检索结果-内蒙古大学图书馆

水产科学 2021年第5期40卷 679-685页

作者：刘慧玲郭文俊王成桂牛潇瑜杨世平孙成波广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东湛江524088

在水温(28±1)℃下,将体质量(1.89±0.26)g的墨吉明对虾饲养在1m^(3)的玻璃钢桶中,密度分别为60、90、120、150、180尾/m^(2),每个密度梯度设3个平行,常规饲养管理养殖15d,研究养殖密度对墨吉明对虾的生长、代谢和免疫的影响。... 详细信息

在水温(28±1)℃下,将体质量(1.89±0.26)g的墨吉明对虾饲养在1m^(3)的玻璃钢桶中,密度分别为60、90、120、150、180尾/m^(2),每个密度梯度设3个平行,常规饲养管理养殖15d,研究养殖密度对墨吉明对虾的生长、代谢和免疫的影响。试验期间,各组对虾存活率均为100%。试验结果显示,密度为90尾/m^(2)时,墨吉明对虾的质量增加率最高(P<0.05);密度大于90尾/m^(2)时,随着养殖密度的增加,墨吉明对虾的质量增加率随之下降;密度为180尾/m^(2)时,墨吉明对虾的质量增加率达到最低值。当养殖密度为90尾/m^(2)时,墨吉明对虾肝胰腺中谷草转氨酶、谷丙转氨酶和肌肉中琥珀酸脱氢酶的活性最高;当养殖密度为180尾/m^(2)时,墨吉明对虾肝胰腺和肌肉中谷草转氨酶、谷丙转氨酶和琥珀酸脱氢酶均呈下降趋势,而肝胰腺的免疫相关酶酸性磷酸酶和肌肉中的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性异常上升。试验结果表明,不同的养殖密度对墨吉明对虾肝胰腺和肌肉中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、琥珀酸脱氢酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性均影响显著(P<0.05)。当养殖密度为90尾/m^(2)时,墨吉明对虾代谢能力与免疫力均处于较高水平,结合养殖综合效益,其适宜的养殖密度应不超过150尾/m^(2)。

关键词：墨吉明对虾密度代谢酶免疫酶

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不同盐度条件下氨氮对斑节对虾仔虾的毒性研究

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水产养殖 2023年第4期44卷 16-21页

作者：于建渤黄学聃陈欢陈鹏铮温振中孙成波广东海洋大学水产学院广东湛江524088 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

开展了不同盐度条件下氨氮对斑节对虾仔虾毒性影响试验。结果表明,盐度为3.0%时,氨氮24,48,72和96 h半致死浓度(LC_(50))分别为91.32,53.92,40.70和25.77 mg/L;盐度为2.5%时,分别为91.95,50.05,35.76和33.71 mg/L;盐度为2.0%的条件下,分别为164.46,98.56,71.05和44.13 mg/L;盐度为1.5%时,分别为97.19,63.97,31.83和26.04 mg/L;盐度为1.0%时,分别为74.79,21.89,13.55和10.81 mg/L;盐度为0.5%时,分别为58.17,12.98,10.46和6.01 mg/L;在盐度3.0%,2.5%,2.0%,1.5%,1.0%和0.5%时,氨氮的安全浓度(SC)分别为2.577,3.371,4.413,2.604,1.081和0.601 mg/L。指出,盐度对氨氮的毒性有较大的影响,盐度过高或者过低,都会增强氨氮对斑节对虾的毒性。提出,斑节对虾仔虾育苗应在盐度2.0%、氨氮对斑节对虾仔虾的毒性最小时进行生产。

关键词：斑节对虾仔虾盐度非离子氨氮氨氮半致死浓度安全浓度

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溶藻弧菌T3SS exsD基因敲除突变株构建及其表型特征

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广东海洋大学学报 2021年第5期41卷 35-43页

作者：王俊霖招茵苏茵茵周诗慧曾福源谢妙王娜简纪常庞欢瑛广东海洋大学水产学院/广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室/广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 中国检验检疫科学研究院北京100176

