检索结果-内蒙古大学图书馆

南方医科大学学报 2024年第10期44卷 1985-1994页

作者：成思怡陈泽锐于长江孙图成朱烁基刘南波朱平华南理工大学医学院广东广州510006 南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院广东广州510180 广东省心脏病发病机制与精准防治重点实验室广东广州510180 广州市心脏病发病机制与防治重点实验室广东广州510180

目的高分辨定量剖析生理状态下小鼠心脏电生理本底稳态属性。方法随机选取成年C57BL/6小鼠22只(雌雄1∶1),采用无麻醉法固定小鼠四肢,自主呼吸下通过灵敏十二导联电生理采集器(ECG_(sqa))记录心电波形,包括小鼠特征性P波、R波及ST波,应... 详细信息

目的高分辨定量剖析生理状态下小鼠心脏电生理本底稳态属性。方法随机选取成年C57BL/6小鼠22只(雌雄1∶1),采用无麻醉法固定小鼠四肢,自主呼吸下通过灵敏十二导联电生理采集器(ECG_(sqa))记录心电波形,包括小鼠特征性P波、R波及ST波,应用LabScribe软件读取与量化心前区V3导联上单一心动周期内高分辨时程参数与振幅参数,使用独立样本t检验比较组间差异,联合皮尔逊相关检验与简单线性回归绘制雌雄心电参数拟合散点图,按相关性强弱区分共享与独特关联对参数,从而揭示定量关联网络概貌。结果ECG_(sqa)分析共识别与量化14个特征型心电参数,28.6%的组间差异具有统计学意义。与雄组相比,雌组R波与ST波的振幅与速率均更高(P<0.05)。在初级关联分析所鉴定的51个关联对中,关联阳性群占比为47.1%,其中涵盖雌雄共有(29.2%)、雄特有(29.2%)与雌特有(41.7%)三大关联组。关联对二阶聚类分析发现,雌雄心脏各波形电压的振幅-速率关联对处于普遍稳定强相关水平(P<0.01),而雄组心电特征展现出房-室互联模式,以及雌组心电特征展现独特心房电导系统质量依赖模式。关联群组分布网络特征显示,雌雄各自特有关联参数与共有关联参数之间具有一定程度串联模式。结论本研究聚焦雌雄小鼠天然心脏电信号的可被精确识别的数理特征,发现心电波重要特征参数的内在关联网络,揭示心房与心室电传导系统内部联结特征及其性别差异性,可为心血管生理与病理的纵深机制探索提供潜在适用的电稳态制式参照。

关键词：心脏电生理定量心电策略 P波 R波 ST波

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靶向白细胞介素1β纳米抗体的制备及其对缺氧小鼠心肌细胞凋亡的影响

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中华医学杂志 2024年第22期104卷 2066-2073页

作者：欧阳情王露 Nasser Moussa Ide 邓刚张新奎游婷苏浩滔朱平华南理工大学医学院广州广东省心血管病研究所南方医科大学附属广东省人民医院(广东省医学科学院)广东省心脏病发病机制与精准防治重点实验室广州市心脏发病机制与重点防治重点实验室广州

目的制备抗白细胞介素1β(IL-1β)纳米抗体, 并观察其对缺氧小鼠心肌细胞凋亡的影响。方法利用DNA重组技术, 使用pET-16b和pHEN1表达载体构建抗IL-1β纳米抗体的重组质粒(pET-16b-4G6M-VHH、pET-16b-5BVP-VHH、pET-16b-5MVZ-VHH和pHEN1-... 详细信息

