检索结果-内蒙古大学图书馆

广东海洋大学学报 2014年第4期34卷 50-55页

作者：王海阳黄郁葱丁燏朱帆简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510225

通过同源引物从致病性哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ZJ0603基因组中克隆GST的开放阅读框(ORF),构建真核表达质粒pcDNA-GST。大量抽提重组质粒后,于背鳍基部肌肉注射重组质粒免疫斜带石斑鱼(Epinephelus coioides),分析重组质粒的免疫效果... 详细信息

通过同源引物从致病性哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ZJ0603基因组中克隆GST的开放阅读框(ORF),构建真核表达质粒pcDNA-GST。大量抽提重组质粒后,于背鳍基部肌肉注射重组质粒免疫斜带石斑鱼(Epinephelus coioides),分析重组质粒的免疫效果。通过核酸水平检测重组质粒在鱼体肝、肌肉、头肾和脾脏组织的分布;用ELISA法检测鱼体血清的抗体水平,用Western-blot检测目的蛋白的表达情况。结果表明:该序列全长615 bp;免疫7 d后,鱼体中均有质粒分布;斜带石斑鱼血清中产生抗GST的高效抗体(1∶4 096);相应的目的蛋白也在鱼体中成功表达。攻毒后,疫苗免疫保护率达80%,表明GST可作为防治哈维氏弧菌病有效候选抗原。

关键词：哈维氏弧菌谷胱甘肽硫转移酶斜带石斑鱼核酸疫苗

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溶藻弧菌acfA基因克隆与生物信息学分析

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广东海洋大学学报 2014年第1期34卷 9-14页

作者：程海燕庞欢瑛鲁义善简纪常吴灶和蔡双虎广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省普通高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

溶藻弧菌引起海水养殖产业弧菌病的主要病原,附着定植因子基因acfA是溶藻弧菌重要毒力基因之一,其表达产物是溶藻弧菌有效定植在宿主肠道上所必需的蛋白。根据弧菌属细菌acfA基因基因保守区设计引物,采用Touchdown PCR扩增acfA基因部分... 详细信息

溶藻弧菌引起海水养殖产业弧菌病的主要病原,附着定植因子基因acfA是溶藻弧菌重要毒力基因之一,其表达产物是溶藻弧菌有效定植在宿主肠道上所必需的蛋白。根据弧菌属细菌acfA基因基因保守区设计引物,采用Touchdown PCR扩增acfA基因部分序列,Inverse PCR和Nested PCR扩增已知序列侧翼序列,成功克隆了溶藻弧菌acfA基因全长。克隆的acfA基因序列全长为743 bp,开放阅读框长度为648 bp组成,共编码215个氨基酸,在5′端上游未发现-35区和-10区序列。演绎的ACFA蛋白N端有18个氨基酸信号肽序列,表明该蛋白是分泌型蛋白;蛋白结构分析表明主要由α螺旋和不规则卷曲构成。BLAST分析表明,该蛋白氨基酸序列与其他弧菌相应蛋白同源性较高,是较保守的外膜蛋白。

关键词：溶藻弧菌,acfA基因克隆蛋白结构

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溶藻弧菌HY9901血红素结合蛋白HutB的原核表达及纯化

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广东海洋大学学报 2014年第3期34卷 47-51页

作者：薛丽丽庞欢瑛黄郁葱吴灶和简纪常周泽军广东海洋大学水产学院广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901血红素结合蛋白HutB作为疫苗候选抗原的可能性,采用PCR方法扩增*** HY9901 hutB基因全长序列,克隆到pMD18-T载体,经双酶切、连接后,定向插入到pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET-HutB,转入... 详细信息

为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901血红素结合蛋白HutB作为疫苗候选抗原的可能性,采用PCR方法扩增*** HY9901 hutB基因全长序列,克隆到pMD18-T载体,经双酶切、连接后,定向插入到pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET-HutB,转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE验证后,优化诱导表达条件和纯化条件,并进行Western-blot分析。结果表明,HutB蛋白在***中诱导表达的最优条件:0.4 mmol/L IPTG,37℃诱导4h,表达的蛋白分子量与预期大小相符,主要以包涵体的形式存在,300 mmol/L咪唑洗脱时效果最佳,能与鼠抗His-tag单抗特异性结合。

关键词：溶藻弧 hutB基因原核表达优化纯化

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溶藻弧菌kdpD基因敲除突变株的构建及其生物学特性研究

溶藻弧菌kdpD基因敲除突变株的构建及其生物学特性研究

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2014年中国水产学会学术年会

作者：张燕飞庞欢瑛吴灶和简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室仲恺农业工程学院

为探究kdp D对溶藻弧菌HY9901生物学特性的影响,本研究利用自杀性载体系统,通过正负向筛选标记的同源重组方法筛选kdp D基因敲除突变株,生物学功能实验研究比较kdp D突变株和野生株HY9901在生长速率、胞外蛋白酶活性以及毒力等方面的差... 详细信息