【目的】构建溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS)中的调控蛋白操纵子ExsD基因缺失株,研究exsD缺失株表型特征。【方法】采用overlapPCR技术构建缺失株ΔexsD,PCR检测缺失株ΔexsD的遗传稳定性... 详细信息

【目的】构建溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS)中的调控蛋白操纵子ExsD基因缺失株,研究exsD缺失株表型特征。【方法】采用overlapPCR技术构建缺失株ΔexsD,PCR检测缺失株ΔexsD的遗传稳定性,比较缺失株与野生株之间的生长速度、泳动能力、胞外酶活性、药物敏感性、毒力,分别采用结晶紫和共聚焦电镜方法测定生物膜的差异变化,通过qRT-PCR方法分析exsD的缺失对T3SS效应蛋白Hop转录的影响。【结果】缺失株ΔexsD构建成功;与野生株相比,ΔexsD遗传稳定性和生长速度无显著差别,但泳动能力极显著上升(P <0.01),胞外蛋白酶活性显著上升(P <0.05),形成生物膜能力在24 h时提高(P <0.05);相比野生株,ΔexsD对米诺环素、庆大霉素、卡那霉素、多西环素、新霉素的敏感性从耐药变成中度敏感;ΔexsD缺失株的毒力显著上升,野生株对斑马鱼的半数致死剂量是缺失株的3.68倍。实时荧光定量结果显示,与HY9901野生型相比,exsD基因的缺失增加了效应蛋白Hop的转录表达。【结论】exsD基因对T3SS的致病性起负调控作用,为进一步阐明exsD基因在溶藻弧菌中的作用机理提供一定的理论基础。

关键词：溶藻弧菌 Ⅲ型分泌系统 exsD基因基因敲除缺失株表型特征

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硫化氢对斑节对虾(Penaeus monodon)溞状幼体、糠虾幼体和仔虾的毒性

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中国农学通报 2023年第6期39卷 152-156页

作者：管立平麦冠华陈鹏铮温振中孙成波广东海洋大学水产学院广东湛江524088 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

探讨硫化氢对斑节对虾溞状幼体、糠虾幼体和仔虾的毒性,求出其安全浓度,为加强育苗期间的水质管理,促进育苗生产稳定健康发展提供科学的参考。用常规生物毒性试验方法研究硫化氢对斑节对虾溞状幼体、糠虾幼体和仔虾的毒性,计算斑节对虾... 详细信息

探讨硫化氢对斑节对虾溞状幼体、糠虾幼体和仔虾的毒性,求出其安全浓度,为加强育苗期间的水质管理,促进育苗生产稳定健康发展提供科学的参考。用常规生物毒性试验方法研究硫化氢对斑节对虾溞状幼体、糠虾幼体和仔虾的毒性,计算斑节对虾各时期的半致死浓度(LC50)和安全浓度(SC)。在斑节对虾溞状幼体时期,24、48、72、96 h的半致死浓度LC50分别为0.856、0.720、0.413、0.377 mg/L;在斑节对虾糠虾幼体时期,24、48、72、96 h的半致死浓度LC50分别为5.167、4.460、1.387、0.940 mg/L;在斑节对虾仔虾时期,24、48、72、96 h的半致死浓度LC50分别为20.625、17.813、12.056、10.762 mg/L。硫化氢对斑节对虾溞状幼体、糠虾幼体和仔虾的安全浓度(CS)分别为0.038、0.094、1.076 mg/L。硫化氢对斑节对虾溞状幼体、糠虾幼体和仔虾毒性作用显著,随着硫化氢浓度的增加,对斑节对虾各时期幼体表现出不同程度的毒性作用。

关键词：硫化氢斑节对虾半致死浓度安全浓度

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草鱼NCCRP-1和IL-10的表达、抗体制备及组织病理变化

