检索结果-内蒙古大学图书馆

广东海洋大学学报 2012年第1期32卷 1-10页

作者：周晴简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510000

应用Real-time PCR技术,研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、苯酚、硫酸铜刺激红笛鲷(Lutjanussanguineus)后非特异性细胞毒性细胞受体(NCCRP-1)基因在不同组织里的表达差异。结果发现,LPS刺激红笛鲷24 h后NCCRP-1在红笛鲷头肾、脾脏... 详细信息

应用Real-time PCR技术,研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、苯酚、硫酸铜刺激红笛鲷(Lutjanussanguineus)后非特异性细胞毒性细胞受体(NCCRP-1)基因在不同组织里的表达差异。结果发现,LPS刺激红笛鲷24 h后NCCRP-1在红笛鲷头肾、脾脏、胸腺、肝脏、心脏、脑、肌肉和肠组织中均有表达,其中头肾表达量最高,脾脏次之,然后依次是肝脏、脑、肌肉、胸腺和肠,心脏表达量最少。LPS、苯酚和CuSO4刺激红笛鲷后,随着刺激时间的增长,NCCRP-1表达量在各组织达到峰值的时间不同。以头肾为模式组织,RT-PCR的结果显示,红笛鲷NCCRP-1在LPS、苯酚和CuSO4的刺激下的表达模式相似,随着时间的增加NCCRP-1表达量逐渐增加,分别在24、9、12 h处达到最高,达到对照组的52、30、24倍左右,之后表达量开始下降。免疫组织化学表明,NCCRP-1只在头肾、脾脏和胸腺的特定细胞中表达。

关键词：红笛鲷 NCCRP-1 基因表达脂多糖苯酚硫酸铜免疫组织化学荧光定量PCR

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草鱼呼肠孤病毒vp5基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测

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广东海洋大学学报 2012年第3期32卷 42-48页

作者：谢吉国闫秀英简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510000

根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性... 详细信息

根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性和毒性检测。PCR、酶切以及测序表明,pGBKT7-vp5重组诱饵载体构建成功。自激活性和毒性检测显示,阳性重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold和阴性对照菌株pGBKT7/Y2HGold在SD/-Trp平板上出现大小相一致的乳白色菌落,且在SD/-Trp/X-α-Gel、SD/-Trp/AbA+/X-α-Gel平板上生长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/-Ade/-His无菌落出现。表明重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold表达的融合蛋白激活了报告基因AUR1-C和MEL1,没有激活报告基因ADE2和HIS3并且对宿主菌无毒性。该重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统进一步筛选cDNA文库中与其相互作用的蛋白。

关键词：草鱼呼肠孤病毒酵母双杂交系统诱饵载体自激活性

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罗非鱼源无乳链球菌培养基及培养条件的优化

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广东海洋大学学报 2012年第3期32卷 49-54页

作者：陈贺吴灶和王蓓黄郁葱鲁义善简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510225

研究无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQGY08的培养与生长特性,探讨脑心浸液(Brian Heart Infusion,BHI)培养基的营养因子、初始pH值、溶氧、温度等因素对无乳链球菌生长的影响,并采用正交实验法对无乳链球菌培养基营养因子添加量... 详细信息

研究无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQGY08的培养与生长特性,探讨脑心浸液(Brian Heart Infusion,BHI)培养基的营养因子、初始pH值、溶氧、温度等因素对无乳链球菌生长的影响,并采用正交实验法对无乳链球菌培养基营养因子添加量进行优化。结果表明,无乳链球菌生长的最适初始pH为7～8,培养温度为28～37℃,振荡转速为180～200 r/min。在BHI培养基中添加20 mg/mL的酵母粉和2 mg/mL的葡萄糖即可在对数期获得最大细菌量。

关键词：无乳链球菌培养基培养条件优化

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无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫效果

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广东海洋大学学报 2012年第6期32卷 50-56页

作者：陈贺吴灶和王蓓鲁义善黄郁葱简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 湛江恒兴南方海洋科技有限公司广东湛江524073 仲恺农业工程学院广东广州510225

制备无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）临床分离株ZJ02的灭活疫苗，采用注射和浸泡2种方法，研究疫苗对吉富罗非鱼（Oreochromisniloticus）的免疫保护效果和血清抗体效价。注射组以4个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫罗非鱼，浸... 详细信息

