检索结果-内蒙古大学图书馆

深海真菌Dichotomomyces cejpii胶霉毒素生物合成基因启动子的克隆和功能鉴定

生物技术通报 2018年第4期34卷 144-150页

作者：黄自磊章卫民叶伟李赛妮李浩华朱牧孜中国科学院南海海洋研究所广州510301 广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广州510070 中国科学院大学北京100049

利用染色体步移技术对深海真菌Dichotomomyces cejpii中胶霉毒素的生物合成基因Gli G、Gli I和Gli O启动子进行克隆,并将其核心区域导入p GL3-basic荧光素酶报告基因载体,通过荧光强度分析发现Gli G的启动子转录活性最强。进一步将Gli ... 详细信息

利用染色体步移技术对深海真菌Dichotomomyces cejpii中胶霉毒素的生物合成基因Gli G、Gli I和Gli O启动子进行克隆,并将其核心区域导入p GL3-basic荧光素酶报告基因载体,通过荧光强度分析发现Gli G的启动子转录活性最强。进一步将Gli G启动子核心区域导入含潮霉素抗性标记的p AN7-1载体,以替换原有启动子pgpd A,并将重组质粒导入酿酒酵母,用潮霉素抗性平板进行筛选,发现Gli G启动子能在酿酒酵母中启动潮霉素抗性基因的表达。

关键词： Dichotomomyces cejpii 胶霉毒素启动子克隆鉴定海洋真菌

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湿地环境可培养粘细菌多样性研究

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生物技术进展 2018年第2期8卷 140-146,J0003,J0004页

作者：张鲜姣吕颖颖朱红惠广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广州510070

采用辅助菌诱导法和滤纸诱导法对广东不同类型湿地底泥样品进行粘细菌的分离纯化,并将形态鉴定与16S rDNA基因序列分析相结合,对纯培养物进行初步分类鉴定。从84份样品中共分离纯化到67株粘细菌,初步鉴定为:粘球菌属(Myxococcus)32株、... 详细信息

采用辅助菌诱导法和滤纸诱导法对广东不同类型湿地底泥样品进行粘细菌的分离纯化,并将形态鉴定与16S rDNA基因序列分析相结合,对纯培养物进行初步分类鉴定。从84份样品中共分离纯化到67株粘细菌,初步鉴定为:粘球菌属(Myxococcus)32株、珊瑚球菌属(Corallococcus)15株、孢囊杆菌属(Cystobacter)2株、多囊菌属(Polyangium)5株、原囊菌属(Archangium)7株、匣状球菌属(Pyxidicoccus)5株、波管状菌属(Hyalangium)1株。结果表明,湿地环境粘细菌多样性丰富,并且存在大量的新类群。研究结果为湿地环境粘细菌资源的挖掘提供了理论支持。

关键词：湿地粘细菌分离鉴定多样性

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越南原始森林粘细菌的分离与鉴定

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生物技术进展 2018年第2期8卷 147-152,J0005页

为了探讨越南热带原始森林环境中可培养粘细菌的多样性,以原始森林的土壤、腐木及树皮样品为研究对象,采用大肠杆菌法和滤纸法从中分离纯化粘细菌,将形态鉴定与16S rRNA基因测序分析相结合,对分离到的纯培养物进行分类鉴定,确定其分类... 详细信息

为了探讨越南热带原始森林环境中可培养粘细菌的多样性,以原始森林的土壤、腐木及树皮样品为研究对象,采用大肠杆菌法和滤纸法从中分离纯化粘细菌,将形态鉴定与16S rRNA基因测序分析相结合,对分离到的纯培养物进行分类鉴定,确定其分类地位。结果显示,从越南16个土样和22个腐木、树皮样品中共分离到70株粘细菌,经纯化后获得了32株。这些菌株分属于6个属,分别是粘球菌属(Myxococcus)14株、珊瑚球菌属(Corallococcus)7株、侏囊菌属(Nanncystis)6株、蜂窝囊菌属(Melittangium)3株、原囊菌属(Archangium)1株、软骨霉状菌属(Chondromyces)1株。这表明粘细菌在越南原始森林环境中分布广泛,并存在较为罕见的粘细菌类群。

关键词：越南原始森林粘细菌分离鉴定

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光催化材料抗真菌性能检测中光照条件的影响

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环境卫生学杂志 2018年第1期8卷 55-59页

作者：孙廷丽周少璐黎玉莲彭如群肖慧敏杨秀茳郭晓苑刘静霞谢小保广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室

目的研究光照条件对光催化材料抗真菌性能检测结果的影响,为建立标准化的光催化材料抗真菌性能测试方法提供数据支持。方法采用365 nm荧光灯,比较相同光照时间时1.2、0.8和0.4 m W/cm^2光照强度下实验菌种经光照后的菌落生长情况来研究... 详细信息

