检索结果-内蒙古大学图书馆

现代食品科技 2013年第8期29卷 1843-1850页

作者：郑扬云吴清平吴克刚吴葵张菊梅广东工业大学轻工化工学院广东广州510006 广东省微生物研究所广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070 中国科学院南海海洋研究所广东广州510632

建立空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)的ERIC-PCR分子生物学分型技术,比较ERIC-PCR分型和生化分型的分型效果。从菌株TY1273出发,运用L16(54)正交试验,对Mg2+、dNTPs、引物和TaqDNA聚合酶浓度等因素在较大范围水平内进行反应体系条件摸... 详细信息

建立空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)的ERIC-PCR分子生物学分型技术,比较ERIC-PCR分型和生化分型的分型效果。从菌株TY1273出发,运用L16(54)正交试验,对Mg2+、dNTPs、引物和TaqDNA聚合酶浓度等因素在较大范围水平内进行反应体系条件摸索,得到一个初步的优化体系;在此基础之上进行单因素的进一步小范围水平内的微调优化,得到最终的优化体系;最后以优化的ERIC-PCR方法对24株***分离株分型;同时根据API Campy生化反应结果进行生化分型,比较ERIC-PCR分子分型方法和生化分型方法。结果显示ERIC-PCR方法将24株菌扩增均得到大小在100 bp-3000 bp之间的条带,并可将其分为22个基因型,分辨系数为0.92,具有较高的分辨力。生化分型将24株菌分为19个生化型,显示了菌株基因的多样性。表明ERIC-PCR技术比生化分型能更好的体现菌株的遗传多样性,且具有简便和分辨力搞等优点,可用于***的多样性研究。

关键词：空肠弯曲菌 ERIC-PCR 分子分型生化分型

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假鹰爪茎、叶组织内生真菌的分布和rDNA ITS序列系统发育分析

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中国药学杂志 2013年第24期48卷 2102-2106页

作者：高晓霞王磊周伟平严寒静李浩华章卫民广东药学院广州510006 广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地广州510070

目的研究假鹰爪(Desmos chinensis Lour.)茎、叶组织中内生真菌的分布及其rDNA ITS序列系统发育。方法采用石蜡永久制片法观察鹰爪茎、叶组织显微结构,细胞化学法确定内生真菌的分布,平板分离法分离培养内生真菌,对分离菌株进行rDNA ITS... 详细信息

目的研究假鹰爪(Desmos chinensis Lour.)茎、叶组织中内生真菌的分布及其rDNA ITS序列系统发育。方法采用石蜡永久制片法观察鹰爪茎、叶组织显微结构,细胞化学法确定内生真菌的分布,平板分离法分离培养内生真菌,对分离菌株进行rDNA ITS区PCR扩增和测序,通过rDNA ITS序列进行内生真菌的分类鉴定及系统发育分析。结果假鹰爪茎中的内生真菌主要分布在韧皮部薄壁细胞,叶中主要分布主脉上方厚角细胞以内的薄壁细胞、栅栏组织、海绵组织。共分离14株内生真菌,分属于拟茎点霉属(Phomopsis)、刺盘孢属(Colletotrichum)和球座菌属(Guignardia),其中拟茎点霉(***.)占总菌株数的57.1%,其次为胶孢刺盘孢(***)和芒果球座菌(***)。结论内生真菌在假鹰爪茎、叶组织中均有分布,无明显组织特异性;rDNA ITS序列系统发育较好的揭示了假鹰爪内生真菌的系统进化关系。

关键词：假鹰爪内生真菌系统发育 rDNA ITS

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一个硫链丝菌素抗性基因标记、用于DNA导入链霉菌的pSET152衍生载体(英文)

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微生物学通报 2013年第7期40卷 1241-1248页

作者：邓名荣郭俊冯广达朱红惠广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070

【目的】在链霉菌PCR-targeting系统中,安普霉素是使用最普遍的选择标记。然而在基因敲除阶段利用安普霉素选择标记后,在遗传补偿时就不能使用相同选择标记的许多重要载体,如pSET152。这常给研究带来不便,特别是当研究对象基因如一些调... 详细信息

