检索结果-内蒙古大学图书馆

河北渔业 2017年第12期 34-37页

作者：韦光本唐黎广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东湛江524088 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025

随着南美白对虾(Penaeus vannamei)种质质量下降、养殖水体污染及养殖技术落后等问题的出现,制约了南美白对虾养殖业的发展。笔者调查海南省南美白对虾养成过程中常见病害及其防治技术,记录各种疾病的病原、发病症状及防治技术等,并研... 详细信息

随着南美白对虾(Penaeus vannamei)种质质量下降、养殖水体污染及养殖技术落后等问题的出现,制约了南美白对虾养殖业的发展。笔者调查海南省南美白对虾养成过程中常见病害及其防治技术,记录各种疾病的病原、发病症状及防治技术等,并研讨南美白对虾、水体、病原菌三者之间的影响关系,确定致病机理。调查发现,病害的发生与对虾体质下降和养殖水体的恶化程度有直接与间接关系,而病害防治的基本要求是增强对虾体质,促进养殖环境的物质转换和物质能量流动,提高水体的自净能力和减少有害物质的长期积累,从而减少病害发生,提高养成率和生产收益。

关键词：南美白对虾(Penaeus vannamei) 病害防治调查海南

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乌鳢出血病的病原及组织病理学研究

乌鳢出血病的病原及组织病理学研究

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中国水产学会鱼病专业委员会2017年学术讨论会

作者：伍元植简纪常蔡双虎广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东湛江524088

对广东顺德勒流镇某水产养殖场患出血病的乌鳢进行病原分离，对分离菌进行形态学分析、生化鉴定、PCR鉴定和人工感染.经鉴定，分离菌为温和气单胞菌，其半致死温度LD50为1.645×105CFU/g.组织病理学观察表明，鳃小片毛细血管严重充... 详细信息

对广东顺德勒流镇某水产养殖场患出血病的乌鳢进行病原分离，对分离菌进行形态学分析、生化鉴定、PCR鉴定和人工感染.经鉴定，分离菌为温和气单胞菌，其半致死温度LD50为1.645×105CFU/g.组织病理学观察表明，鳃小片毛细血管严重充血，基部细胞增生，部分鳃小片相互融合成肉芽肿结构;肝细胞出现空泡，部分区域肝细胞坏死、溶解和脂肪变性;肾小体血管球充血破裂，部分肾小管上皮细胞玻璃样变，细胞质中出现大量空泡;脾脏中血细胞明显增多，淋巴细胞减少;肠黏膜下层和固有膜可见结缔组织增生、水肿现象.温和气单胞菌可引起乌鳢的肝、脾和肾等重要器官出现典型的病理变化并引起死亡.

关键词：乌鳢出血病病原温和气单胞菌病理观察

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无乳链球菌phoB基因缺失株构建及其作为金鲳减毒活疫苗潜力的评估

无乳链球菌phoB基因缺失株构建及其作为金鲳减毒活疫苗潜力的评估

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2017广西海上丝绸之路建设·钦州论坛

作者：蔡小辉王蓓彭银辉黎源鲁义善黄郁葱简纪常吴灶和钦州学院海洋学院海洋生命科学与技术研究中心北部湾海洋生物多样性养护重点实验室中国钦州536011 广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室中国湛江524025 钦州学院海洋学院海洋生命科学与技术研究中心北部湾海洋生物多样性养护重点实验室中国钦州536011

无乳链球菌可以在吞噬细胞和非吞噬细胞中存活从而引起鱼类的败血症和脑膜炎。目前无乳链球菌的疫苗是基于胞外产物(extracellular,products,ECP)、亚单位和灭活全菌制备,然而无乳链球菌多种血清型的存在导致其免疫保护率大大降低。

关键词：无乳链球菌 phoB基因敲除减毒活疫苗金鲳

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无乳链球菌sodA基因的克隆、序列分析及原核表达载体构建

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广东海洋大学学报 2016年第3期36卷 15-19页

作者：王松艳蔡双虎鲁义善简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室广东湛江524088

无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)是引起我国南方罗非鱼链球菌病的主要病原之一,SodA是无乳链球菌重要的毒力因子之一。根据链球菌sod A基因保守区设计引物,采用PCR扩增sod A基因部分序列,反向PCR和巢式PCR扩增其侧翼序列,成功获... 详细信息

