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广东海洋大学学报 2016年第3期36卷 15-19页

作者：王松艳蔡双虎鲁义善简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东湛江524088

无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)是引起我国南方罗非鱼链球菌病的主要病原之一,SodA是无乳链球菌重要的毒力因子之一。根据链球菌sod A基因保守区设计引物,采用PCR扩增sod A基因部分序列,反向PCR和巢式PCR扩增其侧翼序列,成功获... 详细信息

无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)是引起我国南方罗非鱼链球菌病的主要病原之一,SodA是无乳链球菌重要的毒力因子之一。根据链球菌sod A基因保守区设计引物,采用PCR扩增sod A基因部分序列,反向PCR和巢式PCR扩增其侧翼序列,成功获得无乳链球菌sod A基因。无乳链球菌sod A基因序列全长为699 bp,含开放阅读框609 bp,可编码202个氨基酸,演绎的SodA蛋白主要由α螺旋和不规则卷曲构成。BLAST分析表明,该蛋白氨基酸序列与犬链球菌(***)及副乳房链球菌(***)相应蛋白的氨基酸序列相似性分别高达80%和79%。将sodA基因克隆至原核表达载体pET28a上成功构建了重组质粒p ET28a-sod A,导入Escherichia coli BL21(DE3),诱导表达的重组蛋白质分子质量约为24 ku,主要以包涵体形式存在于表达菌中。

关键词：无乳链球菌 sodA基因克隆原核表达

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五倍子和石榴皮对溶藻弧菌及其生物膜的体外抑制作用

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安徽农业科学 2016年第11期44卷 1-3,11页

作者：冯锐基庞欢瑛黄郁葱简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

[目的]明确五倍子(Rhus chinenis)、石榴皮(Folium sennae)对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)及其生物膜的体外抑制作用。[方法]采用琼脂扩散法,分别测定五倍子、石榴皮对溶藻弧菌的体外抑菌作用;选用倍比稀释法确定五倍子、石榴皮对溶... 详细信息

[目的]明确五倍子(Rhus chinenis)、石榴皮(Folium sennae)对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)及其生物膜的体外抑制作用。[方法]采用琼脂扩散法,分别测定五倍子、石榴皮对溶藻弧菌的体外抑菌作用;选用倍比稀释法确定五倍子、石榴皮对溶藻弧菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);采用改良微孔板法评价2种中草药液对溶藻弧菌生物膜形成的影响。[结果]2种中草药都有不同程度的抑制溶藻弧菌的作用,五倍子对溶藻弧菌的抑菌圈直径为(16.37±0.14)mm,MIC和MBC均为6.25 mg/m L;石榴皮对溶藻弧菌的抑菌圈直径为(12.37±0.06)mm,MIC和MBC分别为12.50、25.00 mg/m L。当药物浓度在1.56 mg/m L及以上时,五倍子对溶藻弧菌生物膜的形成有极显著抑制作用;药物浓度在6.25 mg/m L及以上时,石榴皮对溶藻弧菌生物膜的形成有极显著抑制作用。[结论]五倍子和石榴皮对溶藻弧菌及其生物膜均有抑制作用。

关键词：五倍子石榴皮溶藻弧菌体外抑制作用生物膜

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溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统vscP基因的克隆与生物信息学分析

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广东海洋大学学报 2016年第4期36卷 30-36页

作者：李静庞欢瑛简纪常鲁义善汤菊芬吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

根据NCBI上登录的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列,设计一对克隆溶藻弧菌HY9901株Ⅲ型分泌系统"分子尺"蛋白VscP全长基因的特异性引物,PCR扩增获得基因的全长片段。结果显示,vsc P(Gen Bank登录号FR780678)开放... 详细信息

