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2013年环北部湾高校研究生海洋论坛

作者：李桂欢王蓓鲁义善汤菊芬黄郁葱吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江 524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江 524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江 524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江 524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江 524088 仲恺农业工程学院广东广州 510225

利用重叠延伸(SOEing)PCR技术,将罗非鱼病源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQ0910株SIP基因与GAPDH基因通过Linker序列融合,构建成为SIP-GAPDH融合基因.经BamH I/SalI双酶切后,定向克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达.结果显示,在37℃,IPTG浓度为0.1mmol/L,诱导5h时蛋白表达量最大.Western Blot验证了pET-32a-SIP-GAPDH融合基因的蛋白分子量为***-GAPDH融合基因的成功构建与原核表达将为研制罗非鱼源无乳链球菌亚单位疫苗提供理论依据.

关键词：罗非鱼无乳链球菌融合基因原核表达

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氟苯尼考在美国红鱼体内的药代动力学及组织分布研究

氟苯尼考在美国红鱼体内的药代动力学及组织分布研究

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中国水产学会鱼病专业委员会2013年学术研讨会

作者：黄月雄汤菊芬鲁义善简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室仲恺农业工程学院

目的:研究水温20±2℃、盐度为28的条件下,腹腔注射和口灌两种给药方式氟苯尼考在美国红鱼体内的组织分布和药代动力学特征。方法:单剂量10mg/(***)分别单次腹注和口灌甲砜霉素,取给药后9、15、30min和1、1.5、2、4、6、8、12、24... 详细信息

目的:研究水温20±2℃、盐度为28的条件下,腹腔注射和口灌两种给药方式氟苯尼考在美国红鱼体内的组织分布和药代动力学特征。方法:单剂量10mg/(***)分别单次腹注和口灌甲砜霉素,取给药后9、15、30min和1、1.5、2、4、6、8、12、24、48、72、96、120h美国红鱼的血浆、肌肉、肝脏和肾脏,各组织中的药物浓度用HPLC-MS/MS测定,所得药时数据用DAS3.0软件分析。结果:美国红鱼腹注氟苯尼考后血浆的药时数据符合一级吸收二室模型;血药达峰时间(tp)为0.5h,血药质量浓度峰值(Cmax)为15.47μg/mL,药时曲线下面积(AUC)分别394.10mg/(L.h),消除半衰期(t1/2β)为45.39h;口灌氟苯尼考后血浆的药时数据符合一级吸收一室模型;血药达峰时间(tp)为2h,血药质量浓度峰值(Cmax)为6.31μg/mL,药时曲线下面积(AUC)分别136.21mg/(L.h),消除半衰期(t1/2)为12.08h;氟苯尼考在组织中分布较广,注射和灌服给药肌肉、肝脏和肾脏的Cmax分别为2.73和5.12μg/g、9.90和5.44μg/g、6.83和9.10μg/g,tp分别为4和4、0.5和1.5 h、1.5和4h,AUC分别120.01和157.37 mg/(L.h)、105.66和162.32 mg/(L.h)、157.06和213.32mg/(L.h);氟苯尼考在美国红鱼体内消除速度较慢,注射和灌服给药肌肉、肝脏和肾脏的t1/2β分别为39.22和38.53h、7.42和27.9h、148.25和14.85h。结论:氟苯尼考注射给药在美国红鱼体内的吸收快于口灌给药,腹注给药氟苯尼考除在肝脏中的消除快于口灌给药外,在血浆、肌肉和肾脏中的消除均慢于口灌给药。

关键词：氟苯尼考美国红鱼药代动力学组织分布

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无乳链球菌诱导吉富罗非鱼分泌型免疫球蛋白M(sIgM)重链基因的克隆及表达

无乳链球菌诱导吉富罗非鱼分泌型免疫球蛋白M(sIgM)重链基因的克...

