检索结果-内蒙古大学图书馆

中国水产科学 2010年第2期17卷 374-380页

作者：魏世娜简纪常吴灶和鲁义善闫秀英广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

自然杀伤细胞(NK)进化上的前体细胞在鱼类中被称作非特异性细胞毒性细胞(NCC),主要来源于血液和淋巴器官,是防御细菌、病毒、寄生性原生动物等入侵的第一道防线,在非特异性免疫中起重要作用,还具有体外杀伤肿瘤细胞的功能。近年来免疫... 详细信息

自然杀伤细胞(NK)进化上的前体细胞在鱼类中被称作非特异性细胞毒性细胞(NCC),主要来源于血液和淋巴器官,是防御细菌、病毒、寄生性原生动物等入侵的第一道防线,在非特异性免疫中起重要作用,还具有体外杀伤肿瘤细胞的功能。近年来免疫荧光显微镜技术表明NCAMP-1和NCCRP-1两种受体蛋白均表达于NCC膜上,并且这种免疫细胞从鱼类到哺乳动物上的进化是保守的,这些膜蛋白在鱼类炎症反应期可能通过颗粒胞吐途径参与抗菌的先天性免疫。本文就NCC的分离鉴定、形态结构、功能受体作用机制等方面的研究成果作一综述,旨在为深入研究NCC在鱼类先天性防御中的作用提供依据。

关键词：非特异性细胞毒性细胞分离鉴定 NCC受体

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溶藻弧菌诱导凡纳滨对虾消减文库的构建及其表达序列标签分析

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水生生物学报 2010年第1期34卷 157-163页

作者：蔡小辉鲁义善吴灶和简纪常王蓓蔡双虎广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524025

利用抑制消减杂交技术构建了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)诱导的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)血淋巴细胞cDNA文库。用DNAMAN5.2.2软件对560条高质量的ESTs进行聚类,共获得239个Unigenes。与GenBank进行BLASTx和BLASTn同源比较,其中66.9%为已知功能基因,33.1%为未知功能基因,GO分类将其分为7类,包括能量和基础代谢类相关的基因为第一大类占36%,免疫相关基因占15%,其他基因占8%,信号转导类占3%,抗氧化酶和凋亡相关蛋白均为2%,核蛋白类占1%。实验结果表明凡纳滨对虾在溶藻弧菌诱导下可产生一系列特异基因的表达,通过对文库的分析显示,基于PCR方法建立的SSH文库为取得大量免疫相关基因的ESTs序列提供了可能。

关键词：凡纳滨对虾溶藻弧菌抑制消减杂交(SSH) 表达序列标签(EST)

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溶藻弧菌HY9901鞭毛蛋白flaB基因的克隆及原核表达

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水产学报 2010年第1期34卷 139-146页

作者：梁海鹰夏立群吴灶和简纪常鲁义善中国科学院南海海洋研究所广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室中国科学院研究生院

参照GenBank上登录的弧菌鞭毛蛋白flaB基因序列设计引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的flaB全长基因,序列分析结果显示该基因为1134bp,编码377个氨基酸。与GenBank中其它弧菌的同源基因序列比对显示,溶藻弧菌flaB基因与副溶血弧菌flaB基因... 详细信息

参照GenBank上登录的弧菌鞭毛蛋白flaB基因序列设计引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的flaB全长基因,序列分析结果显示该基因为1134bp,编码377个氨基酸。与GenBank中其它弧菌的同源基因序列比对显示,溶藻弧菌flaB基因与副溶血弧菌flaB基因的同源性最高(92%)。将该基因定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出带His-tag的融合蛋白,分子量大小与预期一致。优化的表达条件为28℃,0.4mmol/LIPTG浓度诱导10h。用纯化后的融合蛋白免疫SPF级小鼠,制备了多克隆抗体。Western-blotting结果表明鼠抗FlaB血清不仅能与诱导后的重组蛋白发生反应,而且能与天然的溶藻弧菌全菌蛋白发生反应,提示鞭毛蛋白FlaB可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一,为下一步进行FlaB蛋白免疫原性的研究以及疫苗的制备奠定了基础。

关键词：溶藻弧菌鞭毛蛋白 flaB基因原核表达

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用免疫蛋白质组学方法筛选哈氏弧菌免疫反应蛋白

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水产学报 2010年第4期34卷 635-642页

作者：李岩庞欢瑛鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东海洋大学水产学院广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东海洋大学水产学院中国科学院南海海洋研究所中国科学院研究生院

用免疫蛋白质组学的研究方法鉴定了哈氏弧菌的免疫反应蛋白。将哈氏弧菌接种于TSB培养基28℃培养18h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,一向电泳采用7cmpH4～7的胶条进行等电聚焦,二向用12.5%的SDS-PAGE胶分离蛋白质,考马斯亮蓝染... 详细信息