根据NCBI上登录的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列,设计一对克隆溶藻弧菌HY9901株Ⅲ型分泌系统"分子尺"蛋白VscP全长基因的特异性引物,PCR扩增获得基因的全长片段。结果显示,vsc P(Gen Bank登录号FR780678)开放阅读框ORF为1 206 bp,共编码401个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测其分子质量约为44.4 ku,等电点为5.72。Signal 4.1 Server和TMHMM Server 2.0预测结果表明,VscP无信号肽与跨膜结构域。Soft Berry-Psite预测结果显示,VscP含有3个N端糖基化位点,2个cAMP及c GMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,5个蛋白激酶C磷酸化位点,9个酪蛋白激酶II磷酸化位点,2个N端豆蔻酰基化位点,1个酰胺化位点和3个微体C末端靶信号位点。运用MEGA6.0构建的VscP系统进化树显示,溶藻弧菌VscP与副溶血弧菌(***)聚为一簇。应用SWISS-MODEL软件构建VscP亚基三维结构模型发现,其与鞭毛Fil K蛋白有相似构型。

关键词：溶藻弧菌 III 型分泌系统基因克隆生物信息学分析 vscP

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复方中草药应用于养殖罗非鱼的安全性评价

复方中草药应用于养殖罗非鱼的安全性评价

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2016年中国水产学会学术年会

作者：林紫薇汤菊芬吴灶和鲁义善简纪常广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室

本文章对的中草药进行了亚慢性毒性试验,为其在养殖应用上提供理论依据。将黑豆、当归、黄芪、板蓝根、金银花等中草药按照一定比例配制成复方中草药制剂,再按0%、1%、3%、5%的比例添加于罗非鱼商品饲料中,连续投喂30天,对中草药应用于... 详细信息

本文章对的中草药进行了亚慢性毒性试验,为其在养殖应用上提供理论依据。将黑豆、当归、黄芪、板蓝根、金银花等中草药按照一定比例配制成复方中草药制剂,再按0%、1%、3%、5%的比例添加于罗非鱼商品饲料中,连续投喂30天,对中草药应用于养殖罗非鱼的安全性进行评价。结果表明:(1)罗非鱼的增重率与中草药的添加剂量呈正相关关系;(2)三个添加剂量下,中草药对罗非鱼血清中的谷草转氨酶、谷丙转氨酶、白蛋白、总蛋白、肌酐、尿素氮等指标无显著影响(P>0.05),但5%组罗非鱼血清中甘油三酯的含量显著高于对照组(P<0.05);(3)各浓度组罗非鱼肝、脾、头肾、体肾等组织切片与对照组相比无明显组织学变化。结论:在养殖生产中,在商品饲料中添加1%-3%的本复方中草药制剂是安全可行的。

关键词：罗非鱼中草药安全性评价

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葡聚糖刺激下的斜带石斑鱼转录组分析

葡聚糖刺激下的斜带石斑鱼转录组分析

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2016年中国水产学会学术年会

作者：张海艳王蓓鲁义善汪志文黄瑜简纪常广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室

斜带石斑鱼是一种重要的海水经济养殖鱼类,病害是制约水产养殖业的一个重要的因素。近年来,葡聚糖作为一种新型的天然免疫增强剂在水产养殖中得到广泛的应用。本文,我们使用腹腔注射法免疫斜带石斑鱼,在免疫后的6h和72h分别取头肾,淋巴... 详细信息

斜带石斑鱼是一种重要的海水经济养殖鱼类,病害是制约水产养殖业的一个重要的因素。近年来,葡聚糖作为一种新型的天然免疫增强剂在水产养殖中得到广泛的应用。本文,我们使用腹腔注射法免疫斜带石斑鱼,在免疫后的6h和72h分别取头肾,淋巴细胞,胸腺和脾脏组织进行转录测序。转录组测序结果一共组装了175568条Unigene,平均长度是1507bp。通过Blast比对数据库进行功能注释,一共注释了121629条Unigene。基因差异表达分析获得葡聚糖刺激后的各组织的显著差异表达的免疫相关基因。对差异基因进行GO和KEGG富集分析,免疫相关的显著富集通路主要为toll-like receptor,RIG-1-like receptor和T-cell receptor信号通路等。本研究结果为阐明葡聚糖调节鱼类免疫系统的作用机制提供数据参考。

关键词：斜带石斑鱼葡聚糖转录组 qPCR

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草鱼出血病分子流行病学及GCRV多样性研究

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安徽农业科学 2016年第11期44卷 120-125,153页

