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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：林栩慧吕敏娜李娟廖申权肖文婉胡俊菁蔡海明张健騑戚南山孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室

为获悉广东省特种经济动物贾第虫感染情况,本研究采集了粤东、粤西、粤北及珠三角地区共计40个场的特种经济动物粪便样本。采用q-PCR检测方法对采集的13种特种经济动物(包括蛇、黑熊、梅花鹿、竹鼠、环颈雉鸡、七彩山鸡、鸿雁、果子狸... 详细信息

为获悉广东省特种经济动物贾第虫感染情况,本研究采集了粤东、粤西、粤北及珠三角地区共计40个场的特种经济动物粪便样本。采用q-PCR检测方法对采集的13种特种经济动物(包括蛇、黑熊、梅花鹿、竹鼠、环颈雉鸡、七彩山鸡、鸿雁、果子狸、豪猪、暹罗鳄、猴、刺猬、野猪)共724份粪便样本进行贾第虫分子流行病学调查研究。结果显示,贾第虫感染率为:蛇7.40%(6/81)、黑熊18.92%(7/37)、梅花鹿36.84%(7/19)、竹鼠10.37%(25/241)、环颈雉鸡2.00%(2/100)、七彩山鸡12.90%(4/31)、鸿雁8.00%(4/50)、果子狸7.35%(5/68)、豪猪14.29%(4/28)、暹罗鳄3.33%(1/30)、猴10.53 (2/19)、刺猬0 (0/10)、野猪0 (0/10)。通过对广东省不同地区的特种经济动物贾第虫进行流行病学调查,为广东地区各特种养殖动物的疾病防控和人兽共患病传播风险评估提供重要的数据支持。

关键词：广东特种经济动物贾第虫流行病学调查

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广东粤东地区牛流行性出血病血清学调查

广东粤东地区牛流行性出血病血清学调查

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第16次学术研讨会

作者：吕敏娜林栩慧戚南山蔡海明吴彩艳李娟张健騑胡俊菁于林增肖文婉廖申权孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站

流行性出血病(EHD)是由流行性出血病病毒(EHDV)引起的一种重要虫媒病毒病,主要由库蠓叮咬传播。世界动物卫生组织(OIE)将EHD列为法定报告传染病。EHDV可感染反刍动物,北美白尾鹿最为易感,牛可感染发病,表现为体温升高、厌食、黏膜和浆... 详细信息

流行性出血病(EHD)是由流行性出血病病毒(EHDV)引起的一种重要虫媒病毒病,主要由库蠓叮咬传播。世界动物卫生组织(OIE)将EHD列为法定报告传染病。EHDV可感染反刍动物,北美白尾鹿最为易感,牛可感染发病,表现为体温升高、厌食、黏膜和浆膜面广泛出血,孕畜流产、产奶量下降,少量发病牛死亡。目前世界范围共发现9种不同的血清型(EHDV-1、EHDV-2、EHDV-4～EHDV-10)。为了解流行性出血病(EHD)在广东粤东地区牛群中的感染和流行情况,采用EHDV抗体检测试剂盒对粤东地区的不同牛场随机采集的牛血清进行检测,结果显示,2013年-2019年,每年EHDV抗体阳性率在57.36%-78.75%间,平均阳性率为69.53%。且不同季节的阳性率不同,秋季阳性率75.17%明显高于春季,略高于夏季,显示库蠓活动频繁的季节EHDV抗体阳性率高,说明EHD的流行和媒介昆虫的活动密切相关,有明显的季节性。通过细胞微量中和试验结果显示,广东存在多血清型的EHDV。广东属热带和亚热带地区,湿热的环境适宜库蠓等媒介昆虫的生长和繁殖,为虫媒病的传播提供有利条件。近年来,本课题组对重要牛羊虫媒病进行研究,先后从广东牛血液中分离到蓝舌病病毒和流行性出血病病毒。本研究为今后广东地区EHD的防制提供科学依据。

关键词：流行性出血病牛血清学

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柔嫩艾美耳球虫ALD2生化特性及其抑制剂筛选模型的建立

柔嫩艾美耳球虫ALD2生化特性及其抑制剂筛选模型的建立

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：胡俊菁廖申权戚南山李娟吕敏娜林栩慧张健騑孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室

鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,***)是一种寄生于鸡盲肠的单细胞寄生性原虫,可引起鸡严重的盲肠病变甚至死亡,严重危害养鸡业发展,可造成巨大的经济损失。果糖1,6-二磷酸醛缩酶是顶复门原虫(包含鸡球虫、疟原虫等)糖酵解途径的关键... 详细信息

鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,***)是一种寄生于鸡盲肠的单细胞寄生性原虫,可引起鸡严重的盲肠病变甚至死亡,严重危害养鸡业发展,可造成巨大的经济损失。果糖1,6-二磷酸醛缩酶是顶复门原虫(包含鸡球虫、疟原虫等)糖酵解途径的关键酶,可参与虫体的发育和能量代谢,在疟原虫上是重要的药物靶点,但是其在鸡球虫上的生物学功能尚未探明。本试验为研究柔嫩艾美耳球虫果糖1,6-二磷酸醛缩酶2 (*** aldolase 2,EtALD2)的生化特性,以前期获得的可溶性EtALD2蛋白为基础,建立EtALD2酶活反应体系。经试验确定0.075ug rEtALD2/反应为最适酶量。采用响应曲面法(Response surface methodology,RSM)确定酶最适反应条件,结果显示EtALD2酶活性反应的最佳pH为7.5,最佳温度为27.5℃。根据筛选的最佳条件,进行酶动力学分析,EtALD2对果糖1,6-二磷酸的Km=18.06±1.40uM,Vmax=0.64±0.01mmol/min/mg;对NADH的Km=43.84±6.59uM,Vmax=2.04±0.17mmol/min/mg。本研究为后续以EtALD2为靶标的抑制剂筛选建立体外模型,进一步研究EtALD2的生物学功能奠定基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫果糖1 6-二磷酸醛缩酶2 生化特性抑制剂

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浅析宏基因组测序技术在寄生生物学研究的应用

浅析宏基因组测序技术在寄生生物学研究的应用

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第16次学术研讨会

作者：蔡海明廖申权戚南山吕敏娜吴彩艳李娟林栩慧胡俊菁于林增肖文婉张健騑孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室

无论是第一代的Sanger测序,二代的NGS测序,三代的单分子测序,直至目前的四代的纳米孔测序,每个测序技术更新都带来学术研究或疾病治疗新的篇章。目前随着二代和三代技术的相关仪器国产化,测序技术也得到普及。在这众多技术中,宏基因组... 详细信息

无论是第一代的Sanger测序,二代的NGS测序,三代的单分子测序,直至目前的四代的纳米孔测序,每个测序技术更新都带来学术研究或疾病治疗新的篇章。目前随着二代和三代技术的相关仪器国产化,测序技术也得到普及。在这众多技术中,宏基因组测序技术成为备受关注的新型研究手段或临床诊断技术。其对生物群体分布,群体感应调控和群体进化等基础研究具有重要意义,同时也是临床诊断致病病原或发掘未知病原等不可或缺的手段。当前,宏基因组测序技术在细菌、真菌、古菌和病毒等生物的研究更为活跃,但在寄生生物领域的研究报道却很少。本论文主要论述基因组测序技术的更新轨迹和各个关键技术的技术原理与实现步骤,同时也探讨宏基因组测序技术在寄生生物的应用现状和与技术的相关实现策略,进而分析宏基因组测序技术在寄生生物领域的应用优势与目前存在的技术瓶颈,最后对宏基因组测序技术在寄生生物领域的研究前景进行初步展望。本论文不仅旨在阐述宏基因组测序技术的优缺点,同时也为了寄生生物研究领域的技术体系进行添砖加瓦。

关键词：宏基因组测序寄生生物

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探讨柔嫩艾美耳球虫己糖激酶抑制剂的虚拟筛选策略

探讨柔嫩艾美耳球虫己糖激酶抑制剂的虚拟筛选策略

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第16次学术研讨会

鸡球虫病是由一种或多种艾美耳球虫感染引起的寄生虫病,呈全球性分布,危害极为严重,给养鸡业造成巨大的经济损失。其中,柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是致病力较强的虫种之一。目前,鸡球虫病的防控仍主要依靠化学药物,但随着大量抗... 详细信息

