检索结果-内蒙古大学图书馆

广东海洋大学学报 2012年第1期32卷 1-10页

作者：周晴简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510000

应用Real-time PCR技术,研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、苯酚、硫酸铜刺激红笛鲷(Lutjanussanguineus)后非特异性细胞毒性细胞受体(NCCRP-1)基因在不同组织里的表达差异。结果发现,LPS刺激红笛鲷24 h后NCCRP-1在红笛鲷头肾、脾脏... 详细信息

应用Real-time PCR技术,研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、苯酚、硫酸铜刺激红笛鲷(Lutjanussanguineus)后非特异性细胞毒性细胞受体(NCCRP-1)基因在不同组织里的表达差异。结果发现,LPS刺激红笛鲷24 h后NCCRP-1在红笛鲷头肾、脾脏、胸腺、肝脏、心脏、脑、肌肉和肠组织中均有表达,其中头肾表达量最高,脾脏次之,然后依次是肝脏、脑、肌肉、胸腺和肠,心脏表达量最少。LPS、苯酚和CuSO4刺激红笛鲷后,随着刺激时间的增长,NCCRP-1表达量在各组织达到峰值的时间不同。以头肾为模式组织,RT-PCR的结果显示,红笛鲷NCCRP-1在LPS、苯酚和CuSO4的刺激下的表达模式相似,随着时间的增加NCCRP-1表达量逐渐增加,分别在24、9、12 h处达到最高,达到对照组的52、30、24倍左右,之后表达量开始下降。免疫组织化学表明,NCCRP-1只在头肾、脾脏和胸腺的特定细胞中表达。

关键词：红笛鲷 NCCRP-1 基因表达脂多糖苯酚硫酸铜免疫组织化学荧光定量PCR

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草鱼呼肠孤病毒vp5基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测

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广东海洋大学学报 2012年第3期32卷 42-48页

作者：谢吉国闫秀英简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510000

根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性... 详细信息

根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性和毒性检测。PCR、酶切以及测序表明,pGBKT7-vp5重组诱饵载体构建成功。自激活性和毒性检测显示,阳性重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold和阴性对照菌株pGBKT7/Y2HGold在SD/-Trp平板上出现大小相一致的乳白色菌落,且在SD/-Trp/X-α-Gel、SD/-Trp/AbA+/X-α-Gel平板上生长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/-Ade/-His无菌落出现。表明重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold表达的融合蛋白激活了报告基因AUR1-C和MEL1,没有激活报告基因ADE2和HIS3并且对宿主菌无毒性。该重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统进一步筛选cDNA文库中与其相互作用的蛋白。

关键词：草鱼呼肠孤病毒酵母双杂交系统诱饵载体自激活性

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罗非鱼源无乳链球菌培养基及培养条件的优化

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广东海洋大学学报 2012年第3期32卷 49-54页

作者：陈贺吴灶和王蓓黄郁葱鲁义善简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510225

研究无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQGY08的培养与生长特性,探讨脑心浸液(Brian Heart Infusion,BHI)培养基的营养因子、初始pH值、溶氧、温度等因素对无乳链球菌生长的影响,并采用正交实验法对无乳链球菌培养基营养因子添加量... 详细信息

研究无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQGY08的培养与生长特性,探讨脑心浸液(Brian Heart Infusion,BHI)培养基的营养因子、初始pH值、溶氧、温度等因素对无乳链球菌生长的影响,并采用正交实验法对无乳链球菌培养基营养因子添加量进行优化。结果表明,无乳链球菌生长的最适初始pH为7～8,培养温度为28～37℃,振荡转速为180～200 r/min。在BHI培养基中添加20 mg/mL的酵母粉和2 mg/mL的葡萄糖即可在对数期获得最大细菌量。

关键词：无乳链球菌培养基培养条件优化

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无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫效果

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广东海洋大学学报 2012年第6期32卷 50-56页

作者：陈贺吴灶和王蓓鲁义善黄郁葱简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 湛江恒兴南方海洋科技有限公司广东湛江524073 仲恺农业工程学院广东广州510225

