检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2022年第6期38卷 43-52页

作者：陈福暖黄瑜蔡佳王忠良简纪常王蓓广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088

ABC转运蛋白,即腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter)是具有多种功能且分布极为广泛的膜蛋白质家族。它的主要功能是利用ATP水解产生的能量来实现对底物的跨膜转运,ABC超家族蛋白转运体普遍存在于细菌、真菌,线... 详细信息

ABC转运蛋白,即腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter)是具有多种功能且分布极为广泛的膜蛋白质家族。它的主要功能是利用ATP水解产生的能量来实现对底物的跨膜转运,ABC超家族蛋白转运体普遍存在于细菌、真菌,线虫,果蝇、植物、哺乳动物等几乎所有生物体内。大多数ABC 转运蛋白最初是通过研究真核生物体耐药性(多效耐药和多药耐药)而被发现的。目前针对ABC转运蛋白在细菌致病性中所发挥作用也有广泛的研究。本文综述了ABC 转运蛋白的结构、转运机制和ABC转运蛋白在细菌致病性过程中的作用,讨论了深入研究ABC转运蛋白作用机制对细菌性疾病防治的意义及存在问题。ABC转运蛋白相关的细胞表面或分泌因子很可能是抗菌疗法或疫苗开发的作用靶点,为细菌性疾病的预防提供了新的思路。

关键词： ABC转运蛋白原核生物致病性毒力耐药性

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溶藻弧菌磷酸甲基嘧啶合酶(ThiC)的原核表达及其乙酰化修饰鉴定

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大连海洋大学学报 2022年第3期37卷 435-440页

作者：王旭东范晨龙丁燏广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室水产经济动物病害控制广东省普通高校重点实验室广东湛江524088

为研究溶藻弧菌Vibrio alginolyticus磷酸甲基嘧啶合酶(phosphomethylpyrimidine synthase,ThiC)是否存在乙酰化修饰,以溶藻弧菌HY9901基因组为模板,PCR扩增ThiC基因,构建pET-28a-ThiC原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,并优化其表达条件,然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达及乙酰化情况。结果表明:克隆获得的溶藻弧菌ThiC基因长度为1941 bp;重组蛋白成功在大肠杆菌BL21中表达,相对分子质量为72500,其最佳诱导条件为IPTG 0.1 mmol/L、温度37℃、诱导时间3 h;经Western blot检测显示,ThiC蛋白具有乙酰化修饰,但在体外不能通过乙酰化酶途径去乙酰化。研究表明,溶藻弧菌ThiC原核表达载体构建成功,该蛋白存在乙酰化修饰,但体外不能去乙酰化,本研究结果为溶藻弧菌的维生素合成过程中酶的翻译后调控机制研究提供了科学参考。

关键词：溶藻弧菌磷酸甲基嘧啶合酶原核表达乙酰化

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斜带石斑鱼BAG-1基因克隆及表达分析

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南方农业学报 2022年第5期53卷 1399-1406页

作者：李星吴子杰温依铭刘结红蔡佳简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088

【目的】明确斜带石斑鱼(Epinephelu coioides)BAG-1基因(EcBAG-1)的结构特征、组织表达分布及在脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激后的表达变化,进一步揭示鱼类BAG-1在病原感染中的作用机制,也为了解鱼类的抗病免疫提供参考依据。... 详细信息