鸡球虫病是由一种或多种艾美耳球虫感染引起的寄生虫病,呈全球性分布,危害极为严重,给养鸡业造成巨大的经济损失。其中,柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是致病力较强的虫种之一。目前,鸡球虫病的防控仍主要依靠化学药物,但随着大量抗球虫药物的长期使用,鸡球虫已对目前所使用的各种抗球虫药物产生日益严重的抗药性,致使鸡球虫病的有效防控面临严峻挑战,研制新型的抗球虫药物迫在眉睫。在鸡球虫全基因组、蛋白质组、转录组以及代谢组解析的基础上,与鸡球虫能量代谢相关的糖酵解途径的一些关键代谢酶被认为是潜在的药物靶标。己糖激酶(hexokinase,HK)是糖酵解途径中的限速酶,在鸡球虫能量代谢和直链淀粉的合成过程中充当了极其重要的角色。前期研究表明,阻断柔嫩艾美耳球虫己糖激酶(EtHK)的功能可以干扰虫体赖以生存的碳水化合物和能量代谢,从而抑制鸡球虫在细胞培养模型上的生长发育。因此,针对己糖激酶开展新型抑制剂研究,可筛选出抗球虫先导化合物。本研究采用基于结构的虚拟筛选策略。基于EtHK晶体结构,用刚性对接手段对ZINC、Chembridge数据库进行虚拟筛选;借助分子动力学模拟分析手段建立EtHK的药效团模型,并进行药效团柔性拟合;挑选最优拟合化合物进行药物动力学、成药性、和化学多样性等药物特征过滤得到苗头化合物,并进行酶抑制实验,测定相应抑制率及抑制常数,成功获得多个潜在EtHK抑制剂。本研究内容不仅可以为抗球虫先导化合物的研究开发提供理论和实验基础,也将为从系统生物学角度进一步阐明寄生原虫间己糖激酶的药物机制和功能多样性提供重要的数据信息。

关键词：柔嫩艾美耳球虫己糖激酶抑制剂虚拟筛选

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鸡球虫体外HCT-8细胞培养模型的建立

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广东畜牧兽医科技 2021年第1期46卷 38-42,51,52页

作者：吴彩艳胡俊菁崔明巧戚南山吕敏娜李娟林栩慧蔡海明于林增廖申权孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东省兽医公共卫生公共实验室广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东广州510640 宁夏盐池县农业农村局农业综合执法大队宁夏吴忠751500

由柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)引起的球虫病严重损害鸡的肠道健康,给养鸡业造成巨大的经济损失。***寄生在鸡盲肠上皮细胞,体外培养可在鸡原代肾细胞内发育成卵囊完成内生发育过程,而在其他传代细胞系内只能完成部分生殖阶段,为了... 详细信息

由柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)引起的球虫病严重损害鸡的肠道健康,给养鸡业造成巨大的经济损失。***寄生在鸡盲肠上皮细胞,体外培养可在鸡原代肾细胞内发育成卵囊完成内生发育过程,而在其他传代细胞系内只能完成部分生殖阶段,为了延长其在细胞内的发育进程,建立了鸡球虫HCT-8细胞培养模型。将新鲜制备的***子孢子接种HCT-8细胞,制备细胞爬片,分别进行HE染色和DAPI染色,观察子孢子在细胞内的发育状况。结果表明,子孢子在接种后6 h即可入侵HCT-8细胞,随后子孢子发育为滋养体至48 h形成第一代裂殖体,至54 h第一代裂殖子释放,于72 h形成第二代裂殖体,在144 h第二代裂殖子释放出来,继续培养至168 h未见到卵囊形成,而试验虫株接种鸡体后在144~168 h即可观察到大量未孢子化卵囊排出体外,据此确定子孢子在该细胞内的发育过程结束。本研究所建立的鸡球虫细胞培养模型将子孢子发育至第二代裂殖生殖阶段,将发育阶段向前推进了一个进程,为鸡球虫相关研究工作的开展提供技术平台。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 HCT-8细胞培养

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鸡柔嫩艾美耳球虫基因工程疫苗AR的构建及其免疫保护作用研究

鸡柔嫩艾美耳球虫基因工程疫苗AR的构建及其免疫保护作用研究

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：邱茜茜戚南山廖申权李娟吕敏娜林栩慧蔡海明胡俊菁张健騑张旭孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室佛山科学技术学院