用免疫蛋白质组学的研究方法鉴定了哈氏弧菌的免疫反应蛋白。将哈氏弧菌接种于TSB培养基28℃培养18h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,一向电泳采用7cmpH4～7的胶条进行等电聚焦,二向用12.5%的SDS-PAGE胶分离蛋白质,考马斯亮蓝染色,获得双向电泳图谱,再结合免疫转印技术检测免疫反应的蛋白质,利用ImageMaster 2D Platinum进行配对分析得到15个非特异性的免疫反应性蛋白点,30个特异性的免疫反应性蛋白点。经过鉴定得到13种非特异性的免疫反应性蛋白质,这其中有2对蛋白在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白;同时得到28种特异性的免疫反应性蛋白质,有一个蛋白点没有在数据库中查找到相对应的蛋白质,还有1对蛋白在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白。将特异性免疫反应蛋白鉴定结果与非特异性比较发现有1对蛋白鉴定为同一种蛋白;另外,No.17和No.19是F0F1 ATP synthase的两个亚基。特异性免疫反应蛋白鉴定结果中有6个蛋白质是已知的其他细菌的具有免疫反应的蛋白,分别为OmpN,OmpW,OmpU,alanine dehydrogenase,Elongation factor Ts(EF-Ts),cysteine synthase成功建立了哈氏弧菌的免疫蛋白质组学研究方法,筛选出28种具有特异性免疫反应的蛋白质,为哈氏弧菌的免疫蛋白研究提供理论依据和操作框架。

关键词：哈氏弧菌免疫蛋白质组学全菌可溶性蛋白双向电泳

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溶藻弧菌全菌可溶性蛋白二维图谱的建立及部分蛋白分子的鉴定

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中国水产科学 2010年第3期17卷 404-413页

作者：庞欢瑛李岩鲁义善简纪常吴灶和中国科学院南海海洋研究所广东广州510301 中国科学院研究生院北京100049 广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524025 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

本研究采用蛋白质组学技术,建立了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03培养至稳定期的蛋白质组双向电泳图谱,并对部分蛋白分子进行了肽质量指纹图谱分析鉴定。首先将溶藻弧菌接种于TSB培养基28℃培养24 h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌... 详细信息

本研究采用蛋白质组学技术,建立了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03培养至稳定期的蛋白质组双向电泳图谱,并对部分蛋白分子进行了肽质量指纹图谱分析鉴定。首先将溶藻弧菌接种于TSB培养基28℃培养24 h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,荧光染料标记,24 cm pH4 ～ 7的胶条进行等电聚焦,再用12.5%的胶进行SDS-PAGE。2-D胶经过分析,得到902±8个蛋白斑点,重复胶的匹配点数为866±28,匹配率为96%。从双向电泳图谱中选取68个高丰度蛋白质点进行肽质量指纹图谱鉴定,其中60个在NMPDR数据库中得到鉴定,另外8个在NCBI数据库中得到鉴定。鉴定的蛋白中发现Serine protein kinase、purine nucleoside phosphorylase 和Alkyl hydroperoxide reductase subunit C-like protein存在修饰现象,它们在胶上均有2种表现形式。对68个蛋白进行了细胞功能的分类,发现能量代谢蛋白最多,占43%;其次是转运和结合蛋白,占9%;第三是外膜蛋白,占8%。经CMR操纵子预测软件分析预测到2个操纵子,它们均参与了能量代谢过程。研究结果为溶藻弧菌在不同生长条件下的比较蛋白质组学以及该菌强毒株和无毒株的比较研究提供了基础资料。

关键词：蛋白质组学溶藻弧菌全菌可溶性蛋白肽质量指纹图谱双向电泳

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多鳞鱚消化系统的形态学和组织学研究

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水产科学 2010年第6期29卷 339-343页

作者：曹剑香简纪常黄洋杜涛广东海洋大学广东省海洋开发研究中心广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 广东海洋大学高新科技园广东湛江524025

采用解剖和光镜技术研究多鳞鱚消化系统的形态学和组织学。试验结果表明,多鳞鱚消化道由口咽腔、食道、胃、幽门盲囊、小肠和直肠构成。口咽腔较小,具绒毛状颌齿,舌三角形,黏膜上皮为复层鳞状上皮,上皮含少量味蕾和较多杯状细胞。食道... 详细信息

采用解剖和光镜技术研究多鳞鱚消化系统的形态学和组织学。试验结果表明,多鳞鱚消化道由口咽腔、食道、胃、幽门盲囊、小肠和直肠构成。口咽腔较小,具绒毛状颌齿,舌三角形,黏膜上皮为复层鳞状上皮,上皮含少量味蕾和较多杯状细胞。食道黏膜也为复层上皮,从食道到胃,杯状细胞逐渐减少,上皮由复层上皮逐渐变为单层柱状上皮,肌肉层发达。胃为"Y"型胃,其盲囊部发达,黏膜上皮为单层柱状上皮,贲门部和盲囊部上皮下有一厚层胃腺组织。小肠短,肠道系数为0.56,上皮为具微绒毛的单层柱状上皮,杯状细胞前肠较多,中肠较少,后肠无,幽门盲囊4个,结构与小肠相似。直肠上皮为单层柱状上皮,上皮含少量杯状细胞,肌肉层较小肠发达。肝小叶不明显,肝细胞索明显。胰腺为弥散型,散布在肝脏组织中。

