检索结果-内蒙古大学图书馆

广东海洋大学学报 2021年第5期41卷 35-43页

作者：王俊霖招茵苏茵茵周诗慧曾福源谢妙王娜简纪常庞欢瑛广东海洋大学水产学院/广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室/广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 中国检验检疫科学研究院北京100176

【目的】构建溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS)中的调控蛋白操纵子ExsD基因缺失株,研究exsD缺失株表型特征。【方法】采用overlapPCR技术构建缺失株ΔexsD,PCR检测缺失株ΔexsD的遗传稳定性... 详细信息

【目的】构建溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS)中的调控蛋白操纵子ExsD基因缺失株,研究exsD缺失株表型特征。【方法】采用overlapPCR技术构建缺失株ΔexsD,PCR检测缺失株ΔexsD的遗传稳定性,比较缺失株与野生株之间的生长速度、泳动能力、胞外酶活性、药物敏感性、毒力,分别采用结晶紫和共聚焦电镜方法测定生物膜的差异变化,通过qRT-PCR方法分析exsD的缺失对T3SS效应蛋白Hop转录的影响。【结果】缺失株ΔexsD构建成功;与野生株相比,ΔexsD遗传稳定性和生长速度无显著差别,但泳动能力极显著上升(P <0.01),胞外蛋白酶活性显著上升(P <0.05),形成生物膜能力在24 h时提高(P <0.05);相比野生株,ΔexsD对米诺环素、庆大霉素、卡那霉素、多西环素、新霉素的敏感性从耐药变成中度敏感;ΔexsD缺失株的毒力显著上升,野生株对斑马鱼的半数致死剂量是缺失株的3.68倍。实时荧光定量结果显示,与HY9901野生型相比,exsD基因的缺失增加了效应蛋白Hop的转录表达。【结论】exsD基因对T3SS的致病性起负调控作用,为进一步阐明exsD基因在溶藻弧菌中的作用机理提供一定的理论基础。

关键词：溶藻弧菌 Ⅲ型分泌系统 exsD基因基因敲除缺失株表型特征

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草鱼NCCRP-1和IL-10的表达、抗体制备及组织病理变化

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广东海洋大学学报 2021年第5期41卷 10-18页

作者：陈静妮代礼平雷燕胡海浩黄鉴涛简纪常闫秀英广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室/水产经济动物病害控制广东普通高校重点实验室广东湛江524088 广州利洋水产科技股份有限公司广东广州510515

【目的】制备草鱼(Ctenopharyngodon idella)非特异性细胞毒性细胞受体蛋白-1(NCCRP-1)和白细胞介素-10(IL-10)的抗血清,探讨重组NCCRP-1和IL-10免疫在草鱼抗病毒感染过程中肾脏和肠病理学变化及对NCCRP-1和IL-10表达的影响。【方法】应... 详细信息

【目的】制备草鱼(Ctenopharyngodon idella)非特异性细胞毒性细胞受体蛋白-1(NCCRP-1)和白细胞介素-10(IL-10)的抗血清,探讨重组NCCRP-1和IL-10免疫在草鱼抗病毒感染过程中肾脏和肠病理学变化及对NCCRP-1和IL-10表达的影响。【方法】应用PCR扩增技术获得草鱼NCCRP-1和IL-10开放阅读框ORF,构建原核表达载体pET-NCCRP和pET-IL10;用表达的重组蛋白分别制备兔抗NCCRP-1和IL-10的抗血清,并采用ELISA方法测定抗血清的效价;分别用重组NCCRP-1和IL-10免疫草鱼,并用草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)GD108攻毒,感染7 d后制备草鱼肾脏和肠的病理切片,用定量PCR和western blot检测NCCRP-1和IL-10的表达。【结果】草鱼NCCRP-1和IL-10的ORF分别编码237个和179个氨基酸;草鱼NCCRP-1和IL-10的原核表达载体pET-NCCRP和pET-IL10在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中成功诱导表达,最优表达条件分别是0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)37℃诱导4 h和1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导6 h,western blot分析表明重组表达的蛋白为目的蛋白;制备兔抗NCCRP-1和IL-10抗血清的效价均高达1∶40000,免疫和攻毒后,NCCRP-1免疫组草鱼肾脏与肠的病理变化较轻,且NCCRP-1在肾脏与肠中的表达量显著上调(P<0.05);IL-10免疫组草鱼肾脏与肠的病理变化较重,IL-10在肾脏与肠中的表达量变化不显著。【结论】外源性NCCRP-1免疫后增强了草鱼抵御GCRV-GD108感染的免疫应答,NCCRP-1对草鱼抗GCRV GD108感染效果显著;而外源性IL-10免疫后,其对草鱼抗GCRV GD108感染效果不显著。

