检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2007年第3期23卷 533-535页

作者：钱中清曾耀英王通林羿季煜华肇静娴暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:研究VEGF诱导血管内皮细胞产生细胞外H2O2及其在VEGF促血管内皮细胞增殖功能中的作用。方法:①以H2DCFDA为H2O2指示剂,检测500μg/LVEGF刺激下,血管内皮细胞H2O2的产生;②以MTT法检测3×106U/L过氧化氢酶(CAT),及外源性加入5-2... 详细信息

目的:研究VEGF诱导血管内皮细胞产生细胞外H2O2及其在VEGF促血管内皮细胞增殖功能中的作用。方法:①以H2DCFDA为H2O2指示剂,检测500μg/LVEGF刺激下,血管内皮细胞H2O2的产生;②以MTT法检测3×106U/L过氧化氢酶(CAT),及外源性加入5-20mmol/LH2O2对VEGF促增殖功能的影响。结果:①在VEGF刺激血管内皮细胞15min后,细胞内开始出现逐渐增强的荧光,且随时间逐渐增强,至45min左右最强,随后逐渐减弱;而同时加入过氧化氢酶组的细胞则仅有微弱荧光产生,且荧光强度不随时间变化;②3×106U/L过氧化氢酶对VEGF的促增殖功能有明显的抑制作用(P<0.01);③外源性加入5-10mmol/LH2O2时对血管内皮细胞有明显促增殖作用(P<0.01),但其对VEGF的促增殖功能却有显著抑制作用(P<0.01)。结论:VEGF可刺激血管内皮细胞产生细胞外H2O2,在促细胞增殖中可能具有重要作用。而外源性H2O2对VEGF的生理功能可能具有抑制作用。

关键词：过氧化氢血管内皮细胞血管内皮细胞生长因子过氧化氢酶

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染料木黄酮抑制生长板软骨细胞的增殖与基质合成

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中国病理生理杂志 2007年第8期23卷 1590-1592页

作者：季煜华曾耀英俞瑜暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨染料木黄酮对大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)的形态、增殖和胞外基质成分合成的影响。方法:原代培养RGC,1×10-6μmol/L-1×10-4μmol/L染料木黄酮处理第1代RGC 24 h,观察RGC形态,同位素掺入检测RGC增殖、胶原和蛋白多糖合... 详细信息

目的:探讨染料木黄酮对大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)的形态、增殖和胞外基质成分合成的影响。方法:原代培养RGC,1×10-6μmol/L-1×10-4μmol/L染料木黄酮处理第1代RGC 24 h,观察RGC形态,同位素掺入检测RGC增殖、胶原和蛋白多糖合成,RT-PCR检测collagenⅡ和aggrecan基因表达。结果:染料木黄酮改变了RGC的形态,随着浓度的升高,突起和漂浮细胞的数量增加。染料木黄酮剂量依赖性地抑制RGC的增殖、胶原和蛋白多糖的合成(P<0.05),以及collagenⅡ和aggrecan mRNA的转录。结论:染料木黄酮抑制RGC的增殖和胞外基质的合成。

关键词：染料木黄酮软骨细胞生长面胶原Ⅱ型基因,aggrecan

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小鼠NKT细胞体外扩增的初步研究

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哈尔滨医科大学学报 2007年第6期41卷 541-543页

作者：郭蓉姣黄秀艳梁兆端曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术... 详细信息

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术和流式细胞术(FACS)检测NKT细胞纯度,并用MTT法检测其对靶细胞K562的杀伤活性。结果脾NKT细胞在第0、4、8、12天计数细胞总数为0.5×107、(1.3±0.1)×107、(1.9±0.2)×107和(2.2±0.2)×107,第0、4、8、12天纯度分别为(6.27±1.04)%、(8.54±1.58)%、(10.65±1.95)%和(21.36±4.34)%;α-Gal-cer和rhIL-2作用下,纯化的NKT细胞较脾新鲜分离的单个核细胞对靶细胞K562的杀伤作用强。在效靶比20∶1时,培养时间为4、8,12天的NKT细胞杀伤率分别为52.7%、71.2%和85.7%,明显高于脾MNC33.8%(P<0.05)。结论在α-Galcer和rhIL-2作用下,小鼠NKT细胞得到扩增,细胞纯度约为22%。在效靶比20∶1时,NKT细胞对K562细胞杀伤率约为86%。

