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广藿香内生真菌Daldinia eschscholtzii A630次级代谢产物及其细胞毒活性研究

天然产物研究与开发 2018年第7期30卷 1176-1180页

作者：卢梦梦陈玉婵刘洪新李赛妮李浩华陶美华郝再彬章卫民广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广州510070 桂林理工大学化学与生物工程学院桂林541006

采用色谱法从广藿香内生真菌Daldinia eschscholtzii发酵液中分离得到9个化合物,通过波谱数据分析分别鉴定为dihydrosphaerolone(1)、2,3-dihydro-5-hydroxy-2-methyl-4H-1-benzopyran-4-one(2)、6-hydroxymellein(3)、4,8-dihydroxy-1-tetralone(4)、8-methoxy-1-naphthol(5)、helicascolide A(6)、1-(2,6-dihydroxyphenyl)butan-1-one(7)、1-(2,6-dihydroxyphenyl)ethan-1-one(8)、diisobutyl phthalate(9),其中化合物5、9为首次从该属真菌中分离得到。细胞毒活性测试显示化合物6、7对肿瘤细胞SF-268、MCF-7、NCI-H460、Hep G-2具有较好的抑制活性,IC50值在16.52~28.42μmol/L之间。

关键词：广藿香内生真菌 Daldinia eschscholtzii 次级代谢产物细胞毒活性

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野生金针菇的分子鉴定及遗传多样性分析

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中国食用菌 2018年第4期37卷 52-56页

作者：黄龙花谭武平刘远超黄志勇钟元茂史钏胡惠萍广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070 广东粤微食用菌技术有限公司广东广州510663

针对采自全国7个自然保护区共计11个野生金针菇和2个常见栽培金针菇菌株,进行ITS-PCR和产物测序,经过与Gen Bank上已知序列的比对,结合传统形态特征鉴定,确定各菌株的拉丁名,并用MEGA6.0进行ITS序列的遗传距离分析和系统发育树构建。结... 详细信息

针对采自全国7个自然保护区共计11个野生金针菇和2个常见栽培金针菇菌株,进行ITS-PCR和产物测序,经过与Gen Bank上已知序列的比对,结合传统形态特征鉴定,确定各菌株的拉丁名,并用MEGA6.0进行ITS序列的遗传距离分析和系统发育树构建。结果表明,金针菇的ITS1比ITS2进化速率快,变异位点和简约信息位点差异较大;13株金针菇种内遗传距离为0~0.014,种间遗传距离为0.029~0.045;ITS系统发育树也支持将13个菌株分为3个类群,即3个种,这与分子鉴定和传统形态鉴定结果相吻合,且同一菌种地域分布越近的菌株越容易聚为一支。研究表明,ITS序列分析可用于野生金针菇的分子鉴定和种间遗传多样性分析。

关键词：金针菇 ITS序列系统发育树遗传多样性

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沉香挥发性成分与其抗肿瘤活性的灰色关联度分析

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中成药 2018年第1期40卷 224-227页

作者：陈晓颖黄跃前陈玉婵周欣高晓霞章卫民广东药科大学药学院广东广州510006 广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070

目的对沉香挥发性成分与其体外抗肿瘤活性进行灰色关联度分析。方法 GC-MS法分析4种沉香三氯甲烷提取物的挥发性成分,磺酰罗丹明B(SRB)比色法测定其对Hep G-2、SF-268、MCF-7、NCI-H460细胞株的IC50,再通过灰色关联度分析成分峰面积相... 详细信息

目的对沉香挥发性成分与其体外抗肿瘤活性进行灰色关联度分析。方法 GC-MS法分析4种沉香三氯甲烷提取物的挥发性成分,磺酰罗丹明B(SRB)比色法测定其对Hep G-2、SF-268、MCF-7、NCI-H460细胞株的IC50,再通过灰色关联度分析成分峰面积相对含有量与相应IC50的相关性。结果沉香挥发性成分主要有倍半萜、色酮、甾体,对4种肿瘤细胞株的IC50在11.11~58.55μg/m L之间。与抗肿瘤活性关联度大于0.70的18个挥发性成分中,有6个2-(2-苯乙基)色酮、3个甾体、8个倍半萜。保留时间202.3 min的2-(2-苯乙基)色酮和豆固酮表现出较强的抗肿瘤活性,与4种肿瘤细胞株的IC50关联度均在0.8以上。结论沉香挥发性成分中的2-(2-苯乙基)色酮化合物在其抗肿瘤活性方面具有重要的作用。