关键词：草鱼非特异性细胞毒性细胞受体-1 白细胞介素-10 表达多克隆抗体组织病理学

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斜带石斑鱼热休克蛋白基因HSP70在LPS和Poly I∶C刺激下的表达分析及重组蛋白制备

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大连海洋大学学报 2021年第6期36卷 937-942页

作者：梁振宇邹子鸿汤菊芬黄瑜简纪常蔡佳广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 广西科学院广西北部湾海洋研究中心广西海洋天然产物与组合生物合成化学重点实验室广西南宁530007

为了解斜带石斑鱼Epinephelus coioides热休克蛋白(HSP70)基因(EcHSP70,GenBank登录号MW411059)在石斑鱼抗病原感染中的功能,采用荧光定量PCR检测了LPS与Poly I∶C刺激后48 h内,石斑鱼脾脏细胞(GS)中EcHSP70的表达变化;构建重组质粒EcHS... 详细信息

为了解斜带石斑鱼Epinephelus coioides热休克蛋白(HSP70)基因(EcHSP70,GenBank登录号MW411059)在石斑鱼抗病原感染中的功能,采用荧光定量PCR检测了LPS与Poly I∶C刺激后48 h内,石斑鱼脾脏细胞(GS)中EcHSP70的表达变化;构建重组质粒EcHSP70-4T,转化到BL21(DE3)后进行诱导表达,利用SDS-PAGE电泳和Western blot检测EcHSP70重组蛋白的表达形式。结果表明:LPS与Poly I∶C刺激后,石斑鱼脾脏细胞中EcHSP70基因表达量上调;SDS-PAGE与Western blot检测表明,EcHSP70-4T重组蛋白相对分子质量约为96000,主要以包涵体形式表达。研究表明,EcHSP70蛋白可能参与了石斑鱼的免疫反应,其在大肠杆菌中能以包涵体形式高效表达,并纯化获得了EcHSP70重组蛋白,本研究结果为鉴定EcHSP70的互作蛋白及进一步了解该蛋白在免疫反应中的作用机制提供了数据参考。

关键词：斜带石斑鱼 HSP70基因表达分析原核表达脂多糖聚肌胞

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罗非鱼SRA4基因重组表达、亚细胞定位及组织分布

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广东海洋大学学报 2021年第5期41卷 19-27页

作者：黄子威汪志文黎源夏洪丽简纪常鲁义善广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 广东海洋大学深圳研究院广东省水生动物健康评估工程技术研究中心广东深圳518000

【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)清道夫受体基因(On-SRA4)的重组表达、亚细胞定位及组织分布,为深入研究On-SRA4基因功能奠定基础。【方法】根据NCBI上公布的On-SRA4基因序列设计克隆引物,构建原核表达载体并诱导重组蛋... 详细信息

【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)清道夫受体基因(On-SRA4)的重组表达、亚细胞定位及组织分布,为深入研究On-SRA4基因功能奠定基础。【方法】根据NCBI上公布的On-SRA4基因序列设计克隆引物,构建原核表达载体并诱导重组蛋白rOn-SRA4的表达。同时,采用生物信息学、亚细胞定位手段分析On-SRA4的结构特征,用实时定量PCR分析On-SRA4在头肾、胸腺、脾脏、肝、肠道、鳃、脑、肌肉、皮肤、血液的表达水平,用灭活无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、病毒类似物Poly I:C刺激健康罗非鱼,分析On-SRA4在头肾、胸腺、脾脏、肠道的表达水平。【结果与结论】成功构建原核表达载体pET28a-OnSRA4,诱导获得目的蛋白rOn-SRA4,rOn-SRA4分子质量约80 ku。亚细胞定位显示,rOn-SRA4定位于细胞核与细胞质。组织定量分析表明,On-SRA4在所有组织中均有表达,且在血液中表达量最高,在灭活无乳链球菌与Poly I:C刺激后,健康罗非鱼胸腺、肠道、脾脏和头肾中On-SRA4表达量均显著升高,表明On-SRA4参与了病原引起的免疫反应,是罗非鱼抵抗病原的相关基因。

关键词：尼罗罗非鱼 On-SRA4 重组表达 RT-qPCR 亚细胞定位

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纳米材料在渔用疫苗中的研究进展

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广东农业科学 2021年第1期48卷 134-141页

作者：陈信锦王忠良黄瑜樊博琳简纪常王蓓广东海洋大学水产学院/广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室/广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 中国科学院实验海洋生物学重点实验室/中国科学院海洋研究所/海洋生物学与生物技术功能实验室/青岛海洋科学与技术试点国家实验室山东青岛266071

鱼病治疗研究已从大量使用抗生素转向主要以灭活细菌为基础的疫苗开发。渔用疫苗主要为注射疫苗,虽能有效防治许多不同的水产疾病,但注射疫苗存在的副作用不可忽视。相比之下,口服疫苗和浸泡疫苗可能是鱼类接种的最佳途径,但鱼类对抗原... 详细信息