目的研究光照条件对光催化材料抗真菌性能检测结果的影响,为建立标准化的光催化材料抗真菌性能测试方法提供数据支持。方法采用365 nm荧光灯,比较相同光照时间时1.2、0.8和0.4 m W/cm^2光照强度下实验菌种经光照后的菌落生长情况来研究光照强度对光催化材料抗真菌性能检测结果的影响;比较24,38及48 h光照时间下的催化材料抗真菌性能来确定合适的测试时间;通过人员比对来验证上述流程的可重复性。结果采用365 nm的荧光灯,光照强度(0.4~0.8)m W/cm^2时,对实验菌种的生长活性没有影响,而1.2 m W/cm^2的光照强度则对菌种有一定的伤害;光照38 h时,光催化材料的抗真菌活性区分度最好,最适合做材料的光催化性能评价;采用上述实验结果,不同人员对同一个样品进行独立检测,光催化抗真菌活性的实验结果可重复。结论采用(0.4~0.8)m W/cm^2光照强度,光照时间38 h时,可以建立稳定可重复的光催化材料抗真菌性能的测试方法。该方法首次采用了贴膜法定量测试光催化材料的抗真菌性能,可有效填补我国在光催化材料抗真菌检测方法缺乏的问题,为光催化材料及产品抗真菌性能的标准化提供数据支持,也可为广大光催化材料的生产企业提供可靠的测试方法,有助于提高产业的技术水平。

关键词：光催化材料抗真菌性能光照强度光照时间测试方法

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空气净化器去除空气中尘螨过敏原的效果研究

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工业微生物 2018年第5期48卷 52-56页

作者：张淑瑶文霞刘静霞周少璐谢飞鸿谢小保广东省微生物研究所、广东省微生物分析检测中心、省部共建华南应用微生物国家重点实验室、广东省菌种保藏与应用重点实验室

本文旨在研究空气净化器对空气中尘螨过敏原Der f 1的去除效果。于实验舱内[RH:(50±10)%; Tem:(24±1)℃]将过敏原蛋白Der f 1雾化至空气中,利用采样器采集样品,并用双抗夹心ELISA方法检测过敏原Der f 1的浓度,首先计算出尘螨... 详细信息

本文旨在研究空气净化器对空气中尘螨过敏原Der f 1的去除效果。于实验舱内[RH:(50±10)%; Tem:(24±1)℃]将过敏原蛋白Der f 1雾化至空气中,利用采样器采集样品,并用双抗夹心ELISA方法检测过敏原Der f 1的浓度,首先计算出尘螨过敏原在自然条件下的衰减率;分别开启空气净化器5 min,10 min,15 min,采样后计算空气净化器对过敏原Der f 1的去除效果。实验得出,尘螨过敏原雾化后1 h的自然衰减为(14±0. 5)%,雾化后2 h的自然衰减率为(34±1)%,雾化后4 h的自然衰减率为(57. 5±0. 5)%。市售空气净化器(CADR=358. 5 m3/h)开启最大风量的Der f1的去除效果:5 min去除率为(66. 68±8. 15)%,10 min去除率为(84. 39±9. 67)%,空气净化器连续工作15 min后过敏原Der f1未检出(LOD=0. 488 ng/m L)。因此,本实验得出结论,在自然无干扰条件下,雾化后的尘螨过敏原在空气中较为稳定,空气净化器能有效去除空气中的尘螨过敏原。

关键词：尘螨过敏原 Der f 1 空气净化器去除效果

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空气净化器除菌和净化空气中颗粒物效果的比较

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工业微生物 2018年第5期48卷 42-45页

作者：李素娟文霞李聪颖郭梓珊袁英姿陆舜盈谢小保广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070

按《消毒技术规范》(2002年版)进行自然菌除菌实验,和按国家标准GB/T 18801—2015《空气净化器》进行颗粒物净化效果实验,比较不同品牌的空气净化器除菌效果和对颗粒物净化效果。实验结果表明,紫外线空气净化器除菌效果为89. 13%,洁净... 详细信息

按《消毒技术规范》(2002年版)进行自然菌除菌实验,和按国家标准GB/T 18801—2015《空气净化器》进行颗粒物净化效果实验,比较不同品牌的空气净化器除菌效果和对颗粒物净化效果。实验结果表明,紫外线空气净化器除菌效果为89. 13%,洁净空气量(CADR)为10. 3 m^3/h;光催化空气净化器除菌效果为93. 23%,CADR为150. 1 m^3/h;过滤式空气净化器除菌效果为62. 47%,CADR为273. 1 m^3/h;负离子净化器除菌效果为91%,CADR为408. 7 m^3/h。在测试的四种空气净化器中,除菌效果依次为光催化空气净化器>负离子净化器>紫外线空气净化器>过滤式空气净化器,颗粒物净化效果依次为负离子净化器>过滤式空气净化器>光催化空气净化器>紫外线空气净化器。在选择空气净化器时,针对不同的污染对象,可选择相应用途的空气净化器。