【目的】在链霉菌PCR-targeting系统中,安普霉素是使用最普遍的选择标记。然而在基因敲除阶段利用安普霉素选择标记后,在遗传补偿时就不能使用相同选择标记的许多重要载体,如pSET152。这常给研究带来不便,特别是当研究对象基因如一些调控基因,其生理功能对剂量敏感时更是如此。基于此,拟以pSET152为基础构建一个不以安普霉素为抗性标记的通用整合型载体。【方法】利用融合PCR和λRed重组等方法构建载体。【结果】来自pHZ1358上的硫链丝菌素抗性基因tsr和来自pCR2.1的氨苄抗性基因bla以"tsr在前bla在后"的次序融合。融合后的抗性片段替换pSET152上的安普霉素抗性基因aac(3)-IV,从而获得新载体pGIM6626。利用该载体将删除的榴菌素最小聚酮合酶基因重新导入到Streptomyces vietnamensis突变株中,该突变株恢复了产榴菌素的能力,证实了该载体的有效性。【结论】构建了一个新的pSET152衍生载体pGIM6626。该载体包含氨苄和硫链丝菌素抗性基因,分别在大肠杆菌和链霉菌中作为选择标记。pGIM6626与pSET152用途相似,但前者由于与PCR-targeting系统不存在选择标记的冲突而与该系统更兼容。

关键词：链霉菌整合型载体 pSET152 硫链丝菌素抗性基因 PCR—targeting系统

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白木香果皮化学成分及其生物活性研究

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中草药 2013年第10期44卷 1248-1252页

作者：张兴陶美华陈玉婵高晓霞谭毓治章卫民广东药学院药科学院广东广州510006 广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地广东广州510070

目的研究白木香Aquilaria sinensis果皮的化学成分及其细胞毒性与抗菌活性。方法采用正、反相硅胶柱、凝胶柱和薄层制备等色谱技术和重结晶进行分离纯化,通过波谱分析进行结构鉴定;以神经胶质瘤细胞SF-268、乳腺癌细胞MCF-7、大细胞肺... 详细信息

目的研究白木香Aquilaria sinensis果皮的化学成分及其细胞毒性与抗菌活性。方法采用正、反相硅胶柱、凝胶柱和薄层制备等色谱技术和重结晶进行分离纯化,通过波谱分析进行结构鉴定;以神经胶质瘤细胞SF-268、乳腺癌细胞MCF-7、大细胞肺癌细胞NCI-H460、肝癌细胞HepG-2为供试细胞株,采用SRB染色法对化合物进行体外细胞毒活性研究;以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为供试菌株,采用刃天青染色法对化合物进行体外抗菌活性研究。结果从白木香果皮中分离到10个化合物,经波谱数据分析分别鉴定为isorhamnetin 3-O-(6″-O-(Z)-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranoside(1)、buddlenoid A(2)、7-甲氧基-4′-羟基异黄酮(3)、木犀草素(4)、反式对香豆酸乙酯(5)、木香烃内酯(6)、表木栓醇(7)、豆甾醇(8)、对羟基苯甲酸甲酯(9)、邻苯二酚(10)。结论化合物1～3、5、6、9、10为首次从该植物中分离得到,化合物1～3、5、6为首次从沉香属植物中分离得到;其中化合物6对上述4种肿瘤细胞株表现出较好的抑制作用,化合物1、4对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有一定的抗菌活性。

关键词：白木香 7-甲氧基-4′-羟基异黄酮木香烃内酯细胞毒活性抗菌活性

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南方食品中沙门氏菌污染调查及分型

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微生物学报 2013年第12期53卷 1326-1333页

作者：陈玲张菊梅杨小鹃吴清平徐明芳广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广州510070 暨南大学生命科学技术学院广州510632

【目的】系统调查我国南方代表性地区食品中沙门氏菌污染情况,并对分离株进行血清分型和肠杆菌基因间重复共有序列聚合酶链式反应(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Polymerase Chain Reaction,ERIC-PCR)分型研究,为溯... 详细信息