关键词：沉香挥发性成分抗肿瘤活性灰色关联度分析 GC-MS SRB比色法

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荧光素酶表达载体构建及其在巴斯德毕赤酵母的表达

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现代食品科技 2018年第6期34卷 88-96页

作者：罗展浩吴清平张菊梅丁郁李程思潘力吴慧清华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006 广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070 暨南大学理工学院食品科学与工程系广东广州510632

萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase,FL)是ATP快速检测技术的核心组件,通过荧光强度与ATP浓度的对应关系,在食品行业检测微生物数量发挥着重大作用。本文为实现荧光素酶在重组毕赤酵母GS115中的异源表达,通过从载体pGL2-control中扩增... 详细信息

萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase,FL)是ATP快速检测技术的核心组件,通过荧光强度与ATP浓度的对应关系,在食品行业检测微生物数量发挥着重大作用。本文为实现荧光素酶在重组毕赤酵母GS115中的异源表达,通过从载体pGL2-control中扩增荧光素酶基因luc,克隆到真核表达载体p PIC9K中,线性化后电击转化毕赤酵母GS115菌株,筛选阳性重组菌株。在甲醇的诱导下进行酶的表达,对粗酶液进行生物活性发光分析,然后对粗酶进行超滤、阴离子层析和分子筛凝胶层析三步纯化。甲醇诱导表达96 h发现胞外和胞内粗酶液均有相对较高的酶发光活性,酶活分别为1.45×10~6 RLU/mL和1.58×10~9 RLU/mL。SDS-PAGE与Western blot分析重组荧光蛋白大小约为70 ku,最终纯化得到的荧光素酶,其比活为7.0×10~8 RLU/mg,纯化倍数达到19.3倍,产量为48 mg/L。以上结果表明,荧光素酶能够在毕赤酵母表达系统获得较好的表达和纯化效果。

关键词： ATP生物发光真核表达荧光素酶毕赤酵母纯化

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基于代谢组解析小蝉草子实体与菌丝体代谢产物差异

基于代谢组解析小蝉草子实体与菌丝体代谢产物差异

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：黄虹王刚正张成花邓旺秋李泰辉中国科学院大学中国科学院华南植物园广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室

小蝉草(Ophiocordyceps sobolifera)隶属于线虫草科(Ophiocordycipitaceae)、线虫草属(Ophiocordyceps),误以蝉花入药,但活性成分及其代谢相关研究甚少。因此,本研究拟采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)对小蝉草野生子实体和纯培养菌... 详细信息

小蝉草(Ophiocordyceps sobolifera)隶属于线虫草科(Ophiocordycipitaceae)、线虫草属(Ophiocordyceps),误以蝉花入药,但活性成分及其代谢相关研究甚少。因此,本研究拟采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)对小蝉草野生子实体和纯培养菌丝体的代谢成分进行鉴定,并对二者之间代谢产物差异进行差异分析。质谱鉴定结果显示:在小蝉草野生子实体和纯培养菌丝体中,阴离子模式下检测到5735个代谢产物,阳离子模式下检测到8764个代谢产物;野生子实体和纯培养菌丝体共有的代谢产物有6251个(阳离子模式)和4469个(阴离子模式),仅在野生子实体中检测到的代谢产物有1206个(阳离子模式)和576个(阴离子模式),纯培养菌丝体特有的代谢产物有79个(阳离子模式)和36个(阴离子模式)。结合统计学分析表明,小蝉草野生子实体和纯培养菌丝体之间的代谢产物存在显著性差异,差异代谢物有氨基酸、脂类、肽类、生物碱、有机酸、胺类、糖、多元醇等。野生子实体中代谢产物的种类较为丰富、含量相对较高,包括特有的磷脂类物质、较多的游离氨基酸和短肽、山梨糖醇及亚精胺,更有利于小蝉草对寄主昆虫的侵染、子实体和孢子的生长发育及对野外胁迫环境的适应。同时,野生子实体中含有丰富的具有明显功效的次级代谢产物。除此之外,发现野生子实体含有较高的玉米赤霉烯酮,这可能是小蝉草引起人类中毒的一个因素。本研究为小蝉草活性成分代谢等相关提供了一定的理论依据。