鱼病治疗研究已从大量使用抗生素转向主要以灭活细菌为基础的疫苗开发。渔用疫苗主要为注射疫苗,虽能有效防治许多不同的水产疾病,但注射疫苗存在的副作用不可忽视。相比之下,口服疫苗和浸泡疫苗可能是鱼类接种的最佳途径,但鱼类对抗原的摄取有限,通常需要反复多次接种。纳米颗粒作为疫苗递送系统已被认为是改善和解决这些问题的有力工具。纳米颗粒是具有低毒性、良好生物降解性和特定物理属性(大小、表面电荷或负载能力)的分散体或固体颗粒,允许受控输送,从而改善免疫系统的靶向性和刺激性。这些纳米递送系统在鱼类中的应用还处于开发的初始阶段。综述了纳米颗粒在鱼类疫苗研究中的应用进展,重点介绍了聚乳酸-乙醇酸纳米颗粒、壳聚糖纳米颗粒、脂质体和碳纳米管,提出了未来渔用疫苗研究的热点方向以及需要解决的问题,为渔用疫苗的开发提供一个新思路。

关键词：纳米颗粒渔用疫苗疫苗递送聚乳酸-羟基乙酸(PLGA) 壳聚糖脂质体碳纳米管

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溶藻弧菌PepA蛋白原核表达载体的构建及其乙酰化鉴定

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生物技术通报 2020年第12期36卷 75-81页

作者：徐洲范晨龙丁燏广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088

旨为构建溶藻弧菌HY9901 PepA蛋白的原核表达载体、优化其表达条件,并分析该蛋白是否存在乙酰化调控。首先设计特异性引物经PCR克隆pepA基因,构建表达载体pET-28a-PepA并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋... 详细信息

旨为构建溶藻弧菌HY9901 PepA蛋白的原核表达载体、优化其表达条件,并分析该蛋白是否存在乙酰化调控。首先设计特异性引物经PCR克隆pepA基因,构建表达载体pET-28a-PepA并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达及乙酰化情况。结果显示,表达菌株可以正确表达重组蛋白(60.7 kD),其最佳表达条件为:体积分数为0.1%的IPTG,37℃诱导5 h;Western blot结果表明,PepA蛋白是乙酰化蛋白,且在体外不存在去乙酰化。

关键词：溶藻弧菌 PepA蛋白表达条件优化乙酰化

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红笛鲷SR-BⅠ基因的原核表达及条件优化

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安徽农学通报 2021年第3期27卷 1-5,48页

作者：王一帆陈子茵贾新蕾黄增朝吕静黄郁葱广东海洋大学水产学院/广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东湛江524088

根据GenBank上登录的红笛鲷SR-BⅠ基因设计引物,采用RT-PCR方法扩增该基因胞外段序列,然后将该基因胞外段序列定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,将重组质粒转入大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,并对重组表达菌株的表达条件进行优化。... 详细信息

根据GenBank上登录的红笛鲷SR-BⅠ基因设计引物,采用RT-PCR方法扩增该基因胞外段序列,然后将该基因胞外段序列定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,将重组质粒转入大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,并对重组表达菌株的表达条件进行优化。结果显示,成功构建了原核表达载体pET28a-SR-BI,并能在大肠杆菌BL21中表达,表达的融合蛋白分子量为50.0ku。融合蛋白的最佳诱导表达温度、IPTG浓度和时间分别为16℃、0.05mmol/L和8h。研究结果为进一步研究SR-BI的功能奠定了基础。

关键词：红笛鲷 SR-BⅠ基因原核表达条件优化

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卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)热休克蛋白HSP30基因的克隆与组织表达

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安徽农业科学 2021年第2期49卷 81-86页

作者：肖梓颖王一帆梁雪茹黄郁葱广东海洋大学水产学院/广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东湛江524088

[目的]获得卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)HSP30基因并探讨其组织表达。[方法]采用RACE的方法从卵形鲳鲹脾组织克隆HSP30基因的cDNA全序列,并用荧光定量PCR分析在健康鱼及哈维氏弧菌感染后HSP30基因的组织表达。[结果]HSP30基因cDNA序列... 详细信息