【目的】明确斜带石斑鱼(Epinephelu coioides)BAG-1基因(EcBAG-1)的结构特征、组织表达分布及在脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激后的表达变化,进一步揭示鱼类BAG-1在病原感染中的作用机制,也为了解鱼类的抗病免疫提供参考依据。【方法】依据EcBAG-1基因EST序列设计特异性引物克隆EcBAG-1基因,通过SMART、TMHMM Server v.2.0、SOPMA、SWISS-MODEL、ExPASy、ClustalX及MEGA 5.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR检测EcBAG-1基因的组织表达特征及其在LPS和PolyI:C刺激后的表达模式。【结果】克隆获得的EcBAG-1基因开放阅读框(ORF)长624 bp,共编码207个氨基酸残基;EcBAG-1蛋白分子量为49.84 kD,理论等电点(pI)为5.18,为疏水性蛋白。EcBAG-1蛋白具有BAG-1家族保守的BAG结构域和UBQ泛素相关结构域,无跨膜结构域,主要分布在细胞质和细胞核,其二级结构中α-螺旋占65.22%、延伸链占10.63%、无规则卷曲占20.29%、β-转角仅占3.86%。EcBAG-1氨基酸序列与大黄鱼的BAG-1氨基酸序列相似性最高(96.62%),亲缘关系最近;与原鸡和热带爪蛙的亲缘关系相对较远,对应的BAG-1氨基酸序列相似性分别为58.45%和57.50%。EcBAG-1基因在斜带石斑鱼的肝脏、胸腺、脾脏、头肾、鳃、皮肤、肌肉、大脑、外周血淋巴细胞及心脏等组织中均有表达,且以在大脑中的相对表达量最高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P>0.05,下同);经LPS和PolyI:C刺激24 h后,斜带石斑鱼脾脏中的EcBAG-1基因相对表达量显著上调。【结论】EcBAG-1蛋白含有BAG-1蛋白家族典型的BAG结构域和UBQ结构域,具有与哺乳动物BAG-1相似的生物学功能,即EcBAG-1基因在斜带石斑鱼抵御细菌/病毒感染的过程中发挥重要作用,为深入了解鱼类的抗感染机理拓宽了思路。

关键词：斜带石斑鱼 BAG-1基因病原感染免疫反应表达分析

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尼罗罗非鱼S100A16基因克隆及其功能分析

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南方农业学报 2023年第9期54卷 2614-2623页

作者：陈钊峰苏海明黄瑜鲁义善王蓓简纪常蔡佳广东海洋大学水产学院/广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室/广东省水产经济动物病害控制重点实验室/南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 广东湛江524088 广西科学院/广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室广西南宁530007

【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)钙结合蛋白S100A16的结构特征、系统进化关系及组织表达分布情况等,进一步分析S100A16在抗菌免疫中的作用,为深入研究S100A16基因在鱼类免疫防御中的功能提供参考依据。【方法】根据S100... 详细信息

【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)钙结合蛋白S100A16的结构特征、系统进化关系及组织表达分布情况等,进一步分析S100A16在抗菌免疫中的作用,为深入研究S100A16基因在鱼类免疫防御中的功能提供参考依据。【方法】根据S100A16基因序列设计特异性引物克隆尼罗罗非鱼S100A16基因(On-S100A16),构建原核表达载体并采用SMART 4.0、DNAMAN 9.0及MEGA 6.0等在线软件对On-S100A16氨基酸序列进行生物信息学分析。通过实时荧光定量PCR检测On-S100A16在尼罗罗非鱼各组织中的分布情况及无乳链球菌感染后在尼罗罗非鱼各组织中的表达变化,并制备融合蛋白用于孵育尼罗罗非鱼头肾淋巴细胞后,检测炎症相关因子基因的表达情况。【结果】克隆获得的On-S100A16基因编码区长度为276 bp,共编码91个氨基酸残基,含有S100保守结构域。On-S100A16氨基酸序列与斑马拟丽鱼、杂色鳉、大口黑鲈等其他鱼类的S100A16氨基酸序列具有较高的相似度,系统发育进化分析也显示On-S100A16与斑马拟丽鱼S100A16的亲缘关系最近。On-S100A16基因在尼罗罗非鱼的各组织中广泛表达,在肝脏组织中的相对表达量最高;经无乳链球菌感染后,On-S100A16基因在尼罗罗非鱼脑、肠道和脾脏组织中的表达量呈上调趋势,且均在感染24 h后达峰值。成功制备融合蛋白S100A16后用于孵育头肾淋巴细胞,实时荧光定量PCR检测结果表明,抗炎因子基因IL-4和TLR1的相对表达量极显著上调(P<0.01,下同),促炎因子基因IL-6和TNF-α的相对表达量则极显著下调。【结论】On-S100A16氨基酸序列含有S100蛋白家族典型的S100结构域,其可能具有与其他S100蛋白相似的生物学功能。On-S100A16通过调控淋巴细胞活性来参与尼罗罗非鱼的抗菌免疫反应。

