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作者：宋帅蔡汝健蒋智勇勾红潮李艳楚品品卞志标李春玲广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站/岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心

引言非洲猪瘟(African Swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)引起猪的一种高度接触性传染病,其临床症状和病理变化与经典猪瘟非常相似,有着较高的发病率和死亡率[1]。ASFV是一种大的、有囊膜的双链DNA病毒...

引言非洲猪瘟(African Swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)引起猪的一种高度接触性传染病,其临床症状和病理变化与经典猪瘟非常相似,有着较高的发病率和死亡率[1]。ASFV是一种大的、有囊膜的双链DNA病毒,病毒粒子呈二十面体对称,直径约200nm,在细胞质内复制,属于非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员[2]。

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七株鸡传染性支气管炎病毒S1和N基因序列分析

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广东畜牧兽医科技 2021年第4期46卷 34-38页

作者：周洁邝瑞欢黄允真董嘉文汪招雄孙敏华长江大学动物科学学院湖北荆州434025 广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东广州510640 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525000

本研究于2020年从广东省部分地区疑似鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染的病料中分离到7株病毒,对分离的病毒进行S1及N基因序列分析,结果显示:这7株分离株S1基因与我国常用的MASS型疫苗株H120之间核苷酸相似性为77.3%~81.9%,氨基酸序列相... 详细信息

本研究于2020年从广东省部分地区疑似鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染的病料中分离到7株病毒,对分离的病毒进行S1及N基因序列分析,结果显示:这7株分离株S1基因与我国常用的MASS型疫苗株H120之间核苷酸相似性为77.3%~81.9%,氨基酸序列相似性为75.2%~80.2%;N基因与4/91、H120疫苗株核苷酸相似性均为85.9%~89.1%。上述结果表明,流行株与经典疫苗株之间的序列差异较大。S1与N基因遗传进化分析显示:7株IBV中5株的S1基因属于GI⁃19(QX⁃type),2株分别属于GI⁃22(CK/CH/LSC/99⁃type)和GI⁃28(LDT3⁃type);6株N基因属于LX4⁃type,1株属于CK/CH/LSC/99⁃type。这7株IBV主要以QX⁃type为流行株,其中有3株发生了重组。这说明目前广东省主要流行QX⁃type毒株,但基因重组发生频率高,本研究为加强广东省鸡传染性支气管炎的免疫防控提供了参考。

关键词：传染性支气管炎病毒鸡重组

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鸡柔嫩艾美耳球虫基因工程疫苗AR的构建及其免疫保护作用研究

鸡柔嫩艾美耳球虫基因工程疫苗AR的构建及其免疫保护作用研究

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：邱茜茜戚南山廖申权李娟吕敏娜林栩慧蔡海明胡俊菁张健騑张旭孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室佛山科学技术学院

鸡球虫病是由艾美耳属球虫引起的鸡的一种肠道原虫病,严重危害养鸡业发展。目前鸡球虫病的防治主要依靠抗球虫药物和活卵囊疫苗,但抗球虫药物应用中的药物残留及活卵囊疫苗对免疫鸡体生产性能的潜在危害严重制约现有防控手段的应用,新... 详细信息

鸡球虫病是由艾美耳属球虫引起的鸡的一种肠道原虫病,严重危害养鸡业发展。目前鸡球虫病的防治主要依靠抗球虫药物和活卵囊疫苗,但抗球虫药物应用中的药物残留及活卵囊疫苗对免疫鸡体生产性能的潜在危害严重制约现有防控手段的应用,新型抗球虫制剂的研制亟待开发。鉴于此,本研究以致病力最强的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)为研究对象,选取在虫体入侵宿主细胞过程中起到重要作用的抗原蛋白EtRON2和EtAMA3,利用生信分析其关键功能结构域,选择免疫原性好的片段,通过分子生物学技术克隆获得958bp的串联多表位嵌合抗原片段AR,将嵌合抗原AR片段插入真核表达载体pcDNA3.1中,成功构建真核重组质粒pcDNA3.1-AR。经转染DF-1细胞和免疫肉鸡腿部,使用western blotting技术分别检测其体内外表达情况,结果显示pcDNA3.1-AR质粒在DF-1细胞及鸡体肌肉细胞均可高效表达约37 kDa的AR嵌合抗原蛋白。最后利用动物试验检验所构建真核质粒pcDNA3.1-AR对肉鸡感染鸡球虫病的免疫保护作用。本研究的开展将为新型抗鸡球虫疫苗的研究提供理论基础和新思路。

