检索结果-内蒙古大学图书馆

2016年中国水产学会学术年会

作者：张海艳王蓓鲁义善汪志文黄瑜简纪常广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室

斜带石斑鱼是一种重要的海水经济养殖鱼类,病害是制约水产养殖业的一个重要的因素。近年来,葡聚糖作为一种新型的天然免疫增强剂在水产养殖中得到广泛的应用。本文,我们使用腹腔注射法免疫斜带石斑鱼,在免疫后的6h和72h分别取头肾,淋巴... 详细信息

斜带石斑鱼是一种重要的海水经济养殖鱼类,病害是制约水产养殖业的一个重要的因素。近年来,葡聚糖作为一种新型的天然免疫增强剂在水产养殖中得到广泛的应用。本文,我们使用腹腔注射法免疫斜带石斑鱼,在免疫后的6h和72h分别取头肾,淋巴细胞,胸腺和脾脏组织进行转录测序。转录组测序结果一共组装了175568条Unigene,平均长度是1507bp。通过Blast比对数据库进行功能注释,一共注释了121629条Unigene。基因差异表达分析获得葡聚糖刺激后的各组织的显著差异表达的免疫相关基因。对差异基因进行GO和KEGG富集分析,免疫相关的显著富集通路主要为toll-like receptor,RIG-1-like receptor和T-cell receptor信号通路等。本研究结果为阐明葡聚糖调节鱼类免疫系统的作用机制提供数据参考。

关键词：斜带石斑鱼葡聚糖转录组 qPCR

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红笛鲷CD40和去除信号肽CD40的原核表达

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广东海洋大学学报 2013年第4期33卷 31-37页

作者：樊云霞简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

根据红笛鲷(Lutjanus sanguineus)CD40基因cDNA全长序列设计2对特异性引物,利用RT-PCR技术从红笛鲷头肾组织中扩增出CD40 ORF序列和去信号肽序列,分别与原核表达载体pET-32a(+)相连,构建原核重组表达质粒,命名为pET32-CD40和pET32-△CD... 详细信息

根据红笛鲷(Lutjanus sanguineus)CD40基因cDNA全长序列设计2对特异性引物,利用RT-PCR技术从红笛鲷头肾组织中扩增出CD40 ORF序列和去信号肽序列,分别与原核表达载体pET-32a(+)相连,构建原核重组表达质粒,命名为pET32-CD40和pET32-△CD40,并分别转化至大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,分别于54 ku和53 ku处有清晰的目的蛋白条带。融合蛋白的表达效率最佳的表达条件,pET32-CD40是诱导温度37℃,起始D(600nm)为0.4,IPTG浓度为0.08 mmol/L,诱导5 h;pET32-△CD40是诱导温度37℃,起始D(600nm)为0.6,IPTG浓度为0.10 mmol/L,诱导6 h。在各自优化的表达条件下,pET32-△CD40融合蛋白表达量较pET32-CD40融合蛋白高。RNAstructure软件分析发现,CD40的mRNA 5′端序列形成复杂且较为稳定的二级结构,不利于翻译的起始,表明信号肽序列的存在可能对CD40基因在原核细胞中的表达有一定的影响。

关键词：红笛鲷 CD40基因原核表达

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溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统C-环组分VscQ的原核表达及免疫原性

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安徽农学通报 2020年第18期26卷 101-105页

作者：曾福源伍艳清邱明生武沛文周诗慧王俊霖简纪常谢妙庞欢瑛广东海洋大学深圳研究院广东深圳510000 广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088

为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901菌株Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS)胞质环(C-环)组分VscQ作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌vscQ序列(***862753),设计1对带酶切位点的特异性引物,PCR扩增vscQ基因,进行序列分析。结果显示,该基因全长969bp,预计分子量35.61kDa。将vscQ基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEXvscQ。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,能在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达分子质量约为61.6kDa的VscQ融合蛋白。VscQ蛋白表达的最优条件为:0.4mmol/L IPTG,15℃条件下诱导12h。用纯化后的VscQ融合蛋白免疫白兔,获得高效多克隆抗体,抗体效价为1∶121500。兔抗VscQ血清能与重组VscQ蛋白发生特异性反应,表明T3SS C-环组分VscQ可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一。

关键词：溶藻弧菌 VscQ Ⅲ型分泌系统原核表达免疫原性

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复方中草药在罗非鱼养殖中的安全性评价

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广东海洋大学学报 2017年第3期37卷 43-48页

作者：林紫薇汤菊芬简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

在罗非鱼基础饲料中添加质量分数1%、3%、5%的复方中草药,连续投喂30 d,测定罗非鱼生长性能及血液生化指标,并对其肝脏、脾脏、头肾、体肾等组织进行病理学检查,评价罗非鱼养殖中该复方中草药的安全性。结果表明:3实验组罗非鱼增重率均... 详细信息

