检索结果-内蒙古大学图书馆

广东海洋大学学报 2014年第1期34卷 1-8页

作者：庞欢瑛陈立明蔡佳汤菊芬王蓓吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

根据溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)的基因序列设计1对特异性引物。PCR扩增结果显示,DLD(GenBank登录号AGK62253)全长1 428 bp,共编码475个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测其分子质量约为50.998 ku,等电点为5.51。细胞定位、SignalP 4.0、TMHMM Server 2.0和SoftBerry-Psite预测结果显示,DLD位于细胞质中,在第29至30个氨基酸之间存在信号肽,不存在跨膜区,氨基酸序列含有1个Asn-糖基化位点、5个蛋白激酶C磷酸化位点、6个酪蛋白激酶II磷酸化位点等多个活性位点。系统进化树结果显示,溶藻弧菌DLD与副溶血弧菌(***)聚为一簇。用Kyte-Doolittle亲水性参数、Karplus-Schulz柔韧性参数、Emini表面可及性参数和Jameson-Wolf抗原性参数分别预测,DLD可能的B细胞抗原优势表位分别是第5~10、106~110、120~125、158~163和175~180区段。利用SWISS-MODEL软件,模拟DLD亚基三维结构模型,结果显示其与大肠杆菌(Escherichia coli)DLD蛋白有相似构型。Kegg分析发现,其涉及糖酵解和糖异生等9条信号通路。从生物信息学角度验证了DLD作为弧菌共同抗原的可行性。

关键词：溶藻弧菌基因克隆二氢硫辛酰胺脱氢酶生物信息学分析

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溶藻弧菌vscO基因在不同环境下的表达差异

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吉首大学学报（自然科学版） 2014年第4期35卷 59-63页

作者：庞欢瑛周泽军丁燏黄郁葱吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

为阐明溶藻弧菌vscO的在不同环境下的表达情况,用半定量RT-PCR方法检测vscO mRNA在不同生长时期、不同环境因子(温度、盐度和pH值)培养下的相对表达量.结果表明,溶藻弧菌vscO在对数期,温度为28℃,盐度为2%以及培养基起始pH值为7.0时的... 详细信息

为阐明溶藻弧菌vscO的在不同环境下的表达情况,用半定量RT-PCR方法检测vscO mRNA在不同生长时期、不同环境因子(温度、盐度和pH值)培养下的相对表达量.结果表明,溶藻弧菌vscO在对数期,温度为28℃,盐度为2%以及培养基起始pH值为7.0时的表达量最高.

关键词：溶藻弧菌 Ⅲ型分泌系统(T3SS) vscO基因环境因子基因表达

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凡纳滨对虾白斑病毒VP28基因的RNA干扰体内研究

凡纳滨对虾白斑病毒VP28基因的RNA干扰体内研究

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第九届世界华人虾蟹养殖研讨会

作者：朱卫卫邱德全甘桢广东海洋大学水产学院湛江52408 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江52408 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江52408

VP28是对虾白斑综合症病毒(WSSV)的一种囊膜蛋白,在病毒侵染早期发挥了极其关键的作用.设计了VP28的一条21bp的siRNA(生物公司合成),已有研究结果在体外证实其有效性.在凡纳滨对虾第2腹节注射100 μL BSS(PH7.2)缓冲液稀释104倍的病毒... 详细信息

VP28是对虾白斑综合症病毒(WSSV)的一种囊膜蛋白,在病毒侵染早期发挥了极其关键的作用.设计了VP28的一条21bp的siRNA(生物公司合成),已有研究结果在体外证实其有效性.在凡纳滨对虾第2腹节注射100 μL BSS(PH7.2)缓冲液稀释104倍的病毒粗提液.24h后,对照组直接注射100μl BSS,实验组分为注射100μl的0.05 μg/μl siRNA组(S05组)和注射100μl的0.10 μg/μl siRNA组(S10组),阴性对照不注射任何溶液,每组20尾虾,分别在24h、48h采集对虾的鳃,提取病毒,利用荧光定量检测分析仪检测病毒的拷贝数.

关键词： VP28 WSSV RNA干扰凡纳滨对虾

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红笛鲷TRAF3基因的克隆、表达及其功能研究

红笛鲷TRAF3基因的克隆、表达及其功能研究

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2014年中国水产学会学术年会

作者：夏洪丽蔡佳鲁义善简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室仲恺农业工程学院

TRAF3(Tumor Necrosis Factor receptor-associated factor 3)是TRAF家族成员之一,能够与胞内多种受体如TNFR、NLR、TLR/IL-1R等相互作用,进而调节NF-κB和MAPK信号通路的活性。为研究TRAF3在鱼类免疫信号转导中的作用。本研究利用RACE技术克隆了红笛鲷TRAF3(Ls-TRAF3)基因全长,通过蛋白结构域分析发现Ls-TRAF3在N端含有1个环指结构,2个锌指结构,C端还有该家族保守的coiled coil和MATH结构域。荧光显微镜观察显示Ls-TRAF3为全细胞分布。Ls-TRAF3在所有组织中均有表达,尤其在脾、头肾和肝脏中表达量较高。在哈氏弧菌、poly I:C分别刺激后,Ls-TRAF3在脾脏中表达量均有不同程度的提高,说明Ls-TRAF3可能参与了红笛鲷的免疫应答过程。上述研究结果为进一步研究TRAF3的功能以及鱼类的免疫机制奠定了基础。