关键词： NKT细胞 α-Galcer IL-2

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氧化苦参碱对淋巴细胞增殖和调节性T细胞(Tr)数量的影响

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中国病理生理杂志 2007年第7期23卷 1368-1372页

作者：伍斌曾耀英蔡小嫦施军丛林王通曾祥凤中南大学湘雅一医院皮肤科湖南长沙410008 暨南大学组织移植和免疫中心教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632

目的:分析氧化苦参碱(OMT)对小鼠外周血调节性T细胞(Tr细胞)数量及其对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT治疗ACD的免疫学机制。方法:建立DNFB诱发的小鼠ACD模型,腹腔注射(ip)不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HC... 详细信息

目的:分析氧化苦参碱(OMT)对小鼠外周血调节性T细胞(Tr细胞)数量及其对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT治疗ACD的免疫学机制。方法:建立DNFB诱发的小鼠ACD模型,腹腔注射(ip)不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT),在实验的第1d、7d、14d、21d、28d小鼠尾静脉采血,应用抗-CD3、抗-CD4、抗-CD25单抗进行免疫荧光标记,流式细胞术检测各组CD4+CD25+T细胞数量。利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖的影响。结果:500、125和31mg/LOMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而16、8、4、2mg/LOMT可促进小鼠淋巴结T细胞增殖,但剂量依赖关系不明显。腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量,与HCT组、PBS组比较(P<0.01)。结论:OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈双向作用;腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量;提示:OMT是一种双向免疫调节剂。

关键词：苦参碱 T淋巴细胞

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地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中线粒体质量的变化

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中国药理学通报 2006年第5期22卷 563-567页

作者：王通曾耀英邢飞跃梁佩燕暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510630

目的研究地塞米松(DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡中线粒体质量变化。方法分别设对照组(Control)和DEX组;在6 h,分别以NAO和M itotracker G reen(MG)单染流式细胞术检测线粒体质量变化,以D iOC6(3)染色流式细胞术检测线粒体膜电势变化,以An... 详细信息

目的研究地塞米松(DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡中线粒体质量变化。方法分别设对照组(Control)和DEX组;在6 h,分别以NAO和M itotracker G reen(MG)单染流式细胞术检测线粒体质量变化,以D iOC6(3)染色流式细胞术检测线粒体膜电势变化,以Annexin V-PE/MG双染流式细胞术检测细胞凋亡中线粒体质量改变特点。结果NAO染色检测结果显示终浓度1μmol.L-1DEX可以诱导小鼠胸腺细胞线粒体心磷脂含量降低,与对照组比较P<0.01;MG染色流式细胞术结果表明DEX(P<0.01)诱导了胸腺细胞线粒体质量的降低;DEX(P<0.01)诱导线粒体膜电势依赖性D iOC6(3)在胸腺细胞中可染性下降;Annexin V-PE/MG双染流式细胞术显示,凋亡细胞中存在一定比例的低线粒体质量细胞,DEX组该群细胞多于对照组(P<0.01)。结论DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡中线粒体质量降低;线粒体质量评价在细胞凋亡相关药理学研究领域有应用前景。

关键词：胸腺细胞凋亡线粒体质量 NAO Mitotracker Green

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NO介导的小鼠胸腺细胞中线粒体的变化在细胞凋亡过程中的作用

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 302-305页

作者：王通曾耀英邢飞跃贺芳王炯坤暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510630

目的：研究一氧化氮（NO）介导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电位（△ψm）和心磷脂（CL）含量变化的特点.方法：以S-亚硝基-N-乙酰青霉胺（SNAP）作为NO的供体诱导胸腺细胞凋亡,以地塞米松（DEX）作为阳性对照药物;设空白对照组、SNAP组和... 详细信息

