检索结果-内蒙古大学图书馆

2017广西海上丝绸之路建设·钦州论坛

作者：蔡小辉王蓓彭银辉黎源鲁义善黄郁葱简纪常吴灶和钦州学院海洋学院海洋生命科学与技术研究中心北部湾海洋生物多样性养护重点实验室中国钦州536011 广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室中国湛江524025 钦州学院海洋学院海洋生命科学与技术研究中心北部湾海洋生物多样性养护重点实验室中国钦州536011

无乳链球菌可以在吞噬细胞和非吞噬细胞中存活从而引起鱼类的败血症和脑膜炎。目前无乳链球菌的疫苗是基于胞外产物(extracellular,products,ECP)、亚单位和灭活全菌制备,然而无乳链球菌多种血清型的存在导致其免疫保护率大大降低。

关键词：无乳链球菌 phoB基因敲除减毒活疫苗金鲳

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红笛鲷tdt基因融合蛋白原核表达条件的优化及纯化

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广东海洋大学学报 2013年第1期33卷 44-49页

作者：黄瑜张雪利鲁义善简纪常吴灶和黄浦江周泽军广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510225

克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)末端脱氧核糖核酸转移酶TdT蛋白(Terminal deoxynucleotidyl transferases)成熟肽基因序列,并与pET-32a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-32a-TdT,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。运用传统方法优化诱导条件,以提高重组融合蛋白的表达效率。SDS-PAGE分析表明,37℃、0.7 mmol/L IPTG条件下诱导4 h后,TdT融合蛋白的表达量最大,分子质量大小与预测值相符,该蛋白主要以包涵体形式存在。利用HisTrap HP亲和层析柱使TdT蛋白得到进一步纯化,最佳咪唑洗脱浓度为300 mmol/L,Western blot分析显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性的结合,表明表达蛋白为目的蛋白。

关键词：红笛鲷 tdt基因原核表达优化纯化 Western blot分析

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凡纳滨对虾发光病病原的分离鉴定及防治措施

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江西水产科技 2013年第2期 6-11页

作者：邓传燕李色东陈贺黄郁葱湛江恒兴南方海洋科技有限公司广东湛江524073 广东海洋大学水产学院广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

从广东某虾苗场患病虾苗体内分离到一株致病菌(D-1),回归感染实验证实该菌为虾苗发光病的致病菌。经BIOLOG细菌自动鉴定系统鉴定,该菌与哈维氏弧菌相似度最高(0.718),可利用的唯一碳源有乙酸、D-葡萄糖酸、麦芽糖、吐温、糊精等40种;采... 详细信息

从广东某虾苗场患病虾苗体内分离到一株致病菌(D-1),回归感染实验证实该菌为虾苗发光病的致病菌。经BIOLOG细菌自动鉴定系统鉴定,该菌与哈维氏弧菌相似度最高(0.718),可利用的唯一碳源有乙酸、D-葡萄糖酸、麦芽糖、吐温、糊精等40种;采用通用引物扩增出该菌的16S rRNA片段,并进行了序列分析,结果表明,该菌的16S rRNA序列与哈维氏弧菌同源性最高(99.84%),且在系统发育树上与其聚成一簇。药敏实验结果显示,在60种抗生素中菌株D-1仅对菌必治、复方新诺明、先锋必、亚胺培南、舒普深等12种药物敏感,对青霉素G、氨苄西林、米诺环素、米罗沙星等35种药物有抗性。防治实例表明,0.2 mg/L的舒普深能治愈发光率在10%以内的患病虾苗,治疗成活率为80%～90%。

关键词：凡纳滨对虾发光病哈维氏弧菌药敏实验

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草鱼NEDD4结合蛋白基因1原核表达条件的优化及纯化

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广东海洋大学学报 2013年第4期33卷 38-42页

作者：杨林蔡佳简纪常颜鹏鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510225

通过PCR方法克隆草鱼(Ctenopharyngodon idellus)NEDD4结合蛋白基因1(简称CiN4BP1)的开放阅读框(ORF)序列,将扩增产物与pET-32a(+)表达载体相连接,构建原核表达载体pET-N4BP1,对重组质粒进行酶切和测序鉴定,然后将其导入大肠杆菌BL21(DE... 详细信息