关键词：空气净化器除菌颗粒物

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环介导等温扩增技术检测化妆品中铜绿假单胞菌的研究

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工业微生物 2018年第5期48卷 37-41页

作者：文霞刘静霞张淑瑶杨秀茳谢小保广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广州510070

本文建立了环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测化妆品中铜绿假单胞菌的方法。采用铜绿假单胞菌外膜蛋白oprI基因保守序列引物,评价检测铜绿假单胞菌灵敏度和特异性,并与普通PCR相比,检测人工污... 详细信息

本文建立了环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测化妆品中铜绿假单胞菌的方法。采用铜绿假单胞菌外膜蛋白oprI基因保守序列引物,评价检测铜绿假单胞菌灵敏度和特异性,并与普通PCR相比,检测人工污染样品中的铜绿假单胞菌。结果显示,LAMP检测铜绿假单胞菌的灵敏度为62. 5 pg/μL,而且特异性高,人工污染样品中的检出限为102cfu/m L,比PCR检测灵敏度高10倍。该方法具有灵敏度高、特异性好、操作简便、耗时短,可用于化妆品中铜绿假单胞菌的快速检测。

关键词：化妆品环介导等温扩增技术铜绿假单胞菌

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废弃铅锌矿石和钨矿砂中可培养细菌多样性分析

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生物技术进展 2018年第5期8卷 450-458页

作者：邹卫玲冯广达李华平朱红惠广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广州510070 华南农业大学农学院广州510642

为了了解废弃铅锌矿石和钨矿砂中可培养细菌的多样性,发掘其中的微生物新资源,采用3种培养基(R2A、无磷R2A、无磷R2A+Cd^(2+))分别对其中的可培养细菌进行分离纯化和培养。再通过16S rRNA基因测序获取相关的分类学信息,并进行系统进化... 详细信息

为了了解废弃铅锌矿石和钨矿砂中可培养细菌的多样性,发掘其中的微生物新资源,采用3种培养基(R2A、无磷R2A、无磷R2A+Cd^(2+))分别对其中的可培养细菌进行分离纯化和培养。再通过16S rRNA基因测序获取相关的分类学信息,并进行系统进化分析。从2种材料中共分离到可培养细菌152株。其中,废弃铅锌矿石中的可培养细菌涵盖了5个门、7个分支,分属于Alphaproteobacteria、Betaproteobacteria、Gammaproteobacteria、Deinococcus-Thermus、Actinobacteria、Bacteroidetes和Firmicutes,以Massilia、Methylobacterium、Deinococcus和Sphingomonas为主要类群;而钨矿砂中的可培养细菌涵盖了3个门、4个分支,分属于Alphaproteobacteria、Betaproteobacteria、Actinobacteria和Firmicutes,以Methylobacterium、Massilia、Ralstonia和Microbacterium为主要类群。废弃铅锌矿石中可培养细菌的多样性和新分类单元发现率均大于钨矿砂,且两者的可培养细菌类群组成存在较大差异。此外,向培养基中添加重金属Cd^(2+)降低了可培养细菌的多样性。研究分离到的Cd^(2+)耐受菌株主要属于3个属:Methylobacterium、Herbaspirillum和Ralstonia,其能耐受2 mmol/L Cd^(2+),是金属尾矿中重金属耐受菌的优势种群。研究结果为金属尾矿中微生物新资源的深入发掘提供了依据。

关键词：废弃铅锌矿石钨矿砂 R2A 可培养细菌 16S rRNA基因

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广藿香内生真菌Cerrena sp.中倍半萜类成分及其细胞毒活性研究

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中国中药杂志 2017年第9期42卷 1693-1698页

作者：谢佳倩陈玉婵孙章华刘洪新李赛妮李浩华高晓霞章卫民广东药科大学广东广州510006 广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070

为了研究广藿香内生真菌Cerrena sp.A593的次级代谢产物及其细胞毒活性,采用正、反相硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、HPLC等色谱方法从菌株A593发酵液中分离得到8个倍半萜类化合物,经波谱数据分析,分别鉴定为chloriolin B(1),chloriolin... 详细信息

为了研究广藿香内生真菌Cerrena sp.A593的次级代谢产物及其细胞毒活性,采用正、反相硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、HPLC等色谱方法从菌株A593发酵液中分离得到8个倍半萜类化合物,经波谱数据分析,分别鉴定为chloriolin B(1),chloriolin C(2),pleurocybellone A(3),dihydrohypnophilin(4),cucumin F(5),antrodin A(6),10α-hydroxyamorphan-4-en-3-one(7),connatusin A(8),所有化合物均为首次从Cerrena属真菌中分离得到。体外细胞毒活性结果显示:化合物1~3对Hep G-2,SF-268,MCF-7,NCI-H460 4种肿瘤细胞株具有抑制活性,其IC50在20.33~63.13μmol·L^(-1)。