关键词：多鳞鱚消化系统形态学组织学

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红笛鲷NCCRP-1基因原核表达条件的优化及纯化

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广东海洋大学学报 2010年第6期30卷 25-30页

作者：魏世娜王蓓鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

通过克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)非特异性毒性细胞受体蛋白-1(nonspecific cytotoxic cell receptor protein-1,NCCRP-1)成熟肽基因序列,然后与载体连接构建pET21a-NCCRP融合蛋白表达载体,将其转入大肠杆菌BL21进行诱导表达并优化条件。SDS-PAGE分析表明,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度0.8 mmol/L、37℃条件下培养3 h后表达量最大,分子大小与预期值相符,融合蛋白主要以包涵体形式高效表达,通过HisTrap HP柱子使其得到进一步纯化;Western blot分析表明,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,说明获得该表达产物。

关键词：红笛鲷 NCCRP-1基因原核表达条件优化纯化

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溶藻弧菌HY9901鞭毛蛋白flaC基因的克隆和序列分析及真核表达质粒的构建

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吉首大学学报（自然科学版） 2010年第3期31卷 95-100页

作者：梁海鹰夏立群吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088

参照GenBank上登录的副溶血弧菌鞭毛蛋白flaC基因序列设计引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的flaC全长基因,序列分析结果显示该基因为1 155 bp,编码384个氨基酸.与GenBank中其他弧菌的同源基因序列比对显示,溶藻弧菌flaC基因与副溶血弧菌f... 详细信息

参照GenBank上登录的副溶血弧菌鞭毛蛋白flaC基因序列设计引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的flaC全长基因,序列分析结果显示该基因为1 155 bp,编码384个氨基酸.与GenBank中其他弧菌的同源基因序列比对显示,溶藻弧菌flaC基因与副溶血弧菌flaC基因的同源性最高(87%).将该基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,获得带溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因的真核表达重组质粒pcDNA-flaC,为其DNA疫苗的进一步研究奠定了基础.

关键词：溶藻弧菌 flaC基因基因克隆序列分析重组真核表达质粒

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溶藻弧菌鞭毛蛋白DNA疫苗对红鳍笛鲷的免疫保护研究

溶藻弧菌鞭毛蛋白DNA疫苗对红鳍笛鲷的免疫保护研究

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2010年中国水产学会学术年会

作者：梁海鹰吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室

将溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,成功构建真核表达质粒pcDNA-flaC,将该质粒肌肉注射红鳍笛鲷。采用PCR和RT-PCR,检测该真核表达质粒在红笛鲷组织内的分布、表达。PCR结果显示:免疫接种7 d和28 d,注射... 详细信息

将溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,成功构建真核表达质粒pcDNA-flaC,将该质粒肌肉注射红鳍笛鲷。采用PCR和RT-PCR,检测该真核表达质粒在红笛鲷组织内的分布、表达。PCR结果显示:免疫接种7 d和28 d,注射点周围肌肉、鳃、肾脏、肝脏和脾脏都存在质粒分布;RT-PCR检测结果显示:免疫接种后第7 d、14 d和第28 d,红鳍笛鲷不同组织内均有目的基因表达。ELISA检测抗体效价结果表明:鱼血清内产生了抗FlaC的抗体,表明DNA疫苗免疫后鱼体表达了目的蛋白,并诱导产生了相应抗体。攻毒实验表明免疫后的红笛鲷能较好地抵抗致病性溶藻弧菌的感染。这一研究表明质粒pcDNA-flaC可能是抵抗溶藻弧菌感染的有效的疫苗候选物。

关键词：溶藻弧菌 DNA疫苗红鳍笛鲷免疫保护率

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超声波平板法检测溶藻弧菌HY9901生物被膜的研究

超声波平板法检测溶藻弧菌HY9901生物被膜的研究

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中国南方十六省（市、区）水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会

作者：王蓓吴灶和简纪常鲁义善汤菊芬黄郁葱广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室

生物被膜存在广泛、难以发现并且具有处理困难等特点,对养殖业具有潜在的危害,并能引起水产品安全问题。本文以溶藻弧菌为研究对象,对定量检测生物被膜的超声波平板法进行条件优化,对优化的超声波平板法与平板擦拭法进行比较,并采用银... 详细信息

生物被膜存在广泛、难以发现并且具有处理困难等特点,对养殖业具有潜在的危害,并能引起水产品安全问题。本文以溶藻弧菌为研究对象,对定量检测生物被膜的超声波平板法进行条件优化,对优化的超声波平板法与平板擦拭法进行比较,并采用银染法进行验证。结果表明:优化的超声波平板法的最佳条件为:超声波功率120W,处理时间14min,处理温度25℃,优于平板擦拭法。

关键词：生物被膜溶藻弧菌超声波平板法优化条件

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