关键词：鸡球虫柔嫩艾美耳球虫 EtRON2 EtAMA3 基因工程疫苗

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柔嫩艾美耳球虫RUVB2解旋酶的表达纯化及活性分析

柔嫩艾美耳球虫RUVB2解旋酶的表达纯化及活性分析

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：陈君蔡海明戚南山廖申权李娟吕敏娜林栩慧胡俊菁张健騑孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室仲恺农业工程学院

RUVB like protein (简称"RUVBL")是AAA+ATPase家族一种与多种细胞活动相关的DNA解旋酶,起初人们发现RUVBL蛋白在重组和复制叉逆转中的作用,后续不断的研究发现,其还参与了多种细胞通路,如细胞周期进程、转录、DNA损伤反应等... 详细信息

RUVB like protein (简称"RUVBL")是AAA+ATPase家族一种与多种细胞活动相关的DNA解旋酶,起初人们发现RUVBL蛋白在重组和复制叉逆转中的作用,后续不断的研究发现,其还参与了多种细胞通路,如细胞周期进程、转录、DNA损伤反应等。在顶复门原虫RuvBL酶的相关研究中,报道较多是疟原虫和弓形虫等人兽共患寄生虫,至今为止尚未有柔嫩艾美耳球虫RuvB-Like(EtRuvBL)的相关报道。目前所知的EtRuvBL酶有EtRuvBL1、EtRuvBL2、RuvBL3三种,但其相关功能和特性均未被报道。为了研究EtRuvBL2的相关功能,通过PCR技术扩增EtRuvBL2基因,克隆到pSYNO-1原核表达载体上,转化BL21 (DE3)感受态细胞进行表达,通过烟草蚀纹病毒(tobacco etch virus,TEV)蛋白酶酶切后纯化获得EtRuvBL2重组蛋白。结果发现,His-MBP标签能够促进EtRuvBL2蛋白的可溶性表达。将纯化的蛋白进行ATPase活性、DNA解旋活性、DNA结合活性测定,结果显示EtRuvBL2具有典型的ATP酶活性,这些研究结果将有助于阐明柔嫩艾美耳球虫RuvBL2解旋酶的活性功能,为研究RuvBL解旋酶家族其它成员的结构与功能提供帮助。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 RuvBL2 DNA解旋酶酶活性

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鸡源产气荚膜梭菌的分离鉴定与药敏试验研究

鸡源产气荚膜梭菌的分离鉴定与药敏试验研究

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：刘少冰廖申权戚南山李娟吕敏娜林栩慧胡俊菁张健騑顾有方孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室安徽科技学院动物科技学院

为了对江苏连云港某鸡场疑似患鸡坏死性肠炎病的鸡群进行确诊,并为有效防治提供依据,本研究利用细菌学检验方法对采集的典型病料进行细菌分离鉴定和细菌药敏试验。通过细菌分离培养、形态学观察、荧光定量PCR鉴定等方法。结果成功分离获... 详细信息

为了对江苏连云港某鸡场疑似患鸡坏死性肠炎病的鸡群进行确诊,并为有效防治提供依据,本研究利用细菌学检验方法对采集的典型病料进行细菌分离鉴定和细菌药敏试验。通过细菌分离培养、形态学观察、荧光定量PCR鉴定等方法。结果成功分离获得1株产气荚膜梭菌,经qPCR检测表明所分离梭菌毒素型为A型。药敏试验结果表明该A型产气荚膜梭菌对头孢曲松、阿莫西林、青霉素、氨苄西林、甲硝锉、头孢噻肠和头孢氨苄均高度敏感,对环丙沙星、氧氟沙星中度敏感,但对卡那霉素、多粘菌素B、四环素、丁胺卡那、新霉素、氟苯尼考、丝诺沙星、链霉素、庆大霉素、制霉菌素、多西环素均耐药。本研究结果对鸡坏死性肠炎病的准确诊断和有效防治提供了依据和条件。

关键词：鸡产气荚膜梭菌分离鉴定药敏试验

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毒害艾美耳球虫早熟株的选育与生物学特性研究

毒害艾美耳球虫早熟株的选育与生物学特性研究

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：肖文婉廖申权戚南山李娟吕敏娜林栩慧蔡海明胡俊菁张健騑孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室仲恺农业工程学院

毒害艾美耳球虫是一种寄生于鸡体小肠且具有强致病力的虫种,感染病鸡小肠肿大,有小的白斑和针尖状淤血点,感染严重时可导致肠道出现肠管肿胀、肠壁粘膜增厚等严重病变甚至死亡,严重影响发病鸡群的增重、饲料转化利用率及生产性能,造成... 详细信息