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2013年环北部湾高校研究生海洋论坛

作者：王培王蓓鲁义善蔡佳简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江 524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江 524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江 524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江 524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江 524088 仲恺农业工程学院广东广州 510225

以灭活的无乳链球菌诱导后的吉富罗非鱼为材料,构建其头肾SMART cDNA文库,应用同源性克隆和RACE-PCR技术克隆出吉富罗非鱼sIgM全长并对其进行生物信息学分析.sIgM基因cDNA全长为1921bp,开放阅读框(ORF)为1740bp,5'端非编码区(5'... 详细信息

以灭活的无乳链球菌诱导后的吉富罗非鱼为材料,构建其头肾SMART cDNA文库,应用同源性克隆和RACE-PCR技术克隆出吉富罗非鱼sIgM全长并对其进行生物信息学分析.sIgM基因cDNA全长为1921bp,开放阅读框(ORF)为1740bp,5'端非编码区(5'-UTR) 41bp,3'端非编码区(3'-UTR) 140bp,编码579个氨基酸.预测分子量(MW)为64.26ku,理论等电点(PI)为5.36.1-19个氨基酸为信号肽结构.系统进化树分析显示,吉富罗非鱼sIgM与牙鲆和军曹鱼的亲缘关系较近.sIgM基因有一个可变区(VH)、一个连接区段(JH)和四个恒定区,基本结构形式为Leader-VH-JH-CH1-CH2-CH3-CH4.利用RT-PCR技术对无乳链球菌诱导前后的吉富罗非鱼sIgM基因的组织分布状况进行分析,结果显示,在健康的罗非鱼体内,sIgM基因主要在罗非鱼头肾、脾脏、胸腺中表达,而经灭活的无乳链球菌免疫48h后,sIgM mRNA的表达量在所有组织中都发生上调.将罗非鱼sIgM基因恒定区序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET28-sIgM,诱导表达后确定最优条件为,37℃条件下,IPTG浓度为0.05mM时诱导4h蛋白表达量最大.纯化蛋白后,Western Blot分析,sIgM融合蛋白与鼠抗His-Tag发生特异结合,表明目的蛋白成功表达.

关键词：吉富罗非鱼免疫球蛋白M 基因克隆荧光定量PCR 原核表达

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凡纳滨对虾发光病病原的分离鉴定及防治措施

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江西水产科技 2013年第2期 6-11页

作者：邓传燕李色东陈贺黄郁葱湛江恒兴南方海洋科技有限公司广东湛江524073 广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

从广东某虾苗场患病虾苗体内分离到一株致病菌(D-1),回归感染实验证实该菌为虾苗发光病的致病菌。经BIOLOG细菌自动鉴定系统鉴定,该菌与哈维氏弧菌相似度最高(0.718),可利用的唯一碳源有乙酸、D-葡萄糖酸、麦芽糖、吐温、糊精等40种;采... 详细信息

从广东某虾苗场患病虾苗体内分离到一株致病菌(D-1),回归感染实验证实该菌为虾苗发光病的致病菌。经BIOLOG细菌自动鉴定系统鉴定,该菌与哈维氏弧菌相似度最高(0.718),可利用的唯一碳源有乙酸、D-葡萄糖酸、麦芽糖、吐温、糊精等40种;采用通用引物扩增出该菌的16S rRNA片段,并进行了序列分析,结果表明,该菌的16S rRNA序列与哈维氏弧菌同源性最高(99.84%),且在系统发育树上与其聚成一簇。药敏实验结果显示,在60种抗生素中菌株D-1仅对菌必治、复方新诺明、先锋必、亚胺培南、舒普深等12种药物敏感,对青霉素G、氨苄西林、米诺环素、米罗沙星等35种药物有抗性。防治实例表明,0.2 mg/L的舒普深能治愈发光率在10%以内的患病虾苗,治疗成活率为80%～90%。

关键词：凡纳滨对虾发光病哈维氏弧菌药敏实验

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环境16S rDNA和16S rcDNA序列分析湖光岩玛珥湖的浮游细菌组成

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广东海洋大学学报 2013年第3期33卷 1-9页

作者：秦青英曾永辉郭倩茹简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510000

通过提取环境总16S rDNA和总16S rRNA分别构建DNA克隆文库和反转录cDNA文库,并进行克隆测序和序列分析,探讨湖光岩玛珥湖浮游细菌和浮游活性细菌的遗传多样性。结果表明：构建两个水层的4个克隆文库,即1 m和10 m水层总菌的16S rDNA文库... 详细信息