鸡球虫病是由艾美耳属球虫引起的鸡的一种肠道原虫病,严重危害养鸡业发展。目前鸡球虫病的防治主要依靠抗球虫药物和活卵囊疫苗,但抗球虫药物应用中的药物残留及活卵囊疫苗对免疫鸡体生产性能的潜在危害严重制约现有防控手段的应用,新... 详细信息

鸡球虫病是由艾美耳属球虫引起的鸡的一种肠道原虫病,严重危害养鸡业发展。目前鸡球虫病的防治主要依靠抗球虫药物和活卵囊疫苗,但抗球虫药物应用中的药物残留及活卵囊疫苗对免疫鸡体生产性能的潜在危害严重制约现有防控手段的应用,新型抗球虫制剂的研制亟待开发。鉴于此,本研究以致病力最强的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)为研究对象,选取在虫体入侵宿主细胞过程中起到重要作用的抗原蛋白EtRON2和EtAMA3,利用生信分析其关键功能结构域,选择免疫原性好的片段,通过分子生物学技术克隆获得958bp的串联多表位嵌合抗原片段AR,将嵌合抗原AR片段插入真核表达载体pcDNA3.1中,成功构建真核重组质粒pcDNA3.1-AR。经转染DF-1细胞和免疫肉鸡腿部,使用western blotting技术分别检测其体内外表达情况,结果显示pcDNA3.1-AR质粒在DF-1细胞及鸡体肌肉细胞均可高效表达约37 kDa的AR嵌合抗原蛋白。最后利用动物试验检验所构建真核质粒pcDNA3.1-AR对肉鸡感染鸡球虫病的免疫保护作用。本研究的开展将为新型抗鸡球虫疫苗的研究提供理论基础和新思路。

关键词：鸡球虫柔嫩艾美耳球虫 EtRON2 EtAMA3 基因工程疫苗

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柔嫩艾美耳球虫RUVB2解旋酶的表达纯化及活性分析

柔嫩艾美耳球虫RUVB2解旋酶的表达纯化及活性分析

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：陈君蔡海明戚南山廖申权李娟吕敏娜林栩慧胡俊菁张健騑孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室仲恺农业工程学院

RUVB like protein (简称"RUVBL")是AAA+ATPase家族一种与多种细胞活动相关的DNA解旋酶,起初人们发现RUVBL蛋白在重组和复制叉逆转中的作用,后续不断的研究发现,其还参与了多种细胞通路,如细胞周期进程、转录、DNA损伤反应等... 详细信息

RUVB like protein (简称"RUVBL")是AAA+ATPase家族一种与多种细胞活动相关的DNA解旋酶,起初人们发现RUVBL蛋白在重组和复制叉逆转中的作用,后续不断的研究发现,其还参与了多种细胞通路,如细胞周期进程、转录、DNA损伤反应等。在顶复门原虫RuvBL酶的相关研究中,报道较多是疟原虫和弓形虫等人兽共患寄生虫,至今为止尚未有柔嫩艾美耳球虫RuvB-Like(EtRuvBL)的相关报道。目前所知的EtRuvBL酶有EtRuvBL1、EtRuvBL2、RuvBL3三种,但其相关功能和特性均未被报道。为了研究EtRuvBL2的相关功能,通过PCR技术扩增EtRuvBL2基因,克隆到pSYNO-1原核表达载体上,转化BL21 (DE3)感受态细胞进行表达,通过烟草蚀纹病毒(tobacco etch virus,TEV)蛋白酶酶切后纯化获得EtRuvBL2重组蛋白。结果发现,His-MBP标签能够促进EtRuvBL2蛋白的可溶性表达。将纯化的蛋白进行ATPase活性、DNA解旋活性、DNA结合活性测定,结果显示EtRuvBL2具有典型的ATP酶活性,这些研究结果将有助于阐明柔嫩艾美耳球虫RuvBL2解旋酶的活性功能,为研究RuvBL解旋酶家族其它成员的结构与功能提供帮助。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 RuvBL2 DNA解旋酶酶活性