关键词：红笛鲷 TRAF3 免疫

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马氏珠母贝早期生长性状的遗传参数估计

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广东海洋大学学报 2014年第3期34卷 10-16页

作者：陶后全吴灶和白成刘冠刘志刚广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225 雷州市源源至水产种苗繁育有限公司广东湛江524000

以马氏珠母贝选育系F6代为亲本，采用巢式设计方法和人工解剖授精技术，依照1雄配3雌的原则，建立了8个父系半同胞家系和24个母系全同胞家系，在第8、21、35和50天测定了每个母系全同胞个体的壳长和壳高，以全同胞组内相关分析法估计马... 详细信息

以马氏珠母贝选育系F6代为亲本，采用巢式设计方法和人工解剖授精技术，依照1雄配3雌的原则，建立了8个父系半同胞家系和24个母系全同胞家系，在第8、21、35和50天测定了每个母系全同胞个体的壳长和壳高，以全同胞组内相关分析法估计马氏珠母贝早期生长性状的遗传参数。结果表明，母系半同胞个体具有较大的变异程度，存在着较大的母性效应，父系半同胞组内相关分析法估算的狭义遗传力是马氏珠母贝遗传力的估计值。8．50日龄壳长狭义遗传力估计值为0．11～1．14，壳高狭义遗传力估计值为0．12～1．04，其中利用父系半同胞组内相关法估计壳长的遗传力依次为0．17、0．19、0．12、0．11，壳高的遗传力依次为0．20、0．23、0．13、0．12，属于中等遗传力。马氏珠母贝早期生长性状的遗传相关和表型相关表现为一定的正相关，相关系数的范围分别为0．528～0．746和0．747—0．921。在早期生长阶段以壳长或壳高为参数进行选择育种时，具有较大的遗传改良潜力。

关键词：马氏珠母贝幼体生长性状遗传力遗传相关

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南极衣藻谷胱甘肽-S-转移酶基因的表达及其对大肠杆菌低温耐受性的增强作用

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水生生物学报 2013年第1期37卷 16-21页

作者：彭跃跃丁燏王金慧简纪常鲁义善刘莹广东海洋大学水产学院湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025

谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferase,GST,EC2.5.1.18)是生物体内一种重要的抗氧化酶,为阐明GST在南极衣藻(Chlamydomonas ***-L)中的具体地位,采用实时荧光定量PCR对不同温度下南极衣藻的GST基因的表达进行了分析;并构建了原... 详细信息

谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferase,GST,EC2.5.1.18)是生物体内一种重要的抗氧化酶,为阐明GST在南极衣藻(Chlamydomonas ***-L)中的具体地位,采用实时荧光定量PCR对不同温度下南极衣藻的GST基因的表达进行了分析;并构建了原核表达载体pET28a(+)-GST,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,通过平板培养法探讨了重组菌*** BL21(pET28a(+)-GST)对低温胁迫的耐受性。结果显示,GST在0℃时表达量最高,最高可达对照组的两倍多;pET28a(+)-GST重组表达载体在*** BL21中实现了高效表达,且主要以包涵体形式存在,经HisTrap HP柱分离纯化获得高纯度的GST融合蛋白,并通过SDS-PAGE及Western blot分析得以验证;对低温胁迫实验发现南极衣藻GST蛋白的表达可以提高重组菌*** BL21对低温的耐受性,说明GST基因对南极衣藻适应南极低温环境具有重要作用。

关键词：南极衣藻谷胱甘肽-S-转移酶表达低温

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红笛鲷T淋巴细胞酪氨酸激酶的原核表达及多克隆抗体制备

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生物技术通报 2013年第12期29卷 113-118页

作者：黄瑜张雪利蔡佳简纪常吴灶和鲁义善樊云霞广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

为研究红笛鲷(Lutjanus sanguineus)T淋巴细胞酪氨酸激酶(Lymphocyte cell kinase,LCK)蛋白在机体中的组织分布情况,克隆出红笛鲷lck(LS-lck)基因序列,经酶切、连接等步骤,构建重组质粒pET-28a-LS-LCK,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株... 详细信息

为研究红笛鲷(Lutjanus sanguineus)T淋巴细胞酪氨酸激酶(Lymphocyte cell kinase,LCK)蛋白在机体中的组织分布情况,克隆出红笛鲷lck(LS-lck)基因序列,经酶切、连接等步骤,构建重组质粒pET-28a-LS-LCK,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株后进行IPTG诱导表达。通过表达条件的优化,重组蛋白在37℃、0.03 mmol/L IPTG条件下诱导4 h后获得最大表达量,且主要以包涵体形式存在。Western blot检测重组蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,表明为目的蛋白。利用纯化后的rLS-LCK重组蛋白免疫小鼠,获得了1∶40 000高效价的抗血清,Western blot分析显示,融合蛋白能被小鼠的阳性血清识别,说明rLS-LCK融合蛋白具有较好的免疫反应性和免疫原性。