制备无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）临床分离株ZJ02的灭活疫苗，采用注射和浸泡2种方法，研究疫苗对吉富罗非鱼（Oreochromisniloticus）的免疫保护效果和血清抗体效价。注射组以4个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫罗非鱼，浸... 详细信息

制备无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）临床分离株ZJ02的灭活疫苗，采用注射和浸泡2种方法，研究疫苗对吉富罗非鱼（Oreochromisniloticus）的免疫保护效果和血清抗体效价。注射组以4个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫罗非鱼，浸泡组以相同免疫剂量的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠3种佐剂免疫罗非鱼。结果显示，无乳链球菌疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性，与对照组相比，免疫组血清中的抗体效价水平均显著性提高（P〈0．05），注射组和浸泡组的抗体效价最高分别达到1：256和1：128；注射组中不同剂量的疫苗免疫组免疫保护率较高，高浓度组可达到95％，浸泡组中使用3种佐剂的免疫组免疫保护率分别为59％、64％、55％。表明无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼具有很好的免疫保护性，免疫剂量在5×10^8～4×10^8cfu／mL之间对注射免疫效果有显著性影响，消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠对浸泡免疫效果具有不同的免疫保护率。

关键词：无乳链球菌疫苗罗非鱼免疫保护率

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南极冰藻Chlamydomonas ***-L S-腺苷同型半胱氨酸水解酶基因的克隆及其生物信息学分析

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中国水产科学 2011年第6期18卷 1234-1242页

作者：王金慧丁燏简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025

S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase,SAHH)是一种细胞内广泛存在的酶,在调节生物体转甲基化反应中占据重要地位。本研究通过RT-PCR及RACE-PCR技术克隆了南极冰藻(Chlamydomonas ***-L)S-腺苷同型半胱氨酸水... 详细信息

S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase,SAHH)是一种细胞内广泛存在的酶,在调节生物体转甲基化反应中占据重要地位。本研究通过RT-PCR及RACE-PCR技术克隆了南极冰藻(Chlamydomonas ***-L)S-腺苷同型半胱氨酸水解酶全序列,命名为ICE-LSAHH。ICE-LSAHH全长1 844 bp,包括5′非编码区36 bp,3′非编码区344 bp,含有一个较长的poly(A)尾。开放阅读框1 461 bp,编码487个氨基酸。根据推导的氨基酸序列预测其分子量为53.0 kD,理论等电点为5.16。SignalP 3.0、TMHMM Server v.2.0、NetNGlyc 1.0和NetPhos 2.0预测结果显示,ICE-LSAHH蛋白不存在信号肽与跨膜区,含有1个N-糖基化位点及23个磷酸化位点。利用ClastalX 2.0及MEGA 5.0软件,以邻位相连法对南极冰藻及其他物种SAHH构建系统进化树,结果显示,ICE-LSAHH与杜氏盐藻(Dunaliella salina)、莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、小球藻(Chlorella variabilis)等有较近亲缘关系。利用SWISS-MODEL程序和PyMOL Viewer软件成功模拟了ICE-LSAHH蛋白亚基的三维结构,该结构包括20个α-螺旋和12个β-折叠,且存在3个结构域:N端底物结合域、NAD结合域和C端域。可见,SAHH基因存在于南极冰藻并进行了有效的表达,该蛋白定位于细胞质,进一步证实SAHH是一个进化上比较保守的蛋白。

关键词： Chlamydomonas sp. ICE-L S-腺苷同型半胱氨酸水解酶克隆三维结构生物信息学

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湖光岩玛珥湖可培养浮游细菌的BOX-PCR图谱及生物多样性分析

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微生物学通报 2011年第7期38卷 988-999页

作者：纪建达吴灶和曾永辉董亭亭鲁义善简纪常广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东海洋大学水产学院广东湛江524025