在罗非鱼基础饲料中添加质量分数1%、3%、5%的复方中草药,连续投喂30 d,测定罗非鱼生长性能及血液生化指标,并对其肝脏、脾脏、头肾、体肾等组织进行病理学检查,评价罗非鱼养殖中该复方中草药的安全性。结果表明:3实验组罗非鱼增重率均高于对照组(P<0.05),饲料系数均低于对照组(P<0.05);3个添加剂量下,中草药对罗非鱼血清中的谷草转氨酶、谷丙转氨酶、白蛋白、总蛋白、肌酐、尿素氮等指标无显著影响(P>0.05),但添加5%复方中草药组的罗非鱼血清甘油三酯含量显著高于对照组(P<0.05);3实验组的罗非鱼肝、脾、头肾、体肾与对照组相比无明显变化。在养殖生产中,罗非鱼饲料添加质量分数1%~3%的复方中草药制剂是安全的。

关键词：罗非鱼养殖中草药安全性评价生长性能血液生化指标病理学

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大亚湾网箱养殖水体弧菌种类组成及变化

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湛江海洋大学学报 2006年第4期26卷 42-48页

作者：吴建平蔡创华周毅频吴灶和中国科学院南海海洋研究所广东广州510301 广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

研究了海水网箱养殖海域弧菌数量变化、种类组成及其相关因素．探讨弧菌数量的变化与鱼病的关系。结果表明：网箱内水体弧菌数量为390-230mL^-1．平均为20．6×10^2mL^-1,网箱外水体为130～1450mL^-1，平均为530mL^-1．非养殖对照... 详细信息

研究了海水网箱养殖海域弧菌数量变化、种类组成及其相关因素．探讨弧菌数量的变化与鱼病的关系。结果表明：网箱内水体弧菌数量为390-230mL^-1．平均为20．6×10^2mL^-1,网箱外水体为130～1450mL^-1，平均为530mL^-1．非养殖对照海区为10-390mL^-1．平均为190mL^-1。养殖海区弧菌数量呈现明显的季节性变化．尤其是网箱水体．对照海区只在9月数量较高．其他时间变化不大。平均数量网箱内大于网箱外．网箱外大于对照海区。水体中出现的弧菌种类有河流弧菌Vibrio fluvialis．创伤弧菌Vibrio vulnif gicus．霍乱弧菌Vibrio cholerae．副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus．溶藻弧菌Vibrio alginolyticus．美人鱼弧菌Vibrio damsela．拟态弧菌Vibrio mimicus和好利斯弧菌Vibrio hollisae，美人鱼弧菌、溶藻弧菌和霍乱弧菌占有较大优势。弧种数量与海水温度、盐度及营养盐有相关性．但其相关性因不同种和不同点而不同。检测期间．网箱养殖鱼类无明显流行病发生．但弧菌的高峰期明显与报道的鱼病高峰期相吻合。

关键词：弧菌种类组成分布季节变化网箱水体大亚湾

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溶藻弧菌vscO基因在不同环境下的表达差异

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吉首大学学报（自然科学版） 2014年第4期35卷 59-63页

作者：庞欢瑛周泽军丁燏黄郁葱吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

为阐明溶藻弧菌vscO的在不同环境下的表达情况,用半定量RT-PCR方法检测vscO mRNA在不同生长时期、不同环境因子(温度、盐度和pH值)培养下的相对表达量.结果表明,溶藻弧菌vscO在对数期,温度为28℃,盐度为2%以及培养基起始pH值为7.0时的... 详细信息

为阐明溶藻弧菌vscO的在不同环境下的表达情况,用半定量RT-PCR方法检测vscO mRNA在不同生长时期、不同环境因子(温度、盐度和pH值)培养下的相对表达量.结果表明,溶藻弧菌vscO在对数期,温度为28℃,盐度为2%以及培养基起始pH值为7.0时的表达量最高.

关键词：溶藻弧菌 Ⅲ型分泌系统(T3SS) vscO基因环境因子基因表达

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溶藻弧菌主要外膜蛋白的纯化及其免疫保护性研究

溶藻弧菌主要外膜蛋白的纯化及其免疫保护性研究

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中国水产学会第五届青年学术年会

作者：姚邵云简纪常吴灶和湛江海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室

本文通过超速离心提取溶藻弧菌外膜蛋白,SDS-PAGE电泳后,Western blot检测结果表明,35.6kD外膜蛋白与兔抗溶藻弧菌血清出现较强的阳性反应,因而认为分子量35.6KD的外膜蛋白为溶藻弧菌的主要外膜蛋白(MOMP)。本实验对溶藻弧菌的MOMP进行... 详细信息

本文通过超速离心提取溶藻弧菌外膜蛋白,SDS-PAGE电泳后,Western blot检测结果表明,35.6kD外膜蛋白与兔抗溶藻弧菌血清出现较强的阳性反应,因而认为分子量35.6KD的外膜蛋白为溶藻弧菌的主要外膜蛋白(MOMP)。本实验对溶藻弧菌的MOMP进行了切胶回收,冷冻干燥获得了35.6kD MOMP的纯品,并制备了免疫刺激复合物亚单位疫苗(ISCOM-MOMP),对红鳍笛鲷(Lutjanus argentimaculantus)进行免疫接种,测定了其免疫保护率为71.4%,因而认为所得的35.6kD的外膜蛋白为溶藻弧菌的主要保护性抗原。在分离纯化的基础上,对其N端氨基酸序列进行了分析。

