检索结果-内蒙古大学图书馆

溶藻弧菌HY9901鞭毛蛋白flaC基因的克隆和序列分析及真核表达质粒的构建

吉首大学学报（自然科学版） 2010年第3期31卷 95-100页

作者：梁海鹰夏立群吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088

参照GenBank上登录的副溶血弧菌鞭毛蛋白flaC基因序列设计引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的flaC全长基因,序列分析结果显示该基因为1 155 bp,编码384个氨基酸.与GenBank中其他弧菌的同源基因序列比对显示,溶藻弧菌flaC基因与副溶血弧菌f... 详细信息

参照GenBank上登录的副溶血弧菌鞭毛蛋白flaC基因序列设计引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的flaC全长基因,序列分析结果显示该基因为1 155 bp,编码384个氨基酸.与GenBank中其他弧菌的同源基因序列比对显示,溶藻弧菌flaC基因与副溶血弧菌flaC基因的同源性最高(87%).将该基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,获得带溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因的真核表达重组质粒pcDNA-flaC,为其DNA疫苗的进一步研究奠定了基础.

关键词：溶藻弧菌 flaC基因基因克隆序列分析重组真核表达质粒

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摄食水平对卵形鲳鲹幼鱼的生长和能量收支的影响

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广东海洋大学学报 2010年第1期30卷 18-23页

作者：黄建盛陈刚张健东施钢汤保贵周晖潘传豪广东海洋大学水产学院南海水产经济动物增养殖重点实验室广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025

水温28±1℃条件下,投喂人工配合饲料,研究摄食水平1%、2%、3%、4%、5%(每日投喂量占初始实验鱼湿重的质量百分比)及饱食对卵形鲳鲹幼鱼(初始体重5.77±0.45g)生长及能量收支的影响。结果表明,卵形鲳鲹幼鱼特定生长率、转化效... 详细信息

水温28±1℃条件下,投喂人工配合饲料,研究摄食水平1%、2%、3%、4%、5%(每日投喂量占初始实验鱼湿重的质量百分比)及饱食对卵形鲳鲹幼鱼(初始体重5.77±0.45g)生长及能量收支的影响。结果表明,卵形鲳鲹幼鱼特定生长率、转化效率、摄食率随着摄食水平的提高而增长,摄食水平达4%时干重特定生长率与饱食组差异无显著性(P>0.05),摄食水平达5%时,湿重、蛋白质和能量生长率与饱食组差异无显著性(P>0.05);摄食水平达4%时能值转化效率与饱食组差异无显著性(P>0.05),摄食水平达5%时,干重、蛋白质转化效率与饱食组差异无显著性(P>0.05);摄食水平达2%时干重、蛋白质表观效率与饱食组差异无显著性(P>0.05),摄食水平达4%时,能量表观效率与饱食组差异无显著性(P>0.05)。生长能分配率随摄食水平升高而显著增加(P<0.05),代谢能、排粪能及排泄能分配率的变化则相反。建立了6种摄食水平条件下卵形鲳鲹幼鱼的能量收支方程。

关键词：卵形鲳鲹摄食水平生长能量收支

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红笛鲷NCCRP-1基因原核表达条件的优化及纯化

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广东海洋大学学报 2010年第6期30卷 25-30页

作者：魏世娜王蓓鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

通过克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)非特异性毒性细胞受体蛋白-1(nonspecific cytotoxic cell receptor protein-1,NCCRP-1)成熟肽基因序列,然后与载体连接构建pET21a-NCCRP融合蛋白表达载体,将其转入大肠杆菌BL21进行诱导表达并优化条件。SDS-PAGE分析表明,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度0.8 mmol/L、37℃条件下培养3 h后表达量最大,分子大小与预期值相符,融合蛋白主要以包涵体形式高效表达,通过HisTrap HP柱子使其得到进一步纯化;Western blot分析表明,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,说明获得该表达产物。

关键词：红笛鲷 NCCRP-1基因原核表达条件优化纯化

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基于pufM基因的乌梁素海富营养化湖区好氧不产氧光合细菌系统发育多样性分析

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微生物学通报 2010年第8期37卷 1138-1145页

作者：何一平曾永辉袁博刘惠荣冯福应内蒙古农业大学生命科学学院应用与环境微生物研究所内蒙古呼和浩特010018 广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025

好氧不产氧光合细菌(AAPB)的多样性在海洋中已经广泛研究,但在富营养化湖泊中却研究甚少。通过构建和分析AAPB光合中心合成中的关键基因pufM克隆文库,以期揭示乌梁素海富营养化湖区AAPB分布及其系统发育多样性,探讨其在富营养化湖泊中... 详细信息

