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广东海洋大学学报 2009年第6期29卷 50-54页

作者：张旭丽简纪常王蓓蔡双虎黄郁葱鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

研究了海豚链球菌(Streptococcus iniae)ZJMX04的培养与生长特性,探讨培养基的pH值、气体环境、温度等因素对海豚链球菌生长的影响,并采用正交实验法对海豚链球菌培养基生长因子添加量进行优化。结果表明,海豚链球菌培养基的最适pH为7... 详细信息

研究了海豚链球菌(Streptococcus iniae)ZJMX04的培养与生长特性,探讨培养基的pH值、气体环境、温度等因素对海豚链球菌生长的影响,并采用正交实验法对海豚链球菌培养基生长因子添加量进行优化。结果表明,海豚链球菌培养基的最适pH为7～8,最适培养温度为30℃,振荡培养对海豚链球菌的生长影响不明显。培养基优化研究表明,在BHI培养基中添加10mg/mL的酵母粉和2mg/mL的葡萄糖即可在对数期获得最大细菌量。

关键词：海豚链球菌(Streptococcus iniae) 生长规律培养条件优化

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红笛鲷非特异性毒性细胞受体蛋白Ⅰ基因的克隆及序列分析

红笛鲷非特异性毒性细胞受体蛋白Ⅰ基因的克隆及序列分析

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第十届全国水产青年学术年会

作者：魏世娜简纪常吴灶和鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025

非特异性毒性细胞受体蛋白Ⅰ (nonspecific cytotoxic cell receptor protein,NCCRPⅠ)在识别靶细胞和细胞毒性激活方面起了重要的作用,本研究采用生物信息学方法对多种鱼的NCCRP-Ⅰ基因进行序列比对,根据序列保守区域设计并合成简并性... 详细信息

非特异性毒性细胞受体蛋白Ⅰ (nonspecific cytotoxic cell receptor protein,NCCRPⅠ)在识别靶细胞和细胞毒性激活方面起了重要的作用,本研究采用生物信息学方法对多种鱼的NCCRP-Ⅰ基因进行序列比对,根据序列保守区域设计并合成简并性引物,应用RT-PCR和RACE技术从头肾组织总RNA中克隆出红笛鲷NCCRP-1基因全长,并进行序列分析.结果表明,获得的cDNA片段全长980bp,其中编码区长702bp,编码233个氨基酸残基,5'非编码区42bp,3'非编码区236bp.经Genetyx软件分析推测该蛋白分子量约为26.14ku,等电点为4.92.进一步的序列比较与进化分析表明,红笛鲷NCCRP-1基因显示所克隆的基因与金头鲷等鱼类的同源性较高,同源性达65％～99％;而与哺乳动物的同源性相对较低.

关键词：红笛鲷 NCCRP-1 克隆序列分析

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溶藻弧菌免疫金标试纸条的研制

溶藻弧菌免疫金标试纸条的研制

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中国水产学会鱼病专业委员会第七次会员代表大会暨学术讨论会

作者：梁军吴灶和简纪常鲁义善广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东海洋大学水产学院湛江 524025

以溶藻弧菌菌体抗原免疫家兔获得A、B两份高免血清.对制备的A、B血清的IgG采用饱和硫酸铵盐析沉淀法结合蛋白A亲和层析法进行纯化.获得了纯度和活性均较高的IgG.用柠檬酸钠还原氯金酸法制备胶体金.确定胶体金标记提纯A血清IgG最适条件... 详细信息

以溶藻弧菌菌体抗原免疫家兔获得A、B两份高免血清.对制备的A、B血清的IgG采用饱和硫酸铵盐析沉淀法结合蛋白A亲和层析法进行纯化.获得了纯度和活性均较高的IgG.用柠檬酸钠还原氯金酸法制备胶体金.确定胶体金标记提纯A血清IgG最适条件并制备胶体金—抗体结合物.在玻璃纤维膜上喷涂结合物溶液并冷冻干燥.在硝酸纤维素膜上包被B血清IgG和羊抗兔抗体作为检测线和控制线.组装双抗夹心试纸条并对其灵敏度、特异性进行评价.建立的胶体金免疫层析试纸法能在5 min内完成检测.结果显示检测灵敏度为1×106 cfu/ml.特异性实验检测显示与河流弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌、梅氏弧菌、费氏弧菌、美人鱼弧菌等弧菌无交叉反应.研制出的试纸条能快速、灵敏、特异地检测溶藻弧菌.

