检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2007年第8期23卷 1590-1592页

作者：季煜华曾耀英俞瑜暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨染料木黄酮对大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)的形态、增殖和胞外基质成分合成的影响。方法:原代培养RGC,1×10-6μmol/L-1×10-4μmol/L染料木黄酮处理第1代RGC 24 h,观察RGC形态,同位素掺入检测RGC增殖、胶原和蛋白多糖合... 详细信息

目的:探讨染料木黄酮对大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)的形态、增殖和胞外基质成分合成的影响。方法:原代培养RGC,1×10-6μmol/L-1×10-4μmol/L染料木黄酮处理第1代RGC 24 h,观察RGC形态,同位素掺入检测RGC增殖、胶原和蛋白多糖合成,RT-PCR检测collagenⅡ和aggrecan基因表达。结果:染料木黄酮改变了RGC的形态,随着浓度的升高,突起和漂浮细胞的数量增加。染料木黄酮剂量依赖性地抑制RGC的增殖、胶原和蛋白多糖的合成(P<0.05),以及collagenⅡ和aggrecan mRNA的转录。结论:染料木黄酮抑制RGC的增殖和胞外基质的合成。

关键词：染料木黄酮软骨细胞生长面胶原Ⅱ型基因,aggrecan

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大鼠肋生长板软骨细胞的分离、培养及生物学特性的研究

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中国病理生理杂志 2005年第5期21卷 997-1000页

作者：季煜华俞瑜曾耀英暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广东广州510632

目的建立大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)分离、培养的方法,探讨其生物学特性,为软骨细胞增殖分化的调控和软骨组织工程修复的研究建立实验基础。方法显微解剖出大鼠肋生长板软骨,酶消化法获得分散的单个RGC。观察单层培养的不同代数RGC的细... 详细信息

目的建立大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)分离、培养的方法,探讨其生物学特性,为软骨细胞增殖分化的调控和软骨组织工程修复的研究建立实验基础。方法显微解剖出大鼠肋生长板软骨,酶消化法获得分散的单个RGC。观察单层培养的不同代数RGC的细胞形态变化,并进行细胞生长动力学分析;组织化学和免疫细胞化学方法检测不同代数RGC蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。结果本实验分离的RGC中活细胞比例大于98%;原代培养细胞呈多角形或圆形,第6代细胞仍保持多角的形态;前4代细胞的每日倍增指数随着传代次数的增加而增加,第5代后显著降低;原代培养的RGC中Ⅱ型胶原阳性染色细胞比例大于95%,阿尔新蓝染色也呈阳性;随着传代次数增加阳性细胞的比例下降。结论本研究所建立的分离培养方法可以获得高纯度、高活性的软骨细胞,前3代RGC保持了在体软骨细胞的表型是研究软骨增殖分化调控的良好材料。

关键词：生长面软骨细胞胶原Ⅱ型蛋白聚糖类

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妊娠激素对HIV-1体外感染MT-2细胞及复制的影响

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哈尔滨医科大学学报 2006年第1期40卷 6-9页

作者：李海仙曾耀英曾祥凤肇静娴王通林羿暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的研究妊娠激素对HIV-1体外感染MT-2细胞及复制的影响。方法检测终浓度为1×106U/L的重组人绒毛膜促性腺激素(hCG)和终浓度为10-7mol/L(相当于妇女分泌期外周血水平)、10-6mol/L(相当于妊娠妇女外周血水平)和10-5mol/L(相当于母... 详细信息

目的研究妊娠激素对HIV-1体外感染MT-2细胞及复制的影响。方法检测终浓度为1×106U/L的重组人绒毛膜促性腺激素(hCG)和终浓度为10-7mol/L(相当于妇女分泌期外周血水平)、10-6mol/L(相当于妊娠妇女外周血水平)和10-5mol/L(相当于母胎界面局部浓度)的雌二醇(E2)和孕酮(P4)对HIV-1介导荧光标记的HIV-1ⅢB/H9与未标记荧光的MT-2细胞融合的影响;ELISA法检测感染HIV的MT-2细胞培养上清p24抗原含量来探讨妊娠激素对HIV-1复制的影响。结果10-5mol/L的E2和P4可以明显抑制HIV-1介导的细胞融合,合胞体形成数分别为14.87±2.18和16.52±3.20,与对照组(28.93±4.22)比较有极显著性差异(P<0.01),hCG和10-6mol/L的E2也能抑制HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞的融合,融合数分别为22.18±3.87和24.16±4.25,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。hCG及10-5mol/L E2和P4能明显降低感染细胞培养上清中p24抗原含量,依次为(42.61±2.97)pg/ml(、44.28±3.42)pg/ml和(45.37±2.88)pg/ml,与对照组(57.22±3.10)pg/ml比较有显著性差异(P<0.05)。结论妊娠激素hCG、E2和P4体外可以抑制HIV-1感染MT-2细胞及在其内复制。