好氧不产氧光合细菌(AAPB)的多样性在海洋中已经广泛研究,但在富营养化湖泊中却研究甚少。通过构建和分析AAPB光合中心合成中的关键基因pufM克隆文库,以期揭示乌梁素海富营养化湖区AAPB分布及其系统发育多样性,探讨其在富营养化湖泊中的功能和作用。对乌梁素海红圪卜湖区水体文库中的52个克隆子进行分析,产生了28个OTU,文库覆盖度达到71.4%,反映出文库有较好的代表性。同源性和系统发育分析结果表明,乌梁素海红圪卜湖区AAPB有较高的多样性,与我们之前所发现的同一湖区总细菌多样性较低形成鲜明对比。所获得的序列分属7个亚群,即γ-Proteobacteria(44.2%,含Group-1,-2和-3共3个亚群)、β-Proteobacteria(21.2%)、Rhodobacter-like(7.69%)及2个未知亚群unknown Group-1(21.2%)和Group-2(5.77%)。其中γ-Proteobacteria占到总克隆的44.2%,在低盐的乌梁素海环境中出现高比例的γ-Proteobacteria之前并未见类似报道,并且乌梁素海中存在一些可能是富营养化湖泊特有的AAPB。这表明AAPB可能在富营养化湖泊生态系统的维持和稳定中有重要作用。

关键词：好氧不产氧光合细菌 pufM 群落结构系统发育分析多样性

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溶藻弧菌鞭毛蛋白DNA疫苗对红鳍笛鲷的免疫保护研究

溶藻弧菌鞭毛蛋白DNA疫苗对红鳍笛鲷的免疫保护研究

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2010年中国水产学会学术年会

作者：梁海鹰吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室

将溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,成功构建真核表达质粒pcDNA-flaC,将该质粒肌肉注射红鳍笛鲷。采用PCR和RT-PCR,检测该真核表达质粒在红笛鲷组织内的分布、表达。PCR结果显示:免疫接种7 d和28 d,注射... 详细信息

将溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,成功构建真核表达质粒pcDNA-flaC,将该质粒肌肉注射红鳍笛鲷。采用PCR和RT-PCR,检测该真核表达质粒在红笛鲷组织内的分布、表达。PCR结果显示:免疫接种7 d和28 d,注射点周围肌肉、鳃、肾脏、肝脏和脾脏都存在质粒分布;RT-PCR检测结果显示:免疫接种后第7 d、14 d和第28 d,红鳍笛鲷不同组织内均有目的基因表达。ELISA检测抗体效价结果表明:鱼血清内产生了抗FlaC的抗体,表明DNA疫苗免疫后鱼体表达了目的蛋白,并诱导产生了相应抗体。攻毒实验表明免疫后的红笛鲷能较好地抵抗致病性溶藻弧菌的感染。这一研究表明质粒pcDNA-flaC可能是抵抗溶藻弧菌感染的有效的疫苗候选物。

关键词：溶藻弧菌 DNA疫苗红鳍笛鲷免疫保护率

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草鱼非特异性毒性细胞受体蛋白1基因的克隆和原核表达

草鱼非特异性毒性细胞受体蛋白1基因的克隆和原核表达

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2010年中国水产学会学术年会

作者：代礼平简纪常吴灶和鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室

本研究根据NCCRP-1基因序列保守区域设计简并性引物,应用RT-PCR和RACE技术克隆了草鱼NCCRP-1基因全长,并进行序列的生物信息学分析。结果表明,NCCRP-1基因全长900bp,其中5'非编码区和3'非编码区分别为3bp和183bp;714bp的编码区... 详细信息

本研究根据NCCRP-1基因序列保守区域设计简并性引物,应用RT-PCR和RACE技术克隆了草鱼NCCRP-1基因全长,并进行序列的生物信息学分析。结果表明,NCCRP-1基因全长900bp,其中5'非编码区和3'非编码区分别为3bp和183bp;714bp的编码区共编码237个氨基酸残基。根据推测的氨基酸序列计算,NCCRP-1的分子量为27.335Kda,理论等电点为5.63。BLAST分析显示草鱼的NCCRP-1与鲤鱼等鲈形目鱼种的同源性较高。将草鱼NCCRP-1的成熟多肽连接到原核表达载体pET-32a上进行原核表达,结果显示重组融合蛋白在分子量约29kDa处有一明显表达带;以鼠抗His—tag单抗为一抗,辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG为二抗进行Western blot分析,结果表明显色带分子量大小相符,为进一步研究其功能特性奠定基础。

关键词：草鱼(Ctenopharyngodon idellus) NCCRP-1 克隆原核表达

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南极衣藻ICE-L谷胱甘肽还原酶基因的克隆表达与定量分析