关键词：溶藻弧菌主要外膜蛋白免疫保护蛋白质测序

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红鳍笛鲷弧菌病病原的研究

红鳍笛鲷弧菌病病原的研究

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中国水产学会第五届青年学术年会

作者：李永芹简纪常吴灶和湛江海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室

从广东湛江特呈岛鱼排取患病红鳍笛鲷进行病原分离、纯化,得到一株病原菌Ls-1。该菌为革兰氏阴性短杆菌,有运动性,菌落半透明,最适温度28～30℃,需盐生长,氧化酶反应阳性,发酵葡萄糖不产气,不发酵肌醇,对弧菌抑制剂0/129敏感。经API—ID... 详细信息

从广东湛江特呈岛鱼排取患病红鳍笛鲷进行病原分离、纯化,得到一株病原菌Ls-1。该菌为革兰氏阴性短杆菌,有运动性,菌落半透明,最适温度28～30℃,需盐生长,氧化酶反应阳性,发酵葡萄糖不产气,不发酵肌醇,对弧菌抑制剂0/129敏感。经API—ID32E细菌鉴定系统及弧菌科细菌生化鉴定管鉴定,该菌为一株溶藻弧菌(Vibrio aginolyticus);其对红鳍笛鲷的半数致死量为6.32×10～5cfu/mL。药敏试验结果表明,该菌对阿莫西林、先锋V不敏感,对新生霉素、卡那霉素、多粘菌素B、四环素中度敏感,而对庆大霉素、氟哌酸、氯霉素、红霉素、链霉素和复方新诺明等有较高的敏感性。

关键词：红鳍笛鲷溶藻弧菌细菌鉴定药敏试验

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溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB的原核表达及条件优化和纯化

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中国农学通报 2013年第11期29卷 55-59页

作者：周泽军庞欢瑛丁燏简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

为研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901转运蛋白TolB作为疫苗候选抗原的可能性,根据已发表的溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB序列(JQ846501),设计1对带酶切位点的引物,PCR扩增tolB基因,然后经酶切、连接等步骤,构建tolB基因的原核表... 详细信息

为研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901转运蛋白TolB作为疫苗候选抗原的可能性,根据已发表的溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB序列(JQ846501),设计1对带酶切位点的引物,PCR扩增tolB基因,然后经酶切、连接等步骤,构建tolB基因的原核表达载体pET-TolB,并对其IPTG浓度、诱导时间、温度、洗脱浓度进行优化,以期获得较大量的目的蛋白。结果表明:IPTG诱导后经SDS-PAGE与Western-blot分析,成功表达了溶藻弧菌HY9901株TolB蛋白,分子量与预期相符,且表达的蛋白以包涵体的形式存在;TolB蛋白在大肠杆菌中诱导表达的优化条件为:0.2mmol/L IPTG,37℃诱导4h;最佳咪唑洗脱浓度为400mmol/L。这些结果为进一步研究目的蛋白的免疫原性和疫苗制备奠定基础。

关键词：溶藻弧菌 tolB基因原核表达优化纯化

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溶藻弧菌外膜蛋白对凡纳滨对虾免疫功能的影响

溶藻弧菌外膜蛋白对凡纳滨对虾免疫功能的影响

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中国水产学会第五届青年学术年会

作者：吴灶和曹剑香简纪常鲁义善湛江海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室

本文应用溶藻弧菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)注射凡纳滨对虾(Penaeus vannamei),测定其对凡纳滨对虾免疫指标的影响以及对凡纳滨对虾的免疫保护作用。注射OMP后,0.5mg/mL、1.0mg/mL和1.5mg/mL OMP等3个实验组的凝集效价均显... 详细信息

本文应用溶藻弧菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)注射凡纳滨对虾(Penaeus vannamei),测定其对凡纳滨对虾免疫指标的影响以及对凡纳滨对虾的免疫保护作用。注射OMP后,0.5mg/mL、1.0mg/mL和1.5mg/mL OMP等3个实验组的凝集效价均显著高于对照组(P<0.05),但实验组之间差异不显著(P=0.01)。而血清溶菌活力在注射后急剧上升,在6h时达到最高,随后下降,到96h时基本恢复正常。0.5mg/mL和1.0mg/mL OMP组的抗菌活力在12h时达到最高值,且在12～72 h之间均明显高于对照组和1.5mg/mL组(P<0.05)。血清溶血活力在注射后3h达到最高值,在1～96h内,实验组的溶血活力维持较高水平,均高于对照组。0.5mg/mL、1.0mg/mL和1.5mg/mL OMP对凡纳滨对虾的免疫保护率分别为65.9%、75.6%和70.7%。

关键词：凡纳滨对虾外膜蛋白免疫指标免疫保护

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