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广东海洋大学学报 2021年第5期41卷 10-18页

作者：陈静妮代礼平雷燕胡海浩黄鉴涛简纪常闫秀英广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室/水产经济动物病害控制广东普通高校重点实验室广东湛江524088 广州利洋水产科技股份有限公司广东广州510515

【目的】制备草鱼(Ctenopharyngodon idella)非特异性细胞毒性细胞受体蛋白-1(NCCRP-1)和白细胞介素-10(IL-10)的抗血清,探讨重组NCCRP-1和IL-10免疫在草鱼抗病毒感染过程中肾脏和肠病理学变化及对NCCRP-1和IL-10表达的影响。【方法】应... 详细信息

【目的】制备草鱼(Ctenopharyngodon idella)非特异性细胞毒性细胞受体蛋白-1(NCCRP-1)和白细胞介素-10(IL-10)的抗血清,探讨重组NCCRP-1和IL-10免疫在草鱼抗病毒感染过程中肾脏和肠病理学变化及对NCCRP-1和IL-10表达的影响。【方法】应用PCR扩增技术获得草鱼NCCRP-1和IL-10开放阅读框ORF,构建原核表达载体pET-NCCRP和pET-IL10;用表达的重组蛋白分别制备兔抗NCCRP-1和IL-10的抗血清,并采用ELISA方法测定抗血清的效价;分别用重组NCCRP-1和IL-10免疫草鱼,并用草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)GD108攻毒,感染7 d后制备草鱼肾脏和肠的病理切片,用定量PCR和western blot检测NCCRP-1和IL-10的表达。【结果】草鱼NCCRP-1和IL-10的ORF分别编码237个和179个氨基酸;草鱼NCCRP-1和IL-10的原核表达载体pET-NCCRP和pET-IL10在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中成功诱导表达,最优表达条件分别是0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)37℃诱导4 h和1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导6 h,western blot分析表明重组表达的蛋白为目的蛋白;制备兔抗NCCRP-1和IL-10抗血清的效价均高达1∶40000,免疫和攻毒后,NCCRP-1免疫组草鱼肾脏与肠的病理变化较轻,且NCCRP-1在肾脏与肠中的表达量显著上调(P<0.05);IL-10免疫组草鱼肾脏与肠的病理变化较重,IL-10在肾脏与肠中的表达量变化不显著。【结论】外源性NCCRP-1免疫后增强了草鱼抵御GCRV-GD108感染的免疫应答,NCCRP-1对草鱼抗GCRV GD108感染效果显著;而外源性IL-10免疫后,其对草鱼抗GCRV GD108感染效果不显著。

关键词：草鱼非特异性细胞毒性细胞受体-1 白细胞介素-10 表达多克隆抗体组织病理学

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斜带石斑鱼热休克蛋白基因HSP70在LPS和Poly I∶C刺激下的表达分析及重组蛋白制备

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大连海洋大学学报 2021年第6期36卷 937-942页

作者：梁振宇邹子鸿汤菊芬黄瑜简纪常蔡佳广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 广西科学院广西北部湾海洋研究中心广西海洋天然产物与组合生物合成化学重点实验室广西南宁530007

为了解斜带石斑鱼Epinephelus coioides热休克蛋白(HSP70)基因(EcHSP70,GenBank登录号MW411059)在石斑鱼抗病原感染中的功能,采用荧光定量PCR检测了LPS与Poly I∶C刺激后48 h内,石斑鱼脾脏细胞(GS)中EcHSP70的表达变化;构建重组质粒EcHS... 详细信息