南极衣藻ICE-L谷胱甘肽还原酶基因的克隆表达与定量分析

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2010年中国水产学会学术年会

作者：刘莹丁燏吴灶和简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室

由于南极独特的气候及地理特征,形成了一个酷寒、强辐射、低光照的环境,生存于其中的微藻对这种独特的环境具有相应的适应机制。谷胱甘肽还原酶（GR）是生物体内重要的抗氧化酶之一,在极端环境的适应中具有重要地位。本研究对南极衣藻（... 详细信息

由于南极独特的气候及地理特征,形成了一个酷寒、强辐射、低光照的环境,生存于其中的微藻对这种独特的环境具有相应的适应机制。谷胱甘肽还原酶（GR）是生物体内重要的抗氧化酶之一,在极端环境的适应中具有重要地位。本研究对南极衣藻（Chlamydomonas ***-L）GR的全长cDNA进行克隆,并构建了该基因的原核表达载体;同时,分析了GR基因在不同盐度和CdCl作用下的表达情况。

关键词：南极衣藻谷胱甘肽还原酶基因克隆表达荧光定量分析

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超声波平板法检测溶藻弧菌HY9901生物被膜的研究

超声波平板法检测溶藻弧菌HY9901生物被膜的研究

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中国南方十六省（市、区）水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会

作者：王蓓吴灶和简纪常鲁义善汤菊芬黄郁葱广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室

生物被膜存在广泛、难以发现并且具有处理困难等特点,对养殖业具有潜在的危害,并能引起水产品安全问题。本文以溶藻弧菌为研究对象,对定量检测生物被膜的超声波平板法进行条件优化,对优化的超声波平板法与平板擦拭法进行比较,并采用银... 详细信息

生物被膜存在广泛、难以发现并且具有处理困难等特点,对养殖业具有潜在的危害,并能引起水产品安全问题。本文以溶藻弧菌为研究对象,对定量检测生物被膜的超声波平板法进行条件优化,对优化的超声波平板法与平板擦拭法进行比较,并采用银染法进行验证。结果表明:优化的超声波平板法的最佳条件为:超声波功率120W,处理时间14min,处理温度25℃,优于平板擦拭法。

关键词：生物被膜溶藻弧菌超声波平板法优化条件

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8溶藻弧菌HY9901生物被膜的特性与相关基因的研究

8溶藻弧菌HY9901生物被膜的特性与相关基因的研究

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中国南方十六省（市、区）水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会

作者：王蓓吴灶和简纪常鲁义善蔡双虎汤菊芬广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室

建立溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的生物被膜(BF)体外形成模型,用银染法观察检测溶藻弧菌HY9901生物被膜的形成;同时研究温度和消毒剂对HY9901的游离(FC)细菌和具有生物被膜(BF)的细菌的影响。实验结果表明,溶藻弧菌HY9901株可以形成... 详细信息

建立溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的生物被膜(BF)体外形成模型,用银染法观察检测溶藻弧菌HY9901生物被膜的形成;同时研究温度和消毒剂对HY9901的游离(FC)细菌和具有生物被膜(BF)的细菌的影响。实验结果表明,溶藻弧菌HY9901株可以形成BF,而非致病株ZJ017不形成BF。HY9901株的BF细菌经85℃30min、-20℃80d、0.01%新洁尔灭处理后均有存活,而游离(FC)细菌则无存活细菌。根据已发表的哈氏弧菌LuxR基因核酸序列,设计并合成了一对引物,对溶藻弧菌HY9901株的基因组进行PCR扩增和测序分析,扩增出了520bp的核苷酸片段,该片段与已发表的哈氏弧菌Lux L基因的同源性达95%,而非致病性菌株ZJ017株则扩增不出该基因片段。

关键词：溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus) 生物被膜密度感应系统 Lux R基因

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超声波平板法检测溶藻弧菌HY9901生物被膜的研究

超声波平板法检测溶藻弧菌HY9901生物被膜的研究

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中国南方十六省(市、区)水产学会渔业学术论坛暨第二十六次学术交流大会

作者：王蓓吴灶和简纪常鲁义善汤菊芬黄郁葱广东海洋大学水产学院，广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室，广东湛江，524025

生物被膜存在广泛、难以发现并且具有处理困难等特点，对养殖业具有潜在的危害，并能引起水产品安全问题。本文以溶藻弧菌为研究对象，对定量检测生物被膜的超声波平板法进行条件优化，对优化的超声波平板法与平板擦拭法进行比较。并采... 详细信息

生物被膜存在广泛、难以发现并且具有处理困难等特点，对养殖业具有潜在的危害，并能引起水产品安全问题。本文以溶藻弧菌为研究对象，对定量检测生物被膜的超声波平板法进行条件优化，对优化的超声波平板法与平板擦拭法进行比较。并采用银染法进行验证。结果表明：优化的超声波平板法的最佳条件为：超声波功率120W，处理时间14min，处理温度25℃，优于平板擦拭法。

关键词：生物被膜溶藻弧菌超声波平板法优化条件

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