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微生物学报 2014年第11期54卷 1248-1255页

作者：杨小鹃吴清平张菊梅郭伟鹏广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070

近10年来,一种与鼠伤寒沙门氏菌具有相似抗原的非典型沙门氏菌血清型1,4,[5],12:i:-在全球多个国家检出率大幅度增加,目前已被列为引起人类沙门氏菌病的主要血清型之一。沙门氏菌1,4,[5],12:i:-菌株具多重耐药特性,存在分别以质粒和染... 详细信息

近10年来,一种与鼠伤寒沙门氏菌具有相似抗原的非典型沙门氏菌血清型1,4,[5],12:i:-在全球多个国家检出率大幅度增加,目前已被列为引起人类沙门氏菌病的主要血清型之一。沙门氏菌1,4,[5],12:i:-菌株具多重耐药特性,存在分别以质粒和染色体介导的两种主要的多重耐药菌株(西班牙株系和欧洲株系)。多个抗生素抗性基因(blaTEM、blaCTX-M-1、aac(3)-IV、aadA2、cmlA1、sul1、sul2、dfrA12、strA-strB、tet(A)和tet(B))在1,4,[5],12:i:-耐药菌株中检出。遗传特征分析显示,沙门氏菌1,4,[5],12:i:-与鼠伤寒沙门氏菌具有很高的遗传相似度,并且推测是由于多个独立的遗传事件的改变,导致鼠伤寒沙门氏菌变异而产生不同的1,4,[5],12:i:-株系。对于沙门氏菌1,4,[5],12:i:-,相关快速、准确检测方法的建立及致病、耐药机制研究将是今后的重要方向。

关键词：沙门氏菌1 4 [5] 12:i: 鼠伤寒沙门氏菌

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被污染的工业产品中常见微生物种类及耐药性分析

被污染的工业产品中常见微生物种类及耐药性分析

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2015年第十三届全国防霉防菌技术研讨及产品交流会

作者：陶宏兵邱晓颖冯劲黄小茉谢小保施庆珊广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东广州510070 广东迪美生物技术有限公司广东广州510663

为了工业产品中微生物污染治理及其防腐体系的构建提供科学依据,收集了被微生物污染的工业产品,并对其进行分离、鉴定和分类,再通过测定杀菌剂的最低抑菌浓度(MIC)来评估微生物的抗药水平.污染微生物中革兰氏阴性菌约占47.59％,革兰氏... 详细信息

为了工业产品中微生物污染治理及其防腐体系的构建提供科学依据,收集了被微生物污染的工业产品,并对其进行分离、鉴定和分类,再通过测定杀菌剂的最低抑菌浓度(MIC)来评估微生物的抗药水平.污染微生物中革兰氏阴性菌约占47.59％,革兰氏阳性菌约占32.62％,主要为芽孢杆菌属、假单胞菌属和伯克霍尔德氏菌;污染真菌约占19.8％,主要为链格孢霉属、曲霉属、青霉属.MIC结果表明,分离的洋葱伯克霍尔德氏菌对卡松、布罗波尔、DMDMH抗性均高于标准菌株,分离的铜绿假单胞菌、洋葱伯克霍尔德氏菌和黑曲霉对DMDMH的抗性均高于标准菌株.导致工业产品污染的微生物种类较多,应根据其种类、理化性状、防腐剂杀菌机理不同进行治理.

关键词：工业产品微生物污染杀菌防腐剂耐药性分析质量控制

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化妆品中腐败微生物的抗药性研究

化妆品中腐败微生物的抗药性研究

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2015年第十三届全国防霉防菌技术研讨及产品交流会

作者：文霞杨秀茳谢小保周少璐孙廷丽黄小茉广东省微生物研究所、广东省微生物分析检测中心、省部共建华南应用微生物国家重点实验室、广东省菌种保藏与应用重点实验室广东广州510070 广东迪美生物技术有限公司广东广州510663

对导致化妆品腐败变质的微生物进行分离鉴定,并分析腐败微生物对常用防腐剂的抗药性.根据API鉴定系统和分子生物学技术对腐败微生物进行鉴定,并采用最低抑菌浓度(MIC)的方法评估腐败菌对常用防腐剂尼泊金甲酯、卡松、碘丙炔醇丁基氨甲酸... 详细信息