作者：黄毅昌雷燕杨玉滔闫秀英简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室/水产经济动物病害控制广东普通高校重点实验室广东湛江524088 广州利洋水产科技股份有限公司广东广州510515

[目的]分析不同基因型GCRV分离株与患草鱼出血病草鱼症状的相关性。[方法]采用RT-PCR检测患病草鱼,应用生物信息学方法分析基因型内和基因型间不同分离株间的差异。[结果]对近3年来草鱼出血病分子流行病学分析发现,患草鱼出血病病鱼多为... 详细信息

[目的]分析不同基因型GCRV分离株与患草鱼出血病草鱼症状的相关性。[方法]采用RT-PCR检测患病草鱼,应用生物信息学方法分析基因型内和基因型间不同分离株间的差异。[结果]对近3年来草鱼出血病分子流行病学分析发现,患草鱼出血病病鱼多为"肠炎型"症状,且检测发现其病原多属于GCRV基因型Ⅲ型。对GCRV的多样性分析表明,不同分离株同源蛋白的同源率高达93%以上,却被给予完全不同的名称,给GCRV多样性研究带来一定的困难;同一基因型不同分离株同源蛋白间的变异位点较少,且功能位点发生变异的更少;不同基因型不同分离株同源蛋白间的保守位点较少,且这些保守位点中只有极少数位点为功能位点;不同基因型分离株同源结构蛋白间存在较大的差异,且同源非结构蛋白间的差异更为显著。[结论]草鱼出血病不同临床症状可能与其病原基因型不同有关。

关键词：草鱼呼肠孤病毒草鱼出血病分子流行病学多样性

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无乳链球菌phoB基因缺失菌的构建及其免疫效果评价

无乳链球菌phoB基因缺失菌的构建及其免疫效果评价

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2016年中国水产学会学术年会

作者：蔡小辉王蓓彭银辉黎源鲁义善黄郁葱简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室广西生物技术重点实验室广西海洋研究所

无乳链球菌可在吞噬细胞和非吞噬细胞内存活从而引起鱼类败血症和脑膜炎。通过构建高度保守及毒力相关基因的活疫苗可有效控制链球菌病本研究克隆了phoB基因,氨基酸序列比对结果显示该基因与其它种链球菌具有较高相似性,包含两个高度保... 详细信息

无乳链球菌可在吞噬细胞和非吞噬细胞内存活从而引起鱼类败血症和脑膜炎。通过构建高度保守及毒力相关基因的活疫苗可有效控制链球菌病本研究克隆了phoB基因,氨基酸序列比对结果显示该基因与其它种链球菌具有较高相似性,包含两个高度保守的域:REC和transeg。利用同源重组技术构建了SA?phoB缺失株,与野生菌相比,其细胞黏附和侵入能力及毒力均降低,并且未引起金鲳临床症状和明显的病理改变,表明phoB基因的缺失株影响了无乳链球菌的毒力和侵染能力。通过腹腔注射方式以SA?phoB缺失株为抗原免疫金鲳,结果显示其免疫保护率达93.1%,由此可见该缺失菌可作为一种高效的候选减毒活疫苗株。

关键词：无乳链球菌 phoB 活疫苗金鲳

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眼斑拟石首鱼烂尾病病原菌的分离鉴定及灭活疫苗的免疫效果

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广东海洋大学学报 2016年第4期36卷 37-44页

作者：姚欢黄郁葱蔡双虎鲁义善蔡小辉简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 广西海洋研究所广西海洋生物技术重点实验室广西北海536000

从患烂尾病眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus)的溃疡处分离到一株优势菌So GZ1401,回归感染试验证实该菌是引起烂尾病的病原菌,对眼斑拟石首鱼的半致死量(LD50)为8.6×103 CFU·g^(-1);结合其形态学和生理生化特征及HSP60测序... 详细信息