为了解斜带石斑鱼Epinephelus coioides热休克蛋白(HSP70)基因(EcHSP70,GenBank登录号MW411059)在石斑鱼抗病原感染中的功能,采用荧光定量PCR检测了LPS与Poly I∶C刺激后48 h内,石斑鱼脾脏细胞(GS)中EcHSP70的表达变化;构建重组质粒EcHSP70-4T,转化到BL21(DE3)后进行诱导表达,利用SDS-PAGE电泳和Western blot检测EcHSP70重组蛋白的表达形式。结果表明:LPS与Poly I∶C刺激后,石斑鱼脾脏细胞中EcHSP70基因表达量上调;SDS-PAGE与Western blot检测表明,EcHSP70-4T重组蛋白相对分子质量约为96000,主要以包涵体形式表达。研究表明,EcHSP70蛋白可能参与了石斑鱼的免疫反应,其在大肠杆菌中能以包涵体形式高效表达,并纯化获得了EcHSP70重组蛋白,本研究结果为鉴定EcHSP70的互作蛋白及进一步了解该蛋白在免疫反应中的作用机制提供了数据参考。

关键词：斜带石斑鱼 HSP70基因表达分析原核表达脂多糖聚肌胞

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罗非鱼SRA4基因重组表达、亚细胞定位及组织分布

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广东海洋大学学报 2021年第5期41卷 19-27页

作者：黄子威汪志文黎源夏洪丽简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 广东海洋大学深圳研究院广东省水生动物健康评估工程技术研究中心广东深圳518000

【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)清道夫受体基因(On-SRA4)的重组表达、亚细胞定位及组织分布,为深入研究On-SRA4基因功能奠定基础。【方法】根据NCBI上公布的On-SRA4基因序列设计克隆引物,构建原核表达载体并诱导重组蛋... 详细信息

【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)清道夫受体基因(On-SRA4)的重组表达、亚细胞定位及组织分布,为深入研究On-SRA4基因功能奠定基础。【方法】根据NCBI上公布的On-SRA4基因序列设计克隆引物,构建原核表达载体并诱导重组蛋白rOn-SRA4的表达。同时,采用生物信息学、亚细胞定位手段分析On-SRA4的结构特征,用实时定量PCR分析On-SRA4在头肾、胸腺、脾脏、肝、肠道、鳃、脑、肌肉、皮肤、血液的表达水平,用灭活无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、病毒类似物Poly I:C刺激健康罗非鱼,分析On-SRA4在头肾、胸腺、脾脏、肠道的表达水平。【结果与结论】成功构建原核表达载体pET28a-OnSRA4,诱导获得目的蛋白rOn-SRA4,rOn-SRA4分子质量约80 ku。亚细胞定位显示,rOn-SRA4定位于细胞核与细胞质。组织定量分析表明,On-SRA4在所有组织中均有表达,且在血液中表达量最高,在灭活无乳链球菌与Poly I:C刺激后,健康罗非鱼胸腺、肠道、脾脏和头肾中On-SRA4表达量均显著升高,表明On-SRA4参与了病原引起的免疫反应,是罗非鱼抵抗病原的相关基因。

关键词：尼罗罗非鱼 On-SRA4 重组表达 RT-qPCR 亚细胞定位

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纳米材料在渔用疫苗中的研究进展

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广东农业科学 2021年第1期48卷 134-141页

作者：陈信锦王忠良黄瑜樊博琳简纪常王蓓广东海洋大学水产学院/广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室/广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 中国科学院实验海洋生物学重点实验室/中国科学院海洋研究所/海洋生物学与生物技术功能实验室/青岛海洋科学与技术试点国家实验室山东青岛266071

鱼病治疗研究已从大量使用抗生素转向主要以灭活细菌为基础的疫苗开发。渔用疫苗主要为注射疫苗,虽能有效防治许多不同的水产疾病,但注射疫苗存在的副作用不可忽视。相比之下,口服疫苗和浸泡疫苗可能是鱼类接种的最佳途径,但鱼类对抗原... 详细信息