目的：研究一氧化氮（NO）介导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电位（△ψm）和心磷脂（CL）含量变化的特点.方法：以S-亚硝基-N-乙酰青霉胺（SNAP）作为NO的供体诱导胸腺细胞凋亡,以地塞米松（DEX）作为阳性对照药物;设空白对照组、SNAP组和DEX组3个实验组;经膜联蛋白Ⅴ（annexinⅤ mAb）和碘化丙啶（PI）染色后,用流式细胞术（FCM）检测细胞磷脂酰丝氨酸（PS）外翻;用3,3＇-二已基噁羰花青碘化物[DiOC6（3）]和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中△ψm变化;用壬基吖啶橙（NAO）和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中线粒体CL变化.结果：SNAP作用后6 h,胸腺细胞出现典型的细胞凋亡特征,多数annexin Ⅴ阳性的细胞出现皱缩.DEX组△ψm降低且未凋亡的细胞比例显著高于空白对照组（P＜0.01）;而SNAP组该群细胞所占比例与空白对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.各组中约40%～50%的DiOC6（3）阴性细胞同正常细胞的大小.SNAP组CL含量降低的凋亡细胞所占比例显著高于对照组（P＜0.01）,未见CL含量降低且未凋亡的细胞群.空白对照组和SNAP组中分别有（48.32±3.96）%、（43.64±4.90）%的细胞CL含量降低但大小同正常细胞.结论：NO介导的小鼠胸腺细胞的凋亡过程,依次为磷脂酰丝氨酸外翻、线粒体去极化、CL氧化及细胞皱缩.同DEX模型组相比较,NO介导的小鼠胸腺细胞线粒体的变化为凋亡过程中较晚期的变化.

关键词：一氧化氮 S-亚硝基-N-乙酰青霉胺线粒体凋亡

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HLA-A2^+供者外周血hCMV特异性CTL的定量及其表型分析

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第2期22卷 247-251页

作者：查庆兵何贤辉徐丽慧迟晓云曾耀英暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:利用加载人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽NLV(pp65495-503)的HLA-A0201(A2-NLV)四聚体,探讨四聚体染色条件的优化及其在特异性CTL表型分析中的应用。方法:取HLA-A2+供者外周血,以A2-NLV四聚体/PE在不同条件下染色,然后以... 详细信息

目的:利用加载人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽NLV(pp65495-503)的HLA-A0201(A2-NLV)四聚体,探讨四聚体染色条件的优化及其在特异性CTL表型分析中的应用。方法:取HLA-A2+供者外周血,以A2-NLV四聚体/PE在不同条件下染色,然后以anti-CD3-FITC和anti-CD8-APC标记,流式细胞术分析染色结果,寻找四聚体最佳染色条件,并分析特异性CTL的表型和活化抗原表达。结果:以全血样进行四聚体染色结果优于分离的PBMC。A2-NLV四聚体用量为0.3μg时,与100μL全血于4℃温育1h,特异性染色效果最佳,而与CD8-T细胞非特异性结合很低。以此优化条件进行特异性CTL表型分析,结果显示CD28阳性的A2-NLV四聚体特异性CTL的百分率较非特异性CTL低,表达CD57的百分率较非特异性CTL高,CD25分子只表达于活化的特异性CTL上。结论:通过对染色条件进行优化可明显提高四聚体染色的特异性,降低非特异性结合,优化的四聚体染色法能用于抗原特异性CTL的表型和功能分析。

关键词： HLA-A2四聚体巨细胞病毒 CTL 四聚体染色

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染料木黄酮对生长板软骨细胞胶原合成的影响及其机制

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中国药理学通报 2006年第8期22卷 927-929页

作者：季煜华曾耀英俞瑜暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广东广州510632

目的探讨染料木黄酮(5,7,4′三羟基异黄酮)对大鼠肋生长板软骨细胞(ratcostochondralgrowthplatechondrocyte,RGC)胶原和Sox9表达的影响。方法原代培养RGC,3Hproline参入、RTPCR和Westernblot分别检测染料木黄酮对第1代RGC胶原合成、col2a1基因转录和Sox9表达的影响。结果染料木黄酮抑制RGC的胶原合成(P<0.05),col2a1的转录和Sox9的表达,其抑制作用随着浓度的升高而增强。结论染料木黄酮抑制培养RGC胶原合成的作用至少部分是通过下调Sox9的表达实现的。