目的制备抗白细胞介素1β(IL-1β)纳米抗体, 并观察其对缺氧小鼠心肌细胞凋亡的影响。方法利用DNA重组技术, 使用pET-16b和pHEN1表达载体构建抗IL-1β纳米抗体的重组质粒(pET-16b-4G6M-VHH、pET-16b-5BVP-VHH、pET-16b-5MVZ-VHH和pHEN1-4G6M-VHH、pHEN1-5BVP-VHH、pHEN1-5MVZ-VHH, 其中VHH为重链单域抗体, 4G6M-VHH、5BVP-VHH、5MVZ-VHH分别为3种抗IL-1β的纳米抗体), 将构建成功的质粒分别转入大肠杆菌Rosetta2(DE3)表达菌中进行诱导表达及镍柱纯化, 用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western印迹对表达产物及纯化产物进行鉴定, 并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其亲和力。将纯化所得亲和力最高的抗IL-1β纳米抗体(pHEN1-5MVZ-VHH)应用于小鼠HL-1心肌细胞缺氧模型(分为正常对照组、缺氧模型组、空白质粒组及12.5、25.0、50.0 μg/ml pHEN1-5MVZ-VHH处理组), 并检测细胞存活率及凋亡率。结果 SDS-PAGE和Western印迹结果显示, 成功得到相对分子质量约15 000的抗IL-1β纳米抗体;ELISA结果显示, 与pET-16b载体组相比, pHEN1载体组所表达的纳米抗体与IL-1β抗原的亲和力更高(4G6M-VHH组:3.20±0.03比1.20±0.03, P<0.001;5BVP-VHH组:3.18±0.06比1.21±0.02, P<0.001;5MVZ-VHH组:3.38±0.05比1.62±0.04, P<0.001);细胞存活及凋亡检测结果显示, 与缺氧模型组相比, 25.0 μg/ml及50.0 μg/ml pHEN1-5MVZ-VHH处理组HL-1细胞活性增加[(75.55±2.23)%比(46.90±2.51)%, P<0.001;(74.36±1.96)%比(46.90±2.51)%, P<0.001], 凋亡率降低[(6.83±0.27)%比(10.24±0.76)%, P<0.001;(6.68±0.38)%比(10.24±0.76)%, P<0.001]。结论 pET-16b和pHEN1载体均能表达出抗IL-1β纳米抗体, 且pHEN1载体表达的纳米抗体具有更好的抗原亲和作用。此外, pHEN1-5MVZ-VHH治疗可减少缺氧小鼠心肌细胞凋亡。

关键词：缺氧心肌细胞细胞凋亡白细胞介素1β 纳米抗体原核表达

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腺相关病毒顺行示踪法观察大鼠初级感觉神经传导通路形貌的研究

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中华显微外科杂志 2024年第6期47卷 647-654页

作者：吴广耿李戈邝瑞曾园山朱昭炜何波中山大学附属第一医院整形外科广州510080 南方医科大学附属广东省人民医院广东省医学科学院医学研究部广东省心血管病研究所广东省心脏病发病机制与精准防治重点实验室广州510100 中山大学中山医学院组织胚胎学教研室广州510080 中山大学附属第三医院创伤骨科关节外科广州1510630

目的寻找一种新型、直观地观察大鼠背根神经节(DRG)感觉神经纤维走行的顺行示踪方法。方法2022年7月-2023年8月,中山大学附属第一医院整形外科构建带神经元特异性启动子及红色荧光蛋白的腺相关病毒(AAV-syp-mCherry),同时随机选择3只健... 详细信息

目的寻找一种新型、直观地观察大鼠背根神经节(DRG)感觉神经纤维走行的顺行示踪方法。方法2022年7月-2023年8月,中山大学附属第一医院整形外科构建带神经元特异性启动子及红色荧光蛋白的腺相关病毒(AAV-syp-mCherry),同时随机选择3只健康1月龄雌性SD大鼠,体质量180~220 g,通过无菌手术将病毒注射入大鼠第4腰髓(L_(4))~第6腰髓(L_(6))背根神经节远端脊神经中。饲养1个月后,取注射侧L_(4)~L_(6)脊髓组织、DRG、坐骨神经及足底皮肤进行神经丝蛋白(NF)和微管关联蛋白2(MAP2)免疫荧光染色,用共聚焦显微镜观察平均光密度(AOD)从而分析腺相关病毒(AAV)阳性神经纤维的分布特征。结果注射病毒示踪剂1个月后,在注射侧L_(4)~L_(6)脊髓后角(AOD为0.5419±0.0245)、DRG(AOD为0.4917±0.0087)、坐骨神经(AOD为0.6237±0.0634)、足底皮肤的真皮层及皮肤附属器(AOD为0.4943±0.0165)中可见红色标记物,红色荧光聚集区与NF阳性神经纤维或MAP2阳性神经元共标记,提示AAV-syp-mCherry能通过感觉神经内轴突的顺行运输到远隔靶器官(皮肤)处,并长时间显影。结论顺行示踪法能够很好地显示初级感觉神经元中枢突和外周突的完整形貌,可作为一种观察周围感觉神经纤维路径的有效策略。

关键词：背根神经节脊髓神经根初级感觉神经腺相关病毒顺行示踪技术可视化大鼠

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兴奋性hiPSC源性类神经网络组织的构建

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中山大学学报（医学科学版） 2023年第4期44卷 625-633页