玛珥湖是一类具有独特地质构造特征的火山口湖泊,目前国内外对玛珥湖内微生物多样性的研究还鲜有报道。为了解具有典型玛珥特征的湖光岩湖泊中可培养浮游细菌的种群资源特征,采用盒式PCR(BOX-PCR)筛选技术,通过通用贫营养和原位湖水培... 详细信息

玛珥湖是一类具有独特地质构造特征的火山口湖泊,目前国内外对玛珥湖内微生物多样性的研究还鲜有报道。为了解具有典型玛珥特征的湖光岩湖泊中可培养浮游细菌的种群资源特征,采用盒式PCR(BOX-PCR)筛选技术,通过通用贫营养和原位湖水培养基研究在冬夏两季各水层内获得的可培养细菌种群的差异。结果表明:不同培养基在不同水层上表现的细菌数量的变化相一致,为夏季的5 m>1 m>13 m,冬季的1 m>5 m>13 m,变形菌占据优势地位,其它为放线菌、厚壁菌和拟杆菌;两类培养基上所获培养菌BOX-PCR图谱的多样性相似,但菌群结构不同;而细菌多样性在季节上的变化表现为冬季高于夏季,这与相关湖泊内细菌微生物多样性在夏季会发生减少的特点相似;相同季节同一水层上不同培养基上获得的培养菌门类不同,表明此类通用性培养基在培养该环境微生物中的局限。研究的结果为探讨此类型湖泊微生物多样性与环境的关系及分离该环境下特定微生物菌株提供参考。

关键词：湖光岩玛珥湖细菌多样性可培养性 BOX-PCR

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海水氨氧化细菌菌种保存方法的研究

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水产科学 2011年第8期30卷 471-475页

作者：鲁义善郭青吴灶和简纪常钱鸣亮广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025

将筛选得到的一株海水氨氧化细菌,振荡培养至氨氧化细菌对数增长期末期,去除珊瑚砂后对菌液进行分装保存,以研究其在室温、4℃、-18℃及-80℃的保存条件下存活率的变化。试验结果表明,该氨氧化细菌菌液不宜于-18℃保存,室温下保存不宜超... 详细信息

将筛选得到的一株海水氨氧化细菌,振荡培养至氨氧化细菌对数增长期末期,去除珊瑚砂后对菌液进行分装保存,以研究其在室温、4℃、-18℃及-80℃的保存条件下存活率的变化。试验结果表明,该氨氧化细菌菌液不宜于-18℃保存,室温下保存不宜超过3个月,4℃和-80℃,保存不宜超过6个月。10%的甘油对该氨氧化细菌有抗冻保护作用。但该氨氧化细菌在以珊瑚砂为载体进行保存时,4℃和-80℃,保存15个月后仍能转接成活,且硝化活力无明显下降。

关键词：海水氨氧化细菌保种存活率温度载体

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饲料中添加三聚氰胺对吉富罗非鱼生长、免疫指标及肌肉残留量的影响

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饲料工业 2011年第20期32卷 13-17页

作者：汤菊芬吴灶和简纪常鲁义善王蓓广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省湛江市524025

将三聚氰胺分别按0、500、2 0005、000、10 000 mg/kg的比例添加于基础饲料中,喂养初始体重为(30.14±0.22)g的吉富罗非鱼28 d。通过测定罗非鱼的增重率、血清免疫指标和三聚氰胺在肌肉中残留量等指标,研究三聚氰胺对罗非鱼生长、... 详细信息