关键词：代谢组小蝉草差异分析代谢产物

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基于DNA条形码的三种沉香属物种鉴定研究

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中药材 2018年第5期41卷 1061-1065页

作者：朱爽陈闪冲李奇威黄晓莹章卫民吴光明高晓霞广东药科大学广东广州510006 广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室广东广州510070 安徽昊丰洋生物技术有限公司安徽合肥230031

目的:利用5个DNA条形码(ITS、matK、rbcL、psbA-trnH和trnL-trnF)对3个沉香属物种白木香、马来沉香和Aquilaria crassna Pierre进行分子鉴定,为沉香属药材的种类鉴定和种间分类地位提供分子生物学依据。方法:使用改良CTAB法提取沉香属... 详细信息

目的:利用5个DNA条形码(ITS、matK、rbcL、psbA-trnH和trnL-trnF)对3个沉香属物种白木香、马来沉香和Aquilaria crassna Pierre进行分子鉴定,为沉香属药材的种类鉴定和种间分类地位提供分子生物学依据。方法:使用改良CTAB法提取沉香属植物的总DNA,分别对5个条形码序列进行聚合酶链式反应(PCR)扩增与测序。序列经DNAStar软件拼接,MEGA 7.0软件比对分析及计算相关数据,基于K2P模型构建系统发育树。结果:各条形码序列均被成功扩增与测序,其中trnL-trnF由于含有寡核苷酸重复序列而导致测序序列质量低。ITS及matK均能提供较多遗传信息,但在系统发育树中无法准确区分白木香、马来沉香和Aquilaria crassna Pierre这3个物种,而ITS+matK的组合能准确分辨上述物种。结论:ITS+matK组合序列可以用来鉴别沉香属物种,为沉香属药材的种类鉴定和种间分类地位提供分子生物学依据。

关键词： ITS matK DNA条形码沉香属分子鉴定

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不同来源异戊烯基焦磷酸异构酶(IDI)和脱氧木酮糖磷酸合成酶(DXS)对重组大肠杆菌番茄红素产量的影响

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食品工业科技 2018年第18期39卷 131-136页

作者：杨帆苏卜利姚青李华平朱红惠广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东广州510070 华南农业大学农学院广东广州510642 华南农业大学园艺学院广东广州510642

为获得更多异戊烯基焦磷酸异构酶(isopentenyl diphosphate isomerase,IDI)和脱氧木酮糖磷酸合成酶(1-deoxyxylulose-5-phosphate synthase,DXS)相关功能基因资源,本研究选取来源于大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、粘细菌(Myxococcus stipitatus)、戈壁奇球菌(Deinococcus gobiensis)的4种IDI和DXS,分别克隆到表达载体,将其与含有合成番茄红素基因的p Trc99a EBI质粒共同在大肠杆菌中进行异源表达。结果表明,来源于粘细菌的IDI和DXS可以获得最高的番茄红素产量,分别达到了10.86、7.94 mg/g DCW。协同表达经过密码子优化的IDI、DXS,番茄红素产量达到了15.26 mg/g DCW。本研究通过比较不同来源的IDI和DXS,获得了新的基因资源。

关键词：番茄红素异戊烯基焦磷酸异构酶(IDI) 脱氧木酮糖磷酸合成酶(DXS) 大肠杆菌代谢工程

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试验方法和接种物来源对苯甲酸钠快速生物降解率的影响

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生态毒理学报 2018年第1期13卷 261-267页

作者：邓桂荣刘洪英梅承芳张宏涛柳燕贞曾国驱广东省微生物分析检测中心生态毒理与环境安全实验室广州510070 广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广州510070 广东省部共建华南应用微生物国家重点实验室广州510070 环境保护部固体废物与化学品管理技术中心北京100029

化学品的快速生物降解性直接影响其在环境中的迁移、转化和归宿,是鉴别其环境危害性和持久性的基本指标,是政府管理部门对化学品进行风险管理的重要科学依据,在生态毒理测试中具有非常重要的地位。为探讨试验方法、接种物来源以及两者... 详细信息