关键词：尼罗罗非鱼 S100A16 融合蛋白淋巴细胞抗菌免疫

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利用酵母双杂交系统筛选与鉴定石斑鱼EcBAG3互作因子

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生物技术通报 2022年第8期38卷 77-83页

作者：蔡佳梁振宇黄瑜鲁义善施钢简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江)湛江524088 广西科学院广西北部湾海洋研究中心广西海洋天然产物与组合生物合成化学重点实验室南宁530007

以参与石斑鱼抗病毒免疫反应的EcBAG3蛋白为研究对象,采用酵母双杂交等技术筛选与鉴定EcBAG3的互作蛋白。首先构建了石斑鱼脾脏细胞的酵母双杂交cDNA文库,文库的容量为5.6×10^(6) CFU,插入片段的平均长度在750 bp以上,重组率为100... 详细信息

以参与石斑鱼抗病毒免疫反应的EcBAG3蛋白为研究对象,采用酵母双杂交等技术筛选与鉴定EcBAG3的互作蛋白。首先构建了石斑鱼脾脏细胞的酵母双杂交cDNA文库,文库的容量为5.6×10^(6) CFU,插入片段的平均长度在750 bp以上,重组率为100%。进一步利用此文库筛选EcBAG3的互作因子,初步得到了83个阳性克隆。对这些克隆进行测序与一对一互作验证,最终获得7个候选互作蛋白,功能预测结果显示,互作蛋白涉及免疫调控、转录调节、胁迫响应、信号转导等方面的功能,为进一步解析石斑鱼BAG3在病毒感染中的作用机制奠定了基础。

关键词：石斑鱼酵母双杂交 BAG3 互作蛋白

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尼罗罗非鱼CD209基因的克隆、表达及功能鉴定

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大连海洋大学学报 2021年第3期36卷 374-382页

作者：罗国玲王孝谦简纪常鲁义善汤菊芬黄瑜广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东湛江524088

为揭示尼罗罗非鱼模式识别受体CD209的分子结构、组织表达特性并初步了解其免疫功能,利用聚合酶链式反应(PCR)获得尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus(体质量为100 g±5 g)CD209基因的开放阅读框片段(open reading frame,ORF),命名为O... 详细信息

为揭示尼罗罗非鱼模式识别受体CD209的分子结构、组织表达特性并初步了解其免疫功能,利用聚合酶链式反应(PCR)获得尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus(体质量为100 g±5 g)CD209基因的开放阅读框片段(open reading frame,ORF),命名为OnCD209;使用生物信息学软件对其氨基酸序列进行分析,采用RT-qPCR法对健康尼罗罗非鱼的各组织及无乳链球菌刺激后尼罗罗非鱼肝脏、脾脏、鳃和肠道的CD209基因表达量进行分析,并构建了CD209-pEGFP-N1及CD209-pcDNA3.1载体,研究了CD209基因在293T细胞中的定位及在细胞中过表达时对NF-κB酶活性的影响。结果表明:OnCD209的ORF区片段长度为1383 bp,可编码460个氨基酸,预测该蛋白具有一个C型凝集素结构域;多重氨基酸序列比对及系统进化分析显示,CD209氨基酸序列在各物种间相对不保守,尼罗罗非鱼与田纹狮子鱼Liparis tanakae的CD209氨基酸序列聚为一支,亲缘关系最近;RT-qPCR结果显示,所有组织(脑、血液、皮肤、肌肉、头肾、肠道、鳃、肝脏、脾脏和胸腺)中均能检测到OnCD209的mRNA表达,且在血液中表达量最高;尼罗罗非鱼在受到无乳链球菌感染后,OnCD209的表达在各组织中呈现相似的变化趋势,大致呈先在6 h时上调,后在12、24 h时下调,再在48 h后上调的表达模式;亚细胞定位分析显示,OnCD209定位于细胞膜上;双荧光素酶报告基因系统检测发现,OnCD209对NF-κB通路的活性显著性激活。研究表明,OnCD209可能参与尼罗罗非鱼对细菌的免疫应答过程及炎症反应过程。