[目的]获得卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)HSP30基因并探讨其组织表达。[方法]采用RACE的方法从卵形鲳鲹脾组织克隆HSP30基因的cDNA全序列,并用荧光定量PCR分析在健康鱼及哈维氏弧菌感染后HSP30基因的组织表达。[结果]HSP30基因cDNA序列全长913 bp,包含5′非编码区(5′UTR)89 bp、3′非编码区(3′UTR)188 bp,开放阅读框(ORF)636 bp,编码211个氨基酸。预测其氨基酸序列成熟肽的蛋白分子质量为24.1 kD,理论等电点为5.62。HSP30包括N-末端序列(NTS)、α-晶状体蛋白结构域(ACD)、C-末端序列(CTS)和C-末端延伸(CTE)。系统进化分析结果显示卵形鲳鲹HSP30与高体鰤(Seriola dumerili)HSP30聚为一支。卵形鲳鲹HSP30基因在各组织中均有不同程度的表达,其中肝组织中表达量最高,其次为皮肤、肌肉、脾、心、肾,其他组织的表达量较低。哈维弧菌侵染卵形鲳鲹后,肝、脾和肾组织中HSP30基因mRNA表达量均升高,肝组织中变化最显著。[结论]成功克隆了卵形鲳鲹HSP30基因,为进一步揭示卵形鲳鲹HSP30的抗菌免疫应答机制提供了理论依据。

关键词：卵形鲳鲹热休克蛋白 HSP30 基因克隆组织表达

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斜阳岛珊瑚礁区海泥可培养细菌的分离鉴定及其ECP抑菌作用

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基因组学与应用生物学 2020年第2期39卷 644-651页

作者：周诗慧吴志豪廖嘉明庞欢瑛鲁义善广东海洋大学深圳研究院深圳510000 广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088

为探究斜阳岛珊瑚礁区海洋微生物的代谢产物活性,为天然材料制备新药物资源的开发提供一定的理论依据和实践指导,本研究从斜阳岛珊瑚礁区海泥分离纯化得到3株菌株,经鉴定分别为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、Sphingopyxis terrae和Fic... 详细信息

为探究斜阳岛珊瑚礁区海洋微生物的代谢产物活性,为天然材料制备新药物资源的开发提供一定的理论依据和实践指导,本研究从斜阳岛珊瑚礁区海泥分离纯化得到3株菌株,经鉴定分别为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、Sphingopyxis terrae和Fictibacillus phosphorivorans,分别培养并提取3株细菌的胞外产物(extracellular products,ECP),与硝酸银制备成生物纳米银,OD法测定其抑菌(溶藻弧菌)动力曲线,用2倍稀释法测出3株菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别是21.2μg/mL、18.8μg/mL、20.0μg/mL,用牛津杯法分别测定了3株菌与溶藻弧菌的抑菌活性,抑菌直径分别是(12.20±0.18)mm、(1.32±0.12)mm、(10.81±0.15)mm,安全性实验表明此3株菌对鱼体是安全的。本实验对斜阳岛珊瑚礁区海泥中可培养细菌进行了初步分离与鉴定,并利用分离菌的胞外产物合成生物纳米银,结果显示其具有一定的抑菌效果,从而证明其具有开发新的天然防腐剂和新药的潜力。

关键词：珊瑚礁溶藻弧菌分离鉴定抑菌作用生物纳米银

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罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)新型AI-2信号分子受体RbsB蛋白结晶生长研究

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海洋与湖沼 2020年第1期51卷 132-140页

作者：樊博琳潘丽霞王忠良黎源简纪常王蓓广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 广西科学院南宁536000 中国科学院实验海洋生物学重点实验室中国科学院海洋研究所青岛266071 海洋生物学与生物技术功能实验室青岛海洋科学与技术试点国家实验室青岛266071

为了开展无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)核糖结合蛋白(Ribose binding protein B,RbsB)结构功能的研究,本实验根据已知无乳链球菌ZQ0910全基因组序列设计相关引物。采用PCR方法扩增其RbsB基因,随后将该基因定向克隆到原核表达载... 详细信息

为了开展无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)核糖结合蛋白(Ribose binding protein B,RbsB)结构功能的研究,本实验根据已知无乳链球菌ZQ0910全基因组序列设计相关引物。采用PCR方法扩增其RbsB基因,随后将该基因定向克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行IPTG诱导表达;采用HRV 3C蛋白酶切除GST标签,分子筛分离获得RbsB蛋白;运用生物信息学软件对RbsB基因序列进行分析,并对RbsB蛋白二级和三级结构进行预测;采用NeXtal Tubes JCSG Core Suite结晶试剂盒筛选蛋白结晶条件。研究结果表明,该基因全长为969碱基,编码322个氨基酸,RbsB蛋白理论分子量33.9ku,等电点为9.41,二级结构中α螺旋结构所占比重最高,建立RbsB蛋白三维结构模式图;经IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为59ku,筛选RbsB蛋白的初始结晶条件为(0.2mol/L di-Potassium hydrogen phosphate,20%(W/V)PEG3350;1.5mol/L ammonium sulfate,25%(V/V)Glycerol),获得RbsB蛋白结晶体。本研究结果可为无乳链球菌核糖结合蛋白(RbsB)的功能解析提供实验及理论基础。

关键词：无乳链球菌 RbsB蛋白蛋白纯化结晶化

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