关键词：红笛鲷 lck基因原核表达 Western blot分析抗原性分析

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溶藻弧菌HY9901外膜蛋白OmpH的基因克隆及其生物信息学分析

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生物技术通报 2013年第4期29卷 116-122页

作者：周泽军庞欢瑛丁燏简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

根据已发表的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列设计1对特异性引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株外膜蛋白OmpH的全长基因。结果显示,该基因(GenBank登录号:JX855924)全长573 bp,共编码190个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测... 详细信息

根据已发表的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列设计1对特异性引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株外膜蛋白OmpH的全长基因。结果显示,该基因(GenBank登录号:JX855924)全长573 bp,共编码190个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测其分子量约为21.1 kD,等电点为9.02。SignalP 4.0、TMHMM Server 2.0和SofiBerry-Psite预测结果显示,OmpH不存在信号肽与跨膜区,含有1个N-糖基化位点,6个磷酸化位点,1个内质网靶信号位点以及3个微体C末端靶信号位点。利用MAGE5.0软件,以邻位相连法构建OmpH系统进化树,结果显示,溶藻弧菌OmpH与副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈氏弧菌(Vibrio harveyi)等有较近亲缘关系。采用多种参数成功预测了OmpH可能的B细胞抗原优势表位,分别是第5-10、106-110、120-125、158-163和175-180区段。利用SWISS-MODEL软件,模拟了OmpH亚基三维结构模型,且与其同源蛋白大肠杆菌(Escherichia coli)Skp蛋白有相似构型。

关键词：溶藻弧菌基因克隆 OmpH基因外膜蛋白生物信息学分析

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红笛鲷CD40和去除信号肽CD40的原核表达

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广东海洋大学学报 2013年第4期33卷 31-37页

作者：樊云霞简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

根据红笛鲷(Lutjanus sanguineus)CD40基因cDNA全长序列设计2对特异性引物,利用RT-PCR技术从红笛鲷头肾组织中扩增出CD40 ORF序列和去信号肽序列,分别与原核表达载体pET-32a(+)相连,构建原核重组表达质粒,命名为pET32-CD40和pET32-△CD... 详细信息

根据红笛鲷(Lutjanus sanguineus)CD40基因cDNA全长序列设计2对特异性引物,利用RT-PCR技术从红笛鲷头肾组织中扩增出CD40 ORF序列和去信号肽序列,分别与原核表达载体pET-32a(+)相连,构建原核重组表达质粒,命名为pET32-CD40和pET32-△CD40,并分别转化至大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,分别于54 ku和53 ku处有清晰的目的蛋白条带。融合蛋白的表达效率最佳的表达条件,pET32-CD40是诱导温度37℃,起始D(600nm)为0.4,IPTG浓度为0.08 mmol/L,诱导5 h;pET32-△CD40是诱导温度37℃,起始D(600nm)为0.6,IPTG浓度为0.10 mmol/L,诱导6 h。在各自优化的表达条件下,pET32-△CD40融合蛋白表达量较pET32-CD40融合蛋白高。RNAstructure软件分析发现,CD40的mRNA 5′端序列形成复杂且较为稳定的二级结构,不利于翻译的起始,表明信号肽序列的存在可能对CD40基因在原核细胞中的表达有一定的影响。

关键词：红笛鲷 CD40基因原核表达

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溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB的原核表达及条件优化和纯化

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中国农学通报 2013年第11期29卷 55-59页

作者：周泽军庞欢瑛丁燏简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

为研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901转运蛋白TolB作为疫苗候选抗原的可能性,根据已发表的溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB序列(JQ846501),设计1对带酶切位点的引物,PCR扩增tolB基因,然后经酶切、连接等步骤,构建tolB基因的原核表... 详细信息

为研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901转运蛋白TolB作为疫苗候选抗原的可能性,根据已发表的溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB序列(JQ846501),设计1对带酶切位点的引物,PCR扩增tolB基因,然后经酶切、连接等步骤,构建tolB基因的原核表达载体pET-TolB,并对其IPTG浓度、诱导时间、温度、洗脱浓度进行优化,以期获得较大量的目的蛋白。结果表明:IPTG诱导后经SDS-PAGE与Western-blot分析,成功表达了溶藻弧菌HY9901株TolB蛋白,分子量与预期相符,且表达的蛋白以包涵体的形式存在;TolB蛋白在大肠杆菌中诱导表达的优化条件为:0.2mmol/L IPTG,37℃诱导4h;最佳咪唑洗脱浓度为400mmol/L。这些结果为进一步研究目的蛋白的免疫原性和疫苗制备奠定基础。

关键词：溶藻弧菌 tolB基因原核表达优化纯化

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