关键词：溶藻弧菌胶体金免疫层析

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红笛鲷非特异性毒性细胞受体蛋白1基因的克隆及表达分析

红笛鲷非特异性毒性细胞受体蛋白1基因的克隆及表达分析

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中国水产学会鱼病专业委员会第七次会员代表大会暨学术讨论会

作者：魏世娜简纪常吴灶和鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025

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罗非鱼海豚链球菌胞外产物的特性分析

罗非鱼海豚链球菌胞外产物的特性分析

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第十届全国水产青年学术年会

作者：张旭丽吴灶和简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江 524025

海豚链球菌经脑浸液琼脂培养基(BHIA+ 4％小牛血清)培养60h后,培养物用PBS洗脱、离心,再经孔径0.45μm微孔滤膜过滤,制得粗提胞外产物(Extracellular product,ECP).采用琼脂平板扩散法测定了该菌胞外产物的酶活性和溶血活性,并采用复性... 详细信息

海豚链球菌经脑浸液琼脂培养基(BHIA+ 4％小牛血清)培养60h后,培养物用PBS洗脱、离心,再经孔径0.45μm微孔滤膜过滤,制得粗提胞外产物(Extracellular product,ECP).采用琼脂平板扩散法测定了该菌胞外产物的酶活性和溶血活性,并采用复性电泳技术研究了环境pH以及培养时间对该菌胞外产物活性的影响,同时对胞外产物的致病性以及不同金属离子和抑制剂对ECPase的活性进行了研究.

关键词：海豚链球菌胞外产物罗非鱼

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应用免疫蛋白质组学筛选哈氏弧菌免疫反应蛋白质

应用免疫蛋白质组学筛选哈氏弧菌免疫反应蛋白质

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中国水产学会鱼病专业委员会第七次会员代表大会暨学术讨论会

作者：李岩庞欢瑛鲁义善吴灶和简纪常广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025 广东海洋大学水产学院湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025 广东海洋大学水产学院湛江524025 中科院南海海洋研究所广

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副溶血弧菌和河流弧菌全菌蛋白的双向电泳图谱比较

副溶血弧菌和河流弧菌全菌蛋白的双向电泳图谱比较

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第十届全国水产青年学术年会

作者：李岩庞欢瑛鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 中科院南海海洋研究

为获得副溶血弧菌(Vibrio Parahemolyticus)和河流弧菌(Vibrio furnissii)的全菌蛋白双向电泳图谱，并对电泳图谱进行分析、比较，实验利用裂解液分别裂解副溶血弧菌和河流弧菌，提取全菌蛋白;一向电泳分别采用7cm pH4 ～7的胶条进行等... 详细信息

为获得副溶血弧菌(Vibrio Parahemolyticus)和河流弧菌(Vibrio furnissii)的全菌蛋白双向电泳图谱，并对电泳图谱进行分析、比较，实验利用裂解液分别裂解副溶血弧菌和河流弧菌，提取全菌蛋白;一向电泳分别采用7cm pH4 ～7的胶条进行等电聚焦，二向用12.5％的SDS-PAGE胶分离蛋白质，考马斯亮蓝染色，获得双向电泳图谱，并利用ImageMaster 2D Platinum进行分析，副溶血弧菌的双向电泳图谱得到314±6个蛋白斑点，河流弧菌的双向电泳图谱得到297±10个蛋白斑点，蛋白主要集中在pI值4.24 ～6.50、分子量为95～34ku的区域间.结论：得到副溶血弧菌和河流弧菌的全菌蛋白双向电泳图谱，对这两种弧菌的图谱比较得出有108个蛋白点可以相匹配，副溶血弧菌有个206±6差异蛋白，河流弧菌有个189±10差异蛋白.这为进一步研究副溶血弧菌和河流弧菌全菌蛋白的免疫蛋白质组学以及弧菌的鉴定奠定了基础，也为以后亚单位疫苗的制备提供了参考.