从患烂尾病眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus)的溃疡处分离到一株优势菌So GZ1401,回归感染试验证实该菌是引起烂尾病的病原菌,对眼斑拟石首鱼的半致死量(LD50)为8.6×103 CFU·g^(-1);结合其形态学和生理生化特征及HSP60测序分析,鉴定为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi);利用杯碟法研究其胞外产物性质,结果表明:其胞外产物具有淀粉酶、明胶酶、酪蛋白酶、卵磷脂酶、脂酶活性以及溶血活性,但无脲酶活性。药敏试验表明,该菌株对氟哌酸、恩诺沙星、氟苯尼考和复方新诺明等抗菌药有较高的敏感性。制备哈维氏弧菌灭活疫苗,采用注射和浸泡2种途径免疫眼斑拟石首鱼,测定受免疫鱼的血清抗体效价和疫苗对眼斑拟石首鱼的免疫保护率。结果显示,免疫组血清中的抗体效价水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),注射组和浸泡组的抗体效价最高值分别达718.4和128,哈维氏弧菌攻毒后免疫保护率分别为75.0%~86.7%和46.4%~56.7%。哈维氏弧菌灭活疫苗对眼斑拟石首鱼具有较好的免疫保护性。

关键词：眼斑拟石首鱼烂尾病病原哈维氏弧菌免疫效果

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比较转录组学在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)对喹诺酮类药物耐药机制研究中的应用

比较转录组学在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)对喹诺酮类药物耐药机...

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第八届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会

作者：周维汤菊芬丁燏简纪常广东海洋大学水产学院、广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

哈维氏弧菌主要分布于海洋环境和海洋生物体中,是多种海洋鱼类和无脊椎动物的条件致病菌,目前关于哈维氏弧菌抗喹诺酮药物的机制研究较为缺乏.通过RNA-seq技术对临床分离的哈维氏弧菌敏感菌株(VS)和耐药株(VR)进行比较转录组测序,经从... 详细信息

哈维氏弧菌主要分布于海洋环境和海洋生物体中,是多种海洋鱼类和无脊椎动物的条件致病菌,目前关于哈维氏弧菌抗喹诺酮药物的机制研究较为缺乏.通过RNA-seq技术对临床分离的哈维氏弧菌敏感菌株(VS)和耐药株(VR)进行比较转录组测序,经从头拼接(De nove)再组装共得到2,082条Unigene.通过比对,两个样品共鉴定出129个差异表达基因,耐药菌与敏感菌相比有65个基因上调,64个下调.对这些差异表达基因进行功能注释和富集分析,发现双组份系统(ko02020)、ABC转运系统(ko02010)、鞭毛组装(ko02040)通路显著富集,并找到与哈维氏弧菌喹诺酮耐药相关的9个基因.转录组数据揭示哈维氏弧菌的耐药机制除了经典的靶位点突变外,主动外排系统、双组份系统与鞭毛组装等调节机制也参与了耐药的形成.同时,利用荧光定量PCR技术在优化的反应条件下,对转录组筛选到的10个差异表达基因进行定量表达分析,结果与转录组分析的基因表达变化趋势基本一致,进一步证实了转录组测序和数据分析的可靠性.

关键词：转录组哈维氏弧菌喹诺酮类药物耐药机制表达分析

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哈维氏弧菌qnr基因的克隆及原核表达条件优化

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广东海洋大学学报 2016年第1期36卷 93-97页

作者：周维汤菊芬高增鸿甘桢简纪常吴灶和丁燏广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

根据Gen Bank中公布的哈维氏弧菌qnr基因序列设计引物扩增哈维氏弧菌qnr序列,将其插入p ET-32a质粒,构建原核表达载体p ET32-qnr,并对诱导温度、时间、IPTG浓度等条件进行优化。结果表明,哈维氏弧菌qnr全长651 bp,编码216个氨基酸;重组... 详细信息

根据Gen Bank中公布的哈维氏弧菌qnr基因序列设计引物扩增哈维氏弧菌qnr序列,将其插入p ET-32a质粒,构建原核表达载体p ET32-qnr,并对诱导温度、时间、IPTG浓度等条件进行优化。结果表明,哈维氏弧菌qnr全长651 bp,编码216个氨基酸;重组蛋白优化条件为于28℃、IPTG浓度为0.05 mmol/L条件下诱导6 h。

关键词：哈维氏弧菌 qnr基因原核表达优化

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