通过PCR方法克隆草鱼(Ctenopharyngodon idellus)NEDD4结合蛋白基因1(简称CiN4BP1)的开放阅读框(ORF)序列,将扩增产物与pET-32a(+)表达载体相连接,构建原核表达载体pET-N4BP1,对重组质粒进行酶切和测序鉴定,然后将其导入大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,检测该蛋白表达情况。SDS-PAGE分析表明,在温度为37℃,IPTG浓度为0.06 mmol/L,诱导时间为4 h时,N4BP1重组融合蛋白的表达量最高,蛋白分子质量为40.2 ku,与软件预测值大小相符,该蛋白主要以包涵体形式表达。利用His Trap HP亲和柱纯化目的蛋白;Western blot分析表明,N4BP1融合蛋白能与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性反应,说明该表达的蛋白为目的蛋白。

关键词：草鱼 N4BP1 原核表达表达条件优化纯化 Western blot分析

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红笛鲷重组激活基因rag1原核表达条件的优化及纯化

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广东海洋大学学报 2012年第1期32卷 11-16页

作者：张雪利鲁义善谢吉国简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)RAG1蛋白(recombination activating protein1)活性核心区的基因序列,并与pET-28a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-28a-RAG1,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用IPTG进行诱导表达。为提高融合蛋白的表达效率,运用传统的实验方法对诱导条件进行优化。SDS-PAGE分析表明,在37℃条件下,利用0.1 mmol/L IPTG诱导8 h后,RAG1重组融合蛋白的表达量最大,相对分子质量与预测值相符,该蛋白主要以包涵体形式高效表达,利用His Trap HP亲和柱使其得到进一步纯化;Western blot分析显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,说明表达蛋白为目的蛋白。

关键词：红笛鲷 rag1基因原核表达表达条件优化纯化 Western blot分析

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罗非鱼源无乳链球菌培养基及培养条件的优化

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广东海洋大学学报 2012年第3期32卷 49-54页

作者：陈贺吴灶和王蓓黄郁葱鲁义善简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510225

研究无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQGY08的培养与生长特性,探讨脑心浸液(Brian Heart Infusion,BHI)培养基的营养因子、初始pH值、溶氧、温度等因素对无乳链球菌生长的影响,并采用正交实验法对无乳链球菌培养基营养因子添加量... 详细信息

研究无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQGY08的培养与生长特性,探讨脑心浸液(Brian Heart Infusion,BHI)培养基的营养因子、初始pH值、溶氧、温度等因素对无乳链球菌生长的影响,并采用正交实验法对无乳链球菌培养基营养因子添加量进行优化。结果表明,无乳链球菌生长的最适初始pH为7～8,培养温度为28～37℃,振荡转速为180～200 r/min。在BHI培养基中添加20 mg/mL的酵母粉和2 mg/mL的葡萄糖即可在对数期获得最大细菌量。

关键词：无乳链球菌培养基培养条件优化

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脂多糖、苯酚、硫酸铜对红笛鲷非特异性细胞毒性细胞受体基因表达的影响

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广东海洋大学学报 2012年第1期32卷 1-10页

作者：周晴简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510000

应用Real-time PCR技术,研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、苯酚、硫酸铜刺激红笛鲷(Lutjanussanguineus)后非特异性细胞毒性细胞受体(NCCRP-1)基因在不同组织里的表达差异。结果发现,LPS刺激红笛鲷24 h后NCCRP-1在红笛鲷头肾、脾脏... 详细信息

应用Real-time PCR技术,研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、苯酚、硫酸铜刺激红笛鲷(Lutjanussanguineus)后非特异性细胞毒性细胞受体(NCCRP-1)基因在不同组织里的表达差异。结果发现,LPS刺激红笛鲷24 h后NCCRP-1在红笛鲷头肾、脾脏、胸腺、肝脏、心脏、脑、肌肉和肠组织中均有表达,其中头肾表达量最高,脾脏次之,然后依次是肝脏、脑、肌肉、胸腺和肠,心脏表达量最少。LPS、苯酚和CuSO4刺激红笛鲷后,随着刺激时间的增长,NCCRP-1表达量在各组织达到峰值的时间不同。以头肾为模式组织,RT-PCR的结果显示,红笛鲷NCCRP-1在LPS、苯酚和CuSO4的刺激下的表达模式相似,随着时间的增加NCCRP-1表达量逐渐增加,分别在24、9、12 h处达到最高,达到对照组的52、30、24倍左右,之后表达量开始下降。免疫组织化学表明,NCCRP-1只在头肾、脾脏和胸腺的特定细胞中表达。