关键词：副溶血弧菌河流弧菌双向电泳蛋白质组学

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粤西福建纹胸鮡的食性及繁殖力

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广东海洋大学学报 2009年第4期29卷 10-13页

作者：初庆柱陈刚张健东潘传豪周晖广东海洋大学水生生物博物馆广东湛江524025 广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025

对2007年取自粤西水域的福建纹胸鮡进行生物学研究。结果显示:粤西福建纹胸鮡食性是以动物性食物为主;雌雄性比为1.16∶1;性腺成熟系数雌性为0.263%～19.048%,雄性为0.101%～3.226%;福建纹胸鮡个体绝对怀卵量在45～420粒之间,平均140.9&... 详细信息

对2007年取自粤西水域的福建纹胸鮡进行生物学研究。结果显示:粤西福建纹胸鮡食性是以动物性食物为主;雌雄性比为1.16∶1;性腺成熟系数雌性为0.263%～19.048%,雄性为0.101%～3.226%;福建纹胸鮡个体绝对怀卵量在45～420粒之间,平均140.9±74.7粒;相对怀卵量在31.7～130.4粒/g之间,平均64.3±21.1粒/g;绝对怀卵量与体长呈幂相关:y=0.0008 x7.7308,R2=0.855 2;绝对怀卵量与体重呈指数相关:y=14.439 e0.838 2 x,R2=0.878 3。

关键词：福建纹胸鮡食性个体生殖力粤西水域

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溶藻弧菌HY9901 AcrA基因克隆与序列分析(英文)

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微生物学通报 2008年第1期35卷 67-72页

作者：蔡双虎吴灶和简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025

Touchdown PCR扩增溶藻弧菌HY9901 AcrA基因部分序列,得一460 bp片段,再以反向PCR和巢式PCR联合扩增其侧翼序列,拼接得一由1101 nt组成,共编码366 aa的完整基因。该基因演绎的氨基酸序列与几种弧菌的同源性都比较高,与创伤弧菌YJ016、... 详细信息

Touchdown PCR扩增溶藻弧菌HY9901 AcrA基因部分序列,得一460 bp片段,再以反向PCR和巢式PCR联合扩增其侧翼序列,拼接得一由1101 nt组成,共编码366 aa的完整基因。该基因演绎的氨基酸序列与几种弧菌的同源性都比较高,与创伤弧菌YJ016、副溶血弧菌RIMD 2210633、灿烂弧菌12B01、霍乱弧菌O1 N16961同源性分别为76%、73%、71%和70%。

关键词：溶藻弧菌 AcrA基因基因克隆

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温度对溶藻弧菌HY9901株致病性相关蛋白的调控

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水生生物学报 2008年第6期32卷 787-793页

作者：庞欢瑛吴灶和简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025

将溶藻弧菌HY9901株置于15℃、20℃、28℃、37℃四个温度下培养,18h时分别测定细菌含量,胞外蛋白酶(Extracelluar protease,ECPase)表达量以及胞外产物(Extracellular product,ECP)对动物的致死性。结果表明,随着温度升高,菌液浓度、ECP... 详细信息

将溶藻弧菌HY9901株置于15℃、20℃、28℃、37℃四个温度下培养,18h时分别测定细菌含量,胞外蛋白酶(Extracelluar protease,ECPase)表达量以及胞外产物(Extracellular product,ECP)对动物的致死性。结果表明,随着温度升高,菌液浓度、ECPase的活性以及ECP对小鼠和红笛鲷的致死率先升高后下降。28℃培养的细菌浓度、ECPase的活性以及ECP对小鼠和红笛鲷的致死率均为最大。用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析不同温度培养下细菌的ECP和外膜蛋白(Outer membrane protein,OMP),结果显示,不同温度培养的溶藻弧菌ECP和OMP电泳图谱不同。溶藻弧菌主要ECP的分子量为70kD和62kD。ECP 70kD在20℃时的表达量最大,而28℃时ECP62 kD的蛋白浓度最高。45kD OMP随着温度升高,其合成量增大,28℃时达最大值;而40kD和34kD OMP则随着温度的升高而减弱。通过研究电泳纯化的ECP 62kD和ECP 70kD的酶活性和致死试验,证明ECP 62kD具有很强的酶活性和毒性,而ECP 70kD仅具有弱的酶活性和毒性。

关键词：溶藻弧菌胞外产物外膜蛋白胞外蛋白酶温度

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