无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)是引起我国南方罗非鱼链球菌病的主要病原之一,SodA是无乳链球菌重要的毒力因子之一。根据链球菌sod A基因保守区设计引物,采用PCR扩增sod A基因部分序列,反向PCR和巢式PCR扩增其侧翼序列,成功获得无乳链球菌sod A基因。无乳链球菌sod A基因序列全长为699 bp,含开放阅读框609 bp,可编码202个氨基酸,演绎的SodA蛋白主要由α螺旋和不规则卷曲构成。BLAST分析表明,该蛋白氨基酸序列与犬链球菌(***)及副乳房链球菌(***)相应蛋白的氨基酸序列相似性分别高达80%和79%。将sodA基因克隆至原核表达载体pET28a上成功构建了重组质粒p ET28a-sod A,导入Escherichia coli BL21(DE3),诱导表达的重组蛋白质分子质量约为24 ku,主要以包涵体形式存在于表达菌中。

关键词：无乳链球菌 sodA基因克隆原核表达

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草鱼细胞系CIK酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用

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生物技术通报 2014年第6期30卷 128-133页

作者：闫秀英谢吉国李杰丁燏吴灶和鲁义善简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

旨在探索草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞蛋白质间的相互作用,运用SMART技术构建了草鱼肾组织细胞系CIK(Ctenopharyngodon idellus kidney)的酵母双杂交cDNA文库。提取CIK细胞总RNA后,分离纯化mRNA,然后以mRNA为模板,反转录合成cDNA第一链,再... 详细信息

旨在探索草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞蛋白质间的相互作用,运用SMART技术构建了草鱼肾组织细胞系CIK(Ctenopharyngodon idellus kidney)的酵母双杂交cDNA文库。提取CIK细胞总RNA后,分离纯化mRNA,然后以mRNA为模板,反转录合成cDNA第一链,再在DNA聚合酶作用下,通过长距离PCR,扩增双链cDNA。利用SMART技术,通过同源重组的方法,在酵母株Y187中构建了草鱼CIK细胞全长cDNA文库。经检测,未扩增文库的转化率为1.6×105,文库容量为2.4×106,插入的双链cDNA片段的长度为250-2 000 bp,文库滴度为7×107 CFU/mL,重组率为98%,此文库具有良好的cDNA片段多态性和完整性。利用构建的CIK酵母双杂交文库,以草鱼呼肠孤病毒的VP7和VP5蛋白作为诱饵进行筛选试验,得到VP7相互作用蛋白的阳性菌落,未得到VP5相互作用蛋白的阳性菌落。草鱼CIK细胞酵母双杂交cDNA文库的构建为研究草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞间的互作机制提供了重要研究工具。

关键词：草鱼肾组织细胞系酵母双杂交 cDNA文库蛋白质互作

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草鱼呼肠孤病毒096 vp7基因生物信息学分析及其酵母表达载体的构建

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广东海洋大学学报 2014年第6期34卷 31-37页

作者：郑树城谢吉国王雅蔡双虎简纪常吴灶和闫秀英广东海洋大学水产学院//广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088 北京市大兴区水产技术推广站北京102600

草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是草鱼出血病的病原。从患病草鱼体内分离到一株草鱼呼肠孤病毒GCRV 096,经反转录PCR,克隆得GCRV 096长度为855 bp的vp7基因,并分析该基因编码蛋白的特性。结果表明,同一基因型分离株VP7蛋白... 详细信息

草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是草鱼出血病的病原。从患病草鱼体内分离到一株草鱼呼肠孤病毒GCRV 096,经反转录PCR,克隆得GCRV 096长度为855 bp的vp7基因,并分析该基因编码蛋白的特性。结果表明,同一基因型分离株VP7蛋白间的差异不大,但不同基因型分离株VP7蛋白间存在很大的差异。对GCRV 096 VP7蛋白生物信息学分析表明,信号肽位点位于20氨基酸处,且VP7含有4个潜在的抗原决定簇。构建GCRV 096 vp7基因的酵母表达载体p GBKT7-S10,并成功转化至酵母中。

关键词：草鱼呼肠孤病毒 vp7基因生物信息学酵母表达载体

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红笛鲷tdt基因融合蛋白原核表达条件的优化及纯化

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广东海洋大学学报 2013年第1期33卷 44-49页

作者：黄瑜张雪利鲁义善简纪常吴灶和黄浦江周泽军广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510225

