和脑分别在8 h、24 h出现表达高峰,并于48 h、96 h再次出现表达高峰。脾脏和肾脏、胸腺的On-CD80表达则分别是在48 h、72 h达到表达高峰。综上所述,On-CD80表达能被无乳链球菌所诱导,提示该分子可能参与罗非鱼的抗菌免疫应答,该结果为进一步研究On-CD80在罗非鱼感染无乳链球菌过程中的作用奠定了一定的基础。

关键词：尼罗罗非鱼 CD80 无乳链球菌 mRNA表达分析

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H2S对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)抗氧化系统的调节作用

H2S对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)抗氧化系统的调节作用

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第十届全国微生物资源学术暨国家微生物资源共享服务平台运行服务研讨会

作者：陈树河常云胜丁燏简纪常广东海洋大学水产学院、广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一种海洋条件致病菌，可引起人类和水生动物患病。抗氧化系统参与溶藻弧菌防御各种胁迫，而信号分子H2S可能在溶藻弧菌抗氧化系统的调节中发挥作用。

关键词：溶藻弧菌 H2S 抗氧化酶 CBS

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斜带石斑鱼肠道乳酸菌的分离、鉴定及特性研究

斜带石斑鱼肠道乳酸菌的分离、鉴定及特性研究

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广东水产学会首届青年科技论坛

作者：伍元植广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东湛江524088

从健康斜带石斑鱼肠道中分离出3株形态特征不同的菌株,经革兰氏染色、氧化酶及触酶反应筛选出3株革兰氏阳性球菌,通过生化鉴定和16S rRNA测序结果发现他们分别为粪肠球菌、乳酸片球菌和乳酸乳球菌,命名为WYZ-1、WYZ-2和WYZ-3.选取嗜水... 详细信息

从健康斜带石斑鱼肠道中分离出3株形态特征不同的菌株,经革兰氏染色、氧化酶及触酶反应筛选出3株革兰氏阳性球菌,通过生化鉴定和16S rRNA测序结果发现他们分别为粪肠球菌、乳酸片球菌和乳酸乳球菌,命名为WYZ-1、WYZ-2和WYZ-3.选取嗜水气单胞菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈氏弧菌以及大肠杆菌以琼脂扩散法测定WYZ-1、WYZ-2和WYZ-3的抑菌活性,结果表明WYZ-3对大肠杆菌无抑制作用,对溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈氏弧菌和嗜水气单胞菌都有较显著的抑制作用,其中对溶藻弧菌和副溶血弧菌抑菌效果最好,抑菌直径为21.5-23.5mm;粪肠球菌和乳酸片球菌均对5种致病菌有抑制作用,抑菌直径为9.5-22.5mm.利用药敏纸片琼脂扩散法检测WYZ-1、WYZ-2和WYZ-3对34种常用抗生素的药敏性,结果表明3株乳酸菌均对氨基糖类、喹诺酮类多数、复方新诺明、多念菌素B和氨曲南表现为耐药,对青霉素类多数、四环素类、大环内脂类及克林霉素和氯霉素敏感;WYZ-3对头孢类抗生素表现为敏感,WYZ-1和WYZ-2则对大部分头孢类抗生素表现为耐药.

关键词：乳酸菌斜带石斑鱼生物特性抑菌谱药敏性

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