作者：苏琪淞李戈许金海蒋斌位庆帅曾湘曾园山朱平华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006 中山大学中山医学院组织学与胚胎学教研室广东广州510080 广东省心血管病研究所南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院广东广州510100 医学研究部南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院广东广州510100 广东省心脏病发病机制与精准防治重点实验室//广州市心脏病发病机制与防治重点实验室广东广州510100 广东省脑功能与脑疾病重点实验室广东广州510080

【目的】将人诱导多能干细胞源性神经前体细胞(hiPSC-NPCs)种植于去细胞视神经(DON)上,在体外构建一种具有突触传递功能的类神经网络组织,为神经组织损伤的修复提供一种有效途径。【方法】通过定向诱导和组织工程技术,联合应用hiPSCs和3... 详细信息

【目的】将人诱导多能干细胞源性神经前体细胞(hiPSC-NPCs)种植于去细胞视神经(DON)上,在体外构建一种具有突触传递功能的类神经网络组织,为神经组织损伤的修复提供一种有效途径。【方法】通过定向诱导和组织工程技术,联合应用hiPSCs和3D DON支架,构建一种新的类神经网络组织。定向诱导人诱导多能干细胞(hiPSCs)向人神经前体细胞(hNPCs)及神经元方向分化,使用免疫荧光染色鉴定细胞分化效率。制备3D DON支架,借助扫描电镜、Tunnel染色,鉴定支架形貌及细胞相容性。将诱导的hiPSC-NPCs种植于DON支架中,借助免疫荧光染色、扫描电镜、透射电镜和膜片钳对构建的类神经网络组织进行形态学观察和功能学鉴定。【结果】①免疫细胞化学染色结果提示,诱导的hiPSC-NPCs在体外大部分向神经元方向分化,成功构建了一种以神经元为主的神经网络。②扫描电镜和免疫组织化学结果提示,在体外成功构建了一种以兴奋性神经元为主的类神经网络组织。③免疫组织化学染色、透射电镜和膜片钳结果提示,构建的类神经网络组织能够传递兴奋性突触信息。【结论】利用天然来源的具有均匀孔道分布的DON生物支架材料和hiPSC-NPCs的有机结合,构建了一种以兴奋性神经元为主的具有突触传递功能的类神经网络组织,这种神经网络可作为脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)等神经组织损伤后组织替换疗法的有利工具,具有广阔的临床应用前景。

关键词：人诱导多能干细胞源性神经前体细胞去细胞视神经突触兴奋性神经元类神经网络组织

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β-氨基丙腈联合血管紧张素Ⅱ构建胸主动脉瘤小鼠模型的研究

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岭南心血管病杂志 2023年第6期29卷 654-659页

作者：徐佳梁荣鑫蒋林慧朱烁基于长江孙图成朱平广东省第二人民医院广州510100 南方医科大学附属广东省人民医院(广东省医学科学院)广东省心血管病研究所广州510100 广东省心脏病发病机制与精准防治重点实验室广州市心脏病发病机制与防治重点实验室广州510100

目的探讨通过β-氨基丙腈(beta-aminopropionitrile,BAPN)饮水联合Alzet微孔渗透泵皮下连续释放血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)构建胸主动脉瘤小鼠动物模型的方法。方法 60只3周龄雄性C57BL/6小鼠随机平均分为对照组(20只)、实验... 详细信息

目的探讨通过β-氨基丙腈(beta-aminopropionitrile,BAPN)饮水联合Alzet微孔渗透泵皮下连续释放血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)构建胸主动脉瘤小鼠动物模型的方法。方法 60只3周龄雄性C57BL/6小鼠随机平均分为对照组(20只)、实验A组(20只)及实验B组(20只)。对照组、实验A组和实验B组分别采用普通饮水、0.5 g·kg^(-1)·d^(-1)BAPN饮水和1 g·kg^(-1)·d^(-1)BAPN饮水联合微孔渗透泵(Alzet)皮下连续释放Ang Ⅱ(1μg·kg-1·min-1)。监测各组小鼠饮水量及体质量。分别于第30天和第3天采用超声心动图测量小鼠胸主动脉血管内径并计算直径差,取胸主动脉血管组织行病理学检测,评估胸主动脉瘤小鼠动物模型的构建情况。结果在建模过程中,实验B组中小鼠体质量增长缓慢甚至不增长;实验B组小鼠胸主动脉血管内径差值(d)为(0.519±0.054)mm,相比于对照组(0.135±0.021)mm和实验A组(0.201±0.043)mm,差异有统计学意义(P<0.05);实验A组和实验B组成瘤率分别为5%和40%。结论本研究成功构建了胸主动脉瘤小鼠动物模型,操作简便、成本低及成功率高,为胸主动脉瘤机制及诊疗靶点的研究奠定了基础。