关键词：妊娠激素人类免疫缺陷病毒细胞融合复制

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小鼠NKT细胞体外扩增的初步研究

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哈尔滨医科大学学报 2007年第6期41卷 541-543页

作者：郭蓉姣黄秀艳梁兆端曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术... 详细信息

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术和流式细胞术(FACS)检测NKT细胞纯度,并用MTT法检测其对靶细胞K562的杀伤活性。结果脾NKT细胞在第0、4、8、12天计数细胞总数为0.5×107、(1.3±0.1)×107、(1.9±0.2)×107和(2.2±0.2)×107,第0、4、8、12天纯度分别为(6.27±1.04)%、(8.54±1.58)%、(10.65±1.95)%和(21.36±4.34)%;α-Gal-cer和rhIL-2作用下,纯化的NKT细胞较脾新鲜分离的单个核细胞对靶细胞K562的杀伤作用强。在效靶比20∶1时,培养时间为4、8,12天的NKT细胞杀伤率分别为52.7%、71.2%和85.7%,明显高于脾MNC33.8%(P<0.05)。结论在α-Galcer和rhIL-2作用下,小鼠NKT细胞得到扩增,细胞纯度约为22%。在效靶比20∶1时,NKT细胞对K562细胞杀伤率约为86%。

关键词： NKT细胞 α-Galcer IL-2

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小鼠同种异基因皮肤移植模型的建立

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2005年第2期26卷 221-223页

作者：刘德许曾耀英狄静芳王曦林弈季煜华暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:为移植免疫及药物免疫机理研究建立小鼠同种异基因皮肤移植动物模型。方法:受体BALB/c分为A～E共5组,即对照组,5 0、7 5、10、2 0mg/kg环孢菌素A(CsA)剂量组,通过背-背法进行C5 7BL/ 6的全厚皮皮片移植,以探求通过较小剂量CsA及... 详细信息

目的:为移植免疫及药物免疫机理研究建立小鼠同种异基因皮肤移植动物模型。方法:受体BALB/c分为A～E共5组,即对照组,5 0、7 5、10、2 0mg/kg环孢菌素A(CsA)剂量组,通过背-背法进行C5 7BL/ 6的全厚皮皮片移植,以探求通过较小剂量CsA及优化实验条件和护理方式建立供免疫机理研究的动物试验平台。结果:5 0、7 5、10mg/kg组相对于对照组皮片排斥时间无明显差别,而2 0mg/kg组植皮能较长时间存活。结论:2 0mg/kg的CsA剂量可以经济。

关键词：同种异基因皮片移植环孢菌素A

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CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第2期20卷 135-139页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦... 详细信息

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从人外周血细胞中克隆到CTLA4基因的cDNA。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞 2 4h后 ,CTLA4和EGFP双阳性细胞的百分率为 16%。表达的融合蛋白主要分布于胞内 ,细胞膜上分布较少。相反 ,转染空载体的细胞仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。以佛波醇酯加离子霉素刺激后 ,CTLA4 EGFP融合蛋白在细胞表面表达水平升高到 2 9% ,且分布于胞内的融合蛋白向细胞膜靠近并与质膜融合 ;而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变。结论 :成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K562细胞中得到表达。

关键词： CTLA4 绿色荧光蛋白融合蛋白共聚焦显微术

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中药喘可治对小鼠胸腺细胞抗凋亡作用研究

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辽宁中医杂志 2005年第5期32卷 490-491页

作者：王通曾耀英俞渝暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510630

目的:研究中药喘可治(CKZ)对小鼠胸腺细胞的抗凋亡作用。方法:以地塞米松(DEX )诱导小鼠胸腺细胞凋亡建模,以CKZ保护小鼠胸腺细胞;6h时点以AnnexinV -FITC/PI双染流式细胞术检测早期凋亡和坏死细胞、以PI染色流式细胞术检测晚期凋亡。结... 详细信息

目的:研究中药喘可治(CKZ)对小鼠胸腺细胞的抗凋亡作用。方法:以地塞米松(DEX )诱导小鼠胸腺细胞凋亡建模,以CKZ保护小鼠胸腺细胞;6h时点以AnnexinV -FITC/PI双染流式细胞术检测早期凋亡和坏死细胞、以PI染色流式细胞术检测晚期凋亡。结果:CKZ +DEX组早期凋亡比率(3 5 2 9±2 73 ) %显著低于DEX组(4 5 97±1 3 9) %(P <0 0 1) ;该两组坏死细胞比率差异不显著。DEX +CKZ组晚期凋亡百分率为(17 2 6±4 5 8) % ,显著低于CKZ组(3 3 88±5 61) % (P <0 0 1)。上述各组数据与对照组差异显著(P <0 0 1)。

