检索结果-内蒙古大学图书馆

广东海洋大学学报 2014年第3期34卷 52-57页

作者：陈立明庞欢瑛简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

根据NCBI数据库中已发表的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列合成一对特异性引物,应用聚合酶链式反应(PCR技术)扩增溶藻弧菌HY9001菌株dtd基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a构建重组表达质粒pET-DTD,并对其进行诱导温... 详细信息

根据NCBI数据库中已发表的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列合成一对特异性引物,应用聚合酶链式反应(PCR技术)扩增溶藻弧菌HY9001菌株dtd基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a构建重组表达质粒pET-DTD,并对其进行诱导温度、诱导时间、诱导IPTG浓度等条件的优化,最后探究其纯化时最佳咪唑洗脱浓度。结果表明:DTD蛋白成功表达,且其以包涵体的形式存在,在诱导温度37℃、IPTG浓度0.1 mmol/L条件下诱导5 h表达量最高,纯化最佳咪唑洗脱浓度为150 mmol/L。

关键词：溶藻弧菌 dtd 基因克隆原核表达条件优化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统注射装置蛋白VscO的原核表达及免疫原性

引用

广东海洋大学学报 2014年第3期34卷 41-46页

作者：庞欢瑛周泽军丁燏黄郁葱吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03株Ⅲ型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)注射装置蛋白VscO作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌VscO序列(***179947),设计1对带酶切位点的特异性引物,PCR扩增vscO基因,序列分析结果显示,该基因全长462 bp,理论分子质量为18.430ku。将vscO基因定向插入原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-vscO。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,可在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达分子质量约为22 ku的VscO融合蛋白,且该蛋白主要以包涵体形式存在。VscO蛋白表达和纯化的最优条件为:0.1 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导4 h,咪唑洗脱浓度为400 mmol/L。用纯化后的融合蛋白免疫SPF级小鼠,获得高效多克隆抗体。Western-blotting结果表明,鼠抗VscO血清既能与重组VscO蛋白发生反应,也能与分离自溶藻弧菌约22 ku的天然蛋白发生反应,提示T3SS注射装置蛋白VscO可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一。

关键词：溶藻弧菌 vscO基因 Ⅲ型分泌系统原核表达免疫原性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

溶藻弧菌二氢硫辛酰胺脱氢酶基因克隆及其生物信息学分析

引用

广东海洋大学学报 2014年第1期34卷 1-8页

作者：庞欢瑛陈立明蔡佳汤菊芬王蓓吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

根据溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)的基因序列设计1对特异性引物。PCR扩增结果显示,DLD(GenBank登录号AGK62253)全长1 428 bp,共编码475个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测其分子质量约为50.998 ku,等电点为5.51。细胞定位、SignalP 4.0、TMHMM Server 2.0和SoftBerry-Psite预测结果显示,DLD位于细胞质中,在第29至30个氨基酸之间存在信号肽,不存在跨膜区,氨基酸序列含有1个Asn-糖基化位点、5个蛋白激酶C磷酸化位点、6个酪蛋白激酶II磷酸化位点等多个活性位点。系统进化树结果显示,溶藻弧菌DLD与副溶血弧菌(***)聚为一簇。用Kyte-Doolittle亲水性参数、Karplus-Schulz柔韧性参数、Emini表面可及性参数和Jameson-Wolf抗原性参数分别预测,DLD可能的B细胞抗原优势表位分别是第5~10、106~110、120~125、158~163和175~180区段。利用SWISS-MODEL软件,模拟DLD亚基三维结构模型,结果显示其与大肠杆菌(Escherichia coli)DLD蛋白有相似构型。Kegg分析发现,其涉及糖酵解和糖异生等9条信号通路。从生物信息学角度验证了DLD作为弧菌共同抗原的可行性。

关键词：溶藻弧菌基因克隆二氢硫辛酰胺脱氢酶生物信息学分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统vscP基因的克隆与生物信息学分析

引用

广东海洋大学学报 2016年第4期36卷 30-36页

作者：李静庞欢瑛简纪常鲁义善汤菊芬吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

根据NCBI上登录的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列,设计一对克隆溶藻弧菌HY9901株Ⅲ型分泌系统"分子尺"蛋白VscP全长基因的特异性引物,PCR扩增获得基因的全长片段。结果显示,vsc P(Gen Bank登录号FR780678)开放... 详细信息