对导致化妆品腐败变质的微生物进行分离鉴定,并分析腐败微生物对常用防腐剂的抗药性.根据API鉴定系统和分子生物学技术对腐败微生物进行鉴定,并采用最低抑菌浓度(MIC)的方法评估腐败菌对常用防腐剂尼泊金甲酯、卡松、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯(IPBC)、DMDM乙内酰脲(DMDMH)、布罗波尔的抗药性水平.经鉴定发现2个污染样品中的腐败微生物均为同一种革兰染色阴性杆菌即洋葱伯克霍尔德氏菌,抗药性分析显示腐败菌HZPl537A对DMDMH、卡松和布罗波尔的MIC(2000μg/mL、25μg/mL和62.5μg/mL)均高于标准菌株(500μg/mL、3.13μg/mL和31.25μg/mL);腐败菌HZPl537B对DMDMH、卡松的MIC(2000μg/mL、25μg/mL)均高于标准菌株(500μg/mL、3.13μg/mL);第一代腐败菌的抗药性强于第二代.洋葱伯克霍尔德氏菌容易引起化妆品腐败变质,且对多种防腐剂具有抗药性,在化妆品微生物控制时应给予高度关注.

关键词：化妆品微生物防腐剂抗药性

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肉类及蔬菜食品中EHEC O157污染分布及分型研究

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现代食品科技 2014年第9期30卷 290-296页

作者：赖则冰张淑红朱雪梅吴清平徐明芳张菊梅广东省微生物研究所、省部共建华南应用微生物国家重点实验室、广东省菌种保藏与应用重点实验室、广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070 暨南大学生命科学技术学院广东广州510006

为深入了解肉类及蔬菜中肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC O157)的污染分布规律和遗传多样性,随机采集全国18个城市的食品样品,参考GB/T 4789.36-2008方法进行样品处理,并用rfbE/fliCH7双重PCR对菌株进行鉴定;分别采用单重PCR和ERIC-PCR对菌... 详细信息

为深入了解肉类及蔬菜中肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC O157)的污染分布规律和遗传多样性,随机采集全国18个城市的食品样品,参考GB/T 4789.36-2008方法进行样品处理,并用rfbE/fliCH7双重PCR对菌株进行鉴定;分别采用单重PCR和ERIC-PCR对菌株进行毒力基因(eae、hlyA、stx1和stx2)检测和分子分型。结果表明,414份样品中检出18份EHEC O157阳性样品,总污染率4.35%,其中生鲜肉12份,速冻肉6份,蔬菜未检出;经过生化、血清鉴定和双重PCR检测,鉴定出52株EHEC O157,包括29株O157:H7,3株O157:NM(fliCH7+,无动力),2株O157:NM(fliCH7-,无动力)和18株O157:hund(未确定H型);毒力基因检测结果发现,52株菌株中有50株携带毒力基因,其中40株(76.92%)携带eae,31株(59.62%)携带hlyA,20株(38.46%)携带stx1,24株(46.15%)携带stx2。ERIC-PCR分型结果表明,在相似系数为0.80时,菌株可分为12个聚类簇,F型为其主要基因簇,分离株的基因型呈现多样性。

关键词：肉类蔬菜肠出血性大肠埃希氏菌O157 分布 ERIC-PCR分型

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食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌污染调查和ERIC-PCR分型研究

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现代食品科技 2014年第6期30卷 294-300页

作者：胡惠娟吴清平张菊梅潘力郭伟鹏王惠贤华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006 广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070

通过调查全国17个城市中,七大类食品的小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yesinia enterocolitica)污染情况,了解其分布规律与遗传多样性,从而为我国食品中***污染的溯源和控制供相应的数据支持。本研究采用了稍作修改的《食品微生物学检验-小肠结... 详细信息

通过调查全国17个城市中,七大类食品的小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yesinia enterocolitica)污染情况,了解其分布规律与遗传多样性,从而为我国食品中***污染的溯源和控制供相应的数据支持。本研究采用了稍作修改的《食品微生物学检验-小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(GB/T 4789.8-2008)》和GB/T4789.8-2003两种方法对食品中***进行检测,同时运用ERIC-PCR技术对分离菌株进行分型研究。研究显示在946份食品样品中检出共50份***阳性样品,总污染率为5.29%。在检出的阳性样品中包括肉与肉制品24份、速冻食品25份和食用菌1份,污染率分别为12.06%、16.89%和0.74%,速冻食品和肉与肉制品是目前我国***污染的主要食品类型。采用GB/T4789.8-2008检出阳性样品25份,检出率为2.64%;采用GB/T4789.8-2003检出34份,检出率为3.59%明显高于GB/T4789.8-2008法。ERIC-PCR指纹图谱进行聚类分析,结果显示72个分离株可分为四簇,主要污染基因型在C簇,初步建立了***的ERIC-PCR指纹图谱数据库。

