检索结果-内蒙古大学图书馆

广东海洋大学学报 2012年第3期32卷 49-54页

作者：陈贺吴灶和王蓓黄郁葱鲁义善简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510225

研究无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQGY08的培养与生长特性,探讨脑心浸液(Brian Heart Infusion,BHI)培养基的营养因子、初始pH值、溶氧、温度等因素对无乳链球菌生长的影响,并采用正交实验法对无乳链球菌培养基营养因子添加量... 详细信息

研究无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQGY08的培养与生长特性,探讨脑心浸液(Brian Heart Infusion,BHI)培养基的营养因子、初始pH值、溶氧、温度等因素对无乳链球菌生长的影响,并采用正交实验法对无乳链球菌培养基营养因子添加量进行优化。结果表明,无乳链球菌生长的最适初始pH为7～8,培养温度为28～37℃,振荡转速为180～200 r/min。在BHI培养基中添加20 mg/mL的酵母粉和2 mg/mL的葡萄糖即可在对数期获得最大细菌量。

关键词：无乳链球菌培养基培养条件优化

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脂多糖、苯酚、硫酸铜对红笛鲷非特异性细胞毒性细胞受体基因表达的影响

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广东海洋大学学报 2012年第1期32卷 1-10页

作者：周晴简纪常鲁义善吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510000

应用Real-time PCR技术,研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、苯酚、硫酸铜刺激红笛鲷(Lutjanussanguineus)后非特异性细胞毒性细胞受体(NCCRP-1)基因在不同组织里的表达差异。结果发现,LPS刺激红笛鲷24 h后NCCRP-1在红笛鲷头肾、脾脏... 详细信息

应用Real-time PCR技术,研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、苯酚、硫酸铜刺激红笛鲷(Lutjanussanguineus)后非特异性细胞毒性细胞受体(NCCRP-1)基因在不同组织里的表达差异。结果发现,LPS刺激红笛鲷24 h后NCCRP-1在红笛鲷头肾、脾脏、胸腺、肝脏、心脏、脑、肌肉和肠组织中均有表达,其中头肾表达量最高,脾脏次之,然后依次是肝脏、脑、肌肉、胸腺和肠,心脏表达量最少。LPS、苯酚和CuSO4刺激红笛鲷后,随着刺激时间的增长,NCCRP-1表达量在各组织达到峰值的时间不同。以头肾为模式组织,RT-PCR的结果显示,红笛鲷NCCRP-1在LPS、苯酚和CuSO4的刺激下的表达模式相似,随着时间的增加NCCRP-1表达量逐渐增加,分别在24、9、12 h处达到最高,达到对照组的52、30、24倍左右,之后表达量开始下降。免疫组织化学表明,NCCRP-1只在头肾、脾脏和胸腺的特定细胞中表达。

关键词：红笛鲷 NCCRP-1 基因表达脂多糖苯酚硫酸铜免疫组织化学荧光定量PCR

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草鱼呼肠孤病毒vp5基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测

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广东海洋大学学报 2012年第3期32卷 42-48页

作者：谢吉国闫秀英简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 仲恺农业工程学院广东广州510000

根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性... 详细信息

根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性和毒性检测。PCR、酶切以及测序表明,pGBKT7-vp5重组诱饵载体构建成功。自激活性和毒性检测显示,阳性重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold和阴性对照菌株pGBKT7/Y2HGold在SD/-Trp平板上出现大小相一致的乳白色菌落,且在SD/-Trp/X-α-Gel、SD/-Trp/AbA+/X-α-Gel平板上生长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/-Ade/-His无菌落出现。表明重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold表达的融合蛋白激活了报告基因AUR1-C和MEL1,没有激活报告基因ADE2和HIS3并且对宿主菌无毒性。该重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统进一步筛选cDNA文库中与其相互作用的蛋白。

关键词：草鱼呼肠孤病毒酵母双杂交系统诱饵载体自激活性

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无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫效果

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广东海洋大学学报 2012年第6期32卷 50-56页

作者：陈贺吴灶和王蓓鲁义善黄郁葱简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 湛江恒兴南方海洋科技有限公司广东湛江524073 仲恺农业工程学院广东广州510225

制备无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）临床分离株ZJ02的灭活疫苗，采用注射和浸泡2种方法，研究疫苗对吉富罗非鱼（Oreochromisniloticus）的免疫保护效果和血清抗体效价。注射组以4个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫罗非鱼，浸... 详细信息

