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水产科学 2011年第7期30卷 391-394页

作者：杨世平吴灶和简纪常广东海洋大学广东省海洋开发研究中心广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025 广东海洋大学水产学院广东湛江524025

在基础饲料中分别添加沼泽生红冬孢酵母干酵母和活酵母,在水温(26.2±1)℃、pH 7.4～8.0、盐度5条件下,进行为期6周的养殖试验。研究沼泽生红冬孢酵母对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶和肠道微生物的影响。结果表明,饲料中添加干酵母,能显... 详细信息

在基础饲料中分别添加沼泽生红冬孢酵母干酵母和活酵母,在水温(26.2±1)℃、pH 7.4～8.0、盐度5条件下,进行为期6周的养殖试验。研究沼泽生红冬孢酵母对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶和肠道微生物的影响。结果表明,饲料中添加干酵母,能显著提高凡纳滨对虾肝胰腺中蛋白酶和脂肪酶活性(P<0.05);添加活酵母,能显著提高蛋白酶活性(P<0.05)。添加干酵母能显著减少对虾肠道内细菌总数、弧菌数、弧菌/总细菌比(P<0.05);添加活酵母能显著减少对虾肠道内弧菌数、弧菌/总细菌比例(P<0.05)。沼泽生红冬孢酵母能提高对虾消化酶活性和改善肠道微生物群落结构,可作为对虾养殖的益生菌。

关键词：凡纳滨对虾海洋红酵母沼泽生红冬孢酵母消化酶肠道微生物

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红笛鲷α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的克隆及序列分析

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广东海洋大学学报 2011年第3期31卷 1-6页

作者：张新中鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

应用已知的标签序列通过RACE-PCR和RT-PCR方法成功克隆红笛鲷（Lutjanus sanguineus）α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的全长cDNA序列。α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的cDNA全长分别为560和563 bp,开放阅读框分别为429和444 bp,各编码143和148个... 详细信息

应用已知的标签序列通过RACE-PCR和RT-PCR方法成功克隆红笛鲷（Lutjanus sanguineus）α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的全长cDNA序列。α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的cDNA全长分别为560和563 bp,开放阅读框分别为429和444 bp,各编码143和148个氨基酸,理论相对分子质量分别为15690和16400,理论等电点为7.79和6.61。氨基酸序列BLAST结果表明,红笛鲷α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因编码的氨基酸序列与其他鱼类的相似性分别在59%-79%和55%-80%之间。用邻接法（Neighbor-Joining）构建的α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因的系统发育树表明,红笛鲷与真鲷（Pagrus major）、金头鲷（Sparus aurata）和鰤（Seriola quinqueradiata）等亲缘关系较近。

关键词：红笛鲷 α-珠蛋白 β-珠蛋白基因克隆基因序列

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溶藻弧菌鞭毛蛋白双基因融合表达载体的构建

溶藻弧菌鞭毛蛋白双基因融合表达载体的构建

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2011年中国水产学会学术年会

作者：梁海鹰吴灶和简纪常鲁义善蔡佳广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室

将溶藻弧菌flaA和flaB二个基因,应用重叠延伸剪切技术(splicing by over lappingextension),经三次PCR获得融合基因flaA-flaB,定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,筛选阳性克隆,经酶切及菌落PCR鉴定,并通过DNA测序进一步证实,成功构建... 详细信息

将溶藻弧菌flaA和flaB二个基因,应用重叠延伸剪切技术(splicing by over lappingextension),经三次PCR获得融合基因flaA-flaB,定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,筛选阳性克隆,经酶切及菌落PCR鉴定,并通过DNA测序进一步证实,成功构建了融合基因原核表达载体pET-flaA-flaB。融合基因flaA-flaB在大肠杆菌中获得表达。带His-Tag的重组融合蛋白经镍亲和层析得到进一步纯化,Western blot结果表明鼠抗FIaA血清与鼠抗FlaB血清都能与融合蛋白FlaA-FlaB发生特异性免疫反应,为下一步研究融合蛋白的免疫原性奠定基础,为溶藻弧菌核酸双价疫苗的研制提供依据。