为探究kdp D对溶藻弧菌HY9901生物学特性的影响,本研究利用自杀性载体系统,通过正负向筛选标记的同源重组方法筛选kdp D基因敲除突变株,生物学功能实验研究比较kdp D突变株和野生株HY9901在生长速率、胞外蛋白酶活性以及毒力等方面的差异。体外试验表明,kdp D的缺失,没有明显影响溶藻弧菌的生长曲线和胞外蛋白酶活性,但是缺失株的泳动能力和生物被膜形成能力明显降低。斑马鱼致病性试验结果显示,突变体毒力显著减弱。以上结果表明Kdp D在溶藻弧菌的泳动能力、被膜形成和致病性等方面都发挥着重要作用,为进一步研究Kdp D在溶藻弧菌感染机制中的作用奠定了基础。

关键词：溶藻弧菌 kdp D 基因敲除生物特性

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草鱼呼肠孤病毒096 vp7基因生物信息学分析及其酵母表达载体的构建

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广东海洋大学学报 2014年第6期34卷 31-37页

作者：郑树城谢吉国王雅蔡双虎简纪常吴灶和闫秀英广东海洋大学水产学院//广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 北京市大兴区水产技术推广站北京102600

草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是草鱼出血病的病原。从患病草鱼体内分离到一株草鱼呼肠孤病毒GCRV 096,经反转录PCR,克隆得GCRV 096长度为855 bp的vp7基因,并分析该基因编码蛋白的特性。结果表明,同一基因型分离株VP7蛋白... 详细信息

草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是草鱼出血病的病原。从患病草鱼体内分离到一株草鱼呼肠孤病毒GCRV 096,经反转录PCR,克隆得GCRV 096长度为855 bp的vp7基因,并分析该基因编码蛋白的特性。结果表明,同一基因型分离株VP7蛋白间的差异不大,但不同基因型分离株VP7蛋白间存在很大的差异。对GCRV 096 VP7蛋白生物信息学分析表明,信号肽位点位于20氨基酸处,且VP7含有4个潜在的抗原决定簇。构建GCRV 096 vp7基因的酵母表达载体p GBKT7-S10,并成功转化至酵母中。

关键词：草鱼呼肠孤病毒 vp7基因生物信息学酵母表达载体

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溶藻弧菌vscO基因在不同环境下的表达差异

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吉首大学学报（自然科学版） 2014年第4期35卷 59-63页

作者：庞欢瑛周泽军丁燏黄郁葱吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

为阐明溶藻弧菌vscO的在不同环境下的表达情况,用半定量RT-PCR方法检测vscO mRNA在不同生长时期、不同环境因子(温度、盐度和pH值)培养下的相对表达量.结果表明,溶藻弧菌vscO在对数期,温度为28℃,盐度为2%以及培养基起始pH值为7.0时的... 详细信息

为阐明溶藻弧菌vscO的在不同环境下的表达情况,用半定量RT-PCR方法检测vscO mRNA在不同生长时期、不同环境因子(温度、盐度和pH值)培养下的相对表达量.结果表明,溶藻弧菌vscO在对数期,温度为28℃,盐度为2%以及培养基起始pH值为7.0时的表达量最高.

关键词：溶藻弧菌 Ⅲ型分泌系统(T3SS) vscO基因环境因子基因表达

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凡纳滨对虾白斑病毒VP28基因的RNA干扰体内研究

凡纳滨对虾白斑病毒VP28基因的RNA干扰体内研究

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第九届世界华人虾蟹养殖研讨会

作者：朱卫卫邱德全甘桢广东海洋大学水产学院湛江52408 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江52408 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江52408

VP28是对虾白斑综合症病毒(WSSV)的一种囊膜蛋白,在病毒侵染早期发挥了极其关键的作用.设计了VP28的一条21bp的siRNA(生物公司合成),已有研究结果在体外证实其有效性.在凡纳滨对虾第2腹节注射100 μL BSS(PH7.2)缓冲液稀释104倍的病毒... 详细信息

VP28是对虾白斑综合症病毒(WSSV)的一种囊膜蛋白,在病毒侵染早期发挥了极其关键的作用.设计了VP28的一条21bp的siRNA(生物公司合成),已有研究结果在体外证实其有效性.在凡纳滨对虾第2腹节注射100 μL BSS(PH7.2)缓冲液稀释104倍的病毒粗提液.24h后,对照组直接注射100μl BSS,实验组分为注射100μl的0.05 μg/μl siRNA组(S05组)和注射100μl的0.10 μg/μl siRNA组(S10组),阴性对照不注射任何溶液,每组20尾虾,分别在24h、48h采集对虾的鳃,提取病毒,利用荧光定量检测分析仪检测病毒的拷贝数.