关键词： Cerrena sp. 内生真菌广藿香倍半萜细胞毒活性

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深海真菌埃德菌FS110的基因组测序及胶霉毒素生物合成机制分析

深海真菌埃德菌FS110的基因组测序及胶霉毒素生物合成机制分析

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中国菌物学会2018年学术年会

作者：叶伟黄自磊刘桃妹朱牧孜李赛妮刘帅孔亚丽李浩华许丽琼章卫民广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室

胶霉毒素是一种具有广谱抑菌、抑病毒、抗氧化、强抗肿瘤活性和免疫调节活性的毒素,由胶霉毒素制备的杀菌剂和杀虫剂对防治水稻纹枯病、稻瘟病和稻曲病有很好的防治效果。胶霉毒素在治疗肝纤维化方面已经有应用,胶霉毒素类似物应用小细... 详细信息

胶霉毒素是一种具有广谱抑菌、抑病毒、抗氧化、强抗肿瘤活性和免疫调节活性的毒素,由胶霉毒素制备的杀菌剂和杀虫剂对防治水稻纹枯病、稻瘟病和稻曲病有很好的防治效果。胶霉毒素在治疗肝纤维化方面已经有应用,胶霉毒素类似物应用小细胞肺癌已经进入临床III期,证明胶霉毒素在生物医药领域有很好的应用前景。本课题组组前期在深海真菌埃德菌FS110的代谢产物中分离纯化得到了大量结构新颖的胶霉毒素及其衍生物,分离得到的胶霉毒素对肿瘤细胞具有显著的细胞毒性。在此基础上对埃德菌FS110进行了全基因组测序,本项目组对深海真菌D. cejpii进行全基因组测序。测序结果表明,所得碱基数为40,830,384,909 bp, Q20为98.87%,所得数据的测序单分子clean数据序列的长度分布统计如下图所示,说明本次测序质量较高,可用于后续分析,所得基因组大小为24.32M。GC含量为49.697%。FS110基因组共预测得到8550个基因。从FS110基因组结果中共获得88个与胶霉毒素生物合成相关的基因。预测Cluster18为胶霉毒素生物合成基因簇,与二酮哌嗪类化合物Aspirochlorine生物合成基因簇的相似度为13%。为了更好地解析FS110中胶霉毒素生物合成转录调控机制,并对其生物合成基因进行更好的异源表达,对其中胶霉毒素的生物合成基因启动子功能进行了分析。通过3-4次巢式PCR反应,筛选阳性克隆,获得gliG/gliI/gliO三个基因的启动子片段G1、G2、I1、I2、O1、O2并测序成功。寻找启动子核心区域,然后扩增出gliG/gliI/gliO三个功能基因的上游包括核心启动子区域200-700bp左右片段,如gliG基因上游500bp,gliI基因上游700 bp,gliO基因上游300 bp。萤火虫荧光素酶检测试剂得出,gliG核心启动子区域具有较高的转录活性。将启动子插入pGL3-basic载体中,将0.5 kb gliG核心启动子区域替换pGPDA启动子,将2μ-pAN7-1-gliG核心启动子载体以及2μ-pAN7-1载体(阳性对照)分别电转入酿酒酵母,含有2μ-pAN7-1-gliG核心启动子载体的酵母生长较快,而且菌落数较多。为了对胶霉毒素的生物合成基因进行基因编辑,我们成功构建了适用于海洋真菌FS110的PFC332-sgRNA载体和PX459-sgRNA-GFP-Ble载体。其中PFC332-sgRNA载体中加入了在酵母细胞中发挥作用的sg RNA靶向序列骨架基因;在PX459-sgRNA-GFP-Ble中加上了sg RNA靶向序列以及博来霉素抗性Marker,为后续突变菌株的筛选提供了更加可靠的筛选标记。gliG、gliI、gliO靶向序列的PFC332-sgRNA质粒成功导入到D. cejpii原生质体中,并且筛选出阳性克隆,利用潮霉素抗性基因引物克隆,得到gliG阳性克隆2个,gliO阳性克隆1个,并通过验证了目的基因gliG、gliO的成功敲除。本研究关于深海真菌FS110的基因组测序及胶霉毒素生物合成基因及其启动子的分析为FS110中胶霉毒素生物合成途径的阐明奠定了分子生物学基础。

关键词：埃德菌胶霉毒素基因组测序生物合成 CRISPR/Cas9

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