关键词：食品小肠结肠炎耶尔森氏菌污染率

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广谱抑菌物质产生菌GX-21的筛选及鉴定

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现代食品科技 2014年第12期30卷 68-73,60页

作者：袁林吴清平吴克刚张菊梅莫树平柏建玲广东省微生物研究所广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070 广东工业大学轻工化工学院食品科学与工程系广东广州510006

本研究在广东省及其周边地区共11个采样地点采集土壤样品156份,分离得到放线菌1026株。土壤预处理采用碳酸钙富集培养法,分离采用平板稀释法,选取高氏一号合成培养基作为分离培养基,添加50 mg/L重铬酸钾作为抑制剂。初筛采用琼脂块法,... 详细信息

本研究在广东省及其周边地区共11个采样地点采集土壤样品156份,分离得到放线菌1026株。土壤预处理采用碳酸钙富集培养法,分离采用平板稀释法,选取高氏一号合成培养基作为分离培养基,添加50 mg/L重铬酸钾作为抑制剂。初筛采用琼脂块法,选择金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌、白假丝酵母菌、黑曲霉共5种指示菌进行抑菌试验,共得到95株活性菌株。复筛选择初筛的5种指示菌加上副溶血性弧菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌共8种指示菌,分两级进行复筛:一级复筛仍采用琼脂块,得到19株活性菌株;二级复筛采用牛津杯定量扩散法,得到5株优良菌株。对优良菌株GX-21进行鉴定,通过形态特征观察、培养特性观察、生理生化试验和16S r DNA序列分析,确定菌株GX-21为多产色链霉菌(Streptomyces polychromogenes)。菌株GX-21具有抑菌谱广的特点,对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均有抑制作用。

关键词：多产色链霉菌抑菌活性土壤放线菌筛选鉴定

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紫玉盘内生真菌Arthrinium sp.A092的次级代谢产物研究

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中药材 2014年第11期37卷 2008-2011页

作者：周燕燕李浩华谭国慧郭晓玲章卫民广东药学院广东广州510006 广东省微生物研究所/省部共建华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070

目的：研究分离自紫玉盘中的内生真菌节菱孢属真菌Arthrinium sp.A092的次级代谢产物。方法：运用硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱、HPLC和薄层制备等色谱技术及重结晶对菌株Arthrinium sp.A092的发酵液提取物进行分离纯化,并通过波谱分析... 详细信息

目的：研究分离自紫玉盘中的内生真菌节菱孢属真菌Arthrinium sp.A092的次级代谢产物。方法：运用硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱、HPLC和薄层制备等色谱技术及重结晶对菌株Arthrinium sp.A092的发酵液提取物进行分离纯化,并通过波谱分析进行结构鉴定。结果：从发酵液提取物中分离鉴定出10个化合物,分别为：flemingipanic acid（1）、（-）-gynuraone（2）、对甲氧基苯乙醇（3）、2-己基-3-甲基顺丁烯二酸酐（4）、1-[（12E,16E）-12,16-二十碳二烯酰基]-2-[（E,E）-7,10-十八碳二烯酰基]-3-硬脂酰基甘油（5）、mycoediketopiperazine（6）、libertellenone C（7）、4-羟甲基-4,6-辛二烯-2,3-二醇（8）、邻苯二甲酸二甲酯（9）、邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（10）。结论：其中,化合物1、3-5、8-10为首次从该属真菌中分离得到。

关键词：节菱孢内生真菌紫玉盘次级代谢产物

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镰刀菌诱导结香对白木香叶内生真菌分布和群落构成的影响研究

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中国中药杂志 2014年第2期39卷 197-203页

作者：高晓霞周伟平王磊章卫民严寒静广东药学院广东广州510006 广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东省华南应用微生物重点实验室一省部共建国家重点实验室培育基地广东广州510070

为了研究沉香形成前后白木香叶组织中内生真菌的分布和群落构成,采用石蜡永久制片法观察白木香叶组织显微结构,细胞化学法确定内生真菌的分布。通过改良的CTAB法对白木香进行总DNA提取,利用真核生物通用引物同时对植物和内生真菌rDNA IT... 详细信息