通过提取环境总16S rDNA和总16S rRNA分别构建DNA克隆文库和反转录cDNA文库,并进行克隆测序和序列分析,探讨湖光岩玛珥湖浮游细菌和浮游活性细菌的遗传多样性。结果表明：构建两个水层的4个克隆文库,即1 m和10 m水层总菌的16S rDNA文库和总活性菌的16S rcDNA文库,共获得413条序列,分属15门、32目、52科;1 m水层的rDNA文库与rcDNA文库中Verrucomicrobia类群所占比例最大（36.8%和32.1%）,其次为Alphaproteobacteri（a 15.1%和16%）和Betaproteobacteri（a 17.9%和16%）;在10 m水层的2个文库中,Alphaproteobacteria类群均占绝对优势,分别为63.5%（rDNA）和43.8%（rcDNA）,其次为Verrucomicrobia（11.5%和14.3%）,其他细菌类群包括Acidobacteria、Chloroflexi、Firmicutes、待定门OD1、Planctomycetes、Spirochetes和Deltaproteobacteria,比例在0.8%~3.8%之间;在科的水平上,SAR11为湖光岩玛珥湖最为丰富的类群,占总克隆数的26.9%,其中在10 m水层的比例高达51.5%。序列同源性分析表明,绝大多数序列（89.8%）来源于新种,其中19.6%的序列可能来自于新属,69%的序列可能来自于全新的科。湖光岩玛珥湖浮游细菌群落结构较为独特,有大量的浮游细菌种类尚未获得相应的纯培养物,蕴含着丰富而新颖的微生物资源。

关键词：湖光岩玛珥湖浮游细菌浮游活性菌 16S rDNA 16S rRNA 系统发育分析遗传多样性

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溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB的原核表达及条件优化和纯化

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中国农学通报 2013年第11期29卷 55-59页

作者：周泽军庞欢瑛丁燏简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

为研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901转运蛋白TolB作为疫苗候选抗原的可能性,根据已发表的溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB序列(JQ846501),设计1对带酶切位点的引物,PCR扩增tolB基因,然后经酶切、连接等步骤,构建tolB基因的原核表... 详细信息

为研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901转运蛋白TolB作为疫苗候选抗原的可能性,根据已发表的溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB序列(JQ846501),设计1对带酶切位点的引物,PCR扩增tolB基因,然后经酶切、连接等步骤,构建tolB基因的原核表达载体pET-TolB,并对其IPTG浓度、诱导时间、温度、洗脱浓度进行优化,以期获得较大量的目的蛋白。结果表明:IPTG诱导后经SDS-PAGE与Western-blot分析,成功表达了溶藻弧菌HY9901株TolB蛋白,分子量与预期相符,且表达的蛋白以包涵体的形式存在;TolB蛋白在大肠杆菌中诱导表达的优化条件为:0.2mmol/L IPTG,37℃诱导4h;最佳咪唑洗脱浓度为400mmol/L。这些结果为进一步研究目的蛋白的免疫原性和疫苗制备奠定基础。

关键词：溶藻弧菌 tolB基因原核表达优化纯化

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甲砜霉素在红笛鲷体内的组织分布和药代动力学研究

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中国兽药杂志 2013年第11期47卷 31-36页

作者：秦青英汤菊芬黄郁葱简纪常黄月雄廖建萌广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省湛江市质量计量监督检测所广东湛江524022

研究腹腔注射和口灌给药方式下甲砜霉素在红笛鲷体内的组织分布和药代动力学特征。甲砜霉素单剂量10 mg/(***)分别腹注和口灌红笛鲷,给药后取血浆、肌肉、肝脏和肾脏,各组织中药物浓度用HPLC-MS/MS测定,所得药时数据用DAS3.0软件分析。... 详细信息

研究腹腔注射和口灌给药方式下甲砜霉素在红笛鲷体内的组织分布和药代动力学特征。甲砜霉素单剂量10 mg/(***)分别腹注和口灌红笛鲷,给药后取血浆、肌肉、肝脏和肾脏,各组织中药物浓度用HPLC-MS/MS测定,所得药时数据用DAS3.0软件分析。结果显示:两种给药方式下红笛鲷血浆药时数据均符合一级吸收二室模型;血药达峰时间(t p)分别为2.39和4.51 h,血药浓度峰值(C max)分别为5.80和5.06μg/mL,消除半衰期(t1/2β)分别为7.25和50.09 h。腹注和口灌给药肌肉、肝脏和肾脏的C max分别为2.504和2.678μg/g、4.612和4.393μg/g、12.464和7.509μg/g,t p分别为6.0和4.0 h、2.0和4.0 h、1.5和4.0 h;甲砜霉素在红笛鲷体内消除速度较慢,肌肉、肝脏和肾脏的t1/2β分别为37.168和33.519 h、22.499和33.649 h、19.672和8.673 h。结果表明:腹注给药方式下甲砜霉素在红笛鲷体内的吸收快于口灌给药,在血浆和肝脏中的消除快于口灌给药,在肌肉和肾脏中的消除则慢于口灌给药。