克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)末端脱氧核糖核酸转移酶TdT蛋白(Terminal deoxynucleotidyl transferases)成熟肽基因序列,并与pET-32a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-32a-TdT,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。运用传统方法优化诱导条件,以提高重组融合蛋白的表达效率。SDS-PAGE分析表明,37℃、0.7 mmol/L IPTG条件下诱导4 h后,TdT融合蛋白的表达量最大,分子质量大小与预测值相符,该蛋白主要以包涵体形式存在。利用HisTrap HP亲和层析柱使TdT蛋白得到进一步纯化,最佳咪唑洗脱浓度为300 mmol/L,Western blot分析显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性的结合,表明表达蛋白为目的蛋白。

关键词：红笛鲷 tdt基因原核表达优化纯化 Western blot分析

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草鱼NEDD4结合蛋白基因1原核表达条件的优化及纯化

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广东海洋大学学报 2013年第4期33卷 38-42页

作者：杨林蔡佳简纪常颜鹏鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510225

通过PCR方法克隆草鱼(Ctenopharyngodon idellus)NEDD4结合蛋白基因1(简称CiN4BP1)的开放阅读框(ORF)序列,将扩增产物与pET-32a(+)表达载体相连接,构建原核表达载体pET-N4BP1,对重组质粒进行酶切和测序鉴定,然后将其导入大肠杆菌BL21(DE... 详细信息

通过PCR方法克隆草鱼(Ctenopharyngodon idellus)NEDD4结合蛋白基因1(简称CiN4BP1)的开放阅读框(ORF)序列,将扩增产物与pET-32a(+)表达载体相连接,构建原核表达载体pET-N4BP1,对重组质粒进行酶切和测序鉴定,然后将其导入大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,检测该蛋白表达情况。SDS-PAGE分析表明,在温度为37℃,IPTG浓度为0.06 mmol/L,诱导时间为4 h时,N4BP1重组融合蛋白的表达量最高,蛋白分子质量为40.2 ku,与软件预测值大小相符,该蛋白主要以包涵体形式表达。利用His Trap HP亲和柱纯化目的蛋白;Western blot分析表明,N4BP1融合蛋白能与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性反应,说明该表达的蛋白为目的蛋白。

关键词：草鱼 N4BP1 原核表达表达条件优化纯化 Western blot分析

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凡纳滨对虾发光病病原的分离鉴定及防治措施

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江西水产科技 2013年第2期 6-11页

作者：邓传燕李色东陈贺黄郁葱湛江恒兴南方海洋科技有限公司广东湛江524073 广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

从广东某虾苗场患病虾苗体内分离到一株致病菌(D-1),回归感染实验证实该菌为虾苗发光病的致病菌。经BIOLOG细菌自动鉴定系统鉴定,该菌与哈维氏弧菌相似度最高(0.718),可利用的唯一碳源有乙酸、D-葡萄糖酸、麦芽糖、吐温、糊精等40种;采... 详细信息

从广东某虾苗场患病虾苗体内分离到一株致病菌(D-1),回归感染实验证实该菌为虾苗发光病的致病菌。经BIOLOG细菌自动鉴定系统鉴定,该菌与哈维氏弧菌相似度最高(0.718),可利用的唯一碳源有乙酸、D-葡萄糖酸、麦芽糖、吐温、糊精等40种;采用通用引物扩增出该菌的16S rRNA片段,并进行了序列分析,结果表明,该菌的16S rRNA序列与哈维氏弧菌同源性最高(99.84%),且在系统发育树上与其聚成一簇。药敏实验结果显示,在60种抗生素中菌株D-1仅对菌必治、复方新诺明、先锋必、亚胺培南、舒普深等12种药物敏感,对青霉素G、氨苄西林、米诺环素、米罗沙星等35种药物有抗性。防治实例表明,0.2 mg/L的舒普深能治愈发光率在10%以内的患病虾苗,治疗成活率为80%～90%。

关键词：凡纳滨对虾发光病哈维氏弧菌药敏实验

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红笛鲷重组激活基因rag1原核表达条件的优化及纯化

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广东海洋大学学报 2012年第1期32卷 11-16页

作者：张雪利鲁义善谢吉国简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)RAG1蛋白(recombination activating protein1)活性核心区的基因序列,并与pET-28a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-28a-RAG1,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用IPTG进行诱导表达。为提高融合蛋白的表达效率,运用传统的实验方法对诱导条件进行优化。SDS-PAGE分析表明,在37℃条件下,利用0.1 mmol/L IPTG诱导8 h后,RAG1重组融合蛋白的表达量最大,相对分子质量与预测值相符,该蛋白主要以包涵体形式高效表达,利用His Trap HP亲和柱使其得到进一步纯化;Western blot分析显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,说明表达蛋白为目的蛋白。

关键词：红笛鲷 rag1基因原核表达表达条件优化纯化 Western blot分析

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