关键词：溶藻弧菌 flaA flaB SOEing技术基因融合

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溶藻弧菌鞭毛蛋白DNA疫苗对红鳍笛鲷的免疫保护研究

溶藻弧菌鞭毛蛋白DNA疫苗对红鳍笛鲷的免疫保护研究

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2010年中国水产学会学术年会

作者：梁海鹰吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室

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鲫圆形碘泡虫病组织病理学研究

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南方水产科学 2011年第3期7卷 68-71页

作者：鲁义善简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025

采用常规石蜡切片、苏木精-伊红染色的方法,研究了鲫(Carassius auratus auratus)自然感染圆形碘泡虫(Myxobolus rotundus)后的组织病理变化。结果表明,感染圆形碘泡虫后,在鲫的头部、鳃和体表能形成大小不一的圆形或椭圆形乳白色孢囊,... 详细信息

采用常规石蜡切片、苏木精-伊红染色的方法,研究了鲫(Carassius auratus auratus)自然感染圆形碘泡虫(Myxobolus rotundus)后的组织病理变化。结果表明,感染圆形碘泡虫后,在鲫的头部、鳃和体表能形成大小不一的圆形或椭圆形乳白色孢囊,其孢囊为典型的3层结构:外层的结缔组织、双层质膜的外质以及各个发育阶段的孢子或营养体组成的内质。病理切片可见鱼体各组织器官均有不同程度的病变,主要表现为鳃丝粘连、肿胀增生;肝脏发生以肝血窦为中心的透明、空泡变性;肾小管内皮脱落,肾小球萎缩;肠道粘膜层脱落,肌层细胞肿胀病变;脾脏的含铁血黄素增多等异常现象。

关键词：圆形碘泡虫鲫组织病理

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注射黄芪多糖对吉富罗非鱼c型溶菌酶基因表达量的影响

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广东海洋大学学报 2011年第1期31卷 58-61页

作者：汤菊芬吴灶和简纪常鲁义善王蓓李楠广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025

将黄芪多糖(APS)用无菌生理盐水配制成2 mg/mL和20 mg/mL针剂,腹腔注射吉富罗非鱼,以注射无菌生理盐水为对照。24 h后分别提取吉富罗非鱼鳃、头肾、肝脏、脾脏等组织中的总RNA并反转录成cDNA,利用Real-time PCR方法对不同组织中基因表... 详细信息

将黄芪多糖(APS)用无菌生理盐水配制成2 mg/mL和20 mg/mL针剂,腹腔注射吉富罗非鱼,以注射无菌生理盐水为对照。24 h后分别提取吉富罗非鱼鳃、头肾、肝脏、脾脏等组织中的总RNA并反转录成cDNA,利用Real-time PCR方法对不同组织中基因表达进行定量分析。结果表明:吉富罗非鱼腹腔注射20 mg/mL高剂量APS后,其鳃、头肾、肝脏等三个组织中的Lysozyme-c基因表达量显著高于对照组(P<0.05);注射2 mg/mL低剂量APS后,Lysozyme-c基因表达量仅在脾脏中出现显著上调(P<0.05)。APS可通过诱导Lysozyme-c基因在鳃、头肾、肝脏和脾脏等组织在的表达量,来提高吉富罗非鱼的机体免疫力。

关键词：黄芪多糖吉富罗非鱼 c型溶菌酶基因

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不同蛋白源饲料对褐点石斑鱼幼鱼血细胞发生的影响

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广东海洋大学学报 2011年第6期31卷 9-19页

作者：王赛陈刚张健东纪多亮吴灶和周晖广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025 广东省普通高校南海水产经济动物增养殖重点实验室广东湛江524025

以全鱼粉作为唯一蛋白源(D1),用豆粕替代10%、20%鱼粉(D2、D3),玉米蛋白粉替代10%鱼粉(D4),啤酒酵母替代10%鱼粉(D5),配制5组等氮等能饲料,每种饲料设置3个实验组,进行56 d的养殖实验。通过血液和组织涂(印)片、细胞染色和显微观察,研... 详细信息