毒害艾美耳球虫是一种寄生于鸡体小肠且具有强致病力的虫种,感染病鸡小肠肿大,有小的白斑和针尖状淤血点,感染严重时可导致肠道出现肠管肿胀、肠壁粘膜增厚等严重病变甚至死亡,严重影响发病鸡群的增重、饲料转化利用率及生产性能,造成高发病率及致死率。弱毒活卵囊疫苗是当前防控该病的有效手段,而弱毒选育是最佳的筛选疫苗方法。因此,本试验以毒害艾美耳球虫为研究对象,鉴定其生物学特性,并采用药物浓度递增法及早熟选育方法,选育毒害艾美耳球早熟株,通过对其卵囊形状指数、潜隐期、排卵囊规律、致病力、药物敏感性和免疫原性等特性的测定,探讨毒害艾美耳球虫早熟株的生物学特性,为研制高效安全的毒害艾美耳球虫早熟弱毒活疫苗提供候选虫株和理论依据。

关键词：鸡球虫病毒害艾美耳球虫早熟选育生物学特性

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广东地区柔嫩艾美耳球虫耐药性调查研究

广东地区柔嫩艾美耳球虫耐药性调查研究

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第16次学术研讨会

作者：尹理君廖申权孙铭飞吴彩艳林栩慧宋忠峰吕敏娜李娟蔡海明胡俊菁于林增肖文婉张健騑戚南山顾有方广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室安徽科技学院动物科技学院

鸡球虫病是一种严重危害养鸡业发展的肠道寄生原虫病,每年给养鸡业造成严重经济损失,常导致被感染鸡饲料转化率下降、生产性能降低甚至出现死亡现象,其防治主要依赖于饲料中添加抗球虫药物,但抗球虫药的长期使用也势必导致虫株耐药性的... 详细信息

鸡球虫病是一种严重危害养鸡业发展的肠道寄生原虫病,每年给养鸡业造成严重经济损失,常导致被感染鸡饲料转化率下降、生产性能降低甚至出现死亡现象,其防治主要依赖于饲料中添加抗球虫药物,但抗球虫药的长期使用也势必导致虫株耐药性的产生。为研究广东地区鸡球虫抗药性情况,并为其提供鸡球虫病合理防治方案。本试验分别从惠州、肇庆和韶关等地区患病鸡场采集鸡盲肠样品,利用球虫卵囊分离纯化技术得到优势虫株—"柔嫩艾美耳球虫"卵囊,通过鸡体试验法进行各地区虫株对复方磺胺氯吡嗪钠、尼卡巴嗪、地克珠利等11种抗球虫药物的耐药性评估试验。以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和最适抗球虫百分率(POAA)四项指标,来探究不同地区虫株对不同抗球虫药的耐药性及耐药程度。结果显示:柔嫩艾美耳球虫广东惠州株对甲基盐霉素抗药性最强、对马度米星胺最为敏感;肇庆株对氯羟吡啶、盐酸氯苯胍和地克珠利药物抗药性最强,对拉沙洛西钠抗药性最弱;韶关株对氯羟吡啶和地克珠利的抗药性最为严重,而尼卡巴嗪、马度米星胺和甲基盐霉素对其的抗球虫效果较好;三株普遍对复方磺胺氯吡嗪钠、地克利珠、癸氧喹酯、二硝托胺、氯羟吡啶和盐酸氯苯胍均产生完全或中度耐药。结果表明:广东惠州、肇庆和韶关地区的鸡球虫耐药情况十分严重,应及时针对性的改变用药策略,加强防控改善环境,避免鸡球虫病暴发的风险。

关键词：鸡球虫病抗球虫药物耐药性抗球虫指数

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广东珠三角地区规模化养鸡场鸡传染性病毒性腺胃炎分子流行病学调查研究

广东珠三角地区规模化养鸡场鸡传染性病毒性腺胃炎分子流行病学调...

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：陈祥杰李秀张浩吉廖申权戚南山李娟吕敏娜林栩慧蔡海明胡俊菁张健騑李国清孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室佛山科学技术学院华南农业大学

为了解珠三角地区鸡群中引起传染性病毒性腺胃炎(Transmissible viral proventriculitis,TVP)的相关病毒的感染情况,本研究应用实时荧光定量PCR方法对珠三角地区部分发病鸡场共计990份(每10份混为1个样本,共99个样本)病鸡腺胃样品开展... 详细信息

为了解珠三角地区鸡群中引起传染性病毒性腺胃炎(Transmissible viral proventriculitis,TVP)的相关病毒的感染情况,本研究应用实时荧光定量PCR方法对珠三角地区部分发病鸡场共计990份(每10份混为1个样本,共99个样本)病鸡腺胃样品开展分子流行病学调查,比较了不同日龄、季节、品种TVP的感染情况。结果发现8种TVP相关病毒的总检出率为51.5%(51/99),存在双重和三重感染的情况;其中鸡传染性贫血病毒、马立克氏病病毒、传染性法氏囊病病毒、网状内皮增生症病毒、圆圈病毒3型感染率分别为11.1%(11/99)、43.4%(43/99)、2.0%(2/99)、10.1%(10/99)、1.0%(1/99);临床剖检发现腺胃具有肿大等典型病变;不同季节品种日龄TVP感染率的统计学差异显著(P<0.05)。结果表明珠三角地区养鸡场TVP发生情况普遍存在,本次研究为珠三角地区传染性病毒性腺胃炎的流行规律研究及有效防控提供临床数据。