化学品的快速生物降解性直接影响其在环境中的迁移、转化和归宿,是鉴别其环境危害性和持久性的基本指标,是政府管理部门对化学品进行风险管理的重要科学依据,在生态毒理测试中具有非常重要的地位。为探讨试验方法、接种物来源以及两者的交互效应对苯甲酸钠生物降解率的影响,2013—2015年间以广州地区2个主要处理生活污水的污水处理厂(DTS、LD)为接种物来源,采用OECD 301系列试验方法(301B、301D和301F)进行了苯甲酸钠的快速生物降解性试验,共获得89个标准化测试数据。统计分析结果显示,接种物来源、试验方法与接种物来源的交互效应对苯甲酸钠生物降解率影响不显著,但试验方法单一因素的影响显著。本研究表明,当受试物为易生物降解时,接种物来源、试验方法和接种物来源的交互效应对该受试物的生物降解率无显著的影响,但在同一条件下,选择不同的试验方法往往会导致最终生物降解率出现明显差异。

关键词：苯甲酸钠快速生物降解试验方法接种物

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深红虫草次级代谢产物的分离与鉴定

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中国药房 2018年第3期29卷 353-356页

作者：卢梦梦李义勇刘洪新郝再彬章卫民桂林理工大学化学与生物工程学院广西桂林541006 广东省微生物研究所/省部共建华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室广州510070

目的:对深红虫草的次级谢产物进行分离、鉴定,为进一步发掘深红虫草活性物质和丰富虫草类真菌天然产物库提供参考。方法:采用正相硅胶柱层析、C_(18)反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、薄层色谱等色谱技术对深红虫草发酵液中... 详细信息

目的:对深红虫草的次级谢产物进行分离、鉴定,为进一步发掘深红虫草活性物质和丰富虫草类真菌天然产物库提供参考。方法:采用正相硅胶柱层析、C_(18)反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、薄层色谱等色谱技术对深红虫草发酵液中的化合物进行分离;通过核磁共振氢谱、核磁共振碳谱和质谱分析对分离的化合物进行结构鉴定。结果:从深红虫草发酵液的乙酸乙酯萃取部分共分离得到6个化合物,分别鉴定为5-甲基-1,3-苯二酚(化合物1)、4-hydroxy-17R-methylincisterol(化合物2)、5α,8α-氧桥-(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(化合物3)、3β,5α,6β-三羟基-(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯(化合物4)、尿嘧啶核苷(化合物5)、卵孢菌素(化合物6)。结论:本研究从该属真菌中分离得到了6个化合物,其中化合物1和化合物2为首次分离得到。

关键词：深红虫草次级代谢产物分离鉴定

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深海真菌Dichotomomyces cejpii胶霉毒素生物合成基因启动子的克隆和功能鉴定

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生物技术通报 2018年第4期34卷 144-150页

作者：黄自磊章卫民叶伟李赛妮李浩华朱牧孜中国科学院南海海洋研究所广州510301 广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室广州510070 中国科学院大学北京100049

利用染色体步移技术对深海真菌Dichotomomyces cejpii中胶霉毒素的生物合成基因Gli G、Gli I和Gli O启动子进行克隆,并将其核心区域导入p GL3-basic荧光素酶报告基因载体,通过荧光强度分析发现Gli G的启动子转录活性最强。进一步将Gli ... 详细信息

利用染色体步移技术对深海真菌Dichotomomyces cejpii中胶霉毒素的生物合成基因Gli G、Gli I和Gli O启动子进行克隆,并将其核心区域导入p GL3-basic荧光素酶报告基因载体,通过荧光强度分析发现Gli G的启动子转录活性最强。进一步将Gli G启动子核心区域导入含潮霉素抗性标记的p AN7-1载体,以替换原有启动子pgpd A,并将重组质粒导入酿酒酵母,用潮霉素抗性平板进行筛选,发现Gli G启动子能在酿酒酵母中启动潮霉素抗性基因的表达。

关键词： Dichotomomyces cejpii 胶霉毒素启动子克隆鉴定海洋真菌

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