将三聚氰胺分别按0、500、2 0005、000、10 000 mg/kg的比例添加于基础饲料中,喂养初始体重为(30.14±0.22)g的吉富罗非鱼28 d。通过测定罗非鱼的增重率、血清免疫指标和三聚氰胺在肌肉中残留量等指标,研究三聚氰胺对罗非鱼生长、免疫功能及肌肉残留量的影响。结果显示:饲料中添加不同剂量的三聚氰胺会降低吉富罗非鱼的增重率,在第21 d和第28 d,10 000 mg/kg组吉富罗非鱼的增重率显著低于同期对照组(P<0.05);三聚氰胺对吉富罗非鱼血清中的LZM活力、SOD活力无显著影响(P>0.05),但对AKP活力有影响,三聚氰胺对吉富罗非鱼血清中的AKP活力的影响呈先升高后降低趋势,第7 d和14 d各试验组较对照组有所提高,但影响不显著(P<0.05);在第21 d和第28 d,所有试验组吉富罗非鱼的AKP活性低于同期对照组,5 000 mg/kg和10 000 mg/kg显著低于同期对照组(P<0.05)。从第7 d开始,4个试验组吉富罗非鱼肌肉中均能检测到三聚氰胺残留,三聚氰胺在吉富罗非鱼肌肉中的残留量与三聚氰胺在饲料中的添加剂量成正相关关系。

关键词：三聚氰胺吉富罗非鱼生长免疫指标肌肉残留量

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南极衣藻(Chlamydomonas ***-L)谷胱甘肽还原酶基因的原核表达及其条件优化

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海洋与湖沼 2011年第6期42卷 817-821页

作者：刘莹丁燏简纪常吴灶和缪锦来广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 国家海洋局第一海洋研究所海洋生物活性物质重点实验室青岛266061

采用RT-PCR技术克隆南极衣藻GR基因ORF全长cDNA,然后经酶切、连接等步骤构建其原核表达载体;并对其表达的诱导时间、IPTG浓度、温度进行了优化,以期获得较大量的酶蛋白。结果表明,将构建的原核表达载体pET-GR导入大肠杆菌BL21,可以高效... 详细信息

采用RT-PCR技术克隆南极衣藻GR基因ORF全长cDNA,然后经酶切、连接等步骤构建其原核表达载体;并对其表达的诱导时间、IPTG浓度、温度进行了优化,以期获得较大量的酶蛋白。结果表明,将构建的原核表达载体pET-GR导入大肠杆菌BL21,可以高效表达融合蛋白;且表达的蛋白均以包涵体的形式存在;经SDS-PAGE电泳结果显示,获得的目的蛋白分子量为52.2kDa,符合预期分子量;GR蛋白在大肠杆菌中诱导表达优化条件为,1.0mmol/L的IPTG,28℃诱导3h。这些结果为进一步深入研究该基因的特性与功能奠定了基础。

关键词：南极衣藻Chlamydomonas sp.ICE-L 谷胱甘肽还原酶原核表达诱导条件冰藻

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注射黄芪多糖对吉富罗非鱼热应激蛋白基因表达的影响

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淡水渔业 2011年第6期41卷 15-18页

作者：汤菊芬吴灶和简纪常鲁义善王蓓广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广州510225

将黄芪多糖(APS)用无菌生理盐水配制成2 mg/mL(低剂量)、20 mg/mL(高剂量)两种针剂,腹腔注射吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)。分别在注射后0 h、24 h、48 h、72 h和96 h采样提取吉富罗非鱼鳃、头肾、肝脏和脾脏组织中的总RNA,并反... 详细信息

将黄芪多糖(APS)用无菌生理盐水配制成2 mg/mL(低剂量)、20 mg/mL(高剂量)两种针剂,腹腔注射吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)。分别在注射后0 h、24 h、48 h、72 h和96 h采样提取吉富罗非鱼鳃、头肾、肝脏和脾脏组织中的总RNA,并反转录成cDNA,利用Real-time PCR方法对不同组织中的热应激蛋白(hsp70)基因表达进行定量分析。结果显示,在24 h时,高剂量组吉富罗非鱼鳃、头肾和肝脏三个组织中hsp70基因的表达量显著高于同期对照组(P<0.05),之后表达量快速降低,低剂量组hsp70基因表达量仅在脾脏中有上调。实验表明,APS可通过诱导吉富罗非鱼hsp70基因表达来保护免疫细胞免受应激损伤,从而增强鱼体抵抗病原菌的能力。

关键词：黄芪多糖吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus) 热应激蛋白70(hsp70)基因

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