【目的】系统调查我国南方代表性地区食品中沙门氏菌污染情况,并对分离株进行血清分型和肠杆菌基因间重复共有序列聚合酶链式反应(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Polymerase Chain Reaction,ERIC-PCR)分型研究,为溯源和控制食品中沙门氏菌的污染提供数据。【方法】采用定性法和最大可能数(Most Probable Number,MPN)法对七大类食品(肉与肉制品、水产品、速冻食品、熟食、蔬菜、乳制品和食用菌)中的沙门氏菌进行检测。利用血清分型和分子分型确定南方沙门氏菌血清型的分布和优势血清型,研究分离株的遗传多样性。【结果】从400份食品样品共检出75份沙门氏菌阳性样品,污染率为18.8%(75/400)。其中,97.3%(73/75)的阳性样品污染水平均低于10 MPN/g。对93株分离株进行血清分型,分属9个群、29种血清型。优势血清型为德尔卑沙门氏菌(Salmonella Derby)和鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)。利用ERIC-PCR对96株沙门氏菌(包括93株分离株和3株标准株)进行分型研究发现,在相似系数为0.75时可分为15个聚类簇,56种型别,分离株的基因型别呈现多样性。【结论】南方食品中沙门氏菌的污染率较高,但污染水平低。***和***为优势血清型。初步建立了沙门氏菌ERIC-PCR指纹图谱数据库,南方食品中沙门氏菌的血清型和基因型呈现多样性。

关键词：沙门氏菌污染调查血清分型肠杆菌基因间重复共有序列聚合酶链式反应

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海洋真菌汤姆青霉FS77的抗菌活性研究

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中药材 2013年第1期36卷 99-101页

作者：李浩华王磊潘清灵章卫民广东省微生物研究所/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室/广东省华南应用微生物重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地广东广州510070

目的:研究海洋真菌汤姆青霉Penicillium thomii FS77发酵提取物对细菌和植物病原真菌的抗菌活性,为进一步开发抗菌活性物质奠定基础。方法:采用滤纸片法、生长速率法分别测定海洋真菌汤姆青霉FS77的发酵液和菌丝体提取物对金黄色葡萄球... 详细信息

目的:研究海洋真菌汤姆青霉Penicillium thomii FS77发酵提取物对细菌和植物病原真菌的抗菌活性,为进一步开发抗菌活性物质奠定基础。方法:采用滤纸片法、生长速率法分别测定海洋真菌汤姆青霉FS77的发酵液和菌丝体提取物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli)和植物病原真菌链格孢(Alternaria alternata)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium)的抑制作用;采用连续稀释法测定这2种提取物对供试菌株的最低抑制浓度。结果:汤姆青霉FS77提取物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌具有抑菌活性,其中发酵液和菌丝体提取物对枯草芽孢杆菌的抑制效果最好,抑菌圈直径均为14.35、10.67 mm,最低抑菌浓度分别为1.56 mg/mL;对植物病原真菌链格孢、胶孢炭疽菌也有较好的抑制效果,抑制率均达50%以上,最低抑菌浓度均为3.12mg/mL。结论:海洋真菌汤姆青霉FS77具有潜在的应用价值,其抗菌活性物质值得进一步深入研究。

关键词：海洋真菌汤姆青霉提取物抗细菌抗植物病原真菌南海

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阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶的原核表达及其多克隆抗体制备

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食品工业科技 2013年第2期34卷 198-201页

作者：徐晓可吴清平张淑红张菊梅李程思郭伟鹏广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地广东省微生物研究所广东广州510070

以阪崎肠杆菌(ATCC29544)的基因组DNA为模板通过PCR扩增出α-葡萄糖苷酶基因malA,将其克隆入表达载体PET22b(+),构建重组表达质粒pET22b-malA。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),进行优化表达。采用尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融... 详细信息

以阪崎肠杆菌(ATCC29544)的基因组DNA为模板通过PCR扩增出α-葡萄糖苷酶基因malA,将其克隆入表达载体PET22b(+),构建重组表达质粒pET22b-malA。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),进行优化表达。采用尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白,然后再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过ELISA测定效价,并通过免疫荧光法鉴定与菌体表面结合能力。结果表明克隆的目的基因全长1677bp,与Genebank的malA比较具有100%的同源性。带His标签的融合蛋白以包涵体形式表达,其最优化的表达条件是37℃下用0.8mmol/L IPTG诱导5h。ELISA测定效价为5×105;免疫荧光法鉴定表明多克隆抗体能与阪崎肠杆菌表面结合。本实验为阪崎肠杆菌的免疫磁珠检测奠定了基础。

关键词：阪崎肠杆菌 α-葡萄糖苷酶克隆原核表达多克隆抗体

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冬虫夏草促繁地土壤真菌种群结构的变性梯度凝胶电泳技术分析