关键词：珠三角地区传染性病毒性腺胃炎分子流行病学

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广东粤西地区规模化养鸡场鸡传染性病毒性腺胃炎流行病学调查研究

广东粤西地区规模化养鸡场鸡传染性病毒性腺胃炎流行病学调查研究

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：潘晓婷李秀白银山廖申权戚南山李娟吕敏娜林栩慧胡俊菁张健騑李国清孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室佛山科学技术学院华南农业大学

鸡传染性病毒性腺胃炎(Transmissible viral proventriculitis,TVP)是一种以腺胃疾病为特征的慢性消耗性疾病,因病因复杂至今未有明确定论,目前认为与传染性因素和病毒感染有关,如鸡传染性贫血病毒(CIAV)、鸡腺胃坏死病毒(CPNV)、传染... 详细信息

鸡传染性病毒性腺胃炎(Transmissible viral proventriculitis,TVP)是一种以腺胃疾病为特征的慢性消耗性疾病,因病因复杂至今未有明确定论,目前认为与传染性因素和病毒感染有关,如鸡传染性贫血病毒(CIAV)、鸡腺胃坏死病毒(CPNV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、马立克氏病病毒(MDV)、呼肠孤病毒(ReoV)、网状内皮增生症病毒(REV)和圆圈病3型(GyV3)。为了解粤西地区TVP的流行情况和主要病因,本研究采用qPCR检测方法,对粤西地区的910份(每10份混为1个样本,共91个样本))腺胃样品进行TVP相关8种病毒(CIAV、MDV、IBV、IBDV、ReoV、REV、CPNV和GyV3)的检测,以明确粤西地区的流行情况和主要病因。结果显示,91份样品中共有42份检测阳性,TVP相关病毒阳性检出率462%,其中MDV感染率较高为27.5%,其次为CIAV感染率25.3%,IBDV感染率12.1%,GyV3感染率为6.6%,REV感染率为4.4%,IBV感染率为1.1%,未检出ReoV和CPNV病毒,发现病毒双重感染和混合感染情况。其中,茂名市阳性检出率最高为50%,云浮市为48.6%。结果表明,该地区患病鸡群无品种特异性,但小鸡和中大鸡病毒检出率差异显著,粤西地区主要流行CIAV和MDV。本论文研究结果为粤西地区TVP的流行规律研究及防控提供临床数据。

关键词：粤西地区传染性病毒性腺胃炎分子流行病学

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柔嫩艾美耳球虫ALD2基因的克隆与原核表达

柔嫩艾美耳球虫ALD2基因的克隆与原核表达

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第16次学术研讨会

作者：胡俊菁蔡海明廖申权戚南山吴彩艳吕敏娜李娟林栩慧于林增张健騑孙铭飞李国清广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室华南农业大学兽医学院

为研究柔嫩艾美耳球虫果糖1,6-二磷酸醛缩酶2(*** aldolase 2,EtALD2)的生物学功能,参考已公布的Etald2基因序列设计特异性引物,以***第二代裂殖子、未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子的cDNA为模板,运用PCR法扩增Etald2基因序列。将PCR... 详细信息

为研究柔嫩艾美耳球虫果糖1,6-二磷酸醛缩酶2(*** aldolase 2,EtALD2)的生物学功能,参考已公布的Etald2基因序列设计特异性引物,以***第二代裂殖子、未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子的cDNA为模板,运用PCR法扩增Etald2基因序列。将PCR扩增产物与pMD18T载体连接后进行测序和序列分析,将测序正确的Etald2基因克隆入pcoldI载体,构建pcoldI-EtALD2重组质粒,将测序正确的重组质粒转化至大肠杆菌*** Rosetta(DE3)菌株,在IPTG低温诱导下进行原核表达。结果显示,EtALD2基因的ORF序列长1107 bp,构建的重组质粒pcoldI-EtALD2可在原核细胞中成功表达40.59KDa的融合蛋白,并利用Ni-NTA His Bind Resins纯化pcoldI-EtALD2重组蛋白,得到可溶性蛋白,经Western blot鉴定为目的蛋白。EtALD2基因的成功克隆与表达,为进一步研究该酶的功能奠定基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫果糖1,6-二磷酸醛缩酶2 原核表达

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