关键词：甲砜霉素红笛鲷药代动力学组织分布

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三种弧菌交叉抗原的免疫效果研究

三种弧菌交叉抗原的免疫效果研究

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中国水产学会鱼病专业委员会2013年学术研讨会

作者：陈立明庞欢瑛鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室仲恺农业工程学院

用石斑鱼抗溶藻弧菌血清对溶藻弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌的全细菌蛋白进行免疫蛋白质组学研究,分别筛选得到56、58、48种交叉抗原。对三种弧菌的转印图谱进行配对分析,发现6个交叉抗原,分别为外膜蛋白W(OMPW),ABC转运结合蛋白(ABC),... 详细信息

用石斑鱼抗溶藻弧菌血清对溶藻弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌的全细菌蛋白进行免疫蛋白质组学研究,分别筛选得到56、58、48种交叉抗原。对三种弧菌的转印图谱进行配对分析,发现6个交叉抗原,分别为外膜蛋白W(OMPW),ABC转运结合蛋白(ABC),二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLD),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK),琥珀酸脱氢酶(SDHA),延伸因子T(sEF-Ts)。从胶面提取蛋白DLD,ABC,EF-Ts,腹腔免疫斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides),4周后分别用哈氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌攻毒,结果表明:DLD免疫组对溶藻弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌的保护率分别为70%、60%、70%,与对照组相比存在显著差异(p<0.05)。EF-Ts和ABC免疫组对溶藻弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌只有低的保护率。本研究筛选得到的交叉保护抗原将为弧菌疫苗的制备提供候选抗原。

关键词：交叉抗原弧菌二氢硫辛酰胺脱氢酶疫苗

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急性氨氮胁迫对卵形鲳鲹呼吸代谢的影响

急性氨氮胁迫对卵形鲳鲹呼吸代谢的影响

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2013年全国海水养殖学术研讨会

作者：李金兰陈刚张健东黄建盛王忠良周晖孙卫陈亚敏广东海洋大学水产学院湛江524025 广东海洋大学水产学院湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 广东省普通高校南海水产经济动物增养殖重点实验室湛江524025

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急性氨氮胁迫对卵形鲳鲹呼吸代谢的影响

急性氨氮胁迫对卵形鲳鲹呼吸代谢的影响

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2013年环北部湾高校研究生海洋论坛

作者：李金兰陈刚张健东黄建盛王忠良周晖孙卫陈亚敏广东海洋大学水产学院湛江 524025 广东海洋大学水产学院湛江 524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江 524025 广东省普通高校南海水产经济动物增养殖重点实验室湛江 524025

研究了卵形鲳鲹在不同氨氮浓度下的呼吸生理和能量代谢的变化及其对急性氨氮胁迫的响应.结果表明:随NH3-N浓度升高,卵形鲳鲹MO2、RE、PA均呈增大趋势,其中T2、T3组显著高于对照组(P＜0.05),各处理组间PA均有显著性差异(P＜0.05);T2、T3... 详细信息

研究了卵形鲳鲹在不同氨氮浓度下的呼吸生理和能量代谢的变化及其对急性氨氮胁迫的响应.结果表明:随NH3-N浓度升高,卵形鲳鲹MO2、RE、PA均呈增大趋势,其中T2、T3组显著高于对照组(P＜0.05),各处理组间PA均有显著性差异(P＜0.05);T2、T3组O∶N ratio显著高于对照组(P＜0.05),而RN、AQ及PEP则显著下降(P＜0.05);LG含量均随NH3-N升高而显著下降(P＜0.05);LD无明显变化(P＞0.05).结论:0.003～0.149mg/LNH3-N范围(TAN0.08～3.07mg/L)在卵形鲳鲹可耐受的NH3-N范围内,能明显刺激卵形鲳鲹增加耗氧率,提高能量代谢速率,降低排氨率,对其没有产生明显毒性作用;在此浓度范围内,卵形鲳鲹主要依靠蛋白质和脂肪作为氧化基质供能,但随着NH3-N浓度的升高,卵形鲳鲹逐渐降低蛋白质的供能比例,提高脂肪和糖类的氧化比例,增加的糖类能量主要用于大脑和鳃应对氨氮胁迫的能耗需要.

关键词：卵形鲳鲹呼吸生理能量代谢急性氨氮胁迫

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