根据NCBI上登录的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列,设计一对克隆溶藻弧菌HY9901株Ⅲ型分泌系统"分子尺"蛋白VscP全长基因的特异性引物,PCR扩增获得基因的全长片段。结果显示,vsc P(Gen Bank登录号FR780678)开放阅读框ORF为1 206 bp,共编码401个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测其分子质量约为44.4 ku,等电点为5.72。Signal 4.1 Server和TMHMM Server 2.0预测结果表明,VscP无信号肽与跨膜结构域。Soft Berry-Psite预测结果显示,VscP含有3个N端糖基化位点,2个cAMP及c GMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,5个蛋白激酶C磷酸化位点,9个酪蛋白激酶II磷酸化位点,2个N端豆蔻酰基化位点,1个酰胺化位点和3个微体C末端靶信号位点。运用MEGA6.0构建的VscP系统进化树显示,溶藻弧菌VscP与副溶血弧菌(***)聚为一簇。应用SWISS-MODEL软件构建VscP亚基三维结构模型发现,其与鞭毛Fil K蛋白有相似构型。

关键词：溶藻弧菌 III 型分泌系统基因克隆生物信息学分析 vscP

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

红笛鲷CD40和去除信号肽CD40的原核表达

引用

广东海洋大学学报 2013年第4期33卷 31-37页

作者：樊云霞简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

根据红笛鲷(Lutjanus sanguineus)CD40基因cDNA全长序列设计2对特异性引物,利用RT-PCR技术从红笛鲷头肾组织中扩增出CD40 ORF序列和去信号肽序列,分别与原核表达载体pET-32a(+)相连,构建原核重组表达质粒,命名为pET32-CD40和pET32-△CD... 详细信息

根据红笛鲷(Lutjanus sanguineus)CD40基因cDNA全长序列设计2对特异性引物,利用RT-PCR技术从红笛鲷头肾组织中扩增出CD40 ORF序列和去信号肽序列,分别与原核表达载体pET-32a(+)相连,构建原核重组表达质粒,命名为pET32-CD40和pET32-△CD40,并分别转化至大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,分别于54 ku和53 ku处有清晰的目的蛋白条带。融合蛋白的表达效率最佳的表达条件,pET32-CD40是诱导温度37℃,起始D(600nm)为0.4,IPTG浓度为0.08 mmol/L,诱导5 h;pET32-△CD40是诱导温度37℃,起始D(600nm)为0.6,IPTG浓度为0.10 mmol/L,诱导6 h。在各自优化的表达条件下,pET32-△CD40融合蛋白表达量较pET32-CD40融合蛋白高。RNAstructure软件分析发现,CD40的mRNA 5′端序列形成复杂且较为稳定的二级结构,不利于翻译的起始,表明信号肽序列的存在可能对CD40基因在原核细胞中的表达有一定的影响。

关键词：红笛鲷 CD40基因原核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

复方中草药在罗非鱼养殖中的安全性评价

引用

广东海洋大学学报 2017年第3期37卷 43-48页

作者：林紫薇汤菊芬简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

在罗非鱼基础饲料中添加质量分数1%、3%、5%的复方中草药,连续投喂30 d,测定罗非鱼生长性能及血液生化指标,并对其肝脏、脾脏、头肾、体肾等组织进行病理学检查,评价罗非鱼养殖中该复方中草药的安全性。结果表明:3实验组罗非鱼增重率均... 详细信息

在罗非鱼基础饲料中添加质量分数1%、3%、5%的复方中草药,连续投喂30 d,测定罗非鱼生长性能及血液生化指标,并对其肝脏、脾脏、头肾、体肾等组织进行病理学检查,评价罗非鱼养殖中该复方中草药的安全性。结果表明:3实验组罗非鱼增重率均高于对照组(P<0.05),饲料系数均低于对照组(P<0.05);3个添加剂量下,中草药对罗非鱼血清中的谷草转氨酶、谷丙转氨酶、白蛋白、总蛋白、肌酐、尿素氮等指标无显著影响(P>0.05),但添加5%复方中草药组的罗非鱼血清甘油三酯含量显著高于对照组(P<0.05);3实验组的罗非鱼肝、脾、头肾、体肾与对照组相比无明显变化。在养殖生产中,罗非鱼饲料添加质量分数1%~3%的复方中草药制剂是安全的。

关键词：罗非鱼养殖中草药安全性评价生长性能血液生化指标病理学

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统C-环组分VscQ的原核表达及免疫原性

引用

安徽农学通报 2020年第18期26卷 101-105页

作者：曾福源伍艳清邱明生武沛文周诗慧王俊霖简纪常谢妙庞欢瑛广东海洋大学深圳研究院广东深圳510000 广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088

为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901菌株Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS)胞质环(C-环)组分VscQ作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌vscQ序列(***862753),设计1对带酶切位点的特异性引物,PCR扩增vscQ基因,进行序列分析。结果显示,该基因全长969bp,预计分子量35.61kDa。将vscQ基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEXvscQ。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,能在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达分子质量约为61.6kDa的VscQ融合蛋白。VscQ蛋白表达的最优条件为:0.4mmol/L IPTG,15℃条件下诱导12h。用纯化后的VscQ融合蛋白免疫白兔,获得高效多克隆抗体,抗体效价为1∶121500。兔抗VscQ血清能与重组VscQ蛋白发生特异性反应,表明T3SS C-环组分VscQ可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一。