关键词：染料木黄酮生长板软骨细胞 Ⅱ型胶原 Sox9

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小鼠派氏集合淋巴结T细胞活化和调节性T细胞的分析

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中国病理生理杂志 2006年第3期22卷 537-542页

作者：黄秀艳曾耀英肇静娴王通暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:通过对小鼠派氏集合淋巴结(PPs)、肠系膜淋巴结(MLNs)和腹股沟淋巴结(ILNs)的比较性研究,以分析PPsT细胞活化和调节性T细胞的功能特点。方法:无菌分离小鼠PPs、MLNs和ILNs,分别制备单个淋巴细胞悬液,运用流式细胞术结合荧光抗体染... 详细信息

目的:通过对小鼠派氏集合淋巴结(PPs)、肠系膜淋巴结(MLNs)和腹股沟淋巴结(ILNs)的比较性研究,以分析PPsT细胞活化和调节性T细胞的功能特点。方法:无菌分离小鼠PPs、MLNs和ILNs,分别制备单个淋巴细胞悬液,运用流式细胞术结合荧光抗体染色技术来检测CD3+T细胞、CD3+CD4+辅助性T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞的比例;用多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)、佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)刺激活化淋巴细胞,随后运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术来检测T细胞早期活化标志CD69的表达水平。结果:PPs内CD3+T细胞所占比例明显低于MLNs和ILNs,然而CD4+CD25+调节性T细胞的比例明显高于MLNs和ILNs;在没有加入刺激剂的培养条件下,PPs来源的T细胞CD69的表达水平明显高于MLNs和ILNs来源的T细胞,MLNs来源的T细胞CD69的表达水平明显高于ILNs来源的T细胞;而在加入ConA或者单纯PDB的培养条件下,PPs来源的T细胞却表现出低反应性;在加入PDB+Ion的培养条件下,3者来源的T细胞CD69的表达水平没有明显差别。结论:PPs内CD3+T细胞所占比例较低,CD4+CD25+调节性T细胞的比例较高,这可能是PPs整体T细胞低反应性的原因之一;PPs来源T细胞的高基础活化率可能与其不断接触小肠来源的食物和共生菌抗原有关;PPs来源T细胞选择性地对某些刺激剂表现出低反应性,提示这群细胞处于某种程度的无能状态。上述特征的生物学意义在于避免因为不断接受小肠来源的食物和共生菌抗原的刺激而发生病理性炎症的同时还保留对病原微生物抗原的应答。

关键词：淋巴集结 T淋巴细胞淋巴细胞转化小鼠

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脐血和外周血单个核细胞培养上清影响HIV-1感染的体外实验研究

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中国病理生理杂志 2006年第4期22卷 638-641页

作者：李海仙曾耀英曾祥凤肇静娴李孝建王通暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:体外研究脐血和外周血单个核细胞(CBMC和PBMC)培养上清对HIV-1感染的影响,为发现抗HIV-1的可溶性因子奠定基础。方法:PHA刺激CBMC和PBMC后5h和12h收集上清,加入荧光标记的HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞培养体系中,2h后在倒置荧光显微镜下... 详细信息

目的:体外研究脐血和外周血单个核细胞(CBMC和PBMC)培养上清对HIV-1感染的影响,为发现抗HIV-1的可溶性因子奠定基础。方法:PHA刺激CBMC和PBMC后5h和12h收集上清,加入荧光标记的HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞培养体系中,2h后在倒置荧光显微镜下观察其对细胞融合的影响;用Luminex100TM分析仪检测收集上清中细胞因子含量。结果:PHA刺激CBMC和PBMC后5h和12h的上清均可抑制HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞融合,同一时间收集的PBMC和CBMC上清对HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞融合的抑制作用无差异,但5h上清的抑制作用强于12h的上清;CBMC5h上清中促炎症细胞因子比PBMC5h上清为低,而CCR5配体MIP-1α和RANTES则比PBMC5h上清高,差异显著(P<0·05)。结论:通过脐血和外周血单个核细胞可以制备有效抗HIV感染的可溶性因子,可能为艾滋病治疗药物提供新的来源。

关键词：胎血单核细胞细胞因子类 HIV-1

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