制备无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）临床分离株ZJ02的灭活疫苗，采用注射和浸泡2种方法，研究疫苗对吉富罗非鱼（Oreochromisniloticus）的免疫保护效果和血清抗体效价。注射组以4个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫罗非鱼，浸泡组以相同免疫剂量的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠3种佐剂免疫罗非鱼。结果显示，无乳链球菌疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性，与对照组相比，免疫组血清中的抗体效价水平均显著性提高（P〈0．05），注射组和浸泡组的抗体效价最高分别达到1：256和1：128；注射组中不同剂量的疫苗免疫组免疫保护率较高，高浓度组可达到95％，浸泡组中使用3种佐剂的免疫组免疫保护率分别为59％、64％、55％。表明无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼具有很好的免疫保护性，免疫剂量在5×10^8～4×10^8cfu／mL之间对注射免疫效果有显著性影响，消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠对浸泡免疫效果具有不同的免疫保护率。

关键词：无乳链球菌疫苗罗非鱼免疫保护率

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红笛鲷α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的克隆及序列分析

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广东海洋大学学报 2011年第3期31卷 1-6页

作者：张新中鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

应用已知的标签序列通过RACE-PCR和RT-PCR方法成功克隆红笛鲷（Lutjanus sanguineus）α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的全长cDNA序列。α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的cDNA全长分别为560和563 bp,开放阅读框分别为429和444 bp,各编码143和148个... 详细信息

应用已知的标签序列通过RACE-PCR和RT-PCR方法成功克隆红笛鲷（Lutjanus sanguineus）α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的全长cDNA序列。α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的cDNA全长分别为560和563 bp,开放阅读框分别为429和444 bp,各编码143和148个氨基酸,理论相对分子质量分别为15690和16400,理论等电点为7.79和6.61。氨基酸序列BLAST结果表明,红笛鲷α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因编码的氨基酸序列与其他鱼类的相似性分别在59%-79%和55%-80%之间。用邻接法（Neighbor-Joining）构建的α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因的系统发育树表明,红笛鲷与真鲷（Pagrus major）、金头鲷（Sparus aurata）和鰤（Seriola quinqueradiata）等亲缘关系较近。

关键词：红笛鲷 α-珠蛋白 β-珠蛋白基因克隆基因序列

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溶藻弧菌鞭毛蛋白双基因融合表达载体的构建

溶藻弧菌鞭毛蛋白双基因融合表达载体的构建

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2011年中国水产学会学术年会

作者：梁海鹰吴灶和简纪常鲁义善蔡佳广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室

将溶藻弧菌flaA和flaB二个基因,应用重叠延伸剪切技术(splicing by over lappingextension),经三次PCR获得融合基因flaA-flaB,定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,筛选阳性克隆,经酶切及菌落PCR鉴定,并通过DNA测序进一步证实,成功构建... 详细信息

将溶藻弧菌flaA和flaB二个基因,应用重叠延伸剪切技术(splicing by over lappingextension),经三次PCR获得融合基因flaA-flaB,定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,筛选阳性克隆,经酶切及菌落PCR鉴定,并通过DNA测序进一步证实,成功构建了融合基因原核表达载体pET-flaA-flaB。融合基因flaA-flaB在大肠杆菌中获得表达。带His-Tag的重组融合蛋白经镍亲和层析得到进一步纯化,Western blot结果表明鼠抗FIaA血清与鼠抗FlaB血清都能与融合蛋白FlaA-FlaB发生特异性免疫反应,为下一步研究融合蛋白的免疫原性奠定基础,为溶藻弧菌核酸双价疫苗的研制提供依据。

关键词：溶藻弧菌 flaA flaB SOEing技术基因融合

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溶藻弧菌鞭毛蛋白DNA疫苗对红鳍笛鲷的免疫保护研究

溶藻弧菌鞭毛蛋白DNA疫苗对红鳍笛鲷的免疫保护研究

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2010年中国水产学会学术年会

作者：梁海鹰吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室

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无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

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2011年中国水产学会学术年会

作者：陈贺简纪常鲁义善黄郁葱王蓓广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成疫苗,通过注射和浸泡两种途径免疫吉富罗非鱼,其中注射组分别以四个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫吉富罗非鱼,对照组注射PBS;浸泡组以相同浓度的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪... 详细信息