鱼病治疗研究已从大量使用抗生素转向主要以灭活细菌为基础的疫苗开发。渔用疫苗主要为注射疫苗,虽能有效防治许多不同的水产疾病,但注射疫苗存在的副作用不可忽视。相比之下,口服疫苗和浸泡疫苗可能是鱼类接种的最佳途径,但鱼类对抗原的摄取有限,通常需要反复多次接种。纳米颗粒作为疫苗递送系统已被认为是改善和解决这些问题的有力工具。纳米颗粒是具有低毒性、良好生物降解性和特定物理属性(大小、表面电荷或负载能力)的分散体或固体颗粒,允许受控输送,从而改善免疫系统的靶向性和刺激性。这些纳米递送系统在鱼类中的应用还处于开发的初始阶段。综述了纳米颗粒在鱼类疫苗研究中的应用进展,重点介绍了聚乳酸-乙醇酸纳米颗粒、壳聚糖纳米颗粒、脂质体和碳纳米管,提出了未来渔用疫苗研究的热点方向以及需要解决的问题,为渔用疫苗的开发提供一个新思路。

关键词：纳米颗粒渔用疫苗疫苗递送聚乳酸-羟基乙酸(PLGA) 壳聚糖脂质体碳纳米管

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溶藻弧菌PepA蛋白原核表达载体的构建及其乙酰化鉴定

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生物技术通报 2020年第12期36卷 75-81页

作者：徐洲范晨龙丁燏广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088

旨为构建溶藻弧菌HY9901 PepA蛋白的原核表达载体、优化其表达条件,并分析该蛋白是否存在乙酰化调控。首先设计特异性引物经PCR克隆pepA基因,构建表达载体pET-28a-PepA并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋... 详细信息

旨为构建溶藻弧菌HY9901 PepA蛋白的原核表达载体、优化其表达条件,并分析该蛋白是否存在乙酰化调控。首先设计特异性引物经PCR克隆pepA基因,构建表达载体pET-28a-PepA并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达及乙酰化情况。结果显示,表达菌株可以正确表达重组蛋白(60.7 kD),其最佳表达条件为:体积分数为0.1%的IPTG,37℃诱导5 h;Western blot结果表明,PepA蛋白是乙酰化蛋白,且在体外不存在去乙酰化。

关键词：溶藻弧菌 PepA蛋白表达条件优化乙酰化

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高位处理水精养虾池水体浮游生物的时空变化

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热带生物学报 2022年第5期13卷 429-439页

作者：代霖欣周小磊杨术侯丹清孙成波广东海洋大学水产学院广东湛江524088 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

为了科学防控对虾病害、构建对虾健康控病模式,采用沙滤、蓄水沉淀和含氯消毒剂消毒联合处理养殖用海水源水,用于高位池精养凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei),比较外海水、沙滤水和处理水浮游生物的差异,同时研究养殖水体中浮游生物的... 详细信息

为了科学防控对虾病害、构建对虾健康控病模式,采用沙滤、蓄水沉淀和含氯消毒剂消毒联合处理养殖用海水源水,用于高位池精养凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei),比较外海水、沙滤水和处理水浮游生物的差异,同时研究养殖水体中浮游生物的时空变化。结果表明:外海水中浮游生物种类繁多,共9门27属33种;处理水的浮游生物种类次之,5门15属17种;沙滤水的浮游生物种类为5门15属16种。养殖凡纳滨对虾的虾塘中,处理水的浮游动物数量显著高于外海水和沙滤水浮游动物数量(P<0.05)。外海水的浮游动物密度次之,平均值为(26.45±14.30)个·L^(−1),沙滤水的浮游动物密度最小,平均值为(6.31±1.45)个·L^(−1);处理水的浮游植物数量显著高于外海水和沙滤水(P<0.05),外海水和沙滤水差异不明显(P>0.05)。在垂直方向上,浮游动物总数量的变化是从表层—中层—底层呈增多趋势,浮游植物总数量分布呈表层高于中层和底层,差异不显著(P>0.05);在水平方向上,浮游植物总量在水平方向上分布差异显著(P<0.05),垂直方向分布差异不显著(P>0.05)。

关键词：处理水凡纳滨对虾浮游生物变化

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