关键词：喘可治地塞米松抗凋亡流式细胞术动物实验

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碱性成纤维细胞生长因子对无血清培养大鼠生长板软骨细胞的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2005年第6期26卷 734-739,745页

作者：季煜华曾耀英俞瑜暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)用于无血清培养扩增软骨细胞的可行性及最适质量浓度.方法:分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC).细胞化学和免疫细胞化学染色的方法检测第1代RGC中... 详细信息

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)用于无血清培养扩增软骨细胞的可行性及最适质量浓度.方法:分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC).细胞化学和免疫细胞化学染色的方法检测第1代RGC中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达.观察0.1、1.0、10.0和100.0μg/L bFGF对无血清培养RGC形态的影响,并分别用3H-TdR和3H-Proline掺入法检测上述质量浓度bFGF对无血清培养RGC增殖和胶原合成的影响.结果:第1代RGC表达蛋白多糖和Ⅱ型胶原,保持了软骨细胞的分化表型.随着bFGF质量浓度的增加RGC的形态由多角形变为梭形和圆形.与无血清对照组相比,上述4个质量浓度的bFGF均显著促进RGC的增殖和胶原合成(P＜0.05),其中1.0和10.0μg/L bFGF促RGC增殖的作用与10%胎牛血清(FBS)对照组差异无显著性意义(P＞0.05),但促胶原合成作用较弱,相当于10%FBS对照组的60%左右(P＜0.05).结论:bFGF可用于无血清扩增软骨细胞,1.0～10.0 μg/L是适宜的质量浓度范围,但其促胶原合成作用较弱,还需添加其他因子以弥补促胶原合成作用的不足.

关键词：肋生长板软骨细胞碱性成纤维细胞生长因子无血清培养

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人PD-L1 cDNA的克隆及其胞外区蛋白在大肠杆菌中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 659-663页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的 :克隆人PD L1基因的cDNA并构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中 ,扩增并克隆PD L1的cDNA ,构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表... 详细信息

目的 :克隆人PD L1基因的cDNA并构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中 ,扩增并克隆PD L1的cDNA ,构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果 :克隆到PD L1cDNA编码区的全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。同时构建了在羧基端带有His6标签的PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。免疫印迹分析表明 ,在IPTG诱导后表达的PD L1胞外区蛋白 ,相对分子质量 (Mr)为 2 50 0 0 ,与理论值的大小相符。该重组蛋白能与抗His6标签的单抗 (mAb)特异性反应。结论 :成功地克隆PD L1基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为利用PD L1转基因修饰移植物或以PD

关键词： PD-L1 cDNA克隆淋巴细胞重组蛋白

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小檗碱对DNFB诱导的小鼠迟发型超敏反应的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第4期21卷 418-421页

作者：杜丽蕊何贤辉徐丽慧曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的:研究小檗碱(Ber)对二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:BALB/c小鼠分为对照组、DTH组与Ber处理的DTH组。对照组以不含DNFB的溶剂处理,DTH组以5g/LDNFB腹部致敏、耳廓激发的方法... 详细信息

目的:研究小檗碱(Ber)对二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:BALB/c小鼠分为对照组、DTH组与Ber处理的DTH组。对照组以不含DNFB的溶剂处理,DTH组以5g/LDNFB腹部致敏、耳廓激发的方法建立模型,Ber处理的DTH组每天腹腔注射(i.p)Ber,连续7d,总剂量为30mg/kg体质量。激发后48h,取小鼠双耳称重了解Ber对炎症抑制率的影响。镜下观察耳廓局部组织的变化;以结晶紫法检查Ber对脾脏T淋巴细胞与细胞外基质(ECM)黏附作用的影响;以膜联蛋白V(AnnexinV)染色检查淋巴结细胞的凋亡率。结果:双耳称重的结果显示,Ber处理的DTH组与DTH组具有显著的差异(P<0.05),能明显抑制DNFB引起的炎症反应;耳廓局部组织学检测也表明,Ber能够抑制DNFB诱导的DTH,明显减少淋巴细胞的浸润。Ber处理的DTH组的T细胞与ECM的黏附能力明显降低(P<0.05)。Ber处理的DTH组与DTH组和对照组的细胞凋亡率均无明显差异(P>0.05)。结论:Ber对DNFB诱导的小鼠DTH具有明显的抑制作用,降低小鼠T细胞与ECM的黏附能力可能是其抑制DTH的机制之一。

关键词：小檗碱淋巴细胞细胞黏附迟发型超敏反应

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