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成疫苗,通过注射和浸泡两种途径免疫吉富罗非鱼,其中注射组分别以四个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫吉富罗非鱼,对照组注射PBS;浸泡组以相同浓度的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠三种佐剂免疫吉富罗非鱼,另设无佐剂组和对照组。免疫后每周测定血清的抗体效价,连续8周,并测定56天后以相应菌株攻毒后的相对保护率。结果表明,疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性,与对照组相比,血清中的抗体凝集效价均显著性提高,注射组中不同浓度的疫苗免疫组均获得了较高的免疫保护率,其中高浓度组可达到96%;浸泡组中疫苗与不同佐剂共同使用的免疫组也获得了较高的免疫保护率,其中使用佐剂消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚、氯化钠的免疫组免疫保护率明显高于无佐剂组和对照组。

关键词：无乳链球菌疫苗罗非鱼保护率

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无乳链球菌口服疫苗及浸泡结合口服疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

无乳链球菌口服疫苗及浸泡结合口服疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

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2011年中国水产学会学术年会

作者：徐潇洒简纪常鲁义善黄郁葱王蓓广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成水剂疫苗,用海藻酸钠作为口服疫苗的投递载体制备成口服疫苗微粒。通过拌料口服和浸泡结合口服两种途径免疫吉富罗非鱼,其中口服途径分别以三个不同浓度的口服疫苗,不含菌体的空微粒... 详细信息

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成水剂疫苗,用海藻酸钠作为口服疫苗的投递载体制备成口服疫苗微粒。通过拌料口服和浸泡结合口服两种途径免疫吉富罗非鱼,其中口服途径分别以三个不同浓度的口服疫苗,不含菌体的空微粒组和没有微球包被的菌体组免疫吉富罗非鱼,对照组投喂正常饲料;浸泡结合口服途径,设浸泡结合口服微粒组,浸泡结合菌体组,浸泡组和对照组。免疫后每周测定血清的抗体效价,连续8周,并测定56天后以相应菌株攻毒后的相对保护率。结果表明,疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性,与对照组相比,血清中的抗体凝集效价均显著性提高,口服组中不同浓度的疫苗免疫组均获得了较高的免疫保护率;浸泡结合口服组中浸泡结合口服微粒组也获得了较高的免疫保护率,免疫保护率明显高于其他组。

关键词：无乳链球菌疫苗罗非鱼保护率

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哈维氏弧菌遗传多样性的研究

哈维氏弧菌遗传多样性的研究

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2011年中国水产学会学术年会

作者：徐芝亮吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东·仲恺农业工程学院

本文研究了从湛江、海南、广西等地的患病的海水鱼类或是养殖区水样中分离101株哈维氏弧菌(***)的遗传多样性,主要是运用了血清学性状研究和分子学性状研究,探讨了***菌株之间的不同处,得到了如下研究结果。***的血清型把分离得到的101... 详细信息

本文研究了从湛江、海南、广西等地的患病的海水鱼类或是养殖区水样中分离101株哈维氏弧菌(***)的遗传多样性,主要是运用了血清学性状研究和分子学性状研究,探讨了***菌株之间的不同处,得到了如下研究结果。***的血清型把分离得到的101株***进行攻毒实验,得到32株有毒株,其中有20株为强毒株,12株为弱毒株;根据菌株的采集点和采集鱼种的不同及致病性选择了10株菌,培养后用甲醛灭活,分别接种家兔制备成抗血清,采用凝集法检测各个菌株的抗原性。结果表明本研究的101株中的93株表现为三种不同的血清型(A、B、C),而另外8株***无法用血清学分型。***的分子型把101株***,培养后用试剂盒提取其DNA,RAPD分型发现在相似度65%下,101株哈维氏弧菌可以分为A1-A18,18种不同型;以A2型和A7型的菌株数最多都有28株。BOX分型发现在相似度为40%的情况下,可以把101株哈维式弧菌分为B1-B15,15种不同的型,主要有6种型为B1、B5、B6、B7、B8、B10。

关键词：海水鱼类哈维氏弧菌血清型 RAPD分型 BOX分型

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