关键词：红笛鲷 NCCRP-1 基因表达脂多糖苯酚硫酸铜免疫组织化学荧光定量PCR

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草鱼呼肠孤病毒vp5基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测

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广东海洋大学学报 2012年第3期32卷 42-48页

作者：谢吉国闫秀英简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510000

根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性... 详细信息

根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性和毒性检测。PCR、酶切以及测序表明,pGBKT7-vp5重组诱饵载体构建成功。自激活性和毒性检测显示,阳性重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold和阴性对照菌株pGBKT7/Y2HGold在SD/-Trp平板上出现大小相一致的乳白色菌落,且在SD/-Trp/X-α-Gel、SD/-Trp/AbA+/X-α-Gel平板上生长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/-Ade/-His无菌落出现。表明重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold表达的融合蛋白激活了报告基因AUR1-C和MEL1,没有激活报告基因ADE2和HIS3并且对宿主菌无毒性。该重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统进一步筛选cDNA文库中与其相互作用的蛋白。

关键词：草鱼呼肠孤病毒酵母双杂交系统诱饵载体自激活性

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无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫效果

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广东海洋大学学报 2012年第6期32卷 50-56页

作者：陈贺吴灶和王蓓鲁义善黄郁葱简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 湛江恒兴南方海洋科技有限公司广东湛江524073 仲恺农业工程学院广东广州510225

制备无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）临床分离株ZJ02的灭活疫苗，采用注射和浸泡2种方法，研究疫苗对吉富罗非鱼（Oreochromisniloticus）的免疫保护效果和血清抗体效价。注射组以4个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫罗非鱼，浸... 详细信息

制备无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）临床分离株ZJ02的灭活疫苗，采用注射和浸泡2种方法，研究疫苗对吉富罗非鱼（Oreochromisniloticus）的免疫保护效果和血清抗体效价。注射组以4个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫罗非鱼，浸泡组以相同免疫剂量的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠3种佐剂免疫罗非鱼。结果显示，无乳链球菌疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性，与对照组相比，免疫组血清中的抗体效价水平均显著性提高（P〈0．05），注射组和浸泡组的抗体效价最高分别达到1：256和1：128；注射组中不同剂量的疫苗免疫组免疫保护率较高，高浓度组可达到95％，浸泡组中使用3种佐剂的免疫组免疫保护率分别为59％、64％、55％。表明无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼具有很好的免疫保护性，免疫剂量在5×10^8～4×10^8cfu／mL之间对注射免疫效果有显著性影响，消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠对浸泡免疫效果具有不同的免疫保护率。

关键词：无乳链球菌疫苗罗非鱼免疫保护率

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红笛鲷α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的克隆及序列分析

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广东海洋大学学报 2011年第3期31卷 1-6页

作者：张新中鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

应用已知的标签序列通过RACE-PCR和RT-PCR方法成功克隆红笛鲷（Lutjanus sanguineus）α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的全长cDNA序列。α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的cDNA全长分别为560和563 bp,开放阅读框分别为429和444 bp,各编码143和148个... 详细信息

应用已知的标签序列通过RACE-PCR和RT-PCR方法成功克隆红笛鲷（Lutjanus sanguineus）α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的全长cDNA序列。α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的cDNA全长分别为560和563 bp,开放阅读框分别为429和444 bp,各编码143和148个氨基酸,理论相对分子质量分别为15690和16400,理论等电点为7.79和6.61。氨基酸序列BLAST结果表明,红笛鲷α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因编码的氨基酸序列与其他鱼类的相似性分别在59%-79%和55%-80%之间。用邻接法（Neighbor-Joining）构建的α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因的系统发育树表明,红笛鲷与真鲷（Pagrus major）、金头鲷（Sparus aurata）和鰤（Seriola quinqueradiata）等亲缘关系较近。

关键词：红笛鲷 α-珠蛋白 β-珠蛋白基因克隆基因序列

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