制备无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）临床分离株ZJ02的灭活疫苗，采用注射和浸泡2种方法，研究疫苗对吉富罗非鱼（Oreochromisniloticus）的免疫保护效果和血清抗体效价。注射组以4个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫罗非鱼，浸泡组以相同免疫剂量的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠3种佐剂免疫罗非鱼。结果显示，无乳链球菌疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性，与对照组相比，免疫组血清中的抗体效价水平均显著性提高（P〈0．05），注射组和浸泡组的抗体效价最高分别达到1：256和1：128；注射组中不同剂量的疫苗免疫组免疫保护率较高，高浓度组可达到95％，浸泡组中使用3种佐剂的免疫组免疫保护率分别为59％、64％、55％。表明无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼具有很好的免疫保护性，免疫剂量在5×10^8～4×10^8cfu／mL之间对注射免疫效果有显著性影响，消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠对浸泡免疫效果具有不同的免疫保护率。

关键词：无乳链球菌疫苗罗非鱼免疫保护率

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红笛鲷α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的克隆及序列分析

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广东海洋大学学报 2011年第3期31卷 1-6页

作者：张新中鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

应用已知的标签序列通过RACE-PCR和RT-PCR方法成功克隆红笛鲷（Lutjanus sanguineus）α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的全长cDNA序列。α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的cDNA全长分别为560和563 bp,开放阅读框分别为429和444 bp,各编码143和148个... 详细信息

应用已知的标签序列通过RACE-PCR和RT-PCR方法成功克隆红笛鲷（Lutjanus sanguineus）α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的全长cDNA序列。α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的cDNA全长分别为560和563 bp,开放阅读框分别为429和444 bp,各编码143和148个氨基酸,理论相对分子质量分别为15690和16400,理论等电点为7.79和6.61。氨基酸序列BLAST结果表明,红笛鲷α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因编码的氨基酸序列与其他鱼类的相似性分别在59%-79%和55%-80%之间。用邻接法（Neighbor-Joining）构建的α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因的系统发育树表明,红笛鲷与真鲷（Pagrus major）、金头鲷（Sparus aurata）和鰤（Seriola quinqueradiata）等亲缘关系较近。

关键词：红笛鲷 α-珠蛋白 β-珠蛋白基因克隆基因序列

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无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

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2011年中国水产学会学术年会

作者：陈贺简纪常鲁义善黄郁葱王蓓广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成疫苗,通过注射和浸泡两种途径免疫吉富罗非鱼,其中注射组分别以四个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫吉富罗非鱼,对照组注射PBS;浸泡组以相同浓度的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪... 详细信息

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成疫苗,通过注射和浸泡两种途径免疫吉富罗非鱼,其中注射组分别以四个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫吉富罗非鱼,对照组注射PBS;浸泡组以相同浓度的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠三种佐剂免疫吉富罗非鱼,另设无佐剂组和对照组。免疫后每周测定血清的抗体效价,连续8周,并测定56天后以相应菌株攻毒后的相对保护率。结果表明,疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性,与对照组相比,血清中的抗体凝集效价均显著性提高,注射组中不同浓度的疫苗免疫组均获得了较高的免疫保护率,其中高浓度组可达到96%;浸泡组中疫苗与不同佐剂共同使用的免疫组也获得了较高的免疫保护率,其中使用佐剂消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚、氯化钠的免疫组免疫保护率明显高于无佐剂组和对照组。

关键词：无乳链球菌疫苗罗非鱼保护率

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无乳链球菌口服疫苗及浸泡结合口服疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

无乳链球菌口服疫苗及浸泡结合口服疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

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2011年中国水产学会学术年会

作者：徐潇洒简纪常鲁义善黄郁葱王蓓广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成水剂疫苗,用海藻酸钠作为口服疫苗的投递载体制备成口服疫苗微粒。通过拌料口服和浸泡结合口服两种途径免疫吉富罗非鱼,其中口服途径分别以三个不同浓度的口服疫苗,不含菌体的空微粒... 详细信息

用筛选到的无乳链球菌临床分离株福尔马林灭活制备成水剂疫苗,用海藻酸钠作为口服疫苗的投递载体制备成口服疫苗微粒。通过拌料口服和浸泡结合口服两种途径免疫吉富罗非鱼,其中口服途径分别以三个不同浓度的口服疫苗,不含菌体的空微粒组和没有微球包被的菌体组免疫吉富罗非鱼,对照组投喂正常饲料;浸泡结合口服途径,设浸泡结合口服微粒组,浸泡结合菌体组,浸泡组和对照组。免疫后每周测定血清的抗体效价,连续8周,并测定56天后以相应菌株攻毒后的相对保护率。结果表明,疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性,与对照组相比,血清中的抗体凝集效价均显著性提高,口服组中不同浓度的疫苗免疫组均获得了较高的免疫保护率;浸泡结合口服组中浸泡结合口服微粒组也获得了较高的免疫保护率,免疫保护率明显高于其他组。