关键词：胸主动脉瘤 β-氨基丙腈血管紧张素Ⅱ 动物模型

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斑马鱼wbp11基因敲除品系的建立

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激光生物学报 2023年第3期32卷 217-225页

作者：游诗琦陈宇杨雪婷李韵璇乔卿罗莹姚梅英高罗晴刘欣王跃群吴秀山李永青湖南师范大学省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室心脏发育研究中心长沙410081 广东省心血管病研究所广东省人民医院广州510100 广东省心脏病发病机制与精准防治重点实验室广州510100

WBP11是WW结构域结合蛋白家族的一员,参与前体mRNA剪接过程,是重要的剪接因子。斑马鱼作为重要的模式生物之一,其基因组中含有人类WBP11的同源基因wbp11。为了研究WBP11在脊椎动物早期发育过程中的作用机制,利用CRISPR/Cas9技术构建了... 详细信息

WBP11是WW结构域结合蛋白家族的一员,参与前体mRNA剪接过程,是重要的剪接因子。斑马鱼作为重要的模式生物之一,其基因组中含有人类WBP11的同源基因wbp11。为了研究WBP11在脊椎动物早期发育过程中的作用机制,利用CRISPR/Cas9技术构建了斑马鱼wbp11基因敲除品系。首先,在wbp11基因的第二个外显子上设计基因敲除靶位点,体外转录合成sgRNA,通过显微注射技术对斑马鱼进行基因敲除,得到F0代嵌合体斑马鱼。随后,将嵌合体斑马鱼与野生型斑马鱼杂交,所得到的F1代斑马鱼进行基因型鉴定,筛选出其中的杂合子斑马鱼,并对杂合子斑马鱼的缺失条带进行测序,结果显示其为wbp11基因的2种缺失突变。让同种突变的F1代杂合子斑马鱼自交,对得到的后代F2进行基因型鉴定,筛选获得了纯合子斑马鱼,表明wbp11基因敲除品系构建成功。经显微镜白光成像观察发现,受精后48 h的斑马鱼出现心包水肿、心脏线性化、骨骼弯曲畸形,这可能是由于wbp11基因突变引起剪接机制异常所导致的。此研究为探究WBP11基因在脊椎动物的早期发育中的作用机制开辟了道路。

关键词：斑马鱼 wbp11 CRISPR/Cas9 基因敲除杂合子

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斑马鱼prkd1基因在心脏早期发育过程中的作用研究

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生命科学研究 2023年第2期27卷 95-103,113页

作者：李韵璇陈宇吴锦秋游诗琦李永青朱平吴秀山江志钢王跃群湖南师范大学心脏发育研究中心省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室中国湖南长沙410081 广东省心血管病研究所广东省人民医院广东省医学科学院中国广东广州510100 广东省心脏病发病机制与精准防治重点实验室中国广东广州510100

为了探究蛋白激酶D(protein kinase D,PKD;又名PRKD)家族典型成员prkd1基因对早期心脏发育的影响,选用模式动物斑马鱼为研究对象,设计了吗啉代反义寡核苷酸敲低实验。表型观察结果显示,prkd1基因敲低会导致斑马鱼心脏发育异常,出现心包... 详细信息

为了探究蛋白激酶D(protein kinase D,PKD;又名PRKD)家族典型成员prkd1基因对早期心脏发育的影响,选用模式动物斑马鱼为研究对象,设计了吗啉代反义寡核苷酸敲低实验。表型观察结果显示,prkd1基因敲低会导致斑马鱼心脏发育异常,出现心包水肿、环化异常、心管线性化等畸形表型;斑马鱼心率分析数据显示,与野生型斑马鱼相比,prkd1基因的敲低会导致早期斑马鱼心率降低。利用转录组高通量测序技术对受精后3 d(3 days post fertilization,3 dpf)的斑马鱼对照组和敲低prkd1组进行测序,差异基因富集分析表明,prkd1的敲低与心脏相关信号通路如心肌细胞的肾上腺素信号通路等显著相关。进一步通过qRT-PCR对高通量测序结果进行验证,并对早期心脏发育关键因子进行检测,结果显示,部分心血管相关基因显著下调,tbx5a、gata4等心脏调控关键基因同样显著下调。这些表明prkd1基因可能通过调控心脏发育相关信号通路以及心脏发育关键基因来影响早期心脏发育,在早期心脏发育过程中发挥重要作用。

关键词：心脏发育 prkd1基因斑马鱼吗啉代反义寡核苷酸(MO)

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