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鸡源产气荚膜梭菌的分离鉴定与药敏试验研究

鸡源产气荚膜梭菌的分离鉴定与药敏试验研究

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛

作者：刘少冰廖申权戚南山李娟吕敏娜林栩慧胡俊菁张健騑顾有方孙铭飞广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室安徽科技学院动物科技学院

为了对江苏连云港某鸡场疑似患鸡坏死性肠炎病的鸡群进行确诊,并为有效防治提供依据,本研究利用细菌学检验方法对采集的典型病料进行细菌分离鉴定和细菌药敏试验。通过细菌分离培养、形态学观察、荧光定量PCR鉴定等方法。结果成功分离获... 详细信息

为了对江苏连云港某鸡场疑似患鸡坏死性肠炎病的鸡群进行确诊,并为有效防治提供依据,本研究利用细菌学检验方法对采集的典型病料进行细菌分离鉴定和细菌药敏试验。通过细菌分离培养、形态学观察、荧光定量PCR鉴定等方法。结果成功分离获得1株产气荚膜梭菌,经qPCR检测表明所分离梭菌毒素型为A型。药敏试验结果表明该A型产气荚膜梭菌对头孢曲松、阿莫西林、青霉素、氨苄西林、甲硝锉、头孢噻肠和头孢氨苄均高度敏感,对环丙沙星、氧氟沙星中度敏感,但对卡那霉素、多粘菌素B、四环素、丁胺卡那、新霉素、氟苯尼考、丝诺沙星、链霉素、庆大霉素、制霉菌素、多西环素均耐药。本研究结果对鸡坏死性肠炎病的准确诊断和有效防治提供了依据和条件。

关键词：鸡产气荚膜梭菌分离鉴定药敏试验

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广东地区柔嫩艾美耳球虫耐药性调查研究

广东地区柔嫩艾美耳球虫耐药性调查研究

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2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第16次学术研讨会

作者：尹理君廖申权孙铭飞吴彩艳林栩慧宋忠峰吕敏娜李娟蔡海明胡俊菁于林增肖文婉张健騑戚南山顾有方广东省农业科学院动物卫生研究所岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室安徽科技学院动物科技学院

鸡球虫病是一种严重危害养鸡业发展的肠道寄生原虫病,每年给养鸡业造成严重经济损失,常导致被感染鸡饲料转化率下降、生产性能降低甚至出现死亡现象,其防治主要依赖于饲料中添加抗球虫药物,但抗球虫药的长期使用也势必导致虫株耐药性的... 详细信息

鸡球虫病是一种严重危害养鸡业发展的肠道寄生原虫病,每年给养鸡业造成严重经济损失,常导致被感染鸡饲料转化率下降、生产性能降低甚至出现死亡现象,其防治主要依赖于饲料中添加抗球虫药物,但抗球虫药的长期使用也势必导致虫株耐药性的产生。为研究广东地区鸡球虫抗药性情况,并为其提供鸡球虫病合理防治方案。本试验分别从惠州、肇庆和韶关等地区患病鸡场采集鸡盲肠样品,利用球虫卵囊分离纯化技术得到优势虫株—"柔嫩艾美耳球虫"卵囊,通过鸡体试验法进行各地区虫株对复方磺胺氯吡嗪钠、尼卡巴嗪、地克珠利等11种抗球虫药物的耐药性评估试验。以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和最适抗球虫百分率(POAA)四项指标,来探究不同地区虫株对不同抗球虫药的耐药性及耐药程度。结果显示:柔嫩艾美耳球虫广东惠州株对甲基盐霉素抗药性最强、对马度米星胺最为敏感;肇庆株对氯羟吡啶、盐酸氯苯胍和地克珠利药物抗药性最强,对拉沙洛西钠抗药性最弱;韶关株对氯羟吡啶和地克珠利的抗药性最为严重,而尼卡巴嗪、马度米星胺和甲基盐霉素对其的抗球虫效果较好;三株普遍对复方磺胺氯吡嗪钠、地克利珠、癸氧喹酯、二硝托胺、氯羟吡啶和盐酸氯苯胍均产生完全或中度耐药。结果表明:广东惠州、肇庆和韶关地区的鸡球虫耐药情况十分严重,应及时针对性的改变用药策略,加强防控改善环境,避免鸡球虫病暴发的风险。

关键词：鸡球虫病抗球虫药物耐药性抗球虫指数

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