关键词： VP28 WSSV RNA干扰凡纳滨对虾

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红笛鲷TRAF3基因的克隆、表达及其功能研究

红笛鲷TRAF3基因的克隆、表达及其功能研究

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2014年中国水产学会学术年会

作者：夏洪丽蔡佳鲁义善简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室仲恺农业工程学院

TRAF3(Tumor Necrosis Factor receptor-associated factor 3)是TRAF家族成员之一,能够与胞内多种受体如TNFR、NLR、TLR/IL-1R等相互作用,进而调节NF-κB和MAPK信号通路的活性。为研究TRAF3在鱼类免疫信号转导中的作用。本研究利用RACE技术克隆了红笛鲷TRAF3(Ls-TRAF3)基因全长,通过蛋白结构域分析发现Ls-TRAF3在N端含有1个环指结构,2个锌指结构,C端还有该家族保守的coiled coil和MATH结构域。荧光显微镜观察显示Ls-TRAF3为全细胞分布。Ls-TRAF3在所有组织中均有表达,尤其在脾、头肾和肝脏中表达量较高。在哈氏弧菌、poly I:C分别刺激后,Ls-TRAF3在脾脏中表达量均有不同程度的提高,说明Ls-TRAF3可能参与了红笛鲷的免疫应答过程。上述研究结果为进一步研究TRAF3的功能以及鱼类的免疫机制奠定了基础。

关键词：红笛鲷 TRAF3 免疫

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马氏珠母贝早期生长性状的遗传参数估计

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广东海洋大学学报 2014年第3期34卷 10-16页

作者：陶后全吴灶和白成刘冠刘志刚广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225 雷州市源源至水产种苗繁育有限公司广东湛江524000

以马氏珠母贝选育系F6代为亲本，采用巢式设计方法和人工解剖授精技术，依照1雄配3雌的原则，建立了8个父系半同胞家系和24个母系全同胞家系，在第8、21、35和50天测定了每个母系全同胞个体的壳长和壳高，以全同胞组内相关分析法估计马... 详细信息

以马氏珠母贝选育系F6代为亲本，采用巢式设计方法和人工解剖授精技术，依照1雄配3雌的原则，建立了8个父系半同胞家系和24个母系全同胞家系，在第8、21、35和50天测定了每个母系全同胞个体的壳长和壳高，以全同胞组内相关分析法估计马氏珠母贝早期生长性状的遗传参数。结果表明，母系半同胞个体具有较大的变异程度，存在着较大的母性效应，父系半同胞组内相关分析法估算的狭义遗传力是马氏珠母贝遗传力的估计值。8．50日龄壳长狭义遗传力估计值为0．11～1．14，壳高狭义遗传力估计值为0．12～1．04，其中利用父系半同胞组内相关法估计壳长的遗传力依次为0．17、0．19、0．12、0．11，壳高的遗传力依次为0．20、0．23、0．13、0．12，属于中等遗传力。马氏珠母贝早期生长性状的遗传相关和表型相关表现为一定的正相关，相关系数的范围分别为0．528～0．746和0．747—0．921。在早期生长阶段以壳长或壳高为参数进行选择育种时，具有较大的遗传改良潜力。

关键词：马氏珠母贝幼体生长性状遗传力遗传相关

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哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因克隆、表达及DNA疫苗的免疫效果

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水产学报 2013年第12期37卷 1839-1847页

作者：黄浦江黄郁葱简纪常吴灶和鲁义善张雪利广东海洋大学水产学院广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东海洋大学广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室仲恺农业工程学院

参照GenBank上登录的哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因序列,设计引物扩增OmpW的开放阅读框,序列分析结果显示该基因全长645 bp。将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌BL21中成功表达出带His-tag的融合蛋白,融合蛋白分子量约为43.... 详细信息

参照GenBank上登录的哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因序列,设计引物扩增OmpW的开放阅读框,序列分析结果显示该基因全长645 bp。将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌BL21中成功表达出带His-tag的融合蛋白,融合蛋白分子量约为43.8 ku,且主要以包涵体形式存在。优化的表达条件为37℃,IPTG浓度0.1 mmol/L,诱导时间5 h。将纯化的融合蛋白免疫SPF昆明小鼠制备多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价达1∶30 000,Western-blot结果表明鼠抗OmpW血清能与诱导后的重组蛋白发生特异反应,提示OmpW可能是哈维氏弧菌的一种重要保护性抗原。为进一步研究哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因DNA疫苗对红笛鲷的免疫保护效果,构建了真核表达重组质粒pcDNA-OmpW,然后将真核质粒免疫接种红笛鲷。PCR结果显示,免疫接种后第728天,在红笛鲷的肌肉、头肾、肝脏和脾脏组织中均存在质粒分布;RT-PCR结果显示,免疫接种后第728天,红笛鲷上述组织均有目的基因的表达。ELISA结果表明,红笛鲷体内血清产生了抗OmpW蛋白的高效价抗体。Western-blot分析表明,DNA疫苗免疫后红笛鲷体内表达了相应的目的蛋白,并诱导产生了相应抗体。攻毒实验结果表明,免疫保护率高达60%,可见pcDNA-OmpW可作为红笛鲷预防哈维氏弧菌感染的有效候选疫苗之一。

关键词：哈维氏弧菌外膜蛋白 OmpW 免疫原性 DNA疫苗

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