关键词：尼罗罗非鱼模式识别受体荧光定量PCR 基因克隆亚细胞定位 NF-κB

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溶藻弧菌PEPCK蛋白原核表达及其乙酰化、琥珀酰化修饰的鉴定

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生物技术通报 2021年第5期37卷 84-91页

作者：曾福源苏泽辉周诗慧谢妙庞欢瑛广东海洋大学深圳研究院深圳510000 广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088

构建溶藻弧菌HY9901 PEPCK蛋白的原核表达载体、优化其表达条件,并鉴定该蛋白的乙酰化及琥珀酰化修饰。采用PCR克隆pepck基因,构建pET-28a-pepck并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),对重组菌株的培养温度、IPTG浓度及时间进行优化,采用SDS-PAG... 详细信息

构建溶藻弧菌HY9901 PEPCK蛋白的原核表达载体、优化其表达条件,并鉴定该蛋白的乙酰化及琥珀酰化修饰。采用PCR克隆pepck基因,构建pET-28a-pepck并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),对重组菌株的培养温度、IPTG浓度及时间进行优化,采用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达及乙酰化、琥珀酰化修饰。结果显示,pepck基因全长1 629 bp,重组菌株可以正确表达分子质量约60.9 kD的蛋白。诱导温度:在28℃条件下PEPCK存在于上清和包涵体中,在37℃则主要以包涵体形式存在;IPTG浓度:0.2 mmol/L-1.0 mmol/L范围内,PEPCK的表达量无明显差异;时间:在0-8 h内PEPCK表达量随时间增长逐渐增加,诱导8 h后趋于稳定。Western blot显示PEPCK蛋白具有乙酰化修饰和琥珀酰化修饰。成功构建溶藻弧菌PEPCK重组表达菌株,其最优诱导表达条件为0.2 mmol/L IPTG,28℃诱导8 h;经鉴定PEPCK蛋白具有乙酰化修饰和琥珀酰化修饰。

关键词：溶藻弧菌 PEPCK蛋白原核表达乙酰化琥珀酰化

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溶藻弧菌gr基因缺失株构建及其生物学特性

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广东海洋大学学报 2021年第4期41卷 1-7页

作者：冯建儒范晨龙丁燏广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室水产经济动物病害防控广东普通高校重点实验室广东湛江524088

【目的】研究敲除谷胱甘肽还原酶(GR)基因gr对溶藻弧菌HY9901生物学特性的影响。【方法】通过同源重组技术和Overlap PCR等分子生物学手段构建溶藻弧菌HY9901的gr基因缺失株,通过反转录验证并检测其遗传稳定性,绘制该菌的野生株和缺失... 详细信息

【目的】研究敲除谷胱甘肽还原酶(GR)基因gr对溶藻弧菌HY9901生物学特性的影响。【方法】通过同源重组技术和Overlap PCR等分子生物学手段构建溶藻弧菌HY9901的gr基因缺失株,通过反转录验证并检测其遗传稳定性,绘制该菌的野生株和缺失株的生长曲线,测定该菌野生株和缺失株的生物膜形成能力、抗生素敏感性、胞外蛋白酶活性和泳动能力等生物学特性。【结果】gr基因的缺失几乎不影响溶藻弧菌的生长趋势,但敲除gr基因后溶藻弧菌对呋喃唑酮、头孢唑林、四环素等敏感性增强,该菌的生物膜形成能力增强显著提高。缺失株△gr的胞外蛋白酶活性和泳动能力均低于野生株。【结论】谷胱甘肽还原酶在溶藻弧菌的毒力、生物膜形成、药物敏感性、泳动等方面有重要作用。