关键词：无乳链球菌疫苗罗非鱼保护率

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鱼类非特异性细胞毒性细胞(NCC)的研究进展

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中国水产科学 2010年第2期17卷 374-380页

作者：魏世娜简纪常吴灶和鲁义善闫秀英广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

自然杀伤细胞(NK)进化上的前体细胞在鱼类中被称作非特异性细胞毒性细胞(NCC),主要来源于血液和淋巴器官,是防御细菌、病毒、寄生性原生动物等入侵的第一道防线,在非特异性免疫中起重要作用,还具有体外杀伤肿瘤细胞的功能。近年来免疫... 详细信息

自然杀伤细胞(NK)进化上的前体细胞在鱼类中被称作非特异性细胞毒性细胞(NCC),主要来源于血液和淋巴器官,是防御细菌、病毒、寄生性原生动物等入侵的第一道防线,在非特异性免疫中起重要作用,还具有体外杀伤肿瘤细胞的功能。近年来免疫荧光显微镜技术表明NCAMP-1和NCCRP-1两种受体蛋白均表达于NCC膜上,并且这种免疫细胞从鱼类到哺乳动物上的进化是保守的,这些膜蛋白在鱼类炎症反应期可能通过颗粒胞吐途径参与抗菌的先天性免疫。本文就NCC的分离鉴定、形态结构、功能受体作用机制等方面的研究成果作一综述,旨在为深入研究NCC在鱼类先天性防御中的作用提供依据。

关键词：非特异性细胞毒性细胞分离鉴定 NCC受体

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多鳞鱚消化系统的形态学和组织学研究

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水产科学 2010年第6期29卷 339-343页

作者：曹剑香简纪常黄洋杜涛广东海洋大学广东省海洋开发研究中心广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点试验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025 广东海洋大学高新科技园广东湛江524025

采用解剖和光镜技术研究多鳞鱚消化系统的形态学和组织学。试验结果表明,多鳞鱚消化道由口咽腔、食道、胃、幽门盲囊、小肠和直肠构成。口咽腔较小,具绒毛状颌齿,舌三角形,黏膜上皮为复层鳞状上皮,上皮含少量味蕾和较多杯状细胞。食道... 详细信息

采用解剖和光镜技术研究多鳞鱚消化系统的形态学和组织学。试验结果表明,多鳞鱚消化道由口咽腔、食道、胃、幽门盲囊、小肠和直肠构成。口咽腔较小,具绒毛状颌齿,舌三角形,黏膜上皮为复层鳞状上皮,上皮含少量味蕾和较多杯状细胞。食道黏膜也为复层上皮,从食道到胃,杯状细胞逐渐减少,上皮由复层上皮逐渐变为单层柱状上皮,肌肉层发达。胃为"Y"型胃,其盲囊部发达,黏膜上皮为单层柱状上皮,贲门部和盲囊部上皮下有一厚层胃腺组织。小肠短,肠道系数为0.56,上皮为具微绒毛的单层柱状上皮,杯状细胞前肠较多,中肠较少,后肠无,幽门盲囊4个,结构与小肠相似。直肠上皮为单层柱状上皮,上皮含少量杯状细胞,肌肉层较小肠发达。肝小叶不明显,肝细胞索明显。胰腺为弥散型,散布在肝脏组织中。

关键词：多鳞鱚消化系统形态学组织学

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红笛鲷NCCRP-1基因原核表达条件的优化及纯化

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广东海洋大学学报 2010年第6期30卷 25-30页

作者：魏世娜王蓓鲁义善吴灶和简纪常广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

通过克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)非特异性毒性细胞受体蛋白-1(nonspecific cytotoxic cell receptor protein-1,NCCRP-1)成熟肽基因序列,然后与载体连接构建pET21a-NCCRP融合蛋白表达载体,将其转入大肠杆菌BL21进行诱导表达并优化条件。SDS-PAGE分析表明,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度0.8 mmol/L、37℃条件下培养3 h后表达量最大,分子大小与预期值相符,融合蛋白主要以包涵体形式高效表达,通过HisTrap HP柱子使其得到进一步纯化;Western blot分析表明,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,说明获得该表达产物。

关键词：红笛鲷 NCCRP-1基因原核表达条件优化纯化

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