以全鱼粉作为唯一蛋白源(D1),用豆粕替代10%、20%鱼粉(D2、D3),玉米蛋白粉替代10%鱼粉(D4),啤酒酵母替代10%鱼粉(D5),配制5组等氮等能饲料,每种饲料设置3个实验组,进行56 d的养殖实验。通过血液和组织涂(印)片、细胞染色和显微观察,研究人工培育的褐点石斑鱼幼鱼外周血液白细胞的分类组成,头肾、脾脏、体肾和肝脏等4种组织中各类血细胞的发生情况,以及不同蛋白源饲料对褐点石斑鱼血细胞发生的影响。结果表明:褐点石斑鱼外周血液中的白细胞由淋巴细胞(53.30%±4.66%)、血栓细胞(35.69%±3.85%)、嗜中性粒细胞(10.34%±3.14%)、单核细胞(0.28%±0.36%)、浆细胞(0.24%±0.34%)和嗜酸性粒细胞(0.15%±0.27%)组成;组织印迹片中,未成熟的红细胞、淋巴细胞和粒细胞主要在头肾印迹片中出现,未成熟的单核细胞主要在头肾和脾脏印迹片中出现,血栓细胞在肝脏印迹片中数量最多,推断褐点石斑鱼幼鱼主要的造血组织是头肾,其次是脾脏;在4种组织中均观察到浆细胞,在体肾印迹片中观察到嗜碱性粒细胞,在肝脏印迹片中观察到巨噬细胞,在头肾印迹片中还观察到巨大原红细胞。显微观察和数据统计分析的结果都表明,投喂5种蛋白源不同的配合饲料,未对褐点石斑鱼4种组织中血细胞的发生情况造成显著影响。

关键词：褐点石斑鱼血细胞造血组织不同蛋白源饲料

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无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

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2011年中国水产学会学术年会

作者：陈贺简纪常鲁义善黄郁葱王蓓广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成疫苗,通过注射和浸泡两种途径免疫吉富罗非鱼,其中注射组分别以四个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫吉富罗非鱼,对照组注射PBS;浸泡组以相同浓度的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪... 详细信息

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成疫苗,通过注射和浸泡两种途径免疫吉富罗非鱼,其中注射组分别以四个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫吉富罗非鱼,对照组注射PBS;浸泡组以相同浓度的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠三种佐剂免疫吉富罗非鱼,另设无佐剂组和对照组。免疫后每周测定血清的抗体效价,连续8周,并测定56天后以相应菌株攻毒后的相对保护率。结果表明,疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性,与对照组相比,血清中的抗体凝集效价均显著性提高,注射组中不同浓度的疫苗免疫组均获得了较高的免疫保护率,其中高浓度组可达到96%;浸泡组中疫苗与不同佐剂共同使用的免疫组也获得了较高的免疫保护率,其中使用佐剂消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚、氯化钠的免疫组免疫保护率明显高于无佐剂组和对照组。

关键词：无乳链球菌疫苗罗非鱼保护率

来源：评论

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无乳链球菌口服疫苗及浸泡结合口服疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

无乳链球菌口服疫苗及浸泡结合口服疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

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2011年中国水产学会学术年会

作者：徐潇洒简纪常鲁义善黄郁葱王蓓广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成水剂疫苗,用海藻酸钠作为口服疫苗的投递载体制备成口服疫苗微粒。通过拌料口服和浸泡结合口服两种途径免疫吉富罗非鱼,其中口服途径分别以三个不同浓度的口服疫苗,不含菌体的空微粒... 详细信息

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成水剂疫苗,用海藻酸钠作为口服疫苗的投递载体制备成口服疫苗微粒。通过拌料口服和浸泡结合口服两种途径免疫吉富罗非鱼,其中口服途径分别以三个不同浓度的口服疫苗,不含菌体的空微粒组和没有微球包被的菌体组免疫吉富罗非鱼,对照组投喂正常饲料;浸泡结合口服途径,设浸泡结合口服微粒组,浸泡结合菌体组,浸泡组和对照组。免疫后每周测定血清的抗体效价,连续8周,并测定56天后以相应菌株攻毒后的相对保护率。结果表明,疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性,与对照组相比,血清中的抗体凝集效价均显著性提高,口服组中不同浓度的疫苗免疫组均获得了较高的免疫保护率;浸泡结合口服组中浸泡结合口服微粒组也获得了较高的免疫保护率,免疫保护率明显高于其他组。

关键词：无乳链球菌疫苗罗非鱼保护率

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草鱼非特异性毒性细胞受体蛋白1基因的克隆和原核表达

草鱼非特异性毒性细胞受体蛋白1基因的克隆和原核表达

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2010年中国水产学会学术年会

作者：代礼平简纪常吴灶和鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室

来源：评论

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