关键词：溶藻弧菌 VscQ Ⅲ型分泌系统原核表达免疫原性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

大亚湾网箱养殖水体弧菌种类组成及变化

引用

湛江海洋大学学报 2006年第4期26卷 42-48页

作者：吴建平蔡创华周毅频吴灶和中国科学院南海海洋研究所广东广州510301 广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

研究了海水网箱养殖海域弧菌数量变化、种类组成及其相关因素．探讨弧菌数量的变化与鱼病的关系。结果表明：网箱内水体弧菌数量为390-230mL^-1．平均为20．6×10^2mL^-1,网箱外水体为130～1450mL^-1，平均为530mL^-1．非养殖对照... 详细信息

研究了海水网箱养殖海域弧菌数量变化、种类组成及其相关因素．探讨弧菌数量的变化与鱼病的关系。结果表明：网箱内水体弧菌数量为390-230mL^-1．平均为20．6×10^2mL^-1,网箱外水体为130～1450mL^-1，平均为530mL^-1．非养殖对照海区为10-390mL^-1．平均为190mL^-1。养殖海区弧菌数量呈现明显的季节性变化．尤其是网箱水体．对照海区只在9月数量较高．其他时间变化不大。平均数量网箱内大于网箱外．网箱外大于对照海区。水体中出现的弧菌种类有河流弧菌Vibrio fluvialis．创伤弧菌Vibrio vulnif gicus．霍乱弧菌Vibrio cholerae．副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus．溶藻弧菌Vibrio alginolyticus．美人鱼弧菌Vibrio damsela．拟态弧菌Vibrio mimicus和好利斯弧菌Vibrio hollisae，美人鱼弧菌、溶藻弧菌和霍乱弧菌占有较大优势。弧种数量与海水温度、盐度及营养盐有相关性．但其相关性因不同种和不同点而不同。检测期间．网箱养殖鱼类无明显流行病发生．但弧菌的高峰期明显与报道的鱼病高峰期相吻合。

关键词：弧菌种类组成分布季节变化网箱水体大亚湾

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

应用免疫蛋白质组学筛选哈氏弧菌免疫反应蛋白质

应用免疫蛋白质组学筛选哈氏弧菌免疫反应蛋白质

引用

中国水产学会鱼病专业委员会第七次会员代表大会暨学术讨论会

作者：李岩庞欢瑛鲁义善吴灶和简纪常广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025 广东海洋大学水产学院湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025 广东海洋大学水产学院湛江524025 中科院南海海洋研究所广

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

副溶血弧菌和河流弧菌全菌蛋白的双向电泳图谱比较

副溶血弧菌和河流弧菌全菌蛋白的双向电泳图谱比较

引用

第十届全国水产青年学术年会

作者：李岩庞欢瑛鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 中科院南海海洋研究

为获得副溶血弧菌(Vibrio Parahemolyticus)和河流弧菌(Vibrio furnissii)的全菌蛋白双向电泳图谱，并对电泳图谱进行分析、比较，实验利用裂解液分别裂解副溶血弧菌和河流弧菌，提取全菌蛋白;一向电泳分别采用7cm pH4 ～7的胶条进行等... 详细信息

为获得副溶血弧菌(Vibrio Parahemolyticus)和河流弧菌(Vibrio furnissii)的全菌蛋白双向电泳图谱，并对电泳图谱进行分析、比较，实验利用裂解液分别裂解副溶血弧菌和河流弧菌，提取全菌蛋白;一向电泳分别采用7cm pH4 ～7的胶条进行等电聚焦，二向用12.5％的SDS-PAGE胶分离蛋白质，考马斯亮蓝染色，获得双向电泳图谱，并利用ImageMaster 2D Platinum进行分析，副溶血弧菌的双向电泳图谱得到314±6个蛋白斑点，河流弧菌的双向电泳图谱得到297±10个蛋白斑点，蛋白主要集中在pI值4.24 ～6.50、分子量为95～34ku的区域间.结论：得到副溶血弧菌和河流弧菌的全菌蛋白双向电泳图谱，对这两种弧菌的图谱比较得出有108个蛋白点可以相匹配，副溶血弧菌有个206±6差异蛋白，河流弧菌有个189±10差异蛋白.这为进一步研究副溶血弧菌和河流弧菌全菌蛋白的免疫蛋白质组学以及弧菌的鉴定奠定了基础，也为以后亚单位疫苗的制备提供了参考.

关键词：副溶血弧菌河流弧菌双向电泳蛋白质组学

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：