关键词：溶藻弧菌谷胱甘肽还原酶缺失株生物学特性同源重组

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尼罗罗非鱼CD2-like基因克隆及其胞外区表达研究

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水产科学 2021年第5期40卷 700-709页

作者：陈福暖高晓琳曾晓怜谢彩霞汪志文鲁义善吴灶和王忠良王蓓广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 广东海洋大学深圳研究院广东深圳518000

依据数据库中预测的尼罗罗非鱼白细胞分化抗原2(CD2)基因(GenBank登录号:XM_005460661.4)序列,采用PCR扩增体质量(150±50)g尼罗罗非鱼CD2分子同源类似物(CD2-like)基因编码区片段,然后以其胞外区构建原核表达质粒pGEX-6P1-CD2L,并... 详细信息

依据数据库中预测的尼罗罗非鱼白细胞分化抗原2(CD2)基因(GenBank登录号:XM_005460661.4)序列,采用PCR扩增体质量(150±50)g尼罗罗非鱼CD2分子同源类似物(CD2-like)基因编码区片段,然后以其胞外区构建原核表达质粒pGEX-6P1-CD2L,并进行原核表达及条件优化,最后进行复性纯化,为进一步研究该CD2-like分子在罗非鱼中的免疫功能奠定基础。研究结果表明,罗非鱼CD2-like(OnCD2-like)基因(GenBank登录号:MN296489)编码区全长1110bp,其中胞外区长558 bp。构建OnCD2-like胞外区的原核表达质粒pGEX-6P1-CD2L,将该重组质粒导入大肠杆菌BL21后,成功表达OnCD2-like胞外段重组蛋白。原核表达结果显示,目的蛋白分子质量为20ku,主要以包涵体形式存在,而该包涵体蛋白复性纯化最佳条件为:37℃下,0.2mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6h,经梯度稀释复性并纯化后可成功获得目的重组蛋白。

关键词：尼罗罗非鱼 CD2-like基因基因克隆原核表达

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养殖密度对墨吉明对虾生长、代谢和免疫的影响

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水产科学 2021年第5期40卷 679-685页

作者：刘慧玲郭文俊王成桂牛潇瑜杨世平孙成波广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东湛江524088

在水温(28±1)℃下,将体质量(1.89±0.26)g的墨吉明对虾饲养在1m^(3)的玻璃钢桶中,密度分别为60、90、120、150、180尾/m^(2),每个密度梯度设3个平行,常规饲养管理养殖15d,研究养殖密度对墨吉明对虾的生长、代谢和免疫的影响。... 详细信息

在水温(28±1)℃下,将体质量(1.89±0.26)g的墨吉明对虾饲养在1m^(3)的玻璃钢桶中,密度分别为60、90、120、150、180尾/m^(2),每个密度梯度设3个平行,常规饲养管理养殖15d,研究养殖密度对墨吉明对虾的生长、代谢和免疫的影响。试验期间,各组对虾存活率均为100%。试验结果显示,密度为90尾/m^(2)时,墨吉明对虾的质量增加率最高(P<0.05);密度大于90尾/m^(2)时,随着养殖密度的增加,墨吉明对虾的质量增加率随之下降;密度为180尾/m^(2)时,墨吉明对虾的质量增加率达到最低值。当养殖密度为90尾/m^(2)时,墨吉明对虾肝胰腺中谷草转氨酶、谷丙转氨酶和肌肉中琥珀酸脱氢酶的活性最高;当养殖密度为180尾/m^(2)时,墨吉明对虾肝胰腺和肌肉中谷草转氨酶、谷丙转氨酶和琥珀酸脱氢酶均呈下降趋势,而肝胰腺的免疫相关酶酸性磷酸酶和肌肉中的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性异常上升。试验结果表明,不同的养殖密度对墨吉明对虾肝胰腺和肌肉中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、琥珀酸脱氢酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性均影响显著(P<0.05)。当养殖密度为90尾/m^(2)时,墨吉明对虾代谢能力与免疫力均处于较高水平,结合养殖综合效益,其适宜的养殖密度应不超过150尾/m^(2)。

关键词：墨吉明对虾密度代谢酶免疫酶

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