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中草药 2013年第4期44卷 478-481页

作者：李挺宋斌王超群李泰辉广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地广东广州510070

目的采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对冬虫夏草促繁地土壤真菌多样性进行初步研究。方法利用PCR方法选择特异性引物ITS3-GC和ITS4扩增ITS rDNA基因的ITS2片段,结合DGGE分离技术,并借助生物信息学软件进行分析。结果所测的土壤样品中真... 详细信息

目的采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对冬虫夏草促繁地土壤真菌多样性进行初步研究。方法利用PCR方法选择特异性引物ITS3-GC和ITS4扩增ITS rDNA基因的ITS2片段,结合DGGE分离技术,并借助生物信息学软件进行分析。结果所测的土壤样品中真菌ITS2基因序列与GenBank已报道的丝盖伞属Inocybe(Fr.)Fr.、口蘑属Tricholoma(Fr.)Staude、根肿黑粉菌属Entorrhiza ***及未确定的子囊菌Ascomycota、土壤真菌等的序列相似性较高,土壤真菌种群结构相似性仅有19.4%～50.1%。结论冬虫夏草促繁地土壤真菌多样性丰富。

关键词：冬虫夏草土壤真菌多样性变性梯度凝胶电泳技术

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用于PCR扩增的细菌DNA提取方法比较

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华南农业大学学报 2013年第3期34卷 439-442页

作者：冯广达陈美标羊宋贞朱红惠广东省微生物研究所/广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070

以14个属的革兰阴性菌和阳性菌为研究对象,采用16S rRNA基因PCR扩增对4种细菌DNA提取法进行了比较.结果表明,对细菌DNA的提取效果排序,依次为冻融法、煮沸法、碱解法、ROSE法.冻融法效果最好,具有成本低、省时省力、无污染等优点,但仍... 详细信息

以14个属的革兰阴性菌和阳性菌为研究对象,采用16S rRNA基因PCR扩增对4种细菌DNA提取法进行了比较.结果表明,对细菌DNA的提取效果排序,依次为冻融法、煮沸法、碱解法、ROSE法.冻融法效果最好,具有成本低、省时省力、无污染等优点,但仍存在少数革兰阳性菌DNA提取失败的现象.因此,在菌株较多的情况下可先采用冻融法提取细菌DNA,对少数提取失败的菌株,弃冻融法得到的上清液,再以SDS法、CTAB法或DNA试剂盒的提取进行补充.采用该操作流程既能节省成本和时间,又减少了提取过程中有机废弃物的产生.

关键词： DNA提取冻融法 16S rRNA基因 PCR

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矿泉水臭氧消毒中溴酸盐的形成与控制

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食品与生物技术学报 2013年第12期32卷 1298-1302页

作者：张永清吴清平张菊梅杨秀华广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东广州510070

为控制矿泉水中溴酸盐含量,采用改变臭氧浓度的方法,对添加溴离子的矿泉水、超纯水和自来水分别进行臭氧氧化5 min,观察臭氧氧化过程中臭氧、溴离子以及水质对溴酸盐生成的影响;同时利用向自来水中添加一定浓度溴离子的方法,研究CT值(Oz... 详细信息

为控制矿泉水中溴酸盐含量,采用改变臭氧浓度的方法,对添加溴离子的矿泉水、超纯水和自来水分别进行臭氧氧化5 min,观察臭氧氧化过程中臭氧、溴离子以及水质对溴酸盐生成的影响;同时利用向自来水中添加一定浓度溴离子的方法,研究CT值(Ozone Concentration×Contact Time,CT)对溴酸盐生成的影响。结果表明,随着臭氧浓度和溴离子浓度的增加,溴酸盐生成量增加。当臭氧质量浓度≥0.4 mg/L,添加相同浓度的溴离子时,矿泉水中生成的溴酸盐量大于自来水和超纯水中溴酸盐量。矿泉水不同,添加相同浓度的溴离子,生成的溴酸盐量也不同,但当臭氧质量浓度≥0.4 mg/L时,溴酸盐量均大于10μg/L。CT值增大导致溴酸盐生成量大幅增加。因此,可以通过降低臭氧浓度和溴离子浓度的方法,减少臭氧消毒中溴酸盐的生成量。

关键词：矿泉水臭氧溴离子溴酸盐

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