为了研究沉香形成前后白木香叶组织中内生真菌的分布和群落构成,采用石蜡永久制片法观察白木香叶组织显微结构,细胞化学法确定内生真菌的分布。通过改良的CTAB法对白木香进行总DNA提取,利用真核生物通用引物同时对植物和内生真菌rDNA ITS序列进行PCR扩增,构建内生真菌rDNA ITS文库,RFLP分析和序列测定,用PUAP软件进行系统发育分析,构建最大简约树。结果表明:镰刀菌诱导结香前后,白木香内生真菌菌丝主要分布于海绵组织和韧皮部,结香后韧皮部内生真菌菌丝相对丰度明显增大;茎点霉是未结香白木香叶内生真菌优势种群,刺盘孢菌是已结香白木香叶内生真菌优势种群;刺盘孢菌是未结香和已结香白木香唯一共有内生真菌,且丰度差异较大。不依赖分离培养的分子生物学方法可快速直观地用于植物组织内生真菌的鉴定。白木香叶内生真菌具有一定的遗传多样性,沉香形成前后白木香内生真菌群落构成差异较大。

关键词：白木香沉香形成人工造香内生真菌 rDNA ITS

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大肠菌群特异性检测荧光底物MUGal的合成及应用

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现代食品科技 2014年第8期30卷 251-257页

作者：马延霞吴清平张菊梅郭伟鹏韦献虎中国科学院广州化学研究所广东广州510650 广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070 中国科学院大学北京100049

4-甲基伞形酮基-β-D-吡喃半乳糖苷(MUGal)是食品安全中重要指示菌大肠菌群的特异性快速检测荧光底物。本文采用相转移催化方法使4-甲基伞形酮(4-MU)和四乙酰基-α-D-吡喃溴代半乳糖缩合生成保护的糖苷,再在碳酸钠的水/甲醇溶液中去保... 详细信息

4-甲基伞形酮基-β-D-吡喃半乳糖苷(MUGal)是食品安全中重要指示菌大肠菌群的特异性快速检测荧光底物。本文采用相转移催化方法使4-甲基伞形酮(4-MU)和四乙酰基-α-D-吡喃溴代半乳糖缩合生成保护的糖苷,再在碳酸钠的水/甲醇溶液中去保护生成4-甲基伞形酮基-β-D-吡喃半乳糖苷。通过对温度、时间和催化剂用量对糖苷化一步产率的研究发现,当温度为30℃,反应时间为16 h时,产率最高可达73.12%。醇解反应一步以碳酸钠为碱产率可达91.01%。在对产物进行IR和1HNMR结构表征后,进一步将产物应用于大肠菌群显色培养基,并和进口底物比较,其产荧光管数经X2检验无显著性差异(P>0.05),在实际样品检测中,采用GB4789.3-2010(48 h)和MUGal方法(24 h)的阳性检出率均为80%,MUGal方法的检出时间明显缩短。因此,本研究制备的荧光底物能和进口产品相媲美,可以作为进口底物的替代品。

关键词： 4-甲基伞形酮-β-D-吡喃半乳糖苷相转移催化大肠菌群月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)

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免疫磁捕获-荧光定量PCR快速检测食品中沙门氏菌

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食品工业科技 2014年第24期35卷 79-83页

作者：杨小鹃李海刚吴清平张菊梅陈玲蔡淑珍广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070

建立了免疫磁珠分离(Immunomagnetic separation,IMS)联合荧光定量PCR(Real-time PCR)技术准确、快速检测食品中沙门氏菌(Salmonella spp)的方法。采用亲和纯化的羊抗沙门氏菌抗体与Dynabeads M-280磁珠制备沙门氏菌免疫磁珠,优化反应条... 详细信息

建立了免疫磁珠分离(Immunomagnetic separation,IMS)联合荧光定量PCR(Real-time PCR)技术准确、快速检测食品中沙门氏菌(Salmonella spp)的方法。采用亲和纯化的羊抗沙门氏菌抗体与Dynabeads M-280磁珠制备沙门氏菌免疫磁珠,优化反应条件,建立免疫磁珠分离方法。同时根据沙门氏菌特异性ttr基因,建立Real-time PCR体系,并检测其特异性及敏感性。结果显示,沙门氏菌可产生荧光信号,而其他细菌均未见明显荧光信号。利用所建立的免疫磁捕获-荧光定量PCR(IMS-real-time PCR)方法可以检测初始含菌量最低为6.5CFU/25g的食品样品,全过程需时约8h。150份实际食品样品中,IMS-real-time PCR方法检出27份阳性样品,免疫磁珠联合XLT4平板培养法检出18份阳性样品,传统国标法检出14份阳性样品。

关键词：免